小鼠胰腺炎模型中胰腺導(dǎo)管腺體與導(dǎo)管上皮修復(fù)再生的研究

劉旭呈,王立山,周家華

(1.東南大學(xué) 醫(yī)學(xué)院,江蘇 南京 210009； 2.東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院 肝膽胰中心,江蘇 南京 210009)

·論 著·

小鼠胰腺炎模型中胰腺導(dǎo)管腺體與導(dǎo)管上皮修復(fù)再生的研究

劉旭呈1,王立山1,周家華2

(1.東南大學(xué) 醫(yī)學(xué)院,江蘇 南京 210009； 2.東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院 肝膽胰中心,江蘇 南京 210009)

目的：探討在炎癥情況下胰腺導(dǎo)管腺體(PDG)與胰腺導(dǎo)管上皮修復(fù)再生過程的關(guān)系。方法：采用病理學(xué)評分評估雨蛙肽誘導(dǎo)急慢性胰腺炎小鼠模型的建立，采用病理組織學(xué)方法觀察胰腺組織中PDG及導(dǎo)管結(jié)構(gòu)病理學(xué)變化；免疫組化檢測PDG及胰腺導(dǎo)管上皮細胞中Pdx1、Sox9、Ngn3的表達情況，利用免疫組化評分(HIS評分)評估其陽性表達率。結(jié)果：成功建立小鼠急慢性胰腺炎模型，其病理學(xué)評分分別為3.33±0.52和8.50±0.55，與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義；在慢性胰腺炎模型中，PDG結(jié)構(gòu)出現(xiàn)明顯的增殖變化，且Pdx1、Sox9、Ngn3的表達均有陽性，HIS評分分別為1.966 7±0.233 8、0.700 0±0.209 8、0.900 0±0.209 8，與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：PDG結(jié)構(gòu)與胰腺導(dǎo)管上皮組織的修復(fù)再生相關(guān)，且與成體胰腺的分化成熟有聯(lián)系，可能以胰腺干細胞巢的形式分布于胰腺組織中。

胰腺炎模型; 胰腺導(dǎo)管腺體; 修復(fù)再生; 胰腺干細胞標志物; 小鼠

上皮組織的修復(fù)和再生通過某些細胞的增殖分化來完成，而這類細胞通常都具有自我復(fù)制能力和分化潛能，稱之為成體干細胞。在多種上皮組織中，成體干細胞通過增殖或分化遷移至上皮來維持組織的正常結(jié)構(gòu)或完成病理狀態(tài)下的修復(fù)再生[1]；但在正常情況下，胰腺上皮組織中上皮細胞的更新速率卻是極低的[2]。然而,胰腺在炎癥損傷的情況下卻能很快地完成自身的修復(fù)再生[3]，這說明胰腺中同樣存在成體干細胞,但我們對成體干細胞在胰腺組織中的分布以及在胰腺炎癥的修復(fù)再生的具體作用知之甚少。

胰腺導(dǎo)管腺體(PDG)于20世紀60年代首次被發(fā)現(xiàn)[4]，它含有豐富的胞漿和較大的基底核，主要分布于胰腺主導(dǎo)管及小葉間導(dǎo)管上皮組織中，是一種囊狀腺體樣或卷曲腺體樣的特殊結(jié)構(gòu)。PDG可能與胰腺導(dǎo)管上皮的修復(fù)再生及胰腺導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀黏液瘤(IPMN)的形成也有一定的相關(guān)性[5]，然而我們對PDG與炎癥及腫瘤之間的關(guān)系仍知之甚少。

本研究通過建立急慢性胰腺炎的小鼠模型，觀察胰腺導(dǎo)管周圍PDG以及導(dǎo)管上皮組織的變化情況，并通過檢測Pdx1、Sox9、Ngn3等相關(guān)蛋白的表達情況，來觀察導(dǎo)管上皮組織與炎癥的關(guān)系以及PDG與上皮修復(fù)再生的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 動物及主要試劑

