響應(yīng)面法優(yōu)化核桃枝多酚的提取工藝及體外抗氧化活性研究Δ

王曉嵐，劉冬梅，段 煜（濰坊醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東濰坊 261053）

響應(yīng)面法優(yōu)化核桃枝多酚的提取工藝及體外抗氧化活性研究Δ

王曉嵐＊，劉冬梅，段 煜#（濰坊醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東濰坊 261053）

目的：優(yōu)化核桃枝多酚的提取工藝并評(píng)價(jià)其體外抗氧化活性。方法：以核桃枝多酚提取量為響應(yīng)值，以料液比、提取溫度和乙醇體積分?jǐn)?shù)為響應(yīng)因子，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面法優(yōu)化核桃枝多酚的提取工藝；以維生素C為陽(yáng)性對(duì)照，考察核桃枝多酚對(duì)羥自由基、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基的清除能力及總還原能力，評(píng)價(jià)其體外抗氧化活性。結(jié)果：優(yōu)化的核桃枝多酚的提取條件為料液比1∶25（g/mL）、提取溫度50℃、乙醇體積分?jǐn)?shù)70%；驗(yàn)證試驗(yàn)中核桃枝多酚的提取量為9.30 mg/g（RSD＝0.57%，n＝3）。核桃枝多酚在質(zhì)量濃度分別為12.0、3.0、3.0 μg/mL時(shí)對(duì)羥自由基、DPPH自由基的清除率和總還原能力分別為50.24%、95.42%、1.118，同質(zhì)量濃度下維生素C的相關(guān)數(shù)據(jù)分別為93.71%、46.17%、0.628（P＜0.05）。結(jié)論：用響應(yīng)面法優(yōu)化得到的核桃枝多酚提取工藝穩(wěn)定、可行；核桃枝多酚具有一定的體外抗氧化活性。

核桃枝；多酚；提取工藝；響應(yīng)面法；抗氧化活性

核桃（Juglans regia L.），又名胡桃，為胡桃科（Juglandaceae）核桃屬（Juglans L.）植物。核桃枝為核桃的嫩枝，具有殺蟲(chóng)止癢、解毒散結(jié)的功效，現(xiàn)代藥理研究表明其可用于治療食管癌、乳腺癌、胃癌及淋巴系統(tǒng)腫瘤等[1-2]。已有研究表明，核桃果實(shí)、殼、青衣含有豐富的多酚類(lèi)物質(zhì)，并具有良好的抗氧化活性[3]，而國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中對(duì)核桃枝多酚含量及其活性的文獻(xiàn)報(bào)道較少。響應(yīng)面法能以較少的試驗(yàn)次數(shù)和較短的時(shí)間對(duì)所選的考察因素及試驗(yàn)參數(shù)進(jìn)行較全面的研究，故目前較多地應(yīng)用于生物醫(yī)藥領(lǐng)域[4]。筆者在本文中采用響應(yīng)面法對(duì)核桃枝多酚的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化研究，并考察提取所得的核桃枝多酚的體外抗氧化活性，旨在為核桃枝的開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 材料

1.1 儀器

UV-5100紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海元析儀器有限公司）；EL204電子分析天平[瑞士梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]。

1.2 藥材、藥品與試劑

新鮮核桃枝于2016年4月采自山東濰坊，由濰坊醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)教研室許崇梅副教授鑒定為核桃的新鮮枝條（核桃枝置于－40℃冰箱中凍存，臨用時(shí)粉碎，過(guò)50目篩）；沒(méi)食子酸對(duì)照品（批號(hào)：110831-201206，供含量測(cè)定用）、維生素C對(duì)照品（批號(hào)：100425-201103，純度：100%）均來(lái)源于中國(guó)食品藥品檢定研究院；福林酚試劑（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；其余試劑均為分析純，水為去離子水。

2 方法與結(jié)果

2.1 多酚含量的測(cè)定

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 采用福林酚法[5]。制備100 μg/mL的沒(méi)食子酸對(duì)照品貯備液，準(zhǔn)確移取0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL置于50 mL量瓶中，加入5 mL福林酚試劑，搖勻，加入10 mL 20%碳酸鈉溶液，水定容至刻度，室溫反應(yīng)2 h。于760 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（A），以沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（c）、A為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：A＝188.46c+0.018 5（R2＝0.999 4），表明沒(méi)食子酸檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為1.0～5.0 μg/mL。

