紅豆越橘不同溶劑萃取物組成及抗氧化相關(guān)性

樊梓鸞，陳凱莉，柳雅馨，楊蕾玉，付玉杰*

（東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150040）

紅豆越橘不同溶劑萃取物組成及抗氧化相關(guān)性

樊梓鸞，陳凱莉，柳雅馨，楊蕾玉，付玉杰*

（東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150040）

以矮叢紅豆越橘為研究對象，用體積分?jǐn)?shù)95%乙醇提取后，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，評價乙醇粗提取物和不同溶劑萃取物中總酚、總黃酮、總花色苷、齊墩果酸含量及體外抗氧化能力（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基、2,2 -聯(lián)氮雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二銨鹽自由基（2,2 -azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate)，ABTS＋·）清除能力）。紅豆越橘粗提取物及不同溶劑萃取物均具有一定的抗氧化活性，其中乙酸乙酯、正丁醇萃取物的抗氧化活性較強(qiáng)，乙酸乙酯萃取物具有最好的DPPH自由基清除能力（半抑制濃度（50% inhibitory concentration，IC50）為0.27 mg/mL）與ABTS＋?清除能力（IC50為0.05 mg/mL）。不同溶劑萃取物的抗氧化活性與總黃酮和總酚的含量具有較強(qiáng)的相關(guān)性。

紅豆越橘；抗氧化；總酚；總黃酮；總花色苷；齊墩果酸

樊梓鸞, 陳凱莉, 柳雅馨, 等. 紅豆越橘不同溶劑萃取物組成及抗氧化相關(guān)性[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(17): 138-144. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201717023. http://www.spkx.net.cn

FAN Ziluan, CHEN Kaili, LIU Yaxin, et al. Correlation between antioxidant activity in vitro and active components of different solvent extracts from lingonberry[J]. Food Science, 2017, 38(17): 138-144. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201717023. http://www.spkx.net.cn

自由基會誘發(fā)脂質(zhì)、蛋白質(zhì)及DNA的氧化，而抗氧化劑的重要功能之一是清除自由基，因此抗氧化劑清除自由基的作用不僅引起了科學(xué)家的關(guān)注，公眾對此也有極大的興趣[1-3]。從食物和天然植物中尋找抗氧化的天然活性成分，如多酚、黃酮、三萜類等物質(zhì)已成為當(dāng)前營養(yǎng)與食品研究的熱點(diǎn)之一[4-7]。

紅豆越橘（Vaccinium vitis-idaea L.），又名牙疙瘩，隸屬于杜鵑花科（Ericaceae）越橘屬（Vaccinium spp.），是常綠小灌木，主要分布于東亞、北美、北歐等高山地區(qū)[8]，在我國主要集中于大興安嶺地區(qū)，是重要的野生自然資源，具有很高的利用價值，同時也是風(fēng)靡世界的新興保健水果藍(lán)莓的重要野生品種之一。紅豆越橘果實(shí)為亮紅色，是提取天然色素的重要原料。在越橘的果實(shí)和莖葉中含有花色苷、黃酮、萜類等多種活性成分，具有多種生理功能，對于保健和疾病治療有很好的作用。紅豆越橘富含的多酚類物質(zhì)對自發(fā)性高血壓大鼠有降壓作用，對內(nèi)皮依賴性血管舒張具有改善作用并具有抗炎功效[9-12]。蔓越莓中類黃酮和花青素對預(yù)防心血管疾病有顯著的功效[13]。越橘類提取物可治療尿道感染[14-15]。越橘果渣所含的黃酮類成分具有較高的抗氧化活性[16]。通過研究越橘和藍(lán)莓提取物對鼠大腦細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)防護(hù)作用發(fā)現(xiàn)越橘和藍(lán)莓對神經(jīng)具有明顯的保護(hù)作用[17]。蔓越莓和越橘的濃縮物可抑制水果中真菌的生長[18]。Yin等[19]用含有0.5%三萜酸的食物喂小鼠4～8 周，對小鼠的血漿、大腦、心臟等部位進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)攝入三萜類的小鼠具有更強(qiáng)的抗 氧化能力。因此，對紅豆越橘各種活性成分的研究是近年來國內(nèi)外的熱點(diǎn)之一。關(guān)于紅豆越橘的報道已經(jīng)有很多，但是對其不同溶劑萃取，測定不同萃取物的活性成分含量及其抗氧化相關(guān)性的研究鮮見報道，因此本實(shí)驗(yàn)研究紅豆越橘粗提取物及不同溶劑萃取物的抗氧化活性與其總酚、總黃酮、總花色苷、齊墩果酸含量的關(guān)系，為更好地了解紅豆越橘抗氧化成分的存在部位，更有效地開發(fā)與利用紅豆越橘提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