32只雄性SPF級C57小鼠(20 g左右,6～8周)購自揚州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心，飼養(yǎng)于東南大學(xué)動物實驗中心；主要試劑有雨蛙肽(CAS：17650- 98- 5 yeasen)、Anti- Pdx1(bs- 0922R bioss)、Anti- Sox9(bs- 4177R bioss)、Anti- Ngn3(bs- 0922R bioss)、Anti- CK19(bs- 2190R bioss)及Anti- Ki67(bs- 23104R bioss)。

1.2 方法

1.2.1 胰腺炎模型的建立 將32只C57小鼠隨機分為對照組(n=12)、急性胰腺炎組(AP組，n=6)和慢性胰腺炎組(CP組,n=14)。AP組予以雨蛙肽50 μg·kg-1腹腔注射6次，間隔1 h；CP組予以雨蛙肽50 μg·kg-1腹腔注射6次·d-1，間隔1 h，5 d·周-1，連續(xù)6周；對照組予以生理鹽水腹腔注射6次·d-1，間隔1 h。AP組于第2天造模20 h后腹腔麻醉，取胰腺組織于10%福爾馬林中固定；CP組分別于第2、4、6周取材。

1.2.2 組織病理學(xué)觀察 胰腺組織固定后脫水，石蠟包埋并按10 μm厚度切片，蘇木精-伊紅染色，盲法觀察每一張切片。參照Schmidt等[6]的報道，對胰腺損傷程度進行評分，評分標準為胰腺小葉間或腺泡細胞的水腫、炎癥細胞的浸潤和胰腺腺泡細胞的壞死。

1.2.3 AB- PAS染色 石蠟切片脫蠟至水，蒸餾水沖洗，70%酒精沖洗，加高碘酸酒精溶液10 min。用70%酒精洗后，加入還原液中1 min。再用70%酒精沖洗，滴入無色鹽基性品紅溶液1～1.5 h，再用流水沖洗10 min，用Mayer’s蘇木素復(fù)染液復(fù)染細胞核3～5 min，再用1%鹽酸酒精分化。流水沖洗后，脫水、透明、封固。

1.2.4 免疫組織化學(xué)染色 胰腺切片脫蠟后用pH 7.4的磷酸鹽緩沖液(PBS)洗3次，每次5 min，3%過氧化氫溶液浸泡15 min以滅活內(nèi)源酶，再經(jīng)5%牛血清白蛋白孵育30 min后加入一抗(Anti- Pdx1)，濕盒4 ℃孵育過夜，以PBS洗3次，每次5 min。然后滴加生物素化二抗，置于室溫2 h，以PBS洗3次，每次5 min。加入滴加鏈霉親和素-生物素復(fù)合物(SABC)液室溫2 h，以PBS洗3次，每次5 min。以二甲基聯(lián)苯胺(DBA)顯色，顯色3～7 min，鏡下標記物質(zhì)呈棕黃色，并常規(guī)干燥、透明、樹膠封片。陰性對照組實驗切片不加第一抗體孵育，其他步驟相同；Anti- Sox9、Anti- Ngn3、Anti- CK19、Anti- Ki67步驟與以上相同。

1.2.5 免疫組化結(jié)果判定方法 結(jié)構(gòu)清晰，著色明顯高于背景，在相應(yīng)部位出現(xiàn)棕黃色顆粒者為陽性細胞；不著色或顯色強度與背景無差別者為陰性細胞。每例切片隨機選擇5個高倍(400×)視野，統(tǒng)計陽性細胞數(shù)量和著色程度，取平均值。免疫組化評分(HIS值)法進行統(tǒng)計：A為陽性細胞數(shù)，0%為0，1%～10%為1，11%～50%為2，51%～80%為3，81%～100%為4；B為陽性細胞顯色強度,分為0(無顯色，陰性)、1(淺黃色，弱陽性)、2(棕黃色，陽性)、3(棕褐色，強陽性)。以A與B之乘積作為HIS值，用于免疫組化評分。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行分析，組間評分比較采用t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 小鼠炎癥模型的建立