2.1.2 核桃枝多酚含量的測(cè)定 準(zhǔn)確稱(chēng)取核桃枝粉末5.0 g置于圓底燒瓶中，以一定料液比加入一定體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液，在一定溫度下，回流提取一定時(shí)間，抽濾，定容于250 mL量瓶中。準(zhǔn)確移取200 μL提取液置于10 mL量瓶中，加入1 mL福林酚試劑，搖勻后，加入2 mL 20%碳酸鈉溶液，加水定容至刻度，室溫反應(yīng)2 h。于760 nm波長(zhǎng)處測(cè)定A，代入回歸方程，計(jì)算多酚提取量（mg/g）＝核桃枝中多酚質(zhì)量/核桃枝藥材質(zhì)量。

2.1.3 含量測(cè)定的方法學(xué)驗(yàn)證 準(zhǔn)確稱(chēng)取核桃枝粉末5.0 g，加入100 mL 70%乙醇溶液，在50℃時(shí)提取90 min，作為供試品溶液。（1）準(zhǔn)確度試驗(yàn)：通過(guò)加樣回收率試驗(yàn)考察。向供試品溶液中加入一定量的沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液，按照“2.1.2”項(xiàng)下方法檢測(cè)多酚含量，計(jì)算回收率為99.03%（RSD＝0.74%，n＝6）。（2）重復(fù)性試驗(yàn)：取同一質(zhì)量濃度供試品溶液6份，檢測(cè)多酚含量，結(jié)果RSD為0.71%（n＝6），表明該方法重復(fù)性良好。（3）穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，按照“2.1.2”項(xiàng)下方法分別放置0、2、4、8、10、12、24 h后取樣檢測(cè)，結(jié)果吸光度的RSD為1.12%（n＝7），表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。（4）精密度試驗(yàn)：分別取同一質(zhì)量濃度沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液，連續(xù)測(cè)量6次，結(jié)果吸光度的RSD為0.41%（n＝6），表明該儀器精密度良好。以上方法學(xué)試驗(yàn)結(jié)果顯示，該方法穩(wěn)定、可靠，可用于核桃枝多酚的含量測(cè)定。

2.2 單因素試驗(yàn)

2.2.1 料液比對(duì)多酚提取量的影響 準(zhǔn)確稱(chēng)取核桃枝粉末5.0 g，按照“2.1.2”項(xiàng)下方法，在提取時(shí)間90 min、提取溫度50℃、乙醇體積分?jǐn)?shù)50%條件下平行測(cè)定3次，考察料液比為1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40時(shí)對(duì)多酚提取量的影響，結(jié)果見(jiàn)圖1A。

圖1 各因素對(duì)多酚提取量影響的單因素試驗(yàn)Fig 1 Single factor test for the effects of each factor on extraction amount of polyphenols from J.regia branch

由圖1A可知，料液比在1∶15～1∶25范圍內(nèi)，隨著溶劑用量的增加，多酚提取量明顯升高；當(dāng)料液比為1∶25時(shí)，提取量達(dá)到最大值8.24 mg/g；此后隨著溶劑用量的增加，多酚提取量無(wú)顯著增加，反而有下降趨勢(shì)。因此，選擇料液比1∶20～1∶30進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)。

2.2.2 提取溫度對(duì)多酚提取量的影響 準(zhǔn)確稱(chēng)取核桃枝粉末5.0 g，按照“2.1.2”項(xiàng)下方法，在提取時(shí)間90 min、料液比1∶25、乙醇體積分?jǐn)?shù)50%條件下平行測(cè)定3次，考察提取溫度為20、30、40、50、60、70℃時(shí)對(duì)多酚提取量的影響，結(jié)果見(jiàn)圖1B。

由圖1B可知，提取溫度在20～50℃范圍內(nèi)，多酚提取量隨著溫度的升高而增加；超過(guò)55℃后，溫度繼續(xù)升高，多酚提取量呈下降趨勢(shì)，這可能是由于溫度過(guò)高使熱不穩(wěn)定的多酚被破壞所致。因此，選擇提取溫度40～60℃進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)。

2.2.3 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)多酚提取量的影響 準(zhǔn)確稱(chēng)取核桃枝粉末5.0 g，按照“2.1.2”項(xiàng)下方法，在提取時(shí)間90 min、料液比1∶25、提取溫度50℃條件下平行測(cè)定3次，考察乙醇體積分?jǐn)?shù)為30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%時(shí)對(duì)多酚提取量的影響，結(jié)果見(jiàn)圖1C。

由圖1C可知，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)在30%～70%范圍內(nèi)，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增大，多酚提取量顯著增加；當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)到70%時(shí)，多酚提取量達(dá)到最大值；此后多酚提取量呈下降趨勢(shì)。因此，選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)60%～80%進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)。

