離子色譜法測定豇豆和苦瓜中對氯苯氧乙酸的殘留量

謝艷麗，趙振東，馮玉紅，章程輝

（1.海南大學(xué)分析測試中心，?？?70228； 2.海南大學(xué)環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院，?？?70228；3.農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險評估實(shí)驗室（?？冢？?70228）

離子色譜法測定豇豆和苦瓜中對氯苯氧乙酸的殘留量

謝艷麗1，2，3，趙振東1，3，馮玉紅1，3，章程輝3＊

（1.海南大學(xué)分析測試中心，海口570228； 2.海南大學(xué)環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院，?？?70228；3.農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險評估實(shí)驗室（?？冢?，海口570228）

采用離子色譜法測定豇豆和苦瓜中對氯苯氧乙酸的殘留量。豇豆和苦瓜樣品采用1.8mmol·L－1碳酸鈉－1.7 mmol·L－1碳酸氫鈉溶液超聲提取，固相萃取C18小柱凈化。以1.8mmol·L－1碳酸鈉－1.7mmol·L－1碳酸氫鈉溶液為流動相，紫外檢測器測定。對氯苯氧乙酸的質(zhì)量濃度在0.05～25.0mg·L－1內(nèi)與其對應(yīng)的峰面積呈線性關(guān)系，對氯苯氧乙酸在豇豆和苦瓜中的檢出限（3S／N）依次為0.04，0.03mg·kg－1。以空白樣品為基體進(jìn)行加標(biāo)回收試驗，所得回收率在96.7%～109%之間，測定值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n＝5）在4.7%～7.7%之間。

離子色譜法；對氯苯氧乙酸；豇豆；苦瓜

對氯苯氧乙酸，又稱番茄靈、防落素，是一種內(nèi)吸型多功能植物生長調(diào)節(jié)劑，用于防止茄果類蔬菜落花落果，抑制豆類生根，促進(jìn)果實(shí)發(fā)育，提早成熟，誘導(dǎo)無核果，改善品質(zhì)等［18］，可用于豇豆、番茄、黃瓜、冬瓜等蔬菜以及果樹中，還可用做醫(yī)藥中間體。對氯苯氧乙酸中等毒性，可燃，燃燒產(chǎn)生有毒氯化物氣體。目前蔬菜中對氯苯氧乙酸殘留量的測定主要有氣相色譜－質(zhì)譜法［2，4］、氣相色譜法［5］、高效液相色譜法［7，9］和液相色譜－質(zhì)譜法［67］。氣相色譜法、氣相色譜－質(zhì)譜法、液相色譜法和液相色譜－質(zhì)譜法的優(yōu)點(diǎn)是準(zhǔn)確度高、靈敏度好，缺點(diǎn)是前處理要用到大量的有機(jī)溶劑，對試驗人員的健康不利，也容易污染環(huán)境，且前處理步驟繁瑣，批量檢測工作量過大，因此建立一種簡單可行又對環(huán)境友好的檢測方法非常必要。離子色譜法是一種新型環(huán)保的分析方法，目前已有在食品、環(huán)境等領(lǐng)域中的應(yīng)用報道［1014］。文獻(xiàn)［15］用離子色譜法測定了土壤中對氯苯氧乙酸的殘留量。

本工作建立了離子色譜法測定豇豆和苦瓜中對氯苯氧乙酸殘留量的分析方法，此方法對環(huán)境友好，靈敏度高，方法準(zhǔn)確可靠，簡單易操作，適合批量檢測。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

CIC 300型離子色譜儀，配紫外檢測器；SB－5200DT型超聲波清洗器；島津AUW 220D型電子天平（感量0.01 mg）；離子色譜專用固相萃?。⊿PE）C18小柱（300mg）。

對氯苯氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：1.000g·L－1，稱取對氯苯氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)品（純度為99.5%）10.05mg于10mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度。

碳酸鈉、碳酸氫鈉均為分析純；水為GB／T 6682－2008《分析實(shí)驗室用水規(guī)格和試驗方法》規(guī)定的一級水。

1.2 儀器工作條件

Dionex IonPac AG4A－SC保護(hù)柱（4 mm× 50mm），AS4A－SC分離柱（4mm×250mm）；柱溫35℃；流動相為1.8 mmol·L－1碳酸鈉－1.7mmol·L－1碳酸氫鈉溶液，等度淋洗；流量2mL·min－1；進(jìn)樣量50μL；紫外檢測器吸收波長228nm。