矮叢紅豆越橘（Vaccinium vitis-idaea L.）于成熟季節(jié)采摘于大興安嶺加格達(dá)奇區(qū)，－4 ℃冷凍保存。

1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、6-羥基-2,5,7,8-四甲基苯并二氫吡喃-2-羧酸（Trolox，水溶性VE）、福林-酚試劑 美國Sigma公司；2,2 -聯(lián)氮雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二銨鹽（2,2 -azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate)，ABTS）、沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥98%）、兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥95%）、香草醛、齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥97%） 上海阿拉丁試劑公司；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

722型分光光度計(jì)、PHS-26數(shù)顯pH計(jì) 上海精密儀器有限公司；FA25高剪切分散乳化機(jī) 上海弗魯克流體機(jī)械制造有限公司；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、SHB-3真空泵循環(huán)水系統(tǒng) 上海亞榮生化儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 紅豆越橘粗提取物及不同溶劑萃取物的制備

用電子天平稱取凍存漿果1 kg，加入2 L體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇，在組織搗碎機(jī)中勻漿5 min，從搗碎機(jī)中取出勻漿，在FA25高剪切分散乳化機(jī)中均質(zhì)3 min，真空抽濾。收集濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，在45 ℃條件下減壓濃縮至近干時，用少量乙醇轉(zhuǎn)移到蒸發(fā)皿中，冷凍干燥得乙醇粗提取物。將紅豆越橘粗提物用水（1∶10，m/V）溶解，分別用等量體積的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，之后濃縮、凍干即得不同溶劑萃取物，于－80 ℃保存待用。

1.3.2 紅豆越橘抗氧化活性物質(zhì)測定

以初步分析紅豆越橘抗氧化活性為目的，對紅豆越橘粗提物和不同極性萃取物的總酚、總黃酮、總花色苷、齊墩果酸含量進(jìn)行測定，以此推測粗提取物及不同萃取物對DPPH自由基、ABTS＋?清除能力與總黃酮、總酚、總花色苷、齊墩果酸含量之間的相關(guān)性。

1.3.2.1 總酚含量的測定

采用福林-酚比色法檢測總酚含量[20]，并稍作調(diào)整。

沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：精密吸取40 μL沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.00、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40 mg/mL及0.45 mg/mL），分別置于10 mL試管中，加入1.8 mL 0.1mol/L的福林-酚試劑，樣品混合充分，避光5 min，加入1.2 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)7% Na2CO3水溶液，90 min后在765 nm波長處測定藍(lán)色溶液的吸光度。參比為不含提取液的空白試劑。以沒食子酸的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）、吸光度為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

總酚含量的測定：分別精密量取粗提取物和各萃取物40 μL（1 mg/mL），按上述操作測得765 nm波長處吸光度，并根據(jù)沒食子酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算粗提取物和各萃取物的總酚含量。

1.3.2.2 總黃酮含量的測定

采用AlCl3比色法檢測總黃酮含量[21]，并稍作調(diào)整。兒茶素標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：精密吸取1 mL兒茶素標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.032 5、0.062 5、0.125 0、0.250 0 mg/mL及0.500 0 mg/mL）分別置于10 mL試管中，加入300 μL質(zhì)量分?jǐn)?shù)5% NaNO2，混合均勻，6 min后加入300 μL質(zhì)量分?jǐn)?shù)10% AlCl3?6H2O，搖勻放置6 min；然后加入4 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)4% NaOH溶液，混勻，15 min后于510 nm波長處測定各溶液的吸光度。參比為不含提取液的空白試劑。以兒茶素的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x）、吸光度為縱坐標(biāo)（y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

總黃酮含量測定：分別精密量取紅豆越橘粗提取物及各萃取物1 mL（1 mg/mL），按上述操作測得510 nm波長處吸光度，并根據(jù)兒茶素的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算粗提取物和各萃取物的總黃酮含量。

1.3.2.3 齊墩果酸含量的測定

參照文獻(xiàn)[22]并稍作調(diào)整。齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：精密吸取0.1 mg/mL齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.4、0.8、1.2、1.6 mL及2.0 mL分別置于10 mL試管中，水浴揮干，加入新配制的質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL、高氯酸1.2 mL，于60 ℃水浴加熱15 min后取出，立即用冰水冷卻，加入冰醋酸5.0 mL，搖勻，靜置10 min后，用紫外分光光度計(jì)，于550 nm波長處測定吸光度。以齊墩果酸的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）、吸光度為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

