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    電針對(duì)二腎一夾高血壓大鼠血壓、血管重構(gòu)的影響研究

    2017-09-06 09:12:33郝日雯郭繼龍王海軍冀來喜
    關(guān)鍵詞:曲池血漿針刺

    郝日雯,關(guān) 偉,郭繼龍,王海軍,冀來喜

    (山西中醫(yī)藥大學(xué),山西太原030024)

    電針對(duì)二腎一夾高血壓大鼠血壓、血管重構(gòu)的影響研究

    郝日雯,關(guān) 偉,郭繼龍,王海軍,冀來喜

    (山西中醫(yī)藥大學(xué),山西太原030024)

    目的:本實(shí)驗(yàn)研究通過電針二腎一夾高血壓大鼠(2K1C-RHR)的人迎、曲池穴及兩穴組穴,觀察各單穴及組穴方協(xié)同降壓的效果,并探討其針刺降壓的機(jī)制。方法:按照二腎一夾法建立高血壓大鼠模型,隨機(jī)分為空白組8只、模型組8只、治療組24只,治療組進(jìn)行為期4 w針刺雙側(cè)人迎、曲池及人迎、曲池組穴的治療,監(jiān)測(cè)不同組、不同時(shí)期的血壓變化情況,測(cè)定其血管平滑肌細(xì)胞面積(VSMC)、血管壁厚(WT)、血管內(nèi)徑(LD),計(jì)算WT/LD比值及血漿中血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)的含量,并進(jìn)行相互比較。結(jié)果:模型組與空白組相比,大鼠頸總動(dòng)脈管壁增厚,血管內(nèi)徑縮小明顯,WT/LD的比值明顯增大,存在明顯的血管重構(gòu)現(xiàn)象,大鼠血漿AngⅡ、ALD含量顯著升高;通過針刺治療,模型組與治療組比較,血壓均明顯下降,WT、LD、WT/LD比值和VSMC面積均有不同程度的改善,血漿AngⅡ、ALD含量均明顯降低。結(jié)論:針刺人迎穴、曲池穴有很好的降壓效果,且人迎、曲池組穴降壓效果優(yōu)于各個(gè)單穴;其針刺降壓機(jī)制之一可能是通過改善血管重構(gòu)來緩解血壓的持續(xù)升高,與調(diào)節(jié)血漿中AngⅡ和ALD的含量有關(guān)。

    二腎一夾高血壓大鼠;針刺;血管重構(gòu);血管緊張素Ⅱ;醛固酮

    高血壓是世界各國最常見的心腦血管疾病之一,其發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜,目前認(rèn)為它發(fā)生的主要病理生理學(xué)基礎(chǔ)包括交感神經(jīng)系統(tǒng)以及腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)的活化。內(nèi)皮功能失調(diào)、氧化應(yīng)激增強(qiáng)、血管張力增高以及血管壁重塑等也可能是血壓增高的原因,而腎臟在維持機(jī)體血壓平衡中起著非常重要的作用[1]。本研究在建立二腎一夾高血壓大鼠(2K1C-RHR)模型基礎(chǔ)上,電針其人迎穴、曲池穴以及兩穴組合,觀察電針對(duì)血壓的影響和頸總動(dòng)脈重構(gòu)的基礎(chǔ)性觀察,以及檢測(cè)血漿中血管緊張素(AngⅡ)、醛固酮(ALD)的含量,比較組間相互差異,為針刺治療改善高血壓尋求新的切入點(diǎn),為針刺防治高血壓的研究提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù),探究最佳的降壓腧穴配伍。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)健康SD大鼠40只,體質(zhì)量80~100 g,雌雄各半。動(dòng)物來源于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司,該公司符合國家健康一級(jí)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn),動(dòng)物許可證號(hào):2012-0017。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均采用標(biāo)準(zhǔn)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w,動(dòng)物飼養(yǎng)室溫度、采光、通風(fēng)良好。用消毒的顆粒型大鼠飼料和自來水喂養(yǎng),自由攝食。

