胃腸間質(zhì)瘤基因突變與臨床病理特征、免疫組化表達(dá)分析

葛運(yùn)貞

DOI：10.16662/j.cnki.1674-0742.2017.16.035

[摘要] 目的 分析胃腸間質(zhì)瘤基因突變與臨床病理特征、免疫組化表達(dá)情況。方法 利用免疫組化方式，分析方便選取該院于2011年12月—2016年12月收治的200例GISTs者以及100例非GISTs者基因表達(dá)和突變情況。 結(jié)果 CD117，DOG1，IGF1R的陽(yáng)性表達(dá)率為：96.0%，93.0%以及6.0%。100例非GISTs腫瘤樣本CD117以及DOG1的陽(yáng)性表達(dá)率為17.0%和10.0%（P<0.05）。130例存在c-KIT基因突變。GISTs者外顯子表達(dá)，CD117和DOG1表達(dá)情況和c-KIT以及PDGFRA基因突變無(wú)相關(guān)性，IGF1R于野生型GISTs中陽(yáng)性率比突變型GISTs高（P<0.01）。不同種類的腫瘤位置之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 聯(lián)合檢測(cè)CD117以及DOG1能夠提升GISTs的準(zhǔn)確程度。IGF1R可能為野生型GISTs特異性的免疫組化指標(biāo)以及潛在性治療靶點(diǎn)。IGF1R可能為野生型GISTs特異性的免疫組化指標(biāo)以及潛在性治療靶點(diǎn)。對(duì)預(yù)測(cè)GISTs者使用酪氨酸激酶抑制藥物的治療效果和預(yù)后有著相當(dāng)重要的指導(dǎo)價(jià)值。

[關(guān)鍵詞] 胃腸間質(zhì)瘤；基因突變；病理特征；免疫組化；表達(dá)情況

[中圖分類號(hào)] R735 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2017）06（a）-0035-03

Analysis of Gene Mutation of Gastrointestinal Stromal Tumors and Clinical Pathological Features and Immunohistochemical Expression

GE Yun-zhen

Department of Pathology， Linyi Economic and Technological Development Zone People's Hospital， Linyi， Shandong Province， 276023 China

[Abstract] Objective To analyze the gene mutation of gastrointestinal stromal tumors and clinical pathological features and immunohistochemical expression. Methods The gene expression and mutation situation 200 cases of GISTs patients and 100 cases of non- GISTs patients from December 2011 to Dcember 2016 were analyzed by the immunohistochemical method. Results The positive expression rates of CD117，DOG1，IGF1R was respectively 96.0%，93.0%， 6.0%， and the positive expression rate of CD117 and DOG1 in 100 non- GISTs patients was 17.0% and 10.0%（P<0.05）， and 130 cases were with gene mutation， and the CD117 and DOG1expressiona and c-KIT and PDGFRA gene mutation had no correlation， and the positive rate of IGF1R in mild type GISTs was higher than that of mutation type GISTs（P<0.01）， and the difference between different tumors was obvious（P<0.05）. Conclusion The combined test of CD117 and DOG1 can improve the accuracy of GISTs， IGF1R may be the immunohistochemical index of mild type GISTs specificity and potential treatment target， which is of important guidance value of preventing the treatment effect of oxyphenylaminopropionic acid suppressing drug and prognosis.

[Key words] Gastrointestinal stromal tumor； Gene mutation； Pathological features； Immunohistochemical； Expression

胃腸道間質(zhì)瘤為一種特殊型、獨(dú)立細(xì)胞，屬其起源并非神經(jīng)元或間質(zhì)，其可能為一種特殊種類及細(xì)胞[1]。在此同時(shí)具備干細(xì)胞特征，就臨床功能來(lái)看，主要為胃腸道平滑肌起搏細(xì)胞，與整個(gè)消化道蠕動(dòng)存在相關(guān)性[2]。為了全面認(rèn)識(shí)胃腸間質(zhì)瘤，并在日常工作中全面掌握其診斷方式，結(jié)合實(shí)際情況，該文方便選擇2011年12月—2016年12月該院收治的200例胃腸間質(zhì)瘤患者為研究對(duì)象，全面分析其基因突變與臨床病理特征、免疫組化表達(dá)情況，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選擇該院收治的200例胃腸間質(zhì)瘤患者為研究對(duì)象。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化染色 使用Abcam公司生產(chǎn)的CD117，DOG1，IGF1R抗體，進(jìn)行免疫組化染色。

