原發(fā)性肝癌患者血清PCIII、IV-C、LN、HA的表達

李 林，王望東

(湖北省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 檢驗科，湖北 武漢430015)

原發(fā)性肝癌患者血清PCIII、IV-C、LN、HA的表達

李 林，王望東

(湖北省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 檢驗科，湖北 武漢430015)

原發(fā)性肝癌的確切的分子機制及發(fā)病原因尚未完全明確，迄今為止多數(shù)學者認為其由遺傳和環(huán)境的因素共同作用，并且多個步驟、多種原因共同作用導致了其發(fā)生并進一步進展。肝臟纖維化是慢性肝臟炎癥發(fā)展至肝硬化，乃至最后演變?yōu)楦伟┍亟?jīng)的病理變化過程。肝臟纖維化是指在各種慢性肝臟疾病時，肝臟細胞受到各種刺激和炎癥因子的作用，最后導致細胞發(fā)生壞死，機體與此同時發(fā)生了反復的自我修復反應，出現(xiàn)大量纖維組織的異常增生變化，長期持續(xù)發(fā)展會導致肝硬化的進一步發(fā)生，最后乃至演變?yōu)樵l(fā)性肝癌。

膠原酶類、細胞因子和細胞外基質(zhì)成分是肝臟纖維化的三大類血清學指標，其中相對常用的為細胞外基質(zhì)成分。本研究探討了四種細胞外基質(zhì)成分水平在原發(fā)性肝癌患者和健康對照組人群中的變化，分別是血清透明質(zhì)酸(HA)、血清III型前膠原(PCIII)、層粘蛋白(LN)、IV型膠原(IV-C)，旨在了解其水平變化與原發(fā)性肝癌及肝功能指標的相關(guān)關(guān)系。

細胞外基質(zhì)成分較為復雜，而且其升高的機制也不盡相同，導致其測定某一種成分不足以正確判斷肝纖維化的嚴重性及程度，近年來學者們開始推薦聯(lián)合測定[1]，建立相關(guān)非創(chuàng)診斷體系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院腫瘤科2014年1月至2016年5月住院的原發(fā)性肝癌患者48例，其中男27例，女21例，平均年齡為46±15歲，其均為通過手術(shù)或肝臟穿刺活檢病理學檢查確診，健康正常對照組為我院體檢中心的健康自愿者52例，其中男29例，女23例，平均年齡為42±17歲。整項研究在原發(fā)性肝癌患者及健康體檢者的知情同意下完成，并經(jīng)過我院的倫理委員會批準。

1.2 方法

參與本研究的研究對象需在空腹(8-14 h無任何熱量攝入)后，于次日早晨7-9點抽取肘前靜脈血5 ml于EDTA抗凝管中，保存于-20℃的冰箱進行備用。血清透明質(zhì)酸(HA)、IV型膠原(IV-C)、Ⅲ型前膠原(PCIII)、層粘蛋白(LN)(試劑來源:深圳新產(chǎn)業(yè)全自動化學發(fā)光免疫分析儀器配套試劑)檢測均采用化學發(fā)光免疫法進行測定。采用全自動生化儀器(日本HITACHI公司)檢測丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶(γ-GT)、堿性磷酸酶(ALP)、膽堿醋酶(ChE)、腺苷脫氨酶(ADA)、總膽紅素(TB)、直接膽紅素(DB)、膽汁酸(TBA)、白細胞(WBC)、血小板(PLT)、AST/ALT、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、蛋白A/G比值(A/G)、甲胎蛋白(AFP)相關(guān)肝功能指標。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 18.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，計量資料以均數(shù)±標準差表示，兩組間臨床變量比較采用不配對Studentt檢驗，肝纖維化指標與肝癌相關(guān)性應用spearman等級相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 原發(fā)性肝癌患者組和健康正常對照組肝功能指標(見表1)

原發(fā)性肝癌患者組和健康對照組t檢驗提示年齡、血清AST、血清ALT、堿性磷酸酶、γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶、甲胎蛋白等指標有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。原發(fā)性肝癌患者組高于健康對照組。

表1 原發(fā)性肝癌組和健康對照組肝功能指標檢測結(jié)果±s)

2.2 患者常見無創(chuàng)指標與肝癌相關(guān)性的單因素相關(guān)分析(見表2)

Spearman等級相關(guān)分析提示：原發(fā)性肝癌患者人口學參數(shù)和常見血液指標中，除血清ALT、性別外，其他指標均與原發(fā)性肝癌有相關(guān)性，其中與γ-GT、PT、CHE、AFP、AST、ALB、PLT、A/G、DB、TB等血液指標有顯著相關(guān)性(P<0.01)。

表2 原發(fā)性肝癌與相關(guān)指標spearman's rho等級相關(guān)系數(shù)