在雨蛙肽的反復(fù)刺激下，成功建立了小鼠的急慢性胰腺炎模型，AP組胰腺組織病理學(xué)評分為3.33±0.52，高于對照組評分(P<0.001)；CP組胰腺組織病理學(xué)評分為8.50±0.55，也高于對照組的病理學(xué)評分(P<0.001)。AP組小鼠胰腺組織出現(xiàn)腺泡水腫、組織充血、炎癥細胞浸潤等現(xiàn)象；CP組小鼠胰腺組織出現(xiàn)腺泡萎縮、組織纖維化等現(xiàn)象，胰腺導(dǎo)管系統(tǒng)周圍出現(xiàn)特征明顯的PDG結(jié)構(gòu)(圖1)。

2.2 胰腺導(dǎo)管系統(tǒng)周圍存在著PDG結(jié)構(gòu)

在正常小鼠及急性胰腺炎模型中，小鼠導(dǎo)管系統(tǒng)周圍的PDG結(jié)構(gòu)出現(xiàn)較少；但在慢性胰腺炎模型小鼠中，PDG結(jié)構(gòu)明顯增多，且多分布于胰腺主胰管及小葉間導(dǎo)管周圍，在小葉內(nèi)導(dǎo)管及閏管等周圍未發(fā)現(xiàn)PDG的分布(圖2)。這說明PDG結(jié)構(gòu)的增殖與胰腺的慢性炎癥有較大的關(guān)系，與胰腺導(dǎo)管上皮的修復(fù)在結(jié)構(gòu)上有著一定的關(guān)聯(lián)性。在長期炎癥情況下小鼠的胰腺導(dǎo)管上皮組織發(fā)生自身的修復(fù)再生，而導(dǎo)管上皮組織的修復(fù)再生可能是通過PDG的增殖來完成的。

此外，在慢性胰腺炎模型的建立過程中，2周時小鼠胰腺導(dǎo)管周圍就出現(xiàn)了特征明顯的PDG結(jié)構(gòu)，且隨著時間的推移PDG結(jié)構(gòu)的數(shù)量呈增多的趨勢，6周時PDG增殖最為明顯，結(jié)構(gòu)上與主胰管的導(dǎo)管上皮組織相似(圖3)。在慢性胰腺炎模型中PDG結(jié)構(gòu)與導(dǎo)管均能分泌黏蛋白，導(dǎo)管結(jié)構(gòu)中的細胞分泌中性黏蛋白，呈均質(zhì)紅染，而PDG結(jié)構(gòu)除了能分泌中性黏蛋白之外，還能特異性分泌酸性黏蛋白，染色表現(xiàn)為混合性黏蛋白的藍紫色(圖4)，兩者的黏蛋白表達相近，PDG結(jié)構(gòu)特異性分泌的酸性黏蛋白很可能參與慢性胰腺炎導(dǎo)管上皮組織的修復(fù)再生。所以,PDG結(jié)構(gòu)與胰腺導(dǎo)管上皮組織的修復(fù)有著密切的關(guān)系。

A、C.正常小鼠胰腺組織的病理學(xué)表現(xiàn)；B.AP組小鼠胰腺組織輕度水腫,局部炎癥細胞浸潤，小葉結(jié)構(gòu)正常；D.CP組小鼠胰腺組織大量腺泡壞死灶和炎癥細胞浸潤，小葉結(jié)構(gòu)被破壞，出現(xiàn)間質(zhì)纖維化等

圖1 在雨蛙肽的誘導(dǎo)下小鼠胰腺組織的病理學(xué)改變

Fig 1 The pathology of pancreatic tissues of mice was changed under the induction of caerulein

A、C.對照組模型小鼠胰腺導(dǎo)管周圍組織未見明顯的PDG；B.AP組模型小鼠胰腺導(dǎo)管周圍組織可見少量的PDG分布于主導(dǎo)管周圍,B2為B1的400×光鏡下表現(xiàn)； D.CP組模型小鼠胰腺導(dǎo)管周圍組織導(dǎo)管周圍有大量PDG增殖,D2為D1的400×光鏡下表現(xiàn)

