胃癌長(zhǎng)鏈非編碼RNA SNHG16異常表達(dá)及其臨床病理意義

趙娟娟，韋四喜,2，嚴(yán)芝強(qiáng)，劉娟娟，萬(wàn)穎，黃海,2

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院 臨床生化教研室，貴州 貴陽(yáng) 550004； 2.貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 生化科，貴州 貴陽(yáng) 550004； 3.貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 胃腸外科，貴州 貴陽(yáng) 550004)

胃癌長(zhǎng)鏈非編碼RNA SNHG16異常表達(dá)及其臨床病理意義

趙娟娟1，韋四喜1,2，嚴(yán)芝強(qiáng)3，劉娟娟1，萬(wàn)穎1，黃海1,2

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院 臨床生化教研室，貴州 貴陽(yáng) 550004； 2.貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 生化科，貴州 貴陽(yáng) 550004； 3.貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 胃腸外科，貴州 貴陽(yáng) 550004)

目的：檢測(cè)長(zhǎng)鏈非編碼RNA SNHG16在胃癌組織與癌旁組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法：實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real time- PCR，qRT- PCR)法檢測(cè)SNHG16在41例胃癌組織及5株不同分化程度細(xì)胞系和胃黏膜上皮細(xì)胞中的表達(dá)情況，分析SNHG16表達(dá)與胃癌臨床病理的相關(guān)性。結(jié)果：胃癌組織中SNHG16相對(duì)于癌旁組織其表達(dá)量為(2.64±1.59)，表達(dá)顯著上調(diào)且與胃癌侵襲相關(guān)(P<0.05,r=0.361)。與GES- 1細(xì)胞株比較,HGC- 27中SNHG16相對(duì)表達(dá)量為(4.21±0.69),MGC- 803為(1.99±0.21),BGC- 803為(1.90±0.44),SGC- 7901為(0.76±0.05),AGS為(3.36±0.81);SNHG16在SGC- 7901中低表達(dá)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，在其他4株細(xì)胞中顯著高表達(dá)(P<0.01)。結(jié)論：SNHG16在胃癌組織中高表達(dá)，且其表達(dá)水平與胃癌侵襲程度相關(guān)，可成為胃癌預(yù)后監(jiān)測(cè)及治療的靶點(diǎn)。

胃癌； 長(zhǎng)鏈非編碼RNA； SNHG16； qRT- PCR

胃癌是消化系統(tǒng)常見(jiàn)惡性腫瘤之一，在全球惡性腫瘤中發(fā)病率排第4位，癌癥死亡率排第2位[1- 2]。胃癌的發(fā)生是一個(gè)多步驟、多因素進(jìn)行性發(fā)展的過(guò)程，涉及多條信號(hào)傳導(dǎo)通路的異常改變[3]。因此了解并研究其機(jī)制對(duì)于胃癌的診斷與治療極其重要。

長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non- coding RNA,LncRNA)是一類轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度超過(guò)200 nt的且不能編碼蛋白質(zhì)的RNA分子[4- 5]，近年來(lái)已成為腫瘤研究的熱點(diǎn)。研究表明其參與了基因組印記、劑量補(bǔ)償效應(yīng)、表觀遺傳等多種重要的細(xì)胞生物學(xué)過(guò)程[6- 8]。snoRNA host gene 16(SNHG16)是位于人17號(hào)染色體17q25.1上的長(zhǎng)鏈非編碼RNA?，F(xiàn)有研究報(bào)道，成神經(jīng)細(xì)胞瘤患者SNHG16表達(dá)上調(diào)[9]，在膀胱癌中其表達(dá)與膀胱癌侵襲相關(guān)[10]，在結(jié)腸癌中與細(xì)胞增殖、凋亡等相關(guān)[11]，而在胃癌中未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。因此，本研究旨在檢測(cè)胃癌長(zhǎng)鏈非編碼RNA SNHG16的表達(dá)并分析其與臨床病理特征的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 組織標(biāo)本 收集2014年3月至2015年4月貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院收治的41例初診胃癌患者的癌組織及對(duì)應(yīng)癌旁組織。胃癌患者術(shù)前未進(jìn)行化療和放療。胃癌分期按美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)(American Joint Committee on Cancer，AJCC)胃癌TNM病理分期的標(biāo)準(zhǔn)。本研究經(jīng)過(guò)貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)論證批準(zhǔn)(NO.21)。