2.2.4 提取時(shí)間對(duì)多酚提取量的影響 準(zhǔn)確稱(chēng)取核桃枝粉末5.0 g，按照“2.1.2”項(xiàng)下方法，在料液比1∶25、提取溫度50℃、乙醇體積分?jǐn)?shù)50%條件下平行測(cè)定3次，考察提取時(shí)間為30、60、90、120、150 min時(shí)對(duì)多酚提取量的影響，結(jié)果見(jiàn)圖1D。

由圖1D可知，提取時(shí)間在30～90 min時(shí)，多酚提取量隨著提取時(shí)間延長(zhǎng)而顯著增加；提取時(shí)間為90 min時(shí)多酚提取量達(dá)到最大；此后隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，多酚提取量反而降低，這可能由于時(shí)間的增加使部分多酚被氧化而導(dǎo)致含量降低。因此，選擇提取時(shí)間為90 min。

2.3 響應(yīng)面法優(yōu)化核桃枝多酚的提取條件

2.3.1 響應(yīng)模型的建立和分析 在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，根據(jù)Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理[6]，設(shè)定提取時(shí)間為90 min，核桃枝粉末用量5.0 g，選取料液比（X1）、提取溫度（X2）和乙醇體積分?jǐn)?shù)（X3）這3個(gè)影響較為顯著的因素作為考察變量，采用3因素3水平的響應(yīng)面分析法，以多酚提取量為響應(yīng)值，對(duì)核桃枝多酚提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。多酚含量測(cè)定按照“2.1.2”項(xiàng)下方法。因素與水平見(jiàn)表1，試驗(yàn)方案與結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 因素與水平Tab 1 Factors and levels

表2 試驗(yàn)方案與結(jié)果Tab 2 Design and results of tests

利用Design-Expert 8.0軟件對(duì)表2試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行二次多項(xiàng)式回歸擬合，得多酚提取量對(duì)X1、X2、X3的數(shù)學(xué)回歸模型為：多酚提取量（mg/g）＝9.34+0.32X1+0.41X2－0.3X3－0.24X1X2－0.28X1X3+0.1X2X3－0.84X12－1.17X22－1.1X32。對(duì)此模型進(jìn)行方差分析，結(jié)果見(jiàn)表3；繪制響應(yīng)面和等高線圖，見(jiàn)圖2。

響應(yīng)面圖上等高線的形狀可反映交互效應(yīng)的強(qiáng)弱，橢圓形表示兩因素交互作用顯著，圓形則表示交互作用不顯著[7]。由圖2可知，X1與X2的曲面變化幅度較大，提示料液比和提取溫度對(duì)多酚提取量的影響最為顯著；其次為乙醇體積分?jǐn)?shù)，表現(xiàn)為曲面變化幅度較平緩，這與方差分析結(jié)果一致。由等高線的形狀可知，X1與X2的等高線呈橢圓形，提示二者交互作用最為顯著；X1與X3的交互作用次之；X2與X3的等高線近似圓形，提示二者交互作用不顯著。

表3 方差分析結(jié)果Tab 3 Variance analysis results

圖2 各因素對(duì)多酚提取量影響的響應(yīng)面和等高線圖Fig 2 Response surface and contour plots for the effects of each factor on extraction amount of polyphenols

通過(guò)響應(yīng)面法進(jìn)行多元回歸模型預(yù)測(cè)，得到最優(yōu)提取工藝條件為：料液比1∶25.76（g/mL）、提取溫度51.56℃、乙醇體積分?jǐn)?shù)68.89%。該條件下多酚提取量預(yù)測(cè)值為9.42 mg/g。

2.3.2 驗(yàn)證試驗(yàn) 準(zhǔn)確稱(chēng)取核桃枝粉末5.0 g，考慮實(shí)際操作條件，重新調(diào)整設(shè)定各參數(shù)為料液比1∶25（g/mL）、提取溫度50℃、乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，在此條件下核桃枝多酚提取量為9.30 mg/g（RSD＝0.57%，n＝3），與預(yù)測(cè)值相對(duì)誤差為1.28%。驗(yàn)證值與預(yù)測(cè)值比較接近，提示采用響應(yīng)面法優(yōu)化所得核桃枝多酚提取條件穩(wěn)定。

為了適應(yīng)工業(yè)生產(chǎn)，驗(yàn)證提取工藝的可靠性，進(jìn)行了放大試驗(yàn)。準(zhǔn)確稱(chēng)取核桃枝粉末250.0 g，各3份，按上述條件提取多酚，測(cè)得多酚提取量分別為9.29、9.35、9.31 mg/g，均值為9.32 mg/g（RSD＝0.33%，n＝3），與預(yù)測(cè)值相對(duì)誤差為1.07%，實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值比較接近。