齊墩果酸含量測定：分別精密量取紅豆越橘取粗提取物及各萃取物1 mL（0.5 mg/mL），按上述操作測得在550 nm波長處測定吸光度，并根據(jù)齊墩果酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算粗提取物及各萃取物齊墩果酸含量。

1.3.2.4 總花色苷含量的測定

總花色苷含量的測定用pH-示差分光光度法[23]。精密量取紅豆越橘粗提取物及各萃取物200 μL（1 mg/mL）各2 份于10 m L試管中，分別加入5 mL氯化鉀緩沖液（0.025 mol/L、pH 1.0）、乙酸鈉緩沖液（0.4 mol/L、pH 4.5），分別在510 nm和700 nm波長處測定吸光度，以蒸餾水為空白對照?？偦ㄉ蘸堪词剑?）、（2）計(jì)算。

式中：A1為pH 1.0條件下A510nm與A700nm之差；A2為pH 4.5條件下A510nm與A700nm之差；ε為矢車菊素-3-葡萄糖苷的摩爾消光系數(shù)（26 900 L/（mol?cm））；DF為稀釋因子；M為矢車菊素-3-葡萄糖苷的摩爾質(zhì)量（449.2 g/mol）；V為最終體積/mL；m為產(chǎn)品質(zhì)量/g；L為光程（1 cm）。

1.3.2.5 DPPH法測定抗氧化能力

參照文獻(xiàn)[24]并稍作調(diào)整。將紅豆越橘粗提取物、各萃取物及Trolox配制成0.062 5、0.125 0、0.250 0、0.500 0、1.000 0、2.000 0 mg/mL及4.000 0 mg/mL的樣品溶液。取0.1 mL樣品溶液加入1.4 mL無水乙醇，之后再加入1.0 mL 1×10－4mol/L DPPH溶液，混勻，放置于室溫暗處70 min后測定517 nm波長處吸光度。以Trolox為陽性對照，DPPH自由基的清除率按式（3）計(jì)算。

式中：A1為0.1 mL樣品液＋1.4 mL無水乙醇＋1.0 mL DPPH的吸光度；A2為0.1 mL樣品液＋2.4 mL無水乙醇的吸光度；A3為1.5 mL無水乙醇＋1.0 mL DPPH的吸光度。

按上述方法計(jì)算DPPH自由基清除率，根據(jù)Calcusyn Demo軟件求出半抑制濃度（50% inhibitory concentration，IC50）即清除率為50%的樣品質(zhì)量濃度。

1.3.2.6 ABTS法測定抗氧化能力

參照文獻(xiàn)[25]并稍作調(diào)整。將5 mL 7 mmol/L ABTS和88 μL 140 mmol/L過硫酸鉀混合，在室溫、避光的條件下靜置過夜，形成ABTS儲備液。使用前將ABTS儲備液用磷酸鹽緩沖液稀釋成ABTS工作液，要求在30 ℃、734 nm波長下吸光度為0.70±0.02。將紅豆越橘粗提取物、各萃取物及Trolox配制成0.062 5、0.125 0、0.250 0、0.500 0、1.000 0、2.000 0 mg/mL及4.000 0 mg/mL質(zhì)量濃度的樣品溶液，取0.1 mL樣品溶液加入1.5 mL ABTS工作液，充分振蕩混勻，避光放置6 min，在734 nm波長處測定吸光度。以Trolox作為陽性對照，對ABTS＋?清除率計(jì)算見式（4）。

式中：Acontrol為0.1 mL無水乙醇＋1.5 mL ABTS的吸光度；Asample為0.1 mL樣品溶液＋1.5 mL ABTS的吸光度。

按上述方法計(jì)算ABTS＋?清除率，根據(jù)Calcusyn Demo軟件求出IC50。

1.4 數(shù)據(jù)分析

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均為3 次重復(fù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以±s表示。采用Microsoft Offi ce Excel 2007、Origin 8.0、SPSS 21.0、Calcusyn Demo軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理工作。

