飼料中喹乙醇檢測方法對比分析

飼料中喹乙醇檢測方法對比分析

■文/沈陽豐美生物技術(shù)有限公司 徐 杰 劉鐵英

沈陽禾豐牧業(yè)有限公司 吳 坤 張玉梅

遼寧禾豐牧業(yè)股份有限公司 封偉杰 崔風(fēng)月 李樹懷

本文以高效液相色譜法對豬飼料中的喹乙醇進行檢測，并對檢測中發(fā)現(xiàn)的問題加以討論。結(jié)果表明：高效液相色譜法檢測豬飼料中的喹乙醇含量，采用1mL(30mg)SPE小柱時，不用淋洗液3可獲得更高的回收率；1mL(30mg)SPE小柱承載的最大提取液濃度為100μg/mL，3mL(60mg)SPE小柱承載的最大提取液濃度為500μg/mL。預(yù)混料(10,000mg/kg喹乙醇)最佳稱樣量為0.5g，濃縮料(400mg/kg喹乙醇)和配合料(100mg/kg喹乙醇)最佳稱樣量為5.0g。

液相色譜；檢測；喹乙醇

喹乙醇是一種化學(xué)合成的抗菌促生長劑，過量使用可引起喹乙醇的蓄積中毒并殘留在畜禽肉中，引起食品安全隱患。因此，對飼料中喹乙醇的檢測非常重要，提高檢測結(jié)果的準確度更具有重要意義。本文對豬飼料中的喹乙醇進行檢測(國標方法執(zhí)行GB/T 8381.7-2009飼料中喹乙醇的測定 高效液相色譜法；本文采用的方法是在國標基礎(chǔ)上不使用淋洗液3處理樣品)，針對國標檢測方法中發(fā)現(xiàn)的問題，探討現(xiàn)有檢測方法，提高檢測回收率。

1 材料與方法

1.1 材料

豬用預(yù)混料、濃縮料、配合料和豆粕均由沈陽禾豐牧業(yè)有限公司提供。選取有代表性的飼料樣品至少500g，四分法縮減至100g，磨碎，全部通過0.42mm孔徑篩，混勻，裝入密閉容器中，避光低溫保存，備用。

1.2 測定方法

國標方法執(zhí)行GB/T 8381.7-2009飼料中喹乙醇的測定 高效液相色譜法；本文采用的方法是在國標基礎(chǔ)上不使用淋洗液3處理樣品。

所用的儀器主要有高效液相色譜儀、電子天平、超聲波清洗器、離心機。

表1 淋洗液3對樣品淋洗流失檢測結(jié)果的對比

表2 不同類型飼料稱樣量檢測值對比

表3 SPE小柱承載提取液濃度分析結(jié)果

喹乙醇標準曲線的制備：濃度為1.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/ mL、40.0μg/mL、60.0μg/mL、 80.0μg/mL、100.0μg/mL的喹乙醇標準溶液，在儀器設(shè)定條件下分別進樣做定量校正曲線，以進樣濃度C(μg/mL)為橫坐標X，以峰面積A為縱坐標Y作標準曲線。工作溶液在1.0～100.0μg/mL濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

1.3 統(tǒng)計方法

采用Excel 2007軟件進行分析，結(jié)果均以“平均值±標準差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 淋洗液3對檢測結(jié)果的影響

從表1可以看出，采用國標檢測方法，淋洗液3中含有較高濃度的喹乙醇，喹乙醇回收率最低為44%；將淋洗液3中的喹乙醇提取后，計算總喹乙醇回收率，喹乙醇含量仍低于本文方法。對于濃縮料，喹乙醇回收率不論采用國標還是本文方法，回收率均低于預(yù)混料和配合料的回收率。

對于國標法偏低原因，可能是兩次提取過程對喹乙醇造成損耗，致使回收率低于本文方法。

2.2 稱樣量對檢測結(jié)果的影響

從表2可以看出，使用1mL SPE小柱時，對于喹乙醇添加量為10,000mg/kg的預(yù)混料，最佳取樣量為0.5g；喹乙醇添加量為400mg/kg的濃縮料以及添加量為100mg/kg的配合料，最佳取樣量為5g。隨著相對于最佳取樣量的增多或減少，喹乙醇的回收率均降低。

