酪酸梭菌對食物過敏小鼠腸道屏障功能的影響*

李 旌，黃 煌，梅 璐，于 泳，劉思濛，丁一芮，白利梅，蔣 杰，鄭鵬遠

(鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院消化科，鄭州 450052)

·論 著·

酪酸梭菌對食物過敏小鼠腸道屏障功能的影響*

李 旌，黃 煌，梅 璐，于 泳，劉思濛，丁一芮，白利梅，蔣 杰，鄭鵬遠△

(鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院消化科，鄭州 450052)

目的 探討產(chǎn)丁酸的益生菌酪酸梭菌通過調(diào)節(jié)腸上皮細胞雙孔鉀通道Trek1的表達對過敏小鼠腸道屏障功能的影響。方法 建立小鼠食物過敏模型，ELISA法、流式細胞儀檢測相關(guān)指標驗證造模效果，尤斯室檢測小腸組織通透性變化，Western blot及免疫熒光法檢測Na?ve組、Saline組、SIT組、SIT/SB組、SB組、SIT/CB組、CB組、SIT/CB/Spadin組小鼠空腸組織中Trek1的表達；Transwell系統(tǒng)中使用T84細胞建立單層上皮細胞層，分別暴露于過敏介質(zhì)，qRT-PCR和Western blot檢測Trek1 mRNA和蛋白的表達；分別使用生理鹽水、SIT、SIT/SB、SB、SIT/CB、CB、SIT/CB/Spadin不同療法對過敏小鼠進行治療，了解小鼠腸道Trek1的表達情況、腸道屏障功能及過敏反應(yīng)指標的變化情況。結(jié)果 相對于對照組，食物過敏小鼠小腸Trek1蛋白表達水平顯著下降，腸黏膜通透性顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；T84細胞暴露于過敏介質(zhì)后，Trek1 mRNA和蛋白的表達顯著下降(P<0.05)，但預(yù)先加入p38抑制劑可以拮抗這種改變；SIT治療、酪酸梭菌和丁酸鈉單獨應(yīng)用均可以提高食物過敏小鼠腸道Trek1的表達，減輕過敏反應(yīng)(P<0.05)，但SIT與酪酸梭菌或丁酸鈉的聯(lián)合應(yīng)用效果更加顯著(與SIT組相比P<0.05)，并且可以顯著降低小腸黏膜通透性，改善腸道屏障功能(P<0.05)。結(jié)論 丁酸鈉或者產(chǎn)丁酸的益生菌酪酸梭菌可以通過提高Trek1的表達來恢復(fù)過敏小鼠的腸道屏障功能，減輕過敏反應(yīng)，并且加強SIT治療的效果。

食物過敏；Trek1；腸道屏障功能；益生菌

近年來，過敏性疾病的發(fā)病率逐漸增高，其中約有8%的兒童和5%的成年人發(fā)生過針對某些特定食物抗原的食物過敏。食物過敏是一種Th2細胞因子驅(qū)動的免疫紊亂疾病，癥狀包括腹痛、嘔吐、蕁麻疹、腹瀉等，嚴重者可發(fā)生過敏性休克。腸道屏障功能對于維持機體的免疫穩(wěn)態(tài)有著重要的意義，研究發(fā)現(xiàn)食物過敏的嬰兒及成人均存在腸道屏障功能受損的現(xiàn)象[1]。腸道屏障功能障礙的主要表現(xiàn)為腸上皮層對大分子物質(zhì)的通透性增高，可能導(dǎo)致某些食物抗原通過跨細胞途徑或細胞間途徑通過上皮屏障，從而激活腸道免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致腸道過敏的發(fā)生[2]。雙孔鉀通道Trek1(TWIK-related potassium channel-1)定位于上皮細胞，在肺泡上皮細胞[3]、心血管內(nèi)皮細胞[4]和腸道上皮細胞均有表達[5]。近期有研究表明，Trek1有調(diào)整肺泡上皮屏障[3]、中樞神經(jīng)系統(tǒng)免疫-細胞屏障的功能[6]。益生菌在多種疾病的輔助治療中都取得了良好的效果，筆者的前期研究發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)丁酸的酪酸梭菌可顯著改善IBS小鼠的腸道屏障功能[7]?；谝陨线@些研究，筆者推測Trek1有調(diào)整腸道屏障功能的作用，食物過敏小鼠腸道Trek1表達可能有異常，酪酸梭菌可通過上調(diào)Trek1的表達來改善食物過敏小鼠的腸道屏障功能，減輕過敏反應(yīng)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及主要材料 BALB/c小鼠100只(6～8周齡，20～25 g)購于河南省動物實驗中心。小鼠飼養(yǎng)于SPF環(huán)境中，隨意飲水及進食，12 h日夜循環(huán)，動物實驗由鄭州大學(xué)倫理委員會批準。主要材料：酪酸梭菌(#1987252:285-289)由深圳科興生物有限公司惠贈； T84人結(jié)腸上皮細胞系購于上海中科院細胞庫；IL-4、IL-5、IL-13 ELISA試劑盒購于美國R&D公司；卵清蛋白(OVA)特異性IgE ELISA試劑盒購于英國AbD Sertec公司；Trek1(C-20)抗體購于Santa Cruz Biotech公司；IL-4、IL-5、IL-13，肥大細胞蛋白酶-1(mMCP-1)和TNF-α重組蛋白購于上海Biomart公司；丁酸鈉、p38抑制劑PD169316及辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)購于美國Sigma公司。