圖2 小鼠急慢性炎癥胰腺炎模型下胰腺導(dǎo)管周圍PDG的改變

Fig 2 The PDG structures around the pancreatic ducts were changed in mice with acute and chronic pancreatitis

A.2周時小鼠胰腺導(dǎo)管周圍出現(xiàn)較為明顯的PDG，與主胰管毗鄰；B.為A圖400×光鏡下表現(xiàn)，PDG囊腔擴張，細胞形態(tài)與導(dǎo)管細胞類似；C.4周時小鼠胰腺導(dǎo)管周圍的PDG數(shù)目增多；D.為C圖400×光鏡下表現(xiàn)，PDG數(shù)目增多，但囊腔大小無明顯變化；E.6周時小鼠胰腺導(dǎo)管周圍的PDG形態(tài)改變，表現(xiàn)為不規(guī)則管形；F.為E圖400×光鏡下表現(xiàn)，PDG囊腔明顯擴張，且形態(tài)多呈不規(guī)則形

圖3 在不同時間點CP組小鼠胰腺導(dǎo)管周圍PDG的變化

Fig 3 The PDG structures around the pancreatic ducts in chronic pancreatitis model mice were changed at different time points

A.對照組小鼠胰腺導(dǎo)管上皮和PDG分泌中性黏蛋白，染色呈紅色；B.CP組小鼠胰腺導(dǎo)管上皮和PDG分泌大量黏蛋白，胰腺導(dǎo)管分泌中性黏蛋白，染色呈深紅色；PDG分泌混合性黏蛋白，染色呈藍紫色

圖4 CP組小鼠胰腺導(dǎo)管上皮和PDG黏蛋白的表達

Fig 4 Mucins were expressed in pancreatic ductal epithelium and PDG structures in mice with chronic pancreatitis

2.3 PDG結(jié)構(gòu)參與成體胰腺組織的分化成熟

在慢性炎癥的影響下，胰腺導(dǎo)管系統(tǒng)的增殖能力被激活，胰管及PDG中均可見Ki67陽性的細胞，其HIS評分分別為1.133 3±0.326 6和3.567 7±0.585 4，較對照組的0.066 7±0.103 3和0.266 7±0.103 3有明顯差異(圖5)。此外在PDG中出現(xiàn)Pdx1陽性的細胞，其HIS評分為1.966 7±0.233 8，較對照組的0.033 3±0.081 7明顯增高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(圖6)。這說明在慢性炎癥的刺激下，PDG結(jié)構(gòu)中存在胰腺干細胞特性的細胞，參與導(dǎo)管上皮的修復(fù)再生。

在慢性胰腺炎模型中，PDG結(jié)構(gòu)中存在CK19陽性和Sox9陽性的細胞，其HIS評分分別為1.000 0±0.178 9和0.700 0±0.209 8，較對照組的0.466 7±0.242 2和0.033 3±0.081 7升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(圖7、8)。Sox9與胰腺導(dǎo)管的分化成熟相關(guān)，而CK19是胰腺導(dǎo)管上皮細胞的標志物，說明在PDG結(jié)構(gòu)中存在一種參與胰腺導(dǎo)管細胞分化成熟的細胞；此外，PDG結(jié)構(gòu)中還少量存在Ngn3陽性的細胞，其HIS評分為0.900 0±0.209 8，較對照組的0.000 0±0.000 0升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(圖7、8)。Ngn3主要多表達于胰島及少量腺泡細胞中，與胰島細胞分化成熟密切相關(guān)，說明在PDG結(jié)構(gòu)中還存在著參與胰島細胞分化成熟的細胞。所以，PDG結(jié)構(gòu)參與成體胰腺組織的分化成熟，以胰腺干細胞巢的形式廣泛存在于胰腺組織中。

A.對照組小鼠胰腺組織Ki67免疫組化的結(jié)果呈陰性，染色無顯色；B.CP組小鼠胰腺組織Ki67免疫組化結(jié)果，胰腺導(dǎo)管及PDG陽性表達，染色呈淺黃色；C.對照組和CP組小鼠胰腺組織Ki67免疫組化的HIS評分。aP<0.05,bP<0.001