1.2.2 核酸提取 對(duì)GISTs者蠟塊進(jìn)行處理。每個(gè)蠟塊取8 μm組織，選擇5條，完成脫蠟之后，使用DNA試劑盒，結(jié)合說(shuō)明書(shū)步驟，完成沉淀、吸附以及洗脫等具體步驟，提取出DNA樣本，實(shí)施純度檢測(cè)。在260 nm/280 nm位置測(cè)量吸光值，具體為1.8以上。

1.2.3 基因突變檢查 該實(shí)驗(yàn)使用美國(guó)西格諾公司生產(chǎn)的DNA質(zhì)譜陣列基因分析設(shè)備，對(duì)患者基因突變情況進(jìn)行檢測(cè)。這種方式以基質(zhì)借助輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)得以實(shí)現(xiàn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

該實(shí)驗(yàn)使用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析和處理數(shù)據(jù)，對(duì)計(jì)量資料使用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料使用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 GISTs者的CD117，DOG1，IGF1R表達(dá)詳情

CD117和DOG1的染色主要為細(xì)胞質(zhì)，少數(shù)定位在細(xì)胞膜。IGF1R主要在細(xì)胞膜。以上3種均為彌漫性分布。兩組的CD117，DOG1，IGF1R表達(dá)詳情見(jiàn)表1。

表1 兩組患者的CD117，DOG1，IGF1R陽(yáng)性表達(dá)詳情

2.2 CD117，DOG1，IGF1R和胃腸間質(zhì)瘤的病理特征關(guān)系

CD117的表達(dá)和腫瘤位置以及組織學(xué)種類相關(guān)；DOG1表達(dá)和腫瘤規(guī)格以及危險(xiǎn)程度相關(guān)。

在腸道來(lái)源的GISTs患者中，CD117陽(yáng)性率顯著比其他位置高。且在上皮型以及梭形病理類型中呈現(xiàn)為高表達(dá)趨勢(shì)。IGF1R和組織學(xué)類型，危險(xiǎn)程度，核分裂象等均無(wú)關(guān)。

2.3 腫瘤生長(zhǎng)方式以及規(guī)格

腔內(nèi)型 28例，突向消化道腔內(nèi)，肌壁間 102例，同時(shí)向黏膜以及漿膜面隆起，表面光滑/潰瘍，漿膜下和其他位置70 例，腫瘤表現(xiàn)為結(jié)節(jié)樣增長(zhǎng)，直徑規(guī)格為0.2～31.3 cm.

2.4 基因變異分析情況

2.4.1 c-KIT基因突變情況 200例患者中，130例在存在c-KIT基因突變。僅有1例患者的CD117免疫組化呈現(xiàn)為陰性。 外顯子11突變108例，外顯子9突變64例， 外顯子13突變10例，外顯子17突變17例。

2.4.2 PDGFRA基因突變 PDGFRA基因突變?nèi)藬?shù)為44例。外顯子18 D842V突變者10例，外顯子12 V561D突變者34例。

2.5 c-KIT以及PDGFRA基因突變病理關(guān)系情況

PDGFRA以及c-KIT基因突變和年齡，性別，腫瘤情況，組織學(xué)類型，核分裂像以及危險(xiǎn)程度之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。不同種類的腫瘤位置之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。胃部和小腸在病變者大都為c-KIT突變，結(jié)腸和其他部位以PDGFRA基因突變?yōu)橹鳌?/p>

2.6 c-KIT以及PDGFRA基因突變和CD117，DOG1，IGF1R關(guān)聯(lián)性

CD117和DOG1表達(dá)情況和c-KIT以及PDGFRA基因突變不存在相關(guān)性，IGF1R于野生型GISTs中陽(yáng)性率比突變型GISTs高（P<0.01）。見(jiàn)表2。

表2 c-KIT以及PDGFRA基因突變和CD117，DOG1，IGF1R關(guān)聯(lián)性

注：*P<0.05。

3 討論

CD117為c-KIT基因的蛋白表達(dá)物之一[2-4]。大約有83%～95%的GISTs中呈現(xiàn)為表達(dá)趨勢(shì)。其為診斷GISTs的特異性指標(biāo)之一。值得說(shuō)明的是，大約有5%的GISTs患者CD117表達(dá)為陰性，另外，CD117在多種腫瘤細(xì)胞中可呈現(xiàn)出表達(dá)趨勢(shì)，進(jìn)而提升了診斷難度。該組的CD117陽(yáng)性表達(dá)率為96.0%，和國(guó)內(nèi)報(bào)道相似[5]，國(guó)內(nèi)報(bào)道的CD117為97.52%。

