DC－CIK細胞免疫治療聯(lián)合化療對晚期卵巢癌患者療效及血清CD133、DDX4水平的影響

王 璐 楊文靜

江漢大學附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科（武漢，430015）

DC－CIK細胞免疫治療聯(lián)合化療對晚期卵巢癌患者療效及血清CD133、DDX4水平的影響

王 璐 楊文靜

江漢大學附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科（武漢，430015）

目的：探討DC－CIK細胞免疫治療聯(lián)合化療治療晚期卵巢癌的臨床療效以及對患者血清CD133、DDX4水平的影響。方法：將60例晚期卵巢癌患者隨機分為觀察組（30例）和對照組（30例），對照組僅接受常規(guī)化療，觀察組采用化療聯(lián)合DC－CIK細胞免疫治療。比較兩組患者的免疫功能、治療效果、不良反應以及血清CD133、DDX4水平在治療前后的變化情況。結(jié)果：觀察組的客觀緩解率（80.0%）高于對照組（50.0%）；在治療后和6個月隨訪時觀察組CD3＋、CD3＋CD4＋、CD4＋／CD8＋以及NK細胞的比值均高于對照組，CD4＋CD25＋、CD133、DDX4水平均低于對照組；且治療前、治療后、6個月隨訪后自身比較CD3＋CD4＋、CD4＋／CD8＋、NK細胞比值均明顯升高，CD133、DDX4水平均明顯降低（均P＜0.05）；治療后與6個月隨訪后免疫功能指標兩組無差異（P＞0.05），骨髓抑制和肝功能損害的發(fā)生率觀察組低于對照組（P＜0.05）。結(jié)論：應用DC－CIK細胞免疫治療聯(lián)合化療治療晚期卵巢癌患者可提高臨床治療效果，增強患者免疫能力，更大幅度降低血清CD133、DDX4水平，減少不良反應的發(fā)生，值得臨床探索應用。

DC－CIK細胞免疫治療；化療；晚期卵巢癌；CD133；DDX4

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一，發(fā)病率在世界婦女常見腫瘤中排第6位，目前我國卵巢癌發(fā)病率為6.0／10萬，但死亡率卻居婦科惡性腫瘤首位，嚴重影響著女性的生命健康及生活質(zhì)量［1］。卵巢癌的治療原則仍以手術(shù)為主，聯(lián)合放、化療，但對于大部分晚期卵巢癌患者，初次腫瘤細胞減滅術(shù)難以切除腫瘤灶，放、化療效果不明顯。免疫治療作為新的治療手段逐漸得到關(guān)注，被認為是唯一有可能治愈癌癥的方法［3］。本研究探討DC－CIK細胞免疫治療聯(lián)合化療治療晚期卵巢癌的臨床療效以及對患者血清CD133、DDX4水平的影響，為晚期卵巢癌治療與決策提供相關(guān)的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對象

收集2015年1月－2016年1月在本院治療的晚期卵巢癌患者60例。研究對象納入標準［4］：經(jīng)病理學檢查確診并按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO 2004）手術(shù)?病理分期標準判定為Ⅳ期卵巢癌；預計生存期大于5個化療周期；無其他嚴重的內(nèi)科疾?。粺o化療禁忌證；患者及家屬對于隨機分組和治療方案均了解并簽署知情同意書。按照數(shù)字隨機法將所有研究對象隨機分為觀察組和對照組各30人。觀察組年齡46.0±12.1歲，13例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，17例骨轉(zhuǎn)移，15例肝轉(zhuǎn)移；對照組年齡46.2±10.8歲，12例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，19例骨轉(zhuǎn)移，12例肝轉(zhuǎn)移。兩組研究對象在年齡、癌細胞轉(zhuǎn)移類型等一般資料的差異不具有統(tǒng)計學意義，具有可比性（P＞0.05）。

1.2 治療方法

對照組采用常規(guī)TC化療治療，即治療第一天靜脈液注紫杉醇175mg／m2和順鉑75mg／m2。觀察組采用DC－CIK細胞免疫聯(lián)合TC化療治療［5］：在治療前一個星期采集每個研究對象的外周血50ml制備DC－CIK細胞，離心后取血漿加入生理鹽水稀釋，用淋巴細胞分離液分離后收集界面層的單個核細胞，用培養(yǎng)基洗滌后按一定濃度懸浮于培養(yǎng)基中，再添加重組人干擾素?γ后將其置于37℃、50ml／LCO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。兩天后添加Anti－CD3和rhIL－2培養(yǎng)液，每隔3天更換一次培養(yǎng)基，并補充加入rhIL－2培養(yǎng)液，培養(yǎng)1周左右時回輸，在TC化療間歇應用外周血培養(yǎng)的DC－CIK細胞細胞治療。兩組均21天為一個治療周期，共治療3個周期，出院后繼續(xù)隨訪觀察6個月。