1.2 方法

1.2.1 實驗動物分組及干預(yù) (1)食物過敏模型：按照本團隊之前建立的方法[8]，6～8周齡SPF級BALB/c小鼠隨機分為Saline組和Allergy組，每組10只。OVA 0.1 mg和霍亂毒素20 μg溶解于0.3 mL生理鹽水中，給予Allergy組BALB/c小鼠灌胃，連續(xù)5周。Saline組予等量生理鹽水灌胃。過敏效果的檢測包括ELISA法測定血清 Th2型細胞因子(IL-4、IL-5、IL-13)及OVA特異性IgE的水平，小腸黏膜上肥大細胞(MC)和嗜酸性粒細胞(EO)計數(shù)，以及抗原特異性CD4+T細胞增殖的百分比。(2)抗原特異性免疫療法(antigen-specific immunotherapy,SIT)：按照文獻[9]報道方法進行，按以下程序逐漸增加OVA的劑量，將相應(yīng)劑量OVA加入0.3 mL生理鹽水中灌胃，共14 d。第1～2天：0.01 mg；第3～4天：0.05 mg；第5～7天0.10 mg；第8～9天0.25 mg；第10～14天0.50 mg。(3)過敏小鼠的治療：根據(jù)處理方式不同，將小鼠隨機分為8組，每組10只。未致敏小鼠為Na?ve組，予生理鹽水腹腔注射及灌胃。致敏后小鼠分為7組，分別按以下方式干預(yù)：Saline組予生理鹽水腹腔注射及灌胃；SIT組按上文方法進行處理，生理鹽水腹腔注射；SIT/SB組每日SIT處理前予丁酸鈉(sodium butyrate，SB)腹腔注射(50 mmol/L溶于0.5 mL生理鹽水中)；SB組予SB腹腔注射，生理鹽水腹腔灌胃；SIT/CB組每日SIT處理前予酪酸梭菌(C.Butyricum，CB)灌胃(109CFU/只，混于0.3 mL生理鹽水中)；CB組每日予CB灌胃，生理鹽水腹腔注射；SIT/CB/Spadin組在每日SIT治療前，分別給予Trek1拮抗劑Spadin(10 mmol/L溶于0.1 mL生理鹽水)腹腔注射和CB灌胃。

1.2.2 小腸黏膜MC及EO計數(shù) 小鼠處死后取兩塊空腸黏膜迅速放入液氮冷凍后制作冰凍切片。冰凍切片使用冷丙酮固定，分別對EO和MC染色。光鏡下分別對MC和EO計數(shù)，共20個視野，以1 mm2的細胞數(shù)計數(shù)結(jié)果。

1.2.3 抗原特異性的CD4+T細胞增殖功能測定 首先進行免疫細胞分離，小鼠處死后立即取脾臟，按試劑盒說明書使用免疫磁珠對脾臟細胞懸液中的樹突狀細胞(dendritic cells,DCs)和CD4+CD25-T細胞進行分離。流式細胞儀鑒定細胞純度大于98%。在分離出的T細胞中加入5 μmol/L CFSE進行標記，將標記過的T細胞與DC細胞按照5∶1的比例混合，在加入了10 μg/mL OVA的培養(yǎng)液中培養(yǎng)72 h。流式細胞儀檢測CFSE陽性的細胞。