2 結(jié)果與分析

2.1 紅豆越橘粗提取物及各萃取物活性成分分析

2.1.1 紅豆越橘粗提取物及各萃取物總酚含量

圖 1 紅豆越橘不同溶劑提取物總酚含量Fig. 1 Total polyphenol contents in different extracts

由圖1可知，紅豆越橘粗提取物及各萃取物中總酚含量存在極顯著性差異（P＜0.01）。植物多酚具有多元酚的結(jié)構(gòu)，是廣泛存在于植物體內(nèi)的多元酚類次生代謝產(chǎn)物，且含量較多，成分復(fù)雜且結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，極性較大，因此總酚主要存在于乙酸乙酯和正丁醇提取物中。粗提取物及各萃取物中按總酚含量排序?yàn)椋阂宜嵋阴ポ腿∥铮菊〈驾腿∥铮臼兔演腿∥铮敬痔崛∥铮舅嵛?。乙酸乙酯萃取物含量最高為?17.95±2.97） mg/g，是含量最少的水提物（14.65±2.05） mg/g的8.05 倍。趙國玲等[26]對壇紫菜不同溶劑組分中的總酚含量進(jìn)行測定，得到：乙酸乙酯萃取物＞粗提取物＞正丁醇萃取物＞石油醚萃取物＞水提物，其含量最高的乙酸乙酯部為69.84 mg/g，是含量最低水部的6.29 倍。

2.1.2 紅豆越橘粗提取物及各萃取物總黃酮含量

圖 2 紅豆越橘不同溶劑提取物總黃酮含量Fig. 2 Total fi avonoid contents in different extracts

由圖2可知，紅豆越橘粗提取物總黃酮含量除與正丁醇萃取物差異不顯著外，與其他組別都存在極顯著性差異（P＜0.01）。黃酮類化合物的基本母核由兩個具有酚羥基的苯環(huán)通過中央3 個碳原子連接構(gòu)成，母核上一般連接有甲基、羥基、異戊烯基和甲氧基等官能團(tuán)。天然黃酮類化合物多與糖結(jié)合以苷類形式存在，為低中等極性化合物，低級性黃酮苷元存在于石油醚組分中，極性較大的黃酮苷類主要存在于乙酸乙酯組分中。粗提取物及各萃取物按總黃酮的含量排序?yàn)椋阂宜嵋阴ポ腿∥铮臼兔演腿∥铮菊〈驾腿∥铮敬痔崛∥铮舅嵛铩Ｒ宜嵋阴ポ腿∥锖孔罡邽椋?4.98±0.24） mg/g，是含量最少的水提物（2.13±0.75） mg/g的16.42 倍。喬明福等[27]通過研究蒲桃不同溶劑提取物總黃酮的含量得出乙酸乙酯萃取物＞正丁醇萃取物＞水萃取物＞石油醚萃取物，總黃酮含量最高的乙酸乙酯萃取物為3.953 mg/g，是含量最低石油醚萃取物的4.95 倍。

2.1.3 紅豆越橘粗提取物及各萃取物齊墩果酸含量

由圖3可知，紅豆越橘粗提取物齊墩果酸含量除與正丁醇萃取物差異不顯著外，與其他組別均存在極顯著性差異（P＜0.01）。因石油醚的極性較小，主要萃取一些極性較低的物質(zhì)，可能含有脂溶性成分或者是萜類物質(zhì)。而大部分的萜類物質(zhì)極性都比較低，因此三萜類化合物在石油醚萃取物和乙酸乙酯萃取物中含量較高。粗提取物及各萃取物按齊墩果酸的含量順序依次為：石油醚萃取物＞乙酸乙酯萃取物＞粗提取物＞正丁醇萃取物＞水提物。含量最高的石油醚萃取物（（362.180±0.014） μg/g）是含量最少的水提物（（76.920±0.006） μg/g）的4.70 倍。謝文仙[28]研究狼毒大戟的不同溶劑萃取物中齊墩果酸的含量得出：石油醚萃取物＞水提物＞乙酸乙酯萃取物＞正丁醇萃取物，含量最高的石油醚部為301 mg/g，是含量最低正丁醇部的7.53 倍。

圖 3 紅豆越橘不同溶劑提取物齊墩果酸含量Fig. 3 Oleanolic acid contents in different extracts

2.1.4 紅豆越橘粗提取物及各萃取物總花色苷含量

圖 4 紅豆越橘不同溶劑提取物總花色苷的含量Fig. 4 Contents of total anthocyanins in different extracts