圖5 對照組和CP組小鼠胰腺組織Ki67的免疫組化結(jié)果和其HIS評分

Fig 5 Pancreatic tissues of mice were evaluated by immunohistochemical staining and HIS score of Ki67 in group Control and group CP

A.對照組小鼠胰腺組織Pdx1免疫組化的結(jié)果呈陰性，染色無顯色；B.CP組小鼠胰腺組織Pdx1免疫組化結(jié)果，PDG有陽性表達，染色呈淺黃色;C.對照組和CP組小鼠胰腺組織Pdx1免疫組化的HIS評分。aP<0.05,bP<0.001

圖6 對照組和CP組小鼠胰腺組織Pdx1的免疫組化結(jié)果和其HIS評分

Fig 6 Pancreatic tissues of mice were evaluated by immunohistochemical staining and HIS score of Pdx1 in group Control and group CP

A.對照組小鼠胰腺組織PDG管CK19為陽性表達，染色呈棕黃色；B.CP組小鼠胰腺組織PDG有CK19陽性表達，染色呈淺黃色；C.對照組小鼠胰腺組織PDG有Sox9陽性表達，染色呈淺黃色；D.CP組小鼠胰腺組織PDG有Sox9陽性表達，染色呈淺黃色；E.對照 組小鼠胰腺組織Ngn3呈陰性；F.CP組小鼠胰腺組織PDG有Ngn3陽性表達，染色呈淺黃色

圖7 對照組和CP組小鼠胰腺組織CK19、Sox9和Ngn3的免疫組化結(jié)果

Fig 7 Pancreatic tissues of mice were evaluated by immunohistochemical stainings of CK19,Sox9 and Ngn3 in group Control and group CP

3 討 論

對胰腺組織中的成體干細胞以及其參與完成上皮組織修復(fù)再生的過程，我們還知之甚少。本研究我們通過雨蛙肽誘導(dǎo)建立急慢性胰腺炎模型發(fā)現(xiàn)，PDG的大量增殖主要和慢性胰腺炎的發(fā)生相關(guān)，急性胰腺炎模型小鼠胰腺組織除了輕度水腫充血以外，未見明顯的PDG增殖，這說明在急性胰腺炎的自限性中PDG并不占據(jù)主要作用，這可能和胰腺炎癥的嚴重程度相關(guān)。急性胰腺炎模型小鼠的病理學(xué)表現(xiàn)大多呈現(xiàn)急性水腫型胰腺炎的病理特征，未見明顯的腺泡壞死及導(dǎo)管系統(tǒng)損傷，我們猜測PDG的大量增殖與細胞壞死后釋放的大量因子相關(guān)。急性水腫型胰腺炎主要表現(xiàn)為組織水腫，并無大量細胞壞死，不能刺激PDG的大量增殖，而慢性胰腺炎模型小鼠中，腺泡細胞大量壞死，導(dǎo)管上皮組織損傷嚴重，PDG出現(xiàn)了大量增殖的變化。我們推斷在胰腺組織上皮損傷的情況下，PDG開始大量增殖，參與完成導(dǎo)管上皮組織的修復(fù)再生。此外，在PDG中還表達與導(dǎo)管上皮、胰腺發(fā)育和內(nèi)分泌腺細胞分化相關(guān)蛋白標志物，所以我們認為PDG作為胰腺成體干細胞巢廣泛存在于胰腺組織中。

A.對照組和CP組小鼠胰腺組織PDG和胰腺導(dǎo)管中CK19免疫組化的HIS評分；B.對照組和CP組小鼠胰腺組織PDG和胰腺導(dǎo)管中Sox9免疫組化的HIS評分；C.對照組和CP組小鼠胰腺組織PDG和胰腺導(dǎo)管中Ngn3免疫組化的HIS評分。aP<0.05,bP<0.001

圖8 對照組和CP組小鼠胰腺組織CK19、Sox9和Ngn3的免疫組化的HIS評分

Fig 8 Pancreatic tissues of mice were evaluated by HIS scores of CK19,Sox9 and Ngn3 in group Control and group CP