1.2.4 免疫熒光法檢測Trek1的表達 小鼠處死后取空腸組織制作冰凍切片。組織切片使用冷丙酮固定20 min，BSA封閉30 min，一抗室溫孵育1 h，異硫氰酸熒光素(FITC)標記的熒光二抗室溫孵育1 h，PI染核。每次孵育后使用PBS洗滌3次。甘油封片劑封片，待封片劑凝固后用共聚焦顯微鏡觀察并采集圖片。

1.2.5 Western blot檢測Trek1的表達 向組織中按比例加入蛋白裂解液，充分勻漿，提取結(jié)腸總蛋白，BCA法測蛋白濃度，調(diào)整各樣本蛋白濃度相等。加等量蛋白于加樣孔中，電泳，轉(zhuǎn)膜，麗春紅染膜，5%脫脂奶粉封閉，一抗孵育過夜，洗膜，二抗孵育，洗膜，顯色。

1.2.6 Real-Time qRT-PCR檢測Trek1 mRNA和蛋白的表達 向小鼠空腸組織中加入適量的RNAiso Plus，提取總RNA，按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明合成cDNA。GenBank 獲得目的基因mRNA 全長序列,利用 Primer5.0設(shè)計引物序列,經(jīng)局部序列比對基本檢索工具(BLAST)分析證實引物序列具有特異性。以β-actin為內(nèi)參照，引物序列：Trek1：上游5′-CAA TTC GAC GGA GCT GGA TG-3′；下游5′-CTT CTG TGC GTG GTG AGA TG-3′。β-actin：上游5′-CGC AAA GAC CTG TAT GCC AA-3′；下游5′-CAC ACA GAG TAC TTG CGC TC-3′。使用TOYOBO的SYBR Green Realtime PCR Master Mix試劑盒，ABI 7500 fast Real-time PCR系統(tǒng)，循環(huán)條件為：95 ℃預(yù)變性60 s，95 ℃變性15 s，60 ℃退火15 s，72 ℃延伸45 s；共40個循環(huán)。以目的基因與β-actin的2-△△CT的比值表示Trek1的表達水平。本實驗重復(fù)3次。

1.2.7 T84單層上皮細胞培養(yǎng) 人結(jié)腸上皮細胞系T84細胞使用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)(含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、0.1 mg/mL的鏈霉素、2 mmol/L L-谷氨酰胺)4～6 d，收集細胞，以106cells/mL的密度種植于無包被的0.4 μm的Millpore transwell細胞跨膜培養(yǎng)系統(tǒng)， Millicell-ERS電阻測量儀檢測T84細胞層的跨膜電阻TER，當TER≥1 000 Ω/cm2時提示細胞條件成熟，可進行后續(xù)實驗。

1.2.8 CB的培養(yǎng) CB凍干菌粉使用含10 g葡萄糖，10 g蛋白胨，2 g KH2PO4，0.5 g酵母提取物，0.5 g MgSO4·7H2O和1 g L-半胱氨酸的肉湯培養(yǎng)基，37 ℃恒溫厭氧培養(yǎng)過夜。使用前將菌液以8 500×g的轉(zhuǎn)速離心10 min，收集沉淀，PBS洗滌3次，加入生理鹽水制成懸液。每只小鼠以1×109CFU/只的劑量灌胃。

1.2.9 尤斯室測定腸道屏障功能 小鼠處死后，取小腸組織，去除肌層及漿膜，固定于0.3 cm2的有機玻璃夾中，裝入尤斯室灌流系統(tǒng)。向系統(tǒng)中注入Kreb′s液，并在漿膜面加入10 mmol/L的葡萄糖作為能量來源，黏膜面加入10 mmol/L的甘露醇平衡滲透壓。組織放入尤斯室后平衡30 min，待短路電流(Isc)穩(wěn)定后，開始記錄Isc、組織電導(dǎo)率(G)。同時，在黏膜面加入10-5mol/L的HRP(44×103)作為蛋白探針，每30分鐘取漿膜面樣品0.5 mL測定HRP活性，共2 h。

1.2.10 HRP流量采用修正的Worthington法測定[10]150 μL待測樣品加入800 μL含0.003% H2O2和80 μg/mL鄰聯(lián)茴香胺的PBS中。分光光度計測出460 nm處的A值，代表HRP酶的活性。通過公式計算出HRP流量，以pmol·cm-2·h-1表示。