由圖4可知，紅豆越橘粗提取物及各萃取物中總花色苷含量存在極顯著性差異（P＜0.01）?；ㄉ盏幕竟羌苡芍醒氲娜荚觼磉B接兩個苯環(huán)?；ㄉ盏呐浠鶠榛ㄉ?，具有2-苯基-苯并吡喃陽離子的結(jié)構(gòu)，花青素可以與糖以糖苷鍵結(jié)合形成不同種類的花色苷。由于某些花色苷含有羥基，羥基極性大，因此花色苷主要存在于正丁醇中。總花色苷含量排序?yàn)椋赫〈驾腿∥铮臼兔演腿∥铮敬痔崛∥铮舅嵛铮疽宜嵋阴ポ腿∥?。正丁醇萃取物含量最高為?2.09±1.18） mg/g，是含量最少的乙酸乙酯萃取物（1.40±0.10） mg/g的15.78 倍。陳智力等[29]研究藍(lán)靛果不同提取部位花青素的含量得出：正丁醇萃取物＞水提物＞石油醚萃取物＞乙酸乙酯萃取物，含量最高的正丁醇萃取物為37.3 mg/g，是含量最低乙酸乙酯部萃取物的22.34 倍。

2.2 紅豆越橘粗提取物及各萃取物抗氧化作用比較

2.2.1 紅豆越橘粗提取物、各萃取物清除DPPH自由基能力

圖 5 紅豆越橘不同溶劑提取物對DPPH自由基的清除活性Fig. 5 DPPH radical-scavenging activity of different extracts

由圖5可知，紅豆越橘粗提取物及各萃取物對DPPH自由基清除能力大小依次為：乙酸乙酯萃取物＞正丁醇萃取物＞石油醚萃取物＞粗提取物＞水提物。各提取物對DPPH自由基都表現(xiàn)出清除能力，在質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈良好的劑量-效應(yīng)關(guān)系，隨質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng)。整體而言，乙酸乙酯萃取物對DPPH自由基的清除能力高于其他4 種提取物，當(dāng)質(zhì)量濃度為2 mg/mL時清除率達(dá)到最大（92.43±0.13）%。另外正丁醇萃取物的清除能力也較強(qiáng)。

表 1 紅豆越橘不同溶劑提取物及Trolox清除DPPH自由基活性的IC50值Table 1 IC50values of Trolox and different extracts for DPPH radical scavenging activity

由表1可知，紅豆越橘粗提取物及各層萃取物IC50分別為1.71、0.96、0.27、0.65 mg/mL及6.86 mg/mL，各萃取部位清除DPPH自由基能力相對于陽性對照Trolox弱。其中，清除能力最好的乙酸乙酯萃取物（IC50為0.27 mg/mL）約為陽性對照Trolox IC50的2 倍。乙酸乙酯萃取物含有較高的總酚和總黃酮含量，它們是氫或電子的良好給予體，因此能對產(chǎn)生過氧化作用的自由基有明顯的清除作用。清除DPPH自由基的能力與總酚含量的順序一致，同時含有較多花色苷的正丁醇萃取物清除自由基的能力也較強(qiáng)。

2.2.2 紅豆越橘粗提取物、各萃取物清除ABTS＋?能力

由圖6可知，紅豆越橘粗提取物及各層萃取物清除ABTS＋?能力大小依次為：乙酸乙酯萃取物＞正丁醇萃取物＞粗提取物＞石油醚萃取物＞水提物。各萃取物對ABTS＋?都表現(xiàn)出較強(qiáng)的清除能力，在質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈良好的劑量-效應(yīng)關(guān)系，隨質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng)。在各個質(zhì)量濃度條件下，乙酸乙酯萃取物均表現(xiàn)出最強(qiáng)的ABTS＋?清除能力，隨著質(zhì)量濃度的增加，除乙酸乙酯萃取物外正丁醇萃取物的清除能力增大得最快。整體而言，乙酸乙酯萃取物對ABTS＋?的清除能力高于其他4 種萃取物，當(dāng)質(zhì)量濃度為1 mg/mL時清除率達(dá)到最大（99.79±0.25）%。

圖 6 紅豆越橘不同溶劑提取物和Trolox對ABTS＋ 的清除活性Fig. 6 ABTS radical-scavenging activity of Trolox and different extracts

表 2 紅豆越橘不同溶劑提取物清除ABTS＋ 活性的IC50值Table 2 IC50values of Trolox and different extracts for ABTS radical scavenging activity

由表2可知，紅豆越橘粗提取物及各萃取物IC50分別為0.22、0.45、0.05、0.20 mg/mL及0.78 mg/mL。多酚、花色苷、黃酮類活性物質(zhì)在乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物含量較高，這些活性物質(zhì)含有羥基或酚羥基，能夠能提供氫或者電子從而使自由基失活，因此對ABTS＋?的清除能力強(qiáng)，除乙酸乙酯萃取物外其他各萃取物清除ABTS＋?能力相對于陽性對照Trolox弱，清除能力最強(qiáng)的乙酸乙酯萃取物的IC50為0.05 mg/mL，與陽性對照Trolox IC50相當(dāng)。