1.3 觀察指標

①血清CD133、DDX4水平：CD133、DDX4均是腫瘤干細胞標志物之一，在治療前后分別測試兩組患者血清中CD133、DDX4水平并記錄比較。②不良反應：在治療過程中以及治療后，觀察并記錄兩組患者出現(xiàn)的不良反應情況，主要不良反應包括骨髓抑制、消化道反應、肝功能損害以及周圍神經(jīng)毒性。

1.4 療效評價［6］

①免疫功能：在治療前、治療結(jié)束后第7天、隨訪6個月結(jié)束后，分別采集所有研究對象的外周血，并用熒光抗體法檢測T細胞亞群，包括CD3＋、CD3＋CD4＋、CD4＋／CD8＋、CD4＋CD25＋和NK細胞。②療效評價標準：6個月隨訪后，按照實體瘤的療效評價標準（RECIST）將近期療效分為4個等級評價，即完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、穩(wěn)定（SD）和進展（PD）。疾病控制率＝CR＋PR＋SD，客觀緩解率＝CR＋PR。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS20.0進行統(tǒng)計分析。對年齡等計數(shù)資料采用均值±標準差進行描述，t檢驗進行比較分析；對療效等分類資料采用構(gòu)成比、率進行描述，χ2檢驗進行比較分析。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者近期療效的比較

隨訪6個月結(jié)束后，觀察組中CR 15例，PR 9例，SD 4例，PD 2例，客觀緩解率為80.0%（24／30），疾病控制率為93.3%（28／30）；對照組中CR 8例，PR 7例，SD 9例，PD 6例，客觀緩解率為50.0%（15／30），疾病控制率為80.0%（24／30）。兩組疾病控制率無差異（P＞0.05），客觀緩解率觀察組高于對照組（P＜0.05）。

2.2 兩組患者治療前后免疫功能以及血清CD133、DDX4水平的比較

在治療前兩組免疫功能無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。在治療后和6個月隨訪后，觀察組CD3＋、CD3＋CD4＋、CD4＋／CD8＋以及NK細胞的比值均高于對照組，CD4＋CD25＋、CD133、DDX4水平均低于對照組（P＜0.05）；且觀察組治療前后及隨訪后自身比較，CD3＋CD4＋、CD4＋／CD8＋、NK細胞比值均明顯升高，CD133、DDX4水平均明顯降低（P＜0.05），免疫功能指標治療后與隨訪后比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。見表1。

表1 兩組患者不同時期免疫功能以及血清CD133、DDX4水平比較（珚x±s）

2.3 兩組患者不良反應發(fā)生情況比較

在治療過程中，兩組研究對象均產(chǎn)生了不同的不良反應癥狀，但均自行緩解或及時給藥后緩解。其中觀察組骨髓抑制（2例，6.7%）和肝功能損害（3例，10.0%）的發(fā)生率低于對照組［12例（40.0%）、15例（50.0%）］（P＜0.05），觀察組出現(xiàn)消化道反應（10例，33.3%）和周圍神經(jīng)毒性（5例，16.7%）的幾率與對照組14例（46.7%）、6例（20.0%）無差異（P＞0.05）。

3 討論

卵巢癌通常發(fā)病隱匿，且缺乏有效的早期篩查手段，當出現(xiàn)臨床癥狀時大多已是晚期，治療難以達到理想效果。調(diào)查顯示卵巢癌5年生存率僅有25%～30%［3］。在傳統(tǒng)手術(shù)治療，放、化療治療效果不是非常明顯的情況下，免疫治療，尤其是過繼免疫治療中的DC－CIK細胞免疫治療因取得了良好的治療效果，而備受關(guān)注［7］。