2 結(jié) 果

2.1 食物過敏小鼠小腸Trek1表達下調(diào)，腸道屏障功能受損 本研究成功建立了腸道致敏的小鼠模型， 表現(xiàn)為：Allergy組小鼠的血清Th2型細胞因子IL-4、IL-5、IL-13水平和血清特異性IgE、小腸組織MC和EO計數(shù)、特異性CD4+T細胞增殖的百分比均顯著高于Saline組(P<0.05)(圖1A～D)。Western blot檢測Allergy組小鼠小腸上皮Trek1蛋白表達水平顯著低于Saline組(P<0.05)，免疫熒光檢測Allergy組小鼠小腸上皮組織中Trek1蛋白表達水平顯著低于Saline組(圖1E～G)。腸道屏障功能的檢測在尤斯室內(nèi)進行，以Isc、G反映腸道黏膜通透性，以HRP流量來反映腸道對大分子物質(zhì)的通透性。尤斯室中記錄的Allergy組小鼠的Isc、G以及各時間段HRP流量均顯著高于Saline組，尤斯室中記錄的Allergy組小鼠的Isc、G以及各時間段HRP流量均顯著高于Saline組(圖1 H～K)。

2.2 過敏介質(zhì)通過p38 MAPK途徑抑制T84結(jié)腸上皮細胞Trek1的表達 在T84細胞的培養(yǎng)液中分別加入IL-4(520 ng/mL)，IL-5(530 ng/mL)，IL-13(550 ng/mL)，小鼠mMCP-1(520 ng/mL)或TNF-α(510 ng/mL)培養(yǎng)72 h，設(shè)置陰性對照(Saline)和無關(guān)蛋白對照(BSA)。暴露于這5種細胞因子中的任意一種，均可以顯著降低T84細胞Trek1 mRNA和蛋白的表達(P<0.05)，見圖2。在培養(yǎng)液中預(yù)先加入了p38抑制劑(PD169316，25μmol/L)后，重復(fù)上述實驗過程，結(jié)果Trek1 mRNA和蛋白的表達與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.3 酪酸梭菌可上調(diào)食物過敏小鼠腸道Trek1的表達 為了模仿臨床患者的脫敏過程，對小鼠進行了SIT治療。通過檢測Na?ve組、Saline組、SIT組、SIT/SB組、SB組、SIT/CB組、CB組、SIT/CB/Spadin組血清Th2型細胞因子、血清抗原特異性IgE、小腸組織中MC，EO和抗原特異性CD4+T細胞增殖功能，結(jié)果提示與Saline組相比，CB、SB、SIT單獨治療均可提高過敏小鼠腸道Trek1的表達并減輕過敏反應(yīng)(P<0.05)，但SIT與CB或SB的聯(lián)合治療效果更加顯著(與SIT組相比，P<0.05)。將Trek1抑制劑spandin與SIT與CB合用后，結(jié)果SIT與CB的聯(lián)合治療對過敏的抑制作用消失。

2.4 酪酸梭菌治療顯著改善食物過敏小鼠腸道屏障功能 與Saline組相比，兩個聯(lián)合治療組SIT/SB組、SIT/CB組的Isc、G以及0～30 min，30～60 min，60～90 min的HRP流量均顯著降低(P<0.05)，見圖3。

A：血清Th2型細胞因子檢測(ELISA)；B：血清抗原特異性IgE檢測(ELISA)；C：小腸組織中MC和EO計數(shù)；D：抗原特異性CD4+T細胞增殖功能測定(FCM)；E：小腸上皮Trek1蛋白表達(Western blot)；F～H：檢測小腸上皮組織Trek1蛋白表達(免疫熒光)。I：小腸組織Isc測定；J：小腸組織G測定；K：各時段HRP流量測定；a:P<0.05，與Saline組比較

圖1 建立小鼠食物過敏模型前后的病例變化

A：Trek1 mRNA檢測(qRT-PCR)；B:Trek1蛋白檢測(Western blot)；a:P<0.05，與Saline組比較

圖2 過敏介質(zhì)及p38抑制劑對Trek1表達的影響

A：小腸組織Isc測定；B：小腸組織G測定；C：各時段HRP流量測定；1：Na?ve組；2：Saline組；3：SIT組；4：SIT/SB組；5：SB組；6：SIT/CB組；7：CB組；8：SIT/CB/Spadin組；a:P<0.05，與Saline組比較