    1.1.2 實(shí)驗(yàn)器具 ①針具:32號(hào)0.5寸(13 mm)不銹鋼毫針(蘇州產(chǎn)華佗牌)、LH202H型韓氏治療儀。②手術(shù)器械:U形動(dòng)脈銀夾(內(nèi)徑0.2~0.25 mm)、直剪、彎剪、眼科剪、手術(shù)鑷、止血鉗、1號(hào)手術(shù)縫合線、1 mL注射器。③指標(biāo)檢測(cè)器械:Bp600A小型動(dòng)物無創(chuàng)血壓測(cè)量系統(tǒng)、冰箱、試管、離心機(jī)。④主要實(shí)驗(yàn)用品:大鼠血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)酶聯(lián)免疫分析試劑盒、大鼠醛固酮(ALD)酶聯(lián)免疫分析試劑盒(北京綠源博德生物科技有限公司)。⑤實(shí)驗(yàn)儀器:OLYMPUS光學(xué)顯微鏡(日本);Mias病理圖像分析系統(tǒng)(徠克醫(yī)療儀器有限公司,中國);HITACHI800透射電鏡(日本日立);TGL-16B臺(tái)式高速離心機(jī)(常州翔天實(shí)驗(yàn)儀器廠)。BP600A型大鼠血壓計(jì)(成都泰盟)。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 分組 選用健康SD大鼠40只,隨機(jī)分為空白組、模型組、曲池組(A組)、人迎組(B組)和組穴組(C組),每組8只。按照二腎一夾法建立高血壓大鼠模型,A組選取雙側(cè)人迎、B組選取雙側(cè)曲池、C組選取雙側(cè)兩穴。

    1.2.2 造模[2]取SD大鼠稱重,按40 mg/kg腹腔注射10%水合氯醛麻醉,仰臥固定在手術(shù)臺(tái)上,備毛后用碘酒和酒精消毒手術(shù)區(qū)域,用干凈的紗布作消毒手術(shù)洞巾。沿腹部前正中線左側(cè)取3 cm的切口,血管鉗分離肌肉和脂肪組織,用浸有生理鹽水的棉花球?qū)⑴K器輕輕分開暴露腎臟。眼科鑷小心分離腎蒂部筋膜,分離出一段左腎動(dòng)脈,在近主動(dòng)脈端用U形動(dòng)脈銀夾(內(nèi)徑0.2~0.25 mm)套上,夾開口朝向腹側(cè)。依次分層縫合肌肉、皮膚,并酒精消毒切口,腹腔注射慶大霉素2萬U/只后將動(dòng)物放回籠中。

    1.2.3 模型鑒定 于手術(shù)前及術(shù)后1、2、3、4 w各測(cè)大鼠尾動(dòng)脈收縮壓(SBP)一次(測(cè)血壓方法見后),若手術(shù)4 w后收縮壓超術(shù)前30 mmHg或術(shù)后收縮壓>150 mmHg,認(rèn)為造模成功[2]。

    1.2.4 治療方法 空白組不做任何處理和治療,只監(jiān)測(cè)血壓。模型組按上述方法造模后,同治療組一樣抓取固定,但不做針刺治療。治療組分為治療A組(電針人迎),治療B組(電針曲池),治療C組(電針人迎穴與曲池穴)。按照中國針灸學(xué)會(huì)實(shí)驗(yàn)針灸研究會(huì)華興邦《大鼠穴位圖譜的研制》標(biāo)準(zhǔn)及針刺深度選取雙側(cè)相應(yīng)穴位在造模完成后第2天進(jìn)行治療[3]。

    實(shí)驗(yàn)大鼠人迎穴取穴根據(jù)人迎在人體的解剖位置同時(shí)結(jié)合大鼠解剖,取穴在下頜前正中線旁開約1.5 mm,直刺2 mm;曲池穴取穴在橈骨近端,肘關(guān)節(jié)外側(cè)前方凹陷中,直刺4 mm。用華佗牌32號(hào)0.5寸不銹鋼毫針(長(zhǎng)13 mm),LH202H型韓氏儀,選用疏密波,強(qiáng)度l mA,頻率2 HZ/15 Hz,1次/d,每次持續(xù)刺激20 min,共治療4 w。

    1.2.5 標(biāo)本采集處理方法 血壓監(jiān)測(cè):先將大鼠血壓計(jì)預(yù)熱30 min,然后把大鼠放入預(yù)熱箱預(yù)熱15 min,保證預(yù)熱完全而獲得足夠大的脈搏波。為確保血壓的準(zhǔn)確性,一方面將大鼠要固定好,以消除雜音對(duì)脈搏波的干擾,同時(shí)需連續(xù)測(cè)量3次取平均值。治療前1 d 9:00 Am測(cè)量的血壓作為各組大鼠治療前血壓,治療4 w后第2天9:00 Am測(cè)量的血壓作為各組治療后血壓。