1.1.2 胃癌細(xì)胞株 不同分化程度的人胃癌細(xì)胞株AGS、SGC- 7901、BGC- 823、MGC- 803和HGC- 27，永生化的人胃黏膜上皮細(xì)胞株GES- 1購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞中心。所有細(xì)胞株用含1%雙抗(青霉素與鏈霉素)、1%谷氨酰胺、10%胎牛血清的RPMI 16402培養(yǎng)基,于37 ℃、體積分?jǐn)?shù)5%CO2條件下常規(guī)培養(yǎng)。

1.1.3 試劑與儀器 RPMI 1640培養(yǎng)基(美國(guó)BD公司),Trizol、TaKaRa逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、TaKaRa SYBR Green試劑盒(日本TaRaKa公司)。二氧化碳培養(yǎng)箱(日本SANYO公司)、超微量分光光度計(jì)(美國(guó)Themo公司)、Eppendorf5331型PCR儀(德國(guó)Eppedorf公司)、LightCycler480實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(瑞士羅氏公司)。

1.2 總RNA提取

稱取50～100 mg胃癌組織，邊研磨邊加入液氮，充分研磨后移入EP管中，加入1 ml Trizol。按Trizol試劑說(shuō)明書(shū)提取組織和細(xì)胞的總RNA。測(cè)定RNA濃度及OD260 nm/OD280 nm。最后通過(guò)1%的瓊脂糖凝膠電泳對(duì)RNA進(jìn)行完整性檢測(cè)。

1.3 逆轉(zhuǎn)錄及實(shí)時(shí)熒光定量PCR

按照TaKaRa逆轉(zhuǎn)錄試劑盒兩步合成cDNA,于-20 ℃保存。進(jìn)行熒光定量PCR;按照TaKaRa SYBR Green試劑盒要求配置20 μl反應(yīng)體系,羅氏LightCycler 480(LC480)進(jìn)行檢測(cè)。反應(yīng)條件:95 ℃預(yù)變性30 s;95 ℃變性5 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共40個(gè)循環(huán)；以HPRT為內(nèi)參。癌旁組織作為對(duì)照組。細(xì)胞中SNHG16基因表達(dá)量檢測(cè)以GES- 1作為對(duì)照，用2-ΔΔCT表示SNHG16的相對(duì)表達(dá)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

相對(duì)表達(dá)量以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，組織樣本數(shù)據(jù)比較行配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，細(xì)胞數(shù)據(jù)用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。SNHG16基因的表達(dá)量與組織標(biāo)本病理參數(shù)之間的關(guān)系用卡方檢驗(yàn)。雙側(cè)P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 SNHG16在不同胃癌細(xì)胞株中的表達(dá)

qRT- PCR結(jié)果顯示,與胃黏膜上皮細(xì)胞GES- 1比較，胃癌細(xì)胞株HGC- 27 SNHG16的表達(dá)量為4.21±0.69,MGC- 803為1.99±0.21,BGC- 803為1.90±0.44，SGC- 7901為0.76±0.05，AGS為3.36±0.81；SNHG16在SGC- 7901中低表達(dá)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其他4株細(xì)胞中顯著高表達(dá)(P<0.01)。

2.2 SNHG16在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)

41例胃癌組織中SNHG16表達(dá)量為2.64±1.59，與對(duì)應(yīng)的癌旁組織表達(dá)量比較SNHG16表達(dá)上調(diào)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

2.3 SNHG16與胃癌臨床病理資料的相關(guān)分析

41例胃癌患者胃癌組織中，SNHG16表達(dá)水平與腫瘤的侵襲相關(guān)(r=0.361,P<0.01),且侵襲程度T3- T4期的患者其SNHG16表達(dá)量高于侵襲程度T1- T2期(圖1);但在性別、年齡、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期等其他的病理特征上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

3 討 論

目前越來(lái)越多的研究表明,lncRNA在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用[12],但對(duì)于這些lncRNA在癌癥發(fā)生發(fā)展過(guò)程中所扮演的角色及作用機(jī)制仍知之甚少[13- 16]。本研究結(jié)果顯示，lncRNA SNHG16在胃癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織。進(jìn)一步分析癌組織中SNHG16表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，SNHG16的表達(dá)與腫瘤的侵襲程度(T1- T4)呈正相關(guān)，隨著侵襲程度加深，SNHG16癌組織中的表達(dá)量增高，而與其他臨床病理特征不相關(guān)。這一研究結(jié)果提示,SNHG16可能通過(guò)一定信號(hào)途徑參與胃癌的侵襲，從而進(jìn)一步影響胃癌的進(jìn)展及預(yù)后。