2.4 核桃枝多酚體外抗氧化活性研究

2.4.1 羥自由基清除能力 采用經(jīng)典羥自由基清除率檢測(cè)方法[8]。在10 mL具塞刻度試管中，依次分別加入1.0 mL的4.5 mmol/L硫酸亞鐵、1.0 mL的4.5 mmol/L水楊酸-乙醇溶液，搖勻，分別準(zhǔn)確加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL質(zhì)量濃度為50 μg/mL（以核桃枝多酚提取物質(zhì)量計(jì)，溶劑為乙醇溶液，下同）的核桃枝多酚溶液及2.0、1.8、1.6、1.4、1.2、1.0、0.8 mL水，最后加入1.0 mL的4.4 mmol/L過(guò)氧化氫溶液，于37℃水浴反應(yīng)30 min，在510 nm波長(zhǎng)處測(cè)A。將加入樣品溶液體積為0 mL的試管的A記為A0，其余試管記為Ai，用1 mL水代替1 mL過(guò)氧化氫溶液所得A記為Ai0，以維生素C為陽(yáng)性對(duì)照，平行測(cè)定3次，取平均值。計(jì)算清除率{[1－（Ai－Ai0）/A0]× 100%}，得多酚質(zhì)量濃度分別為2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 μg/mL時(shí)對(duì)羥自由基的清除率為10.32%、19.87%、27.24%、36.73%、42.17%、50.24%（維生素C為93.71%）。采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（下同），結(jié)果見(jiàn)圖3A。

圖3 核桃枝多酚的體外抗氧化活性測(cè)定結(jié)果Fig 3 Determination results of antioxidant activity in vitro of polyphenols from J.regia branch

由圖3A可知，在試驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，核桃枝多酚和維生素C均具有清除羥自由基的作用，且清除率隨著質(zhì)量濃度的增大而升高，呈明顯的劑量依賴關(guān)系。但多酚對(duì)羥自由基的清除率明顯低于相同質(zhì)量濃度的維生素C，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.4.2 DPPH自由基清除能力 采用經(jīng)典DPPH自由基清除率檢測(cè)方法[9]。在10 mL具塞刻度試管中，精密加入2.0 mL的0.04 mg/mL DPPH乙醇溶液，分別準(zhǔn)確移取20、40、60、80、100、120 μL質(zhì)量濃度為125.0 μg/mL的核桃枝多酚溶液，加水至5 mL，充分混合，室溫避光反應(yīng)30 min，571 nm波長(zhǎng)處測(cè)定A，記為Ai；以等體積無(wú)水乙醇代替多酚提取液，同法操作所得A記為A0；以等體積無(wú)水乙醇代替DPPH乙醇溶液，加入不同質(zhì)量濃度的多酚提取液，同法操作所得A記為Ai0；以維生素C為陽(yáng)性對(duì)照，平行測(cè)定3次，取平均值，計(jì)算清除率。結(jié)果，多酚質(zhì)量濃度分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 μg/mL時(shí)，對(duì)DPPH自由基的清除率分別為19.30%、41.21%、58.00%、73.75%、84.37%、95.42%（維生素C為46.17%），結(jié)果見(jiàn)圖3B。

由圖3B可知，在試驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，核桃枝多酚和維生素C均具有清除DPPH自由基的作用，且清除率隨著質(zhì)量濃度的增大而升高，呈明顯的劑量依賴關(guān)系。并且在相同質(zhì)量濃度下，多酚的清除率明顯高于維生素C，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.4.3 總還原能力 采用普魯士藍(lán)法[10]。在700 nm波長(zhǎng)下測(cè)定A，待測(cè)樣品的A越大，其還原力越強(qiáng)，抗氧化活性就越強(qiáng)[11]。準(zhǔn)確移取20、40、60、80、100、120 μL質(zhì)量濃度為125.0 μg/mL的核桃枝多酚溶液，加水至0.5 mL，依次加入1.0 mL pH 6.6的磷酸鹽緩沖溶液、2.0 mL 1%鐵氰化鉀，于50℃水浴20 min后急速冷卻，加入1.0 mL 10%三氯乙酸、0.5 mL 0.1%三氯化鐵，搖勻，室溫下靜置10 min；以維生素C為陽(yáng)性對(duì)照，在700 nm波長(zhǎng)處測(cè)A，平行測(cè)定3次，取平均值。結(jié)果，核桃枝多酚質(zhì)量濃度分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 μg/mL時(shí)，A分別為0.284、0.621、0.832、0.97、1.084、1.118（維生素C為0.628），結(jié)果見(jiàn)圖3C。