機體抗腫瘤反應主要以細胞免疫為主，不同的T淋巴細胞是主要的效應細胞［8］。人體外周血淋巴細胞中的CD3＋、CD4＋、CD8＋和NK細胞變化是反映人體細胞免疫功能的重要指標，其中CD3＋、CD4＋、CD8＋反映機體特異性細胞免疫功能；NK細胞反映機體非特異性細胞免疫功能。樹突狀細胞（DC）是一種專職性抗原提呈細胞，它能攝取識別腫瘤相關(guān)抗原，并將其傳遞給T淋巴細胞，誘導T淋巴細胞增值和應答［9］。細胞因子誘導的殺傷細胞（CIK）是增殖能力最強、細胞活性較強的免疫效應細胞，同時具有很強的腫瘤殺傷能力［10］。DC－CIK細胞治療是將患者自身DC和CIK在體外共同培養(yǎng)，使數(shù)量和活性得到提高后回輸給患者自身，從而提高機體的腫瘤抗原識別能力和腫瘤殺傷能力，延緩或減少腫瘤復發(fā)，提高腫瘤的治愈率和患者生存率［3］。DDX4特異存在于性腺生殖細胞中，在卵巢癌細胞中高度表達；CD133具有與DDX4相似的表達模式，因此在卵巢癌組織中同樣高度表達，是腫瘤干細胞的重要標志物之一［1112］。本研究結(jié)果顯示，采用免疫治療的觀察組CD3＋、CD3＋CD4＋、CD4＋／CD8＋以及NK比值均高于對照組，CD4＋CD25＋、CD133、DDX4水平均低于對照組，且治療前、治療后及隨訪后CD3＋CD4＋、CD4＋／CD8＋、NK細胞比值明顯升高，CD133、DDX4水平明顯降低，免疫功能指標治療后與隨訪后相比較無差異。表明DC－CIK細胞免疫治療能增強患者免疫功能，提高患者抗腫瘤免疫效應，明顯降低患者血清腫瘤標志物CD133和DDX4。

DC－CIK細胞免疫治療能夠確保高效免疫反應和有效的腫瘤細胞殺傷能力，其主要機制在于兩種細胞通過不同的機制各自識別腫瘤細胞后，釋放毒性顆粒裂解腫瘤細胞；同時還能釋放抑制腫瘤活性的細胞因子［1314］。本次研究結(jié)果還顯示，接受DCCIK細胞免疫治療聯(lián)合化療治療的觀察組患者客觀緩解率明顯提高，在治療過程中發(fā)生骨髓抑制和肝功能損害的比例也明顯少于對照組。表明DC－CIK細胞免疫治療聯(lián)合化療能提高晚期卵巢癌的臨床治療效果，并具有較好的安全性。

綜上所述，應用DC－CIK細胞免疫治療聯(lián)合化療治療晚期卵巢癌患者可提高臨床治療效果，增強患者免疫能力，更大幅度降低血清CD133、DDX4水平，減少不良反應的發(fā)生，值得臨床探索應用。

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［責任編輯：董 琳］

Effect of DC－CIK immune－cell therapy combined with chemotherapy on treatment of advanced ovarian carcinoma and its impact on level of serum CD133 and DDX4

WANG Lu，YANG Wenjing Department of Obstetrics and Gynecology，Affiliated Hospital of Jianghan University，Hubei，430015

Objective：To evaluate the effect of DC－CIK immune－cell therapy combined with chemotherapy on treatment of advanced ovarian carcinoma and its impact on level of serum CD133and DDX4.Methods：60patients with advanced ovarian carcinoma were randomly divided into experimental group（30cases）and control group（30cases）.Patients in observation group were given DC－CIK immune－cell therapy combined with chemotherapy，and patients in control group were treated only by chemotherapy.The immune function，therapeutic effect，adverse reaction and the change of serum CD133and DDX4level of patients before and after treatment were recorded and compared between the two groups.Results：The objective response rate（ORR）of patients in observation group was 80.00%，which was significant higher than that of patients in control group（50.00%）.After treatment and at six months followed－up，the level of CD3＋，CD3＋CD4＋，CD4＋／CD8＋and NK cell of patients in observation group were significant higher than those of the patients in control group.The level of CD4＋／CD25＋，CD133，DDX4of patients in observation group were significant lower than those of patients in control group.The level of CD3＋CD4＋，CD4＋／CD8＋and NK cell of patients after treatment in observation group had increased，and the level of CD133，DDX4of patients after treatment in observation group had declined（P＜0.05），but there was no statistically significant differences in indicators of immune function of patients in observation group after treatment（P＞0.05）.The incidence of bone marrow suppression and liver damage of patients in experimental group were significant lower than those of patients in control group（P＜0.05）.Conclusion：Patient with advanced ovarian carcinoma treated by DC－CIK immune－cell combined with chemotherapy can improve the clinical therapeutic effect，promote the immune function，decline serum CD133and DDX4level，as well asdecrease the incidence of adverse reactions.It’s worthy of clinical application.

DC－CIK immune－cell therapy；Chemotherapy；Advanced ovarian carcinoma；CD133；DDX4

10.3969／j.issn.1004－8189.2017.05.003

武漢市衛(wèi)生計生委臨床醫(yī)學科研項目（WX15D59）

2016－12－21

2017－02－12