    病理學(xué)觀察:血壓測(cè)量完畢后將大鼠解剖,取長(zhǎng)約1 cm右側(cè)頸總動(dòng)脈組織,立即放入4%多聚甲醛中固定。經(jīng)梯度酒精脫水、二甲苯透明石蠟包埋,常規(guī)切片(厚度約為5 μm)。烘干后的石蠟切片再用二甲苯脫蠟,經(jīng)梯度乙醇至水洗二甲苯Ⅰ10 min、二甲苯Ⅱ10 min、無水乙醇Ⅰ5 min、無水乙醇Ⅱ5 min,然后依次95%、90%、80%、70%乙醇各2 min,蒸餾水沖洗2 min。

    HE染色:蘇木素染液中染色7 min,自來水沖洗1 min,蒸餾水沖洗,1%鹽酸酒精溶液分化3~5 s,流動(dòng)的自來水沖洗,0.5%水溶性伊紅溶液中染色3 min,切片進(jìn)行常規(guī)脫水、透明。

    封片:95%乙醇10 min,無水乙醇Ⅰ、Ⅱ各5 min,二甲苯∶乙醇(1∶1)溶液2 min,二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10 min,中性樹膠封片。

    光學(xué)顯微鏡下觀察:用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)測(cè)定血管平滑肌細(xì)胞面積、血管壁厚度和內(nèi)徑,并計(jì)算WT/LD比值。電鏡下觀察頸總動(dòng)脈重構(gòu)的超微結(jié)構(gòu)變化情況。

    血管緊張素Ⅱ、血漿醛固酮水平的檢測(cè):4 w治療結(jié)束后,將大鼠用10%水合氯醛(45 mg/kg)腹腔麻醉,腹主動(dòng)脈取血4~5 mL,注入含10% EDTA.Na 230 μL及抑肽酶20 μL的試管中混勻,在4℃,3 000 rpm條件下離心10 min,分離血漿,酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)AngⅡ及ALD。

    表1 針刺治療前后各組大鼠血壓比較 (mmHg,±s)

    表1 針刺治療前后各組大鼠血壓比較 (mmHg,±s)

    注:與空白組比較,1)P<0.01;與模型組比較,2)P<0.01;與組穴組比較,3)P<0.01;與人迎組比較,4)P<0.01

    針刺前 第1周 第2周 第3周 第4周空白組 8 103.38±3.90 104.90±4.63 106.32±3.36 105.68±3.66 105.30±3.82模型組 8 186.32±3.951)189.09±1.571)189.12±2.781)192.14±2.881)191.06±2.391)曲池組 8 190.56±1.70 178.62±5.162)156.43±8.772)3)4)143.15±5.662)3)4)138.16±8.072)3)4)人迎組 8 189.17±1.53 172.82±4.632)140.12±3.982)3)136.83±4.442)3)123.01±3.352)3)組穴組 8 188.28±2.68 169.27±5.322)136.94±6.882)120.43±5.852)114.59±4.882)組別 例數(shù)

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS18.0醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,組間比較采用SNK法(q檢驗(yàn))。資料表達(dá)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。

    2 結(jié)果

    2.1 治療前后各組大鼠血壓比較

    針刺前:空白組與模型組大鼠血壓之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),說明實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模成功。而模型組與治療各組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01),說明模型組與各治療組之間有較好的可比性。

    針刺1 w、2 w、3 w和4 w后,模型組與曲池組、人迎組和組穴組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);針刺2 w、3 w和4 w后,組穴組與曲池組、人迎組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);人迎組與曲池組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)果見表1。

    2.2WT、LD、WT/LD、VSMC的變化

    模型組大鼠的頸總動(dòng)脈管壁(WT)增厚明顯,但管內(nèi)徑(LD)縮小明顯,WT/LD比值明顯增大,VSMC面積增大明顯,與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);治療組中WT、LD、WT/LD比值和VSMC面積均有不同程度改善,與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);其中,人迎組與組穴組WT、LD、WT/LD比值和VSMC比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但與曲池組相比,WT、LD、WT/LD比值和VSMC比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表2。

    表2 各組大鼠WT,LD,WT/LD,VSMC的變化 (±s)

    表2 各組大鼠WT,LD,WT/LD,VSMC的變化 (±s)

    注:與空白組比較,1)P<0.01;與模型組比較,2)P<0.01;與人迎組比較,3)P<0.01

    組別 例數(shù) WT(μm) LD(μm) WT/LD(%) VSCM(μm2)空白組 8 60.03±1.57 420.92±13.11 74.31±0.51 168.88±2.50模型組 8 70.30±0.841)377.35±32.941)18.75±1.691)214.011±1.251)曲池組 8 67.65±0.432)3)405.79±11.062)3)16.68±0.492)3)211.67±2.672)3)人迎組 8 64.53±0.242)410.21±9.842)15.53±0.812)200.24±6.842)組穴組 8 64.39±0.202)414.92±13.112)15.19±0.342)174.37±3.232)