2.3 總酚、總黃酮、齊墩果酸含量與抗氧化活性相關(guān)性分析

紅豆越橘總酚、總黃酮、齊墩果酸含量與抗氧化活性相關(guān)性分析詳見表3。紅豆越橘乙醇粗提取物及不同萃取物中總黃酮和總酚含量與抗氧化能力之間有較好的相關(guān)性?？偡雍颗c抗氧化活性正相關(guān)，總酚含量與DPPH自由基清除能力極顯著相關(guān)（P＜0.01），與ABTS＋?清除能力顯示出一定的線性相關(guān)性（P＞0.05）?？傸S酮含量與ABTS＋?、DPPH自由基清除能力極顯著正相關(guān)（P＜0.01）。齊墩果酸含量與ABTS＋?、DPPH自由基清除能力相關(guān)性不顯著（P＞0.05）。說明紅豆越橘粗提取物及不同溶劑萃取物中黃酮、總酚含量的多少直接反映萃取物抗氧化能力強(qiáng)弱。樊梓鸞[30]研究包括紅豆越橘在內(nèi)的11 種漿果的多酚和黃酮含量與清除ABTS＋?和DPPH自由基的能力呈現(xiàn)顯著的正相關(guān)性（P＜0.05）。

表 3 總酚、總黃酮、齊墩果酸含量與抗氧化活性相關(guān)性Table 3 Correlation analysis between total phenols, total fi avonoids or oleanolic acid and antioxidant activity

3 結(jié) 論

通過測定紅豆越橘乙醇提取物及不同溶劑萃取物中活性成分及其各提取物清除ABTS＋?、DPPH自由基的能力，考察各提取物中不同活性成分的含量與抗氧化活性之間的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，紅豆越橘粗提取物及各溶劑萃取物中總酚、總黃酮、總花色苷、齊墩果酸含量存在極顯著性差異，總酚、總黃酮、齊墩果酸、總花色苷含量最高的分別為乙酸乙酯萃取物、乙酸乙酯萃取物、石油醚萃取物、正丁醇萃取物。經(jīng)皮爾森系數(shù)分析可知，紅豆越橘提取物中起主要抗氧化作用的是總酚、總黃酮。乙酸乙酯萃取物在質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL時其對DPPH自由基清除率為80.46%（IC50為0.27 mg/mL），乙酸乙酯萃取物在質(zhì)量濃度為0.5 mg/mL時其對ABTS＋?的清除率為99.79%（IC50為0.05 mg/mL）。乙酸乙酯萃取物活性最高，下一步可 對其進(jìn)行系統(tǒng)地分離與分析，確定抗氧化物質(zhì)，為紅豆越橘進(jìn)一步的開發(fā)及利用提供一定的理論依據(jù)。

[1] MCCORD J M. Oxygen-derived free radicals in postischemic tissue injury[J]. New England Journal of Medicine, 1985, 312(3): 159-163. DOI:10.1056/NEJM198501173120305.

[2] BECKMAN J S, BECKMAN T W, CHEN J, et al. Apparent hydroxyl radical production by peroxynitrite: implications for endothelial injury from nitric oxide and superoxide[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 1990, 87(4): 1620-1624. DOI:10.1073/ pnas.87.4.1620.

[3] NIKI E. Antioxidant capacity: which capacity and how to assess it?[J]. Journal of Berry Research, 2011, 1(4): 169-176. DOI:10.3233/JBR-2011-018.

[4] MEHLHORN R J, COLE G. The free radical theory of aging: a critical review[J]. Advances in Free Radical Biology and Medicine, 1985, 1(1): 165-223. DOI:10.1016/8755-9668(85)90007-9.

[5] LEHTONEN H M, LEHTINEN O, SUOMELA J P, et al. Flavonol glycosides of sea buckthorn (Hippophae rhamnoides ssp. sinensis) and lingonberry (Vaccinium vitis-idaea) are bioavail able in humans and monoglucuronidated for excretion[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2010, 58(1): 620-627. DOI:10.1021/jf9029942.

[6] FERREIRA R G S, SILVA JúNIOR W F, VEIGA JUNIOR V F, et al. Physicochemical characterization and biological activities of the triterpenic mixture α, β-amyrenone[J]. Molecules, 2017, 22(2): 1-9. DOI:10.3390/molecules22020298.