胰腺組織具有異質(zhì)性，不同的結(jié)構(gòu)有不同的增殖機制。胰腺β細胞以及腺泡細胞主要通過自我復(fù)制來完成增殖的過程。雖然在研究中有學(xué)者認為，泡心細胞及終末導(dǎo)管細胞具有潛在干細胞特性，能分化增殖形成β細胞以及腺泡細胞，但其增殖最主要的來源還是通過自身復(fù)制而不是干細胞的分化來完成的。目前關(guān)于胰腺導(dǎo)管上皮細胞增殖的研究較少，主要認為導(dǎo)管細胞的增殖多依賴于干細胞巢的分化。

我們發(fā)現(xiàn)，胰腺在慢性炎癥情況下出現(xiàn)多種結(jié)構(gòu)的增殖,如PDG、胰島、腺泡、終末導(dǎo)管細胞。Strobel等[7]通過系譜追蹤標記的方法標記β細胞以及腺泡細胞，誘導(dǎo)炎癥后未在導(dǎo)管上皮細胞中發(fā)現(xiàn)標記的細胞，這說明胰腺導(dǎo)管細胞的增殖不依賴于胰島及腺泡細胞。Carpino等[8]發(fā)現(xiàn)，PDG主要分布于不小于300 μm的導(dǎo)管系統(tǒng)周圍，而在終末導(dǎo)管系統(tǒng)中未發(fā)現(xiàn)PDG的存在。在炎癥損傷時胰腺終末導(dǎo)管系統(tǒng)有較高的增殖率，其機制仍不清楚，目前認為終末導(dǎo)管的增殖與PDG無關(guān)。

在小鼠和人胚胎胰腺發(fā)育過程中，多種基因起著重要的作用：Pdx1多表達于胰腺前體細胞，與胰腺發(fā)育和β細胞成熟密切相關(guān)[9]；Sox9多表達于胰腺發(fā)育的前期階段，與前體細胞的成熟分化相關(guān)[10]；Ngn3在內(nèi)分泌細胞發(fā)育、胰島素的產(chǎn)生和分泌及重編程干細胞或非β細胞生成胰島素分泌β細胞中起著重要的調(diào)控作用等[11]。我們發(fā)現(xiàn)，PDG有著特異性的結(jié)構(gòu)并表達特異性的分子標志物，在長期炎癥誘導(dǎo)后PDG表達Pdx1、Sox9、Ngn3蛋白標志物。敲除小鼠的Pdx1基因后其胰芽無法正常發(fā)育形成胰腺，還有實驗表明外源性的Pdx1表達能誘導(dǎo)腺泡細胞分化成β細胞，因此Pdx1被視為胰腺干細胞的標志物[12]。我們通過長期刺激胰腺誘導(dǎo)炎癥模型后發(fā)現(xiàn)，PDG中Pdx1陽性表達，說明PDG中很有可能存在著胰腺干細胞。此外，在PDG中我們還發(fā)現(xiàn)了Ngn3的陽性表達。Ngn3的表達和β細胞的成熟有著密切關(guān)系，是胰腺內(nèi)分泌腺分化的關(guān)鍵因子，在正常胰腺組織的少數(shù)腺泡和導(dǎo)管組織中也有表達。外源性Ngn3表達能夠誘導(dǎo)腺泡及導(dǎo)管細胞向β細胞分化[13]，而在炎癥情況下PDG中Ngn3有著較高的表達，說明與胰島細胞的分化有著聯(lián)系。除了與內(nèi)分泌腺細胞分化相關(guān)，PDG與導(dǎo)管細胞的增殖也有著密切聯(lián)系。PDG在炎癥的刺激下出現(xiàn)導(dǎo)管上皮細胞的分子特征，胰腺導(dǎo)管細胞均表達CK19和Sox9。CK19作為導(dǎo)管上皮細胞的標志物，表達于正常胰腺導(dǎo)管組織，而Sox9的表達與導(dǎo)管的形成相關(guān)。Chen等[14]通過誘導(dǎo)Sox9的表達使腺泡細胞轉(zhuǎn)分化形成導(dǎo)管樣細胞，說明Sox9在胰腺導(dǎo)管細胞形成中起著重要作用?？偟膩碚f，PDG很可能以干細胞巢的形式存在于胰腺組織中，在炎癥損傷的刺激下能分化增殖形成多種胰腺細胞參與完成組織的修復(fù)再生，所以我們推斷PDG很可能是胰腺干細胞結(jié)構(gòu)。