既往報(bào)道證實(shí)[6]，和CD117相比，DOG1陽(yáng)性表達(dá)量稍高，該組案例則顯示，DOG1在GISTs表達(dá)陽(yáng)性率為93.0%，比CD117低。在100例非GISTs腫瘤樣本中，CD117以及DOG1的陽(yáng)性表達(dá)率分別為17.0%（34/200）和10.0%（20/200）。兩組數(shù)據(jù)的CD117和DOG1陽(yáng)性表達(dá)情況差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。以上結(jié)果證實(shí)，CD117和DOG1能夠提升疾病診斷率，兩者聯(lián)合檢測(cè)，可取得相對(duì)顯著效果。

深度研究證實(shí)[7]，CD117的表達(dá)和腫瘤位置以及組織學(xué)種類相關(guān)；DOG1表達(dá)和腫瘤規(guī)格以及危險(xiǎn)程度相關(guān)[8]。在梭形以及上皮型呈現(xiàn)出高表達(dá)趨勢(shì)。由此可見(jiàn)，兩者聯(lián)合檢查對(duì)于差異化病理特征判斷有著一定現(xiàn)實(shí)意義。上述基因表達(dá)和c-KIT以及PDGFRA基因突變情況不存在相關(guān)性，證實(shí)其不能作為預(yù)測(cè)疾病基因突變的指標(biāo)。在GISTs患者中，c-KIT以及PDGFRA基因突變能夠指導(dǎo)TKIs小分子靶向治療[11]。

該研究中還證實(shí)，不同種類的腫瘤位置之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。胃部和小腸在病變者大都為c-KIT突變，結(jié)腸和其他部位以PDGFRA基因突變?yōu)橹?。已知的TKIs對(duì)于差異化基因突變位點(diǎn)的GISTs存在差異性。

綜上所述，聯(lián)合檢測(cè)CD117以及DOG1能夠提升GISTs的準(zhǔn)確程度，這一點(diǎn)在CD117內(nèi)表達(dá)中被尤為體現(xiàn)。上述兩者和患者的臨床病理特點(diǎn)存在相關(guān)性。腫瘤表現(xiàn)為結(jié)節(jié)樣增長(zhǎng)，IGF1R可能為野生型GISTs特異性的免疫組化指標(biāo)以及潛在性治療靶點(diǎn)。結(jié)合腫瘤發(fā)生位置和基因突變檢測(cè)全面結(jié)合，對(duì)于預(yù)測(cè)GISTs病患使用酪氨酸激酶抑制藥物的治療效果和預(yù)后有著相當(dāng)重要的指導(dǎo)價(jià)值。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 李辛辛， 朱世龍， 林思彤，等.胃腸間質(zhì)瘤的臨床病理及免疫組化與危險(xiǎn)度分級(jí)的關(guān)系[J]. 廣西醫(yī)學(xué)，2015， 37（3）：392- 394.

[2] 李辛辛， 林思彤， 羅元. 胃腸間質(zhì)瘤伴發(fā)其他原發(fā)癌的病理及DOG-1、P16表達(dá)分析[J]. 廣西醫(yī)學(xué)，2015（4）：543-546.

[3] 李華莉， 蔡嶸， 任剛，等. 胃和小腸胃腸道間質(zhì)瘤臨床病理特征差異性分析[J]. 臨床外科雜志， 2016， 24（8）：611-614.

[4] 趙玲， 陳曉宇， 劉強(qiáng)，等. 不同部位胃腸道間質(zhì)瘤臨床病理特征、預(yù)后以及基因突變分析[J]. 胃腸病學(xué)， 2016， 21（7）：392-397.

[5] 張文迪， 婁麗萍. 胃腸道間質(zhì)瘤 KIT/PDGFRA 基因突變類型及其與臨床病理特征的關(guān)系[J]. 江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版， 2016， 26（6）：492-498.

[6] 湯蘇敏， 沈朝勇， 尹源，等. 胃腸間質(zhì)瘤Ki-67的表達(dá)特點(diǎn)及其臨床意義[J]. 四川大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2015，46（6）：931-933.

[7] 牛慶慧， 張翠萍， 江月萍.174例胃腸道間質(zhì)瘤的臨床特點(diǎn)、病理特征及治療分析[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志， 2015， 24（6）：728-730.

[8] 陳大鵬， 牛玉軍， 謝美艷，等. 胃間質(zhì)瘤CT征象與危險(xiǎn)度分級(jí)的關(guān)系[J]. 解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2016， 37（5）：461-464.

（收稿日期：2017-03-09）