[7] PERUSKO M, Al-HANISH A, MIHAILOVIC J, et al. Antioxidative capacity and binding affinity of the complex of green tea catechin and beta-lactoglobulin glycated by the Maillard reaction[J]. Food Chemistry, 2017, 232: 744-752. DOI:10.1016/j.foodchem.2017.04.074.

[8] LI J, PERCIVAL D, HOYLE J, et al. Phenology and yield of native fruits cloudberry/bakeapple (Rub us chamaemorus L.) and lingonberry/ partridgeberry (Vaccinium vitis-idaea L.) grown in Southern Labrador, Canada[J]. Canadian Journal of Plant Science, 2016, 96(3): 329-338. DOI:10.1139/cjps-2015-0131.

[9] GONZáLEZ R, BALLESTER I, LóPEZ-POSADAS R, et al. Effects of f lavonoids and other polyphenols on inflammation[J]. Critical Reviews in Food Science & Nutrition, 2011, 51(4): 331-362. DOI:10.1080/10408390903584094.

[10] KIVIMAKI A S, EHLERS P I, SILTARI A, et al. Lingonberry, cranberry and blackcurrant juices affect mRNA expressions of inflammatory and atherothrombotic markers of SHR in a long-term treatment[J]. Journal of Functional Foods, 2012, 4(2): 496-503. DOI:10.1016/j.jff.2012.02.010.

[11] TANGNEY C C, RASMUSSEN H E. Polyphenols, inflammation, and cardiovascular d isease[J]. Current Atherosclerosis Reports, 2013, 15(5): 1-10. DOI:10.1007/s11883-013-0324-x.

[12] KIVIMAKI A S, EHLERS P I, TURPEINEN A M, et al. Lingonberry juice improves endothelium-dependent vasodilatation of mesenteric arteries in spontaneously hypertensive rats in a long-ter m intervention[J]. Journal of Functional Foods, 2011, 3(4): 267-274. DOI:10.1016/j.jff.2011.05.001.

[13] ISAAK C K, PETKAU J C, O K, et al. Manitoba lingonberry (Vaccinium vi tis-idaea) bioactivities in ischemia-reperfusion injury[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2015, 63(23): 5660-5669. DOI:10.1021/acs.jafc.5b00797.

[14] KONTIOKARI T, SUNDQVIST K, NUUTINEN M, et al. Randomised trial of cranberry-lingonberry juice and Lactobacillus GG drink for the prevention of urinary tract infections in women[J]. British Medical Journal, 2001, 322: 1-5. DOI:10.1136/bmj.322.7302.1571.

[15] HOWELL A B, VORSA N, DER MARDEROSIAN A, et al. Inhibition of the adherence of P-fimbriated Escherichia coli to uroepithelialcell surfaces by proanthocya nidin extracts from cranberries[J]. New England Journal of Medicine, 1998, 339(15): 1085-1086. DOI:10.1056/NEJM199810083391516.

[16] 潘一峰, 瞿偉菁, 顧于蓓, 等. 越桔果渣中黃酮類成分抗氧化活性的研究[J]. 食品科學(xué), 2005, 26(10): 206-210.

[17] VYA S P, DEBNATH M, KALIDINDI S, et al. Protective effect of lingonberry and blueberry extracts on rat brain cells exposed to oxidative stress[J]. Free Radical Biology and Medicine, 2015, 86(Supp1): 39. DOI:10.1016/j.freeradbiomed.2015.07.136.

[18] ERMIS E, HERTEL C, SCHNEIDER C, et al. Characterization of in vitro antifungal activities of small and American cranberry (Vaccinium oxycoccos L. and V. macrocarpon Aiton) and lingonberr y (Vaccinium vitis-idaea L.) concentrates in sugar reduced fruit spreads[J]. International Journal of Food Microbiology, 2015, 204: 111-117. DOI:10.1016/j.ijfood micro.2015.03.017.

[19] YIN M C, LIN M C, MONG M C, et al. Bioavailability, distribution, and antioxidative effects of selected triterpenes in mice[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2012, 60(31): 7697-7701. DOI:10.1021/jf302529x.

[20] LIU M, LIN L Q, SONG B B, et al. Cranberry phytochemical extract inhibits SGC-7901 cell growth and human tumor xenografts in BALB/c nu/nu mice[J]. Journal of Agr icultural and Food Chemistry, 2009, 57(2): 762-768. DOI:10.1021/jf802780k.