    2.3 血漿AngⅡ的變化

    與空白組相比,模型組大鼠血漿AngⅡ的含量升高明顯。針刺治療4 w后,人迎組、曲池組、組穴組的大鼠血漿AngⅡ含量與模型組比較明顯降低(P<0.01)。結(jié)果見表3。

    表3 各組大鼠血漿AngⅡ的變化 (pg/mL,±s)

    表3 各組大鼠血漿AngⅡ的變化 (pg/mL,±s)

    注:與空白組比較,1)P<0.01;與模型組比較,2)P<0.01

    組別 例數(shù) AngⅡ空白組 8 146.21±51.37模型組 8 376.08±38.171)曲池組 8 162.30±28.922)人迎組 8 147.93±52.452)組穴組 8 145.92±45.322)

    2.4 血漿ALD的變化

    與空白組相比,模型組大鼠血漿ALD含量顯著升高。針刺治療4 w后,人迎組、曲池組、組穴組的大鼠血漿ALD含量與模型組比較有所降低。其中,人迎組、組穴組針刺后血漿ALD水平與模型組比較顯著降低(P<0.01)。結(jié)果見表4。

    表4 各組大鼠血漿ALD的變化 (pg/mL,±s)

    表4 各組大鼠血漿ALD的變化 (pg/mL,±s)

    注:與空白組比較,1)P<0.01;與模型組比較,2)P<0.01

    組別 例數(shù) AngⅡ空白組 8 97.99±34.54模型組 8 158.55±44.971)曲池組 8 138.46±44.01人迎組 8 105.08±59.012)組穴組 8 94.14±37.972)

    3 討論

    中醫(yī)學(xué)中并無“高血壓”病名,根據(jù)高血壓所表現(xiàn)的頭痛頭暈,時(shí)發(fā)時(shí)止,耳鳴,心悸癥狀,屬于中醫(yī)學(xué)的“眩暈、頭痛”等范疇。許多醫(yī)家在總結(jié)和繼承前人的理論基礎(chǔ)上,對(duì)高血壓的病因病機(jī)有著多元化認(rèn)識(shí)。熊興江等[4]將高血壓病的病因病機(jī)概括為“火、飲、虛”。還有研究表明高血壓發(fā)展初、中期,常見火證,病位在肝、心、胃、腸,尤其肝火為甚[5],西醫(yī)多認(rèn)為血壓升高與交感神經(jīng)興奮相關(guān)。黃飛翔等[5]認(rèn)為風(fēng)、痰、瘀、虛是高血壓病發(fā)生的主要病因。根據(jù)中醫(yī)的整體觀念及大量文獻(xiàn)所述,高血壓病的發(fā)病與飲食不節(jié)、勞逸過度或情志失調(diào)等因素密切相關(guān),久之導(dǎo)致肝、脾、腎三臟功能失常而出現(xiàn)氣血失調(diào),病變往往以陰虛為本,陽亢為標(biāo),且互為因果,陰損及陽,氣機(jī)失常,兼證常挾痰、挾濕、挾火、挾瘀等。

    現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為高血壓的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,但總體認(rèn)為是在各種因素下血壓的調(diào)節(jié)功能失調(diào)而產(chǎn)生,主要有中樞神經(jīng)系統(tǒng)、體液內(nèi)分泌系統(tǒng)及腎臟等參與發(fā)病過程。針刺治療通過介導(dǎo)腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)、血管活性因子神經(jīng)遞質(zhì)、免疫系統(tǒng)和胰島素抵抗等多種途徑和多因素產(chǎn)生降壓效應(yīng),使機(jī)體內(nèi)環(huán)境平衡,通過對(duì)人體神經(jīng)-體液-內(nèi)分泌-免疫等多個(gè)系統(tǒng)平衡整合,從而達(dá)到降低血壓的目的[6]。