圖3 尤斯室試驗

3 討 論

近20年來，食物過敏的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)迅速增高，出現(xiàn)這種情況的原因尚不明確，導(dǎo)致對于食物過敏的治療方法非常有限。而腸道屏障功能對于維持免疫穩(wěn)態(tài)有著重要的意義，腸道屏障功能障礙可能是食物過敏病理生理過程中的中心環(huán)節(jié)。影響腸道屏障功能的因素眾多，所以找到一個有效的治療靶點至關(guān)重要。本研究發(fā)現(xiàn)，食物過敏小鼠腸道上皮細胞Trek1的表達下降，腸道通透性增高；過敏介質(zhì)是通過抑制p38 MAPK途徑來抑制T84結(jié)腸上皮細胞層Trek1的表達的；酪酸梭菌及其代謝產(chǎn)物丁酸鈉均可上調(diào)過敏小鼠小腸上皮細胞Trek1的表達，從而改善腸道上皮屏障功能，并減輕過敏反應(yīng)。

Trek1是一種雙孔鉀離子通道，研究表明其與多種屏障功能相關(guān)。Roan等[3]報道Trek1可以調(diào)節(jié)牽拉導(dǎo)致的肺泡上皮細胞層的損傷。Bittner等[6]的研究表明Trek1對于維持血腦屏障的功能有重要的意義。還有研究表明，小鼠結(jié)腸背側(cè)神經(jīng)節(jié)的神經(jīng)元表達機械敏感性Trek1通道，Trek1活性的下降可使結(jié)腸的機械敏感性增強，最終導(dǎo)致腸道炎癥的發(fā)生[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，一系列過敏介質(zhì)(IL-4、IL-5、IL-13、TNF-α、mMCP-1)均可抑制Trek1的表達，進而導(dǎo)致腸道屏障功能障礙。此結(jié)果表明Trek1可能是腸道過敏發(fā)生過程中的關(guān)鍵因素。

為了改善腸道屏障功能，研究者已發(fā)現(xiàn)了一些很有潛力的治療方法。比如使用TNF-α抗體阿達木單抗對T84和Caco-2單層上皮細胞進行干預(yù)，可以抑制肌球蛋白輕鏈的磷酸化及p38 MAPK信號系統(tǒng)、NF-κB的激活，從而改善TNF-α導(dǎo)致的腸道屏障功能障礙[12]。Colgan等[13]發(fā)現(xiàn)暴露于IL-4可導(dǎo)致結(jié)腸上皮屏障功能障礙，用IL-4抗體和IL-4受體抗體處理后，可顯著拮抗這一現(xiàn)象。然而，參與過敏反應(yīng)發(fā)生的是一系列促炎因子，僅僅干預(yù)一種或兩種細胞因子的作用意義不大，所以找到一個共同的作用點對于改善腸道屏障功能障礙有重要的意義。本研究發(fā)現(xiàn)過敏介質(zhì)均可以通過p38 MAPK途徑抑制上皮細胞中Trek1的表達，所以Trek1是過敏介質(zhì)共同的作用對象，是潛在的治療靶點，這對于腸道過敏的治療有著重要的意義。

酪酸梭菌又稱酪酸梭狀芽孢桿菌，是一種專性厭氧的革蘭陽性芽孢桿菌。酪酸梭菌制劑為新一代芽孢類微生態(tài)制劑，對胃酸和溫度有更好的耐受性，可以常溫保存，能和某些抗生素聯(lián)合使用。酪酸梭菌的主要代謝產(chǎn)物丁酸是可促進腸道上皮細胞再生和修復(fù)主要營養(yǎng)物質(zhì)。酪酸梭菌在治療腹瀉、抗生素相關(guān)性腸炎、新生兒黃疸中已取得了良好的效果。筆者前期研究也表明，酪酸梭菌能夠上調(diào)應(yīng)激小鼠腸道上皮細胞occludin、zo-1、claudin-1的表達，改善小鼠腸道屏障功能[14]。本研究中，為了模仿臨床患者的脫敏治療，給予了過敏小鼠SIT治療。而單獨給予SIT治療改善了過敏小鼠的上皮屏障功能和過敏反應(yīng)，單獨使用酪酸梭菌或者丁酸鈉也是如此。但給予過敏小鼠SIT和酪酸梭菌或者SIT和丁酸鈉聯(lián)合治療，腸道Trek1蛋白的表達顯著上調(diào)，并且明顯修復(fù)了腸道屏障功能，同時SIT抑制腸道過敏反應(yīng)也顯著增強。為了解酪酸梭菌或者丁酸鈉改善腸道屏障和過敏反應(yīng)的作用是否是通過上調(diào)Trek1實現(xiàn)的，在聯(lián)合治療中加入了Trek1的抑制劑spadin，發(fā)現(xiàn)抑制過敏反應(yīng)和改善腸道屏障功能的作用被拮抗了，這個現(xiàn)象提示Trek1是酪酸梭菌治療的作用靶點，酪酸梭菌可通過提高Trek1的表達顯著降低腸道上皮屏障的通透性，進而改善過敏反應(yīng)。