在同等混合均勻度體系下，稱樣量少，代表性越小；稱樣量多，代表性越大；而稱樣量的大小在SPE小柱上體現(xiàn)為提取濃度的高低，這是否與SPE小柱最大承載量有關(guān)系呢？

2.3 SPE小柱承載最大提取液濃度的分析

從表3可以看出，使用1mL SPE小柱承載的提取液濃度應(yīng)小于100μg/ mL，以40μg/mL喹乙醇檢測回收率最高；3mL SPE小柱承載的提取液濃度應(yīng)小于500μg/mL。

對于1mL SPE小柱，隨著提取液濃度的增加，淋洗液2中的喹乙醇回收率增加。當提取液液濃度為100μg/ mL時，淋洗液2回收率為到3%；當提取液濃度達到200μg/mL時，淋洗液2回收率達到10%以上；提取液濃度達到300μg/mL時，淋洗液2回收率達到30%以上。提取液濃度高于100μg/mL時，隨著濃度的升高，對喹乙醇的檢測結(jié)果影響也相應(yīng)增大。

對于3mL SPE小柱，提取液濃度大于500μg/mL時，隨著提取濃度的增加，淋洗液1與淋洗液2中喹乙醇回收率均增加。當提取液濃度為800μg/mL時，淋洗液2喹乙醇回收率達到10%以上。

樣品檢測較高精準度是建立在不同添加量樣品與小柱承載濃度二者良好結(jié)合的基礎(chǔ)上，在實驗中主要體現(xiàn)在稱樣數(shù)量上?？紤]產(chǎn)品整體混合均勻性因素，即每個產(chǎn)品均有最佳提取濃度或承載濃度，以上二者以最小濃度為準。

3 結(jié)論

綜合以上試驗結(jié)果可知：不使用淋洗液3對飼料樣品進行檢測可提高試樣喹乙醇回收率。這可能因為淋洗液3與提取液的組成相同，在淋洗液3淋洗小柱時將小柱上部分喹乙醇再次提取，溶于淋洗液3中流出，進而使得喹乙醇回收率偏低。

不同SPE小柱、不同喹乙醇添加量的樣品稱樣量不同對檢測結(jié)果有較大影響。1mL SPE小柱承載的最大提取液濃度為100μg/mL，3mL SPE小柱承載的最大提取液濃度為500μg/ mL。使用1mL SPE小柱時，預(yù)混料(10,000mg/kg喹乙醇)最佳稱樣量為0.5g，濃縮料(400mg/kg喹乙醇)和配合料(100mg/kg喹乙醇)最佳稱樣量為5.0g。這可能與SPE小柱不同規(guī)格的承載濃度，以及每種產(chǎn)品的喹乙醇混合均勻度、最佳提取濃度有關(guān)。當提取濃度過高，或者超出SPE小柱承載濃度時，回收率偏低。

豆粕和濃縮料的回收率結(jié)果平行性較差，而濃縮料的主要成分恰好以豆粕為主，豆粕是否影響檢測結(jié)果，還有待于進一步研究分析。■

[1] 王永紅,丁平,朱英才.飼料中喹乙醇檢測方法研究[J].南方農(nóng)業(yè),2011,9(5)：51～52.

[2] 中華人民共和國國家標準：飼料中喹乙醇的檢測高效液相色譜法[S].GB/T 8381.7-2009.

[3] 文軍,張麗英,李德發(fā),等.反向高效液相色譜測定飼料中喹乙醇的含量[J].中國獸藥雜志,2003,37(2)：20～23.

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[5] Ming-Ren S. Fuh, Shun-An Chan, Huanclong Wang, et al. Determinaltion of antibacterial reagents by liquid chromatography-electrospray-mass spectrometry[J]. Talanta, 2000,52(1)：141～151.