干細胞和腫瘤之間也有著密切聯(lián)系，它們之間有著很多共性。干細胞的基因突變或者功能失調(diào)是形成腫瘤的重要因素。Notch通路和胰腺癌的發(fā)生和進展有著密切聯(lián)系[15]。在正常胰腺組織中，Notch通路在胰腺的發(fā)育、分化以及修復(fù)再生的過程中扮演著重要的角色[16]。而胰腺癌中Notch過表達促進胰腺癌血管生成，從而誘導(dǎo)胰腺癌的形成、發(fā)展及浸潤、轉(zhuǎn)移[17]。在小鼠模型中Notch持續(xù)活化，出現(xiàn)腺泡-導(dǎo)管化生(ADM)，發(fā)展為PanINs，最終發(fā)展成胰腺癌。而在胰腺發(fā)育的過程中，Ngn3作為Notch的下游通路，它的過度表達和胰腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系仍不清楚。目前認為依賴于Shh通路的Sox9的過度表達與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展也有著密切關(guān)系[18]，但PDG與腫瘤之間關(guān)系的研究甚少，Ngn3、Sox9等蛋白的表達與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展的關(guān)系有待進一步研究。

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Study on the relationship between PDG and pancreatic ductal epithelium regeneration in mouse model of pancreatitis

LIU Xu- cheng1,WANG Li- shan1,ZHOU Jia- hua2

(1.SchoolofMedicine,SoutheastUniversity,Nanjing210009,China; 2.DepartmentofHepatobiliaryandPancreaticCenter,ZhongdaHospital,SoutheastUniversity,Nanjing210009,China)

Objective: Exploring the relationship between PDG and regeneration of pancreatic ductal epithelium under the stimulation of inflammation. Methods： We evaluate whether the mouse model of acute and chronic pancreatitis was established successfully by pathological score；Histopathological changes of PDG and ducts in pancreatic tissue were observed by histopathological methods；The expression of Pdx1, Sox9 and Ngn3 in PDG and pancreatic ductal epithelial cells were observed by immunohistochemistry，and the positive expression rate of markers was evaluated by HIS score. Results: Mouse models of acute and chronic pancreatitis were successfully established, and the pathological scores of group AP and group CP were 3.33±0.52 and 8.50±0.55. There were significant differences compared with the control group with a statistical significance; In the models of chronic pancreatitis, proliferation of PDG were obvious, and the expression of both Pdx1, Sox9 and Ngn3 was positive, The HIS scores were 1.966 7±0.233 8, 0.700 0±0.209 8, 0.900 0±0.209 8 respectively. There was a significant difference compared with the control group with a statistical significance. Conclusion： PDG is related with the regeneration of pancreatic ductal epithelium and the differentiation and maturation of adult pancreas. PDG may be distributed in pancreatic tissue in the form of pancreatic stem cell nests.

pancreatitis models; pancreatic ductal gland regeneration; regeneration; pancreatic stem cell markers; mice

2017- 03- 23

2017- 04- 28

國家自然科學(xué)基金資助項目(6590000141)

劉旭呈(1991-)，男，江蘇南通人，在讀碩士研究生。E- mail:18626014180@163.com

周家華 E- mail:zhoujiahua64@163.com

劉旭呈,王立山,周家華.小鼠胰腺炎模型中胰腺導(dǎo)管腺體與導(dǎo)管上皮修復(fù)再生的研究[J].東南大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2017，36(4)：505- 512.

R- 332; R657.51

A

1671- 6264(2017)04- 0505- 08

10.3969/j.issn.1671- 6264.2017.04.001