由圖3C可知，在試驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨核桃枝多酚和維生素C的質(zhì)量濃度增大而A明顯增加，提示二者均具有良好的還原能力，且核桃枝多酚的還原能力要優(yōu)于維生素C，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

本研究通過(guò)響應(yīng)面法得到核桃枝多酚的最優(yōu)提取工藝，驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果顯示采用該工藝得到的多酚提取量符合理論預(yù)測(cè)值，提示采用Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化核桃枝多酚提取條件可行，并且可以為核桃枝多酚提取的產(chǎn)業(yè)化提供指導(dǎo)。

本研究從羥自由基和DPPH自由基的清除能力及總還原能力3個(gè)方面對(duì)核桃枝多酚體外抗氧化活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，較全面地反映了核桃枝多酚的抗氧化活性。試驗(yàn)結(jié)果顯示，核桃枝多酚具有良好的體外抗氧化活性，其在清除DPPH自由基和總還原能力方面優(yōu)于等量維生素C，可作為潛在的天然抗氧化劑和自由基清除劑加以開(kāi)發(fā)。

生命科學(xué)研究表明，人類(lèi)的某些疾病（如腫瘤、心腦血管疾病）的發(fā)病機(jī)制與體內(nèi)物質(zhì)的氧化有著密切的聯(lián)系，從天然產(chǎn)物中尋找抗氧化劑是目前研究的熱點(diǎn)[12]。多酚類(lèi)化合物是一類(lèi)活性較強(qiáng)的抗氧化物質(zhì)，而目前對(duì)核桃枝多酚的提取方式和提取物活性研究的文獻(xiàn)報(bào)道較少[13]，因此本研究對(duì)核桃枝資源的開(kāi)發(fā)利用具有一定的指導(dǎo)意義。但同時(shí)本研究也存在著一定的局限性，如未對(duì)核桃枝多酚的體內(nèi)抗氧化活性進(jìn)行評(píng)價(jià)，未確定核桃枝多酚的具體種類(lèi)和成分，這些研究將在后續(xù)工作中進(jìn)行。

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Optimization of Extraction Technology of Polyphenols from Juglans regia Branch by Response Surface Method and Study on Its Antioxidant Activity in vitro

WANG Xiaolan，LIU Dongmei，DUAN Yu（School of Pharmacy，Weifang Medical University，Shandong Weifang 261053，China）

Juglans regia branch；Polyphenols；Extraction technology；Response surface method；Antioxidant activity

R284.2；R285.5

A

1001-0408（2017）22-3124-05

2016-11-09

2017-04-13）

（編輯：劉 萍）

山東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（No.ZR2013HQ024）

＊講師，碩士。研究方向：天然藥物化學(xué)。電話：0536-8462493。E-mail：xiaolan_wang@126.com

#通信作者：副教授，博士。研究方向：天然藥物化學(xué)。電話：0536-8462493。E-mail：yuduan78@126.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.22.27

ABSTRACTOBJECTIVE：To optimize the extraction technology of polyphenols from Juglans regia branch and evaluate its antioxidant activity in vitro.METHODS：Using extraction amount of polyphenols from J.regia branch as response value，solvent-solid ratio，extraction temperature and ethanol volume fraction as response factors，based on single factor test，response surface method was used to optimize the extraction technology of polyphenols from J.regia branch.Using vitamin C as positive control，scavenging on hydroxyl radicals and 1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl（DPPH）radicals and total reducing activities of polyphenols from J.regia branch were investigated.And its antioxidant activity in vitro was evaluated.RESULTS：Optimized extraction conditions for polyphenols from J.regia branch was as follow as solid-liquid ratio of 1∶25（g/mL），extraction temperature of 50℃，ethanol volume fraction of 70%.The extraction amount of polyphenols from J.regia branch was 9.30 mg/g（RSD＝0.57%，n＝3）in the verification test.Clearance rate on hydroxyl radicals and DPPH radicals and total reducing activity of polyphenols from J.regia branch were respectively 50.24%，95.42%，1.118 when it was under the mass concentration of 12.0，3.0，3.0 μg/mL；and the related data of vitamin C was 93.71%，46.17%，0.628 under the same mass concentration（P＜0.05）.CONCLUSIONS：Extraction technology of polyphenols from J.regia branch optimized by response surface method is stable and feasible；polyphenols from J.regia branch shows certain antioxidant activity in vitro.