綜上所述，小鼠腸道上皮細胞表達Trek1，抑制Trek1的表達會導(dǎo)致腸道上皮屏障障礙。暴露于過敏介質(zhì)會抑制上皮細胞Trek1的表達。酪酸梭菌輔助SIT治療能夠上調(diào)腸道上皮細胞Trek1的表達，最終修復(fù)受損的腸道屏障功能，并且抑制腸道過敏反應(yīng)。這對食物過敏的益生菌治療提供了有力的依據(jù)，開拓了新的思路。

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Effects of clostridium butyricum on intestinal barrier function in food allergic mice*

LiJing,HuangHuang,MeiLu,YuYong,LiuSimeng,DingYirui,BaiLimei,JiangJie,ZhengPengyuan△

(DepartmentofGastroenterology,FifthAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou,Henan450052,China)

Objective To investigate that butyrate-producing probiotic clostridium butyricum improves the intestinal epithelial barrier function in food allergic mice by regulating TWIK-related potassium channel-1(Trek1) expression in intestinal epithelial cells.Methods An intestinal allergy mouse model was created,then the model construction effect was verified by detecting the related indicators by ELISA,flow cytometer.The change of small intestinal tissue permeability was detected by the Ussing chambers.The Trek1 expressions in mouse jejunum tissue in control group and allergy group were detected by Western blot and immunofluorescent method;in the Transwell system,T84 cells were used to establish epithelial cellular monolayer for exposing to the allergic mediators,the Trek1 mRNA and protein expression were detected by qRT-PCR and Western blot.Then the allergic mice were grouped and treated by different methods including normal saline,SIT，SIT/SB，SB，SIT/CB，CB，SIT/CB/Spadin,the expression of mice intestinal Trek1,intestinal barrier function and allergic reaction indicators were detected.Results Compared with the control group,the small intestinal Trek1 protein and tissue expression level in the food allergic mice were significantly decreased,the intestinal mucosal permeability was significantly increased,the differences were statistically significant(P<0.05);after T84 cells exposing to the allergic mediators,Trek1 mRNA and protein expression were significantly decreased(P<0.05),but adding p38 inhibitor in advance could antagonize this change;the single use of SIT,clostridium butyricum and sodium butyrate could increase the intestinal Trek1 expression in food allergic mice,and alleviated the allergic reaction(P<0.05),whereas the combined use of SIT and clostridium butyricum or sodium butyrate had more significant effect(compared with the SIT group,P<0.05),moreover could significantly decrease small intestinal mucosal permeability and improved the intestinal barrier function(P<0.05).Conclusion Sodium butyrate or butyrate-producing probiotic clostridium butyricum can restore the intestinal barrier function,alleviates the allergic reaction and strengthens the SIT curative effect in allergic mice by increasing Trek1 expression.

food hypersensitivity;Trek1;epithelial barrier;probiotics

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.22.002

國家自然科學(xué)基金資助項目(81370494)；國家973計劃前期研究專項(2011CB512006) ；河南省科技創(chuàng)新杰出人才基金(134200510022)；鄭州市創(chuàng)新型科技人才隊伍建設(shè)工程基金(131PLJRC656)。 作者簡介：李旌(1990-)，在讀碩士，主要從事胃腸道感染與免疫的研究?！?/p>

，E-mail：medp7123@126.com。

R574.4

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1671-8348(2017)22-3028-05

2016-12-18

2017-03-06)