表2 原發(fā)性肝癌與相關(guān)指標spearman's rho等級相關(guān)系數(shù)(續(xù))

2.3 原發(fā)性肝癌患者組和健康正常對照組血清 PCIII、IV-C、LN、HA水平(見表3)

肝纖維化的血清學指標在原發(fā)性肝癌患者組和健康對照組比較采用不配對Studentt檢驗，存在顯著性差異(P<0.01)。結(jié)果說明原發(fā)性肝癌各項肝纖維化血清學指標PCIII、IV-C、LN、HA顯著高于健康正常對照組。

表3 原發(fā)性肝癌組和健康對照組PCIII、IV-C、LN、HA檢測結(jié)果

3 討論

原發(fā)性肝癌高發(fā)地帶位于我國東南沿海地區(qū)，是我國地區(qū)較為常見的惡性腫瘤之一，目前其發(fā)病機制和發(fā)病原因尚未十分明確。隨著通過不同檢查手段，實現(xiàn)了早期診斷，早期治療原發(fā)性肝癌，而且其總體治療效果出現(xiàn)了明顯的提高。甲胎蛋白AFP是一種白蛋白，此種蛋白通常由胚胎干細胞分泌，但其在出生后兩周的胎兒中，會發(fā)現(xiàn)AFP從血液中消失，該生化指標是到迄今為止最廣泛地被應用于早期篩查和診斷原發(fā)性肝癌的。血清AFP水平與分化程度、生物學特性和腫瘤大小明顯相關(guān)，是反映治療效果和病情變化的較為敏感的指標。有大量相關(guān)文獻報道在原發(fā)性肝癌患者中血清AFP水平早期就會升高，而且隨著原發(fā)性肝癌的進一步進展，其AFP水平就會越高[2]。本研究中原發(fā)性肝癌組AFP水平顯著高于健康對照組(P<0.01)。

慢性肝炎是由于各種因素導致肝細胞損傷，隨之以膠原纖維為主的細胞外基質(zhì)在肝內(nèi)發(fā)生增生、沉積，最后導致了肝臟纖維化的發(fā)生[3]。正常肝臟細胞外基質(zhì)的主要成分有蛋白多糖、層粘蛋白和膠原。HA是一種蛋白多糖，肝臟纖維化的程度被證實與其血清的含量相一致[4]。慢性肝炎患者的PCIII持續(xù)升高提示了病情向肝硬化發(fā)生了進一步進展，而其血清含量的降低則預示了病情有所緩解。在肝臟纖維化早期合成PCIII的速度較快，然而越到晚期其合成速度愈慢，因而PCIII可作為診斷活動性纖維化的輔助檢測指標。何云等[5]報道，PCIII診斷肝硬化的陰性預測值在91.3%-93.2%之間，故可作為排除肝硬化的一項輔助檢測指標。IV型膠原含量升高能較為靈敏地反映出來肝臟纖維化程度的進展，可在早期輔助發(fā)現(xiàn)及診斷肝臟纖維化。IV型膠原被相關(guān)學者證實能較敏感的反映出來肝臟纖維化的進展程度，隨著病程的進展，血清含量中的IV-C膠原逐漸升高。層粘蛋白是一種非膠原性結(jié)構(gòu)蛋白，為基底膜中特有，與門靜脈壓力和肝臟纖維化活動程度呈正相關(guān)，在原發(fā)性肝癌、肝硬化和慢性活動性肝炎患者血清中均出現(xiàn)了明顯的升高。LN被證實也可以反映肝臟纖維化嚴重程度及其進展的過程。作為細胞基質(zhì)成分之一的透明質(zhì)酸酶，能較為準確并靈敏地反映肝細胞受損狀況和肝臟內(nèi)合成的纖維含量，是肝硬變和肝纖維化檢測的敏感性指標。血清HA在慢性遷延性肝炎、急性肝炎時被發(fā)現(xiàn)其輕度增高，在慢性活動性肝炎患者中其血清含量明顯升高，在肝硬化患者中其血清含量發(fā)生了極度的升高。HA是一種蛋白多糖，肝組織發(fā)生纖維化時其分泌會明顯增加，其進入體循環(huán)還可通過側(cè)支分流，同時其內(nèi)皮細胞受體相應減少，造成其降解減少，因此肝臟纖維化時，HA變化最大，是反映肝臟纖維化較為敏感的一項生化指標[6]。