1.3 試驗方法

稱取粉碎后的豇豆或苦瓜試樣5.00g于150mL具塞三角燒瓶中，加入1.8mol·L－1碳酸鈉－1.7mmol·L－1碳酸氫鈉溶液50mL，密封超聲提取30min，移取20mL溶液至50mL離心管中，以10 000r·min－1轉(zhuǎn)速離心20min。取上清液經(jīng)SPE C18小柱過濾，濾液用0.45μm水系濾膜針頭濾器過濾后，按儀器工作條件進(jìn)行測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜行為

試驗選擇了豇豆和苦瓜兩種蔬菜作為研究基質(zhì)，在豇豆和苦瓜中加入2.0mg·kg－1對氯苯氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)品，加標(biāo)樣品的離子色譜圖見圖1。

圖1 加標(biāo)樣品色譜圖Fig.1 Chromatograms of spiked samples

由圖1可知：對氯苯氧乙酸保留時間為5.59min，基質(zhì)峰與對氯苯氧乙酸能完全分開。

2.2 色譜條件的選擇

對氯苯氧乙酸在堿性環(huán)境中以對氯苯氧乙酸根陰離子的形式存在，試驗選擇一款低容量碳酸鹽體系的陰離子色譜柱。

淋洗液流量越高，峰形越好，靈敏度越高，目標(biāo)物出峰越快，分析速率也越快，但分離度會降低，在綜合考慮了分離度、峰形、靈敏度等前提下，試驗選擇淋洗液流量為2mL·min－1。

2.3 超聲提取時間的選擇

稱取18份空白豇豆樣品，每份添加2.0mg· kg－1對氯苯氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)品，試驗考察了超聲提取時間依次為5，10，15，20，25，30，40，60，90min時對測定的影響，其結(jié)果見圖2。

由圖2可知：隨著超聲提取時間的增加，對氯苯氧乙酸在豇豆中的回收率呈增加的趨勢，當(dāng)提取時間達(dá)到30min左右時，回收率趨于穩(wěn)定。試驗選擇超聲提取時間為30min。

圖2 提取時間對回收率的影響Fig.2 Effect of extraction time on recovery

2.4 干擾試驗

豇豆和苦瓜中可能存在吲哚乙酸、吲哚丁酸、硝酸鹽、亞硝酸鹽等干擾物，試驗以吲哚乙酸、吲哚丁酸及常規(guī)陰離子F－、Cl－、NO2－、NO3－、Br－、SO4－、PO43－進(jìn)行干擾試驗。結(jié)果表明：在各離子質(zhì)量濃度不大于50mg·L－1時，對氯苯氧乙酸與常規(guī)陰離子可以有效分離，吲哚乙酸、吲哚丁酸在1.2節(jié)所列的條件下不出峰，因此對目標(biāo)物的檢測沒有影響。

2.5 線性回歸方程和檢出限

移取1.000g·L－1對氯苯氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液適量，稀釋后配制成質(zhì)量濃度依次為0.05，0.1，0.25，1.0，5.0，10.0，25.0mg·L－1的對氯苯氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。按儀器工作條件對標(biāo)準(zhǔn)溶液系列進(jìn)行測定（在該條件下，對氯苯氧乙酸的保留時間為5.75min）。結(jié)果表明：對氯苯氧乙酸的質(zhì)量濃度在0.05～25.0mg·L－1內(nèi)與其對應(yīng)的峰面積呈線性關(guān)系，線性回歸方程為y＝8.480×104x＋1.124× 103，相關(guān)系數(shù)為1.000。

在空白基質(zhì)中添加對氯苯氧乙酸，以3倍信噪比為檢出限，以10倍信噪比為測定下限。當(dāng)樣品稱樣量為5.0g，最后樣品的定容體積為10.0mL時，得到方法中對氯苯氧乙酸在豇豆和苦瓜中的檢出限（3S／N）依次為0.04，0.03mg·kg－1；在豇豆和苦瓜中的測定下限（10S／N）依次為0.15，0.1mg· kg－1。