不同分化程度的胃癌細(xì)胞株SNHG16高表達(dá)，其中未分化細(xì)胞株HGC- 27表達(dá)量最高，高分化細(xì)胞株AGS次之，中分化細(xì)胞株MGC- 803和BGC- 823表達(dá)水平相當(dāng)，且SNHG16表達(dá)水平與胃癌細(xì)胞的分化程度無(wú)明顯關(guān)聯(lián)。結(jié)果說(shuō)明，SNHG16主要的生物學(xué)作用可能更大程度上影響胃癌細(xì)胞侵襲，而不是分化和惡性變。

表1 SNHG16表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)間的關(guān)系

Tab 1 Correlation between the SNHG16 expression and clinicopthological characteristics in gastric cancer

臨床生物學(xué)特征nSHNG16表達(dá)分布/例高低P值性別 男2613130．195 女15114年齡 ≤60歲201280．853 >60歲21129分化程度 中/中低13670．925 低281810腫瘤侵襲 T1?T210370．030 T3?T431229淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 無(wú)12570．756 有291910遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移 M03923160．802 M1211TNM分期 Ⅰ?Ⅱ期14590．097 Ⅲ?Ⅳ期271710

注：以SNHG16表達(dá)量的中位數(shù)作為臨界值，高于臨界值視為高表達(dá)，小于中位數(shù)為低表達(dá)。

圖1 不同侵襲程度中SNHG16的表達(dá)量

Fig 1 The expression of SNHG16 in different invasion degrees

綜上所述，侵襲與轉(zhuǎn)移是胃癌重要生物學(xué)行為之一，也是造成患者不能及時(shí)有效獲得治療并導(dǎo)致死亡的主要原因[17]。SNHG16在胃癌的進(jìn)展中可能發(fā)揮致癌基因的作用，主要參與胃癌細(xì)胞的侵襲過(guò)程，對(duì)分化及其惡化作用不大，但其在胃癌的進(jìn)展和預(yù)后過(guò)程中的具體作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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Long non- coding RNA SNHG16 dysregulated expression in gastric cancer and its clinicopathological significance

ZHAO Juan- juan1，WEI Si- xi1,2,YAN Zhi- qiang3，LIU Juan- juan1， WAN Ying1，HUANG Hai1,2

(1.DepartmentofClinicalBiochemistry,SchoolofClinicalLaboratoryScience,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,China; 2.DepartmentofClinicalBiochemistry,AffiliatedHospitalofGuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,China; 3.DepartmentofGastrointerstinalSurgery,AffiliatedHospitalofGuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,China)

Objective: To explore the expression of long non- coding RNA SNHG16 in human gastric cancer tissues and cell lines, as well its clinical implication. Methods: Quantitative real- time PCR (qRT- PCR) was performed to detect the expression of SNHG16 in 41 pairs of gastric cancer samples and four gastric cancer cell lines with different degrees of differentiation and normal gastric mucosa cell line GES- 1. The potential relationship between lncRNA SNHG16 expression levels in tumor tissues and clinicopatholoical features of gastric cancer were analyzed. Results: The qRT- PCR confirmed that expression of SNHG16 was significantly increased in gastric cancer tissues(2.64±1.59),which was associated with the depth of the invasion, compared with adjacent non- tumor tissues(P<0.05,r=0.361). Compared with GES- 1, the relative expression of SNHG16 in cell lines with different degrees of differentiation were respectively:HGC- 27(4.21±0.69),MGC- 803(1.99±0.21),BGC- 803(1.90±0.44),SGC- 7901(0.76±0.05)and AGS(3.36±0.81). The expression of SNHG16 was up- regulated in different degrees of gastric cancer cells compared with GES- 1(P<0.01).SNHG16 expression was down- regulated in SGC- 7901 compared with GES- 1(P>0.05). Conclusion: High expression of SNHG16 is involved in the depth of invasion of gastric cancer and may represent a potential biomarker for the prognosis monitoring and treatment of gastric cancer.

gastric cancer; long non- coding RNA; SNHG16; qRT- PCR

2017- 02- 26

2017- 05- 22

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81460364)

趙娟娟(1989-)，女，貴州盤(pán)縣人，在讀碩士研究生。E- mail:liushan12345624437@126.com

黃海 E- mail:cffchen321@163.com

趙娟娟,韋四喜,嚴(yán)芝強(qiáng),等.胃癌長(zhǎng)鏈非編碼RNA SNHG16異常表達(dá)及其臨床病理意義[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2017，36(4)：551- 554.

R735.2

A

1671- 6264(2017)04- 0551- 04

10.3969/j.issn.1671- 6264.2017.04.010