    本研究在針刺選穴時(shí)綜合考慮穴位所屬經(jīng)脈、所處位置及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中針刺的可行性,并結(jié)合多年臨床經(jīng)驗(yàn),選取人迎、曲池作為治療穴并組成腧穴處方進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。人迎穴為足陽明胃經(jīng)之穴,且為足陽明、少陽之會(huì),氣海輸注于前的門戶,是行使氣海功能的真正所在。選擇“營運(yùn)之腧”的人迎穴為主穴治療高血壓,以發(fā)揮司氣海、協(xié)調(diào)營衛(wèi)運(yùn)行之功效。針刺人迎穴之所以降壓效果明顯,與其特殊解剖位置相關(guān)。人迎穴位置當(dāng)頸總動(dòng)脈的分叉點(diǎn),頸動(dòng)脈竇壓力感受器位于此處。針刺可以刺激頸動(dòng)脈竇壓力感受器,從而使興奮傳導(dǎo)到延髓心血管中樞,興奮心迷走中樞和抑制心交感中樞來降低心率,同時(shí)抑制交感縮血管中樞使血管舒張來降低外周阻力,最終使偏高的血壓下降到正常[7]。曲池穴是手陽明大腸經(jīng)的合穴,陽明經(jīng)多血多氣,針刺曲池穴能攝納陽明氣血,使氣血下降,平亢盛之肝陽,鎮(zhèn)上逆之邪火,故能起到平肝潛陽、定眩降壓之功效?,F(xiàn)代研究表明,曲池穴可增強(qiáng)心肌收縮力,減緩心率,對(duì)血管舒縮功能有調(diào)節(jié)作用,輕刺激可引起血管收縮,重刺激多引起血管擴(kuò)張,其降低血壓作用已被證實(shí)且遠(yuǎn)期療效較好。

    本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:2K1C-RHR的頸總動(dòng)脈存在著明顯的血管重構(gòu)現(xiàn)象,表現(xiàn)為WT明顯增厚、LD明顯縮小、WT/LD比值明顯增大、VSMC面積明顯增大。說明針刺可能是通過改善高血壓的血管重構(gòu)來減緩血壓的持續(xù)性升高。進(jìn)而我們可以了解到針刺對(duì)高血壓病理發(fā)展過程中血管重構(gòu)的影響,從而為針刺降壓找到一個(gè)新的切入點(diǎn),提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。同時(shí)提示針刺組穴組對(duì)2K1C-RHR高血壓大鼠的AngⅡ和ALD水平有確切降低效應(yīng)。

    因此,針刺人迎穴、曲池穴有很好的降壓效果,且人迎、曲池組穴降壓效果優(yōu)于各個(gè)單穴;針刺可以緩解或改善二腎一夾高血壓大鼠頸總動(dòng)脈血管重構(gòu)及降低血漿AngⅡ和ALD的含量;其針刺降壓機(jī)制之一可能是通過調(diào)節(jié)血漿中AngⅡ和ALD的含量改善血管重構(gòu)來緩解血壓的持續(xù)升高,實(shí)驗(yàn)證實(shí)人迎穴可以作為針刺降壓的有效穴位中的優(yōu)選穴位,形成降壓腧穴配伍組方降壓方。但是由于時(shí)間、經(jīng)驗(yàn)以及模型等諸多方面的因素未能對(duì)其降壓機(jī)制作更深入的探討,期待后續(xù)研究來進(jìn)一步完善。

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    [7]閻琦,王舒.針刺治療高血壓病機(jī)理概述[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2013,29(2):359-361.

    (編輯:張 凡)

    Effect of electro-acupuncture on blood pressure and vascular remodeing in 2K1C-RHR

    Hao Riwen,Guan Wei,Guo Jilong,Wang Haijun,Ji Laixi
    (Shanxi University of Chinese Medicine,Taiyuan Shanxi 030024)

    Objective:To observe the co-operation effects and to probe in the mechanism of reducing blood pressure by electro-acupuncture treatment in the stenosis of renal artery caused hypertension(2K1C-RHR)in rats on Renying point,Quchi point and two points together.Methods:40 rats were randomly divided into control group,model group,Renying group,Quchi group and both points group with 8 in each group.The hypertension models were established by 2K1CRHR,the rats in last three groups were treated by electro-acupuncture on respective points.And then the blood pressure,VSMC,WT,LD were checked,and WT/LD,the amount of AngⅡ,ALD were calculated.Results:Compared with control group,the WT of rats in model group was increased,and the LD was reduced obviously,and the WT/LD,AngⅡ,ALD were obviously increased,while after acupuncture,all indice were changed obviously,especially for the rats in both points group.Conclusion:Good effects on hypertension were observed by acupuncture on Renying point,Quchi point,especially for two points.One of the mechanisms of acupuncture on hypetension may be to alleviate the continuous elevation of blood pressure by improving vascular remodeling,which is related to the regulation of plasma levels of Ang II and ALD.

    two kidney one clip hypertensive rats;acupuncture;vascular remodeling;angiotensinⅡ;aldosterone

    R285.5

    A

    1671-0258(2017)04-0016-04

    國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81673887)

    郝日雯,助教

    關(guān)偉,講師,E-mail:894710745@qq.com

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