對血清 PCIII、IV-C、LN和HA 進行聯(lián)合的檢測在肝纖維化和肝硬化中的研究的報道相對較多，在原發(fā)性肝癌中是不是有價值的報道比較少見。本文經(jīng)過檢測發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝癌組的PCIII、IV-C、LN和HA相對于健康對照組顯著的升高了。PCIII、IV-C、LN和HA既可以反映肝功能的損害程度，也可以反映肝臟纖維化程度，并與血清肝功能ALT、AST、ALP、γ-GT具有顯著的相關(guān)性。本研究顯示肝癌的發(fā)生可能是由于肝細胞受損導致纖維化和肝功能的損害的共同作用所致。

目前臨床常見輔助檢查指標中大多數(shù)指標與原發(fā)性肝癌有一定的關(guān)聯(lián)性。這些指標包含：①血清透明質(zhì)酸、Ⅲ型前膠原、層粘蛋白、Ⅳ型膠原；②γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、總膽紅素、膽堿酯酶、血小板、直接膽紅素、白細胞、白蛋白、蛋白A/G比值、甲胎蛋白；③病人年齡。本實驗顯示原發(fā)性肝癌組年齡、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶、γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶、甲胎蛋白等指標高于健康對照組。Spearman等級相關(guān)分析顯示除血清ALT和性別以外，其他血液生化指標均與和原發(fā)性肝癌有相關(guān)性，其中以γ-GT、PT、CHE、AFP、AST、ALB、PLT、A/G、DB、TB等血液生化指標相關(guān)性較大(P<0.01)。

這些指標參與原發(fā)性肝癌診斷模型的構(gòu)建有其合理性：①病人年齡：慢性肝病病程是時間累積的結(jié)果，是慢性肝炎活動，肝臟纖維化進一步進展乃至最后演變?yōu)樵l(fā)性肝癌的時間體現(xiàn)；②白蛋白相對減少與球蛋白相對升高導致的蛋白A/G比值降低更能較為直接地反映炎癥活躍程度增加和肝臟合成功能減弱；間接膽紅素增高反映肝臟排泄及和合成功能均受損，直接膽紅素和血清白蛋白反映肝臟合成的功能，其降低反映了肝功能減退，兩者均是肝臟功能受損、纖維化的進一步進展乃至最后漸變?yōu)樵l(fā)性肝癌的表現(xiàn)。③血小板減少反映了慢性肝臟細胞遭受破壞，導致纖維化的進一步形成，從而造成了門靜脈系統(tǒng)壓力的增加，脾臟進行性腫大，同時也可能由于肝炎病毒的慢性感染進一步抑制了骨髓造血功能。

本研究顯示：選擇血清 HA、LN、IV-C和PCIII四者聯(lián)合檢測，原發(fā)性肝癌血清 PCIII、IV-C、LN和HA、肝功能指標與健康正常對照組之間比較顯著升高(P<0.01)；此四項血清指標與肝癌存在一定的相關(guān)性。因此，血清 PCIII、IV-C、LN和HA可作為診斷肝癌和監(jiān)測其病情的重要參考指標。血清 PCIII、IV-C、LN和HA檢測的臨床價值已得到普遍認可，被認為是判斷肝纖維化或肝硬化較為敏感的檢測指標。血清 PCIII、IV-C、LN和HA與血清肝功能堿性磷酸酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶具有顯著的相關(guān)性。本研究可能系肝臟細胞受損導致纖維化和肝功能損害共同作用所致。有學者提出血清HA在慢性肝炎患者人群中診斷明顯肝纖維化、重度肝纖維化與肝硬化的ROC曲線下面積分別為0.75、0.82和0.89。研究支持HA水平可能作為肝纖維化或肝硬化臨床有用的無創(chuàng)指標[7-9]。血清LN在肝臟纖維化及肝硬化時明顯增加，且肝功能越愈差，其血清水平愈高，提示其可能和晚期的食管靜脈曲張和門靜脈高壓有關(guān)。在IV-C的合成過程中，由于其沉積于細胞外基質(zhì)不需要去除端肽，因此其在血清中的含量變化可能與肝血竇基底膜的更新速度有關(guān)，既往臨床與基礎研究均提示了IV-C在血清中的水平變化和與肝臟炎癥活動相關(guān)性較小，卻和門靜脈高壓、肝臟纖維化程度息息相關(guān)[10]。聯(lián)合多指標診斷可以提高診斷的精確度，常見的聯(lián)合指標包括HA、LN、PIIIP、IV-C等。研究表明這些組合診斷準確率在80%以上。

總之，本研究顯示血清PCIII、IV-C、LN和HA和肝功能指標水平的改變均與原發(fā)性肝癌有一定的相關(guān)性，聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌有一定的預測性。聯(lián)合檢測可提高預測原發(fā)性肝癌的準確性和可靠性。作為判斷肝纖維化、原發(fā)性肝癌有良好的預測作用，無創(chuàng)傷，重復性良好，臨床較為實用。

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2016-08-24)