2.6 方法的精密度與回收試驗

在空白豇豆和空白苦瓜樣品中，分別添加0.5，2.0，10.0mg·kg－1的對氯苯氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)品，每個添加水平5個平行樣品，按試驗方法進(jìn)行測定，其結(jié)果見表1。

表1 精密度與回收試驗結(jié)果（n＝5）Tab.1 Results of tests for precision and recovery（n＝5）

由表1可知：對氯苯氧乙酸在豇豆和苦瓜中的回收率在96.7%～109%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在4.7%～7.7%之間?；厥章逝c精密度測定結(jié)果均符合農(nóng)藥殘留試驗準(zhǔn)則［16］對室內(nèi)檢測分析的要求。

2.7 樣品分析

從?？凇⒊芜~、文昌、屯昌、三亞等5個海南主要的蔬菜種植區(qū)選取了25個種植基地，采集了51種豇豆樣品和46種苦瓜樣品，按試驗方法進(jìn)行測定，均未檢出對氯苯氧乙酸。試驗結(jié)果表明：海南的豇豆、苦瓜在種植過程中可能沒有施用植物生長調(diào)節(jié)劑對氯苯氧乙酸，也可能是對氯苯氧乙酸在豇豆和苦瓜中的殘留量較小，低于方法的檢出限。

本工作采用離子色譜法測定豇豆和苦瓜中對氯苯氧乙酸殘留量，對氯苯氧乙酸可與常規(guī)陰離子分離，也可與豇豆、苦瓜基質(zhì)中的其他干擾成分達(dá)到基線分離，方法的準(zhǔn)確度與精密度符合農(nóng)藥殘留試驗準(zhǔn)則的要求。本方法簡單、快速、適合批量檢測，試驗中未使用有機(jī)溶劑，對環(huán)境友好，可用作實(shí)驗室檢測豇豆和苦瓜中對氯苯氧乙酸的常規(guī)方法。本方法對其他基質(zhì)中對氯苯氧乙酸含量的測定，尚需做進(jìn)一步的研究。

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IC Determination of Residual Amount of 4－Chlorophenoxyacetic Acid in Cowpea and Bitter Gourd

XIE Yanli1，2，3，ZHAO Zhendong1，3，F(xiàn)ENG Yuhong1，3，ZHANG Chenghui3＊
（1.Analysis and Testing Center，Hainan University，Haikou570228，China；2.College of Environment and Plant Protection，Hainan University，Haikou570228，China；3.Laboratory of Quality and Safety Risk Assessment for Agro－products（Haikou），Ministry of Agriculture，Haikou570228，China）

IC was applied to the determination of residual amount of 4－chlorophenoxyacetic acid in cowpea and bitter gourd.The sample of cowpea and bitter gourd was extracted ultrasonically with mixture of 1.8mmol·L－1Na2CO3and 1.7mmol·L－1NaHCO3solution，and then purified with SPE C18colunm.Mixture of 1.8mmol·L－1Na2CO3and 1.7 mmol·L－1NaHCO3solution was used as mobile phase，and UV detector was used in determination.Linear relationship between values of peak area and mass concentration of 4－chlorophenoxyacetic acid was kept in the range of 0.05－25.0mg·L－1，with detection limits（3S／N）in cowpea and bitter gourd of 0.04，0.03mg·kg－1respectively.On the base of blank sample，test for recovery was made by standard addition method；values of recovery found were in the range of 96.7%－109%，with RSD′s（n＝5）in the range of 4.7%－7.7%.

IC；4－chlorophenoxyacetic acid；cowpea；bitter gourd

O657.7

A

1001－4020（2017）05－0594－04

10.11973／lhjy－h(huán)x201705024

2016－04－22

國家重大科學(xué)儀器設(shè)備開發(fā)專項（2012YQ09022910）；海南省自然科學(xué)基金（214019）

謝艷麗（1976－），女，河南洛陽人，高級實(shí)驗師，主要從事色譜研究工作

＊通信聯(lián)系人。zchlm＠163.com