[21] SUN J, LIU R H. Apple phytochemical extracts inhibit proliferation of estrogen-dependent and estrogen-independent human breast cancer cells through cell cycle modulation[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2008, 56(24): 11661-11667. DOI:10.1021/jf8021223.

[22] 沈思, 李孚杰, 梅光明, 等. 茯苓皮三萜類物質(zhì)含量的測定及其抑菌活性的研究[J]. 食品科學(xué), 2009, 30(1): 95-98.

[23] BAO J S, CAI Y Z, SUN M, et al. Anthocyani ns, flavonols, and free radical scavenging activity of Chinese bayberry (Myrica rubra) extracts and their color properties and stability[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2005, 53(6): 2327-2332. DOI:10.1021/jf048312z.

[24] CESPEDES C L, VALDEZ-MORALES M, AVIL A J G, et al. Phytochemical profi le and the antioxidant activity of Chilean wild blackberry fruits, Aristote lia chilensis, (Mol) Stuntz (Elaeocarpaceae)[J]. Food Chemistry, 2010, 119(3): 886-895. DOI:10.1016/ j.foodchem.2009.07.045.

[25] TARUSCIO T G, BARNEY D L, EXON J. Content and profile of flavanoid and phenolic acid compounds in conjunction with the antioxidant capacity for a variety of northwest Vaccinium Berries[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2004, 52(10): 3169-3176. DOI:10.1021/jf0307595.

[26] 趙國玲, 劉承初, 謝晶, 等. 壇紫菜不同溶劑組分的抗氧化活性[J].食品科學(xué), 2010, 31(17): 186-191.

[27] 喬明福, 楊秋霞, 何洋. 蒲桃不同提取部位總黃酮含量比較研究[J].廣州化工, 2014, 42(15): 125-127.

[2 8] 謝文仙. 狼毒大戟三萜的提取純化、鑒定與抑瘤抑菌等作用研究[D].廣州: 廣東工業(yè)大學(xué), 2015: 36-37.

[29] 陳智力, 王秋紅, 匡海學(xué). 藍(lán)靛果不同提取部位花青素、多酚類的含量測定及體外抗氧化活性[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2016, 22(1): 48-52. DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2016010048.

[30] 樊梓鸞. 紅豆越橘多酚對氧化誘導(dǎo)損傷及癌細(xì)胞增殖抑制作用研究[D]. 哈爾濱: 哈爾濱工業(yè)大學(xué), 2012: 62-64.

Correlation between Antioxidant Activity in Vitro and Active Components of Different Solvent Extracts from Lingonberry

FAN Ziluan, CHEN Kaili, LIU Yaxin, YANG Leiyu, FU Yujie*
(College of Forestry, Northeast Forestry University, Harbin 150040, China)

The 95% ethanol extract from lingonberry (Vaccinium vitis-idaea L.) was fractionated by successive extraction with petroleum ether, ethyl acetate and n-butanol. The contents of total phenols, total fi avonoids, total anthocyanins and oleanolic acid in the crude extract and its fractions were evaluated as well as their antioxidant activit ies in vitro as indicated by radical scavenging capacities against 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) and (2,2 -azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate (ABTS) radicals. Besides, the correlation between total phenols, total fi avonoids, total anthocyanins or oleanolic acid and antioxidant activity was analyzed. Results indicated that different solvent extracts from lingonberry showed a significant antioxidant activity. The ethyl acetate-soluble and butyl alcohol-soluble fractions had higher free radical scavenging capacity, and the former exhibited the strongest DPPH and ABTS radical scavenging activity with an IC50value of 0.27 and 0.05 mg/mL, respectively. There was a positive correlation between the antioxidant activity of the different extracts and the contents of total phenols and total fi avonoids.

lingonberries; antioxidant; total phenolics; total fi avonoids; total anthocyanins; terpenoid

10.7506/spkx1002-6630-201717023

TS201.2

A

1002-6630（2017）17-0138-07引文格式：

2016-06-28

黑龍江省自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目（QC2016021）；中央高?？茖W(xué)前沿與交叉學(xué)科創(chuàng)新基金項(xiàng)目（2572016CA06）；國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（31170510）；中國博士后科學(xué)基金項(xiàng)目（2016M600239）

樊梓鸞（1981—），女，講師，博士，研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物分離純化及功能活性評價。E-mail：fzl_1122@163.com *通信作者：付玉杰（1967—），女，教授，博士，研究方向?yàn)樯种参锷鷳B(tài)學(xué)、林業(yè)生物制劑。E-mail：985461289@qq.com