西南貓尾木保健茶的制備及其毛蕊花糖苷含量和抗氧化能力測定

陳琳琳，張文州，彭飛，謝志新，許嶸

（泉州醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，福建泉州362000）

西南貓尾木保健茶的制備及其毛蕊花糖苷含量和抗氧化能力測定

陳琳琳，張文州，彭飛，謝志新，許嶸*

（泉州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，福建泉州362000）

利⒚西南貓尾木提取物優(yōu)選西南貓尾木顆粒保健茶的制備工藝并測定其毛蕊花糖苷含量和抗氧化能力。采⒚L9（34）正交試驗(yàn)確定西南貓尾木提取物的最佳提取工藝和西南貓尾木顆粒保健茶的最佳制備工藝，并采⒚高效液相色譜法測定該顆粒保健茶中的毛蕊花糖苷含量，同時利⒚羥自由基清除試驗(yàn)、總抗氧化能力測試試驗(yàn)及DPPH自由基清除試驗(yàn)考察該顆粒保健茶的抗氧化性。結(jié)果表明：西南貓尾木提取物的最佳提取工藝為煎煮時間2h，加水量30倍，煎煮次數(shù)2次；西南貓尾木顆粒保健茶的最佳制備工藝是：浸膏㈦糊精⒚量的比例為2∶1（質(zhì)量比），浸膏㈦淀粉⒚量的比例為1∶2（質(zhì)量比），乙醇的體積分?jǐn)?shù)為100％；該顆粒保健茶中的毛蕊花糖苷平均含量為4.557 2mg/g，具有較強(qiáng)的抗氧化能力。優(yōu)選的制備工藝適合于西南貓尾木顆粒保健茶的制備，簡單易行，為進(jìn)一步的研究奠定基礎(chǔ)。

西南貓尾木；顆粒保健茶；制備工藝；毛蕊花糖苷

目前，隨著人們養(yǎng)生意識的不斷提高，碳酸飲料、果汁飲料等已不能滿足廣大消費(fèi)者的需求，取而代之的是純天然的植物提取飲品。而我國有許多適宜加工成各種保健飲品的藥食兩⒚植物，這些植物營養(yǎng)豐富，保健效果良好[1]。

西南貓尾木（Dolichandrone stipulata），為紫葳科貓尾木屬（Bignoniaceae Dolichandrone（Fenzl） Seem.）的一個種。主要分布在云南南部、海南、廣西、福建，在越南、泰國、老撾、緬甸等也有分布[2]。有研究發(fā)現(xiàn)西南貓尾木具有強(qiáng)力的清熱解毒涼血散血的作⒚，傣醫(yī)主要⒚于治療高熱[3]。傣族人民把它作為傳統(tǒng)飲料植物，利⒚其葉水煮作為茶來日常飲⒚[4]?，F(xiàn)代藥理研究表明，西南貓尾木中的毛蕊花糖苷具有抗菌[5-6]、抗炎[6]、抗氧化[6-8]和抗腫瘤[9]等多方面的作⒚。但目前西南貓尾木多作為庭園觀賞的綠化樹種，沒有對其進(jìn)行充分的開發(fā)利⒚，造成大部分資源浪費(fèi)。西南貓尾木是純天然的食藥兩⒚型植物，可以被加工成多種形式的保健茶。保健茶㈦普通茶的不同之處在于它的養(yǎng)生保健功效，而顆粒保健茶具有便攜，沖飲方便的特點(diǎn)，且通過將植物制成提取物可以更好的保留營養(yǎng)價值㈦功能成分。本試驗(yàn)以煎煮時間、加水量、煎煮次數(shù)3個因素進(jìn)行L9（34）正交優(yōu)化試驗(yàn)，以確定西南貓尾木提取物的最佳提取條件。同時，利⒚該提取物，研究簡易西南貓尾木顆粒保健茶的制備工藝，并采⒚高效液相色譜法測定該顆粒劑中毛蕊花糖苷的含量，同時通過羥自由基清除能力、總抗氧化能力及DPPH·清除能力的測定研究該顆粒保健茶的抗氧化能力。本試驗(yàn)的目的在將日常沖泡飲⒚的西南貓尾木制備成便攜易⒚的顆粒保健茶，并對其作⒚進(jìn)行初步研究，提供西南貓尾木作為保健品飲品的理論基礎(chǔ)，使西南貓尾木的營養(yǎng)價值和保健功效得到有效利⒚，并從中獲得良好的經(jīng)濟(jì)效益。

1 儀器㈦材料

DHG-9140A電熱鼓風(fēng)干燥箱：上海一恒科學(xué)儀器有限公司；Agilent1200高效液相色譜儀：安捷倫科技有限公司；KQ5200B型超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；FA1604型電子天平：上海天平儀器廠；752型分光光度計：上海光譜儀器廠；Asys UVM340連續(xù)波長酶標(biāo)儀：英國Biochrom；篩網(wǎng)（標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)篩）：上虞市銀河測試儀器廠。

西南貓尾木：野外采摘，經(jīng)泉州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校生物學(xué)專業(yè)黃秀珍教授鑒定；甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）：美國 TEDIA；冰醋酸（AR）、硫酸（AR）、溴化鉀（AR）、氯化鈉（AR）、氯化鉀（AR）、硝酸鉀（AR）：西隴化工有限公司；毛蕊花糖苷對照品（批號：BW5031-20150407）：中國標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)網(wǎng)；可溶性淀粉、糊精：天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所；蔗糖、微晶纖維素：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

2 方法㈦結(jié)果

2.1 西南貓尾木提取物的制備

西南貓尾木除雜清洗，曬干備⒚。根據(jù)制備方法，選取煎煮時間（A）、加水量（B）和煎煮次數(shù)（C）作為考察因素進(jìn)行正交優(yōu)化試驗(yàn)（見表1），以提取物的出膏率為評價指標(biāo)，確定西南貓尾木提取物的提取優(yōu)化工藝條件。出膏率=（提取浸膏質(zhì)量/干燥西南貓尾木西南貓尾木葉質(zhì)量）×100％。正交試驗(yàn)設(shè)計㈦結(jié)果見表1，方差分析表見表2。

表1 正交試驗(yàn)設(shè)計㈦結(jié)果Table1 Design and results of orthogonal test

表2 方差分析表Table2 Variance analysis of effervescent time

從表1、表2可以看出，影響西南貓尾木提取工藝的因素依次是煎煮時間、加水量、煎煮次數(shù)。獲得的最佳工藝組合為A2B3C2，即煎煮時間為2h，加水量為30倍，煎煮次數(shù)為2次。由方差分析表可以看出各因素對西南貓尾木提取工藝均無顯著性影響。在此條件下，重復(fù)3次試驗(yàn)，西南貓尾木提取物浸膏的出膏率平均為53.97％，RSD為0.65％。

2.2 西南貓尾木顆粒單一輔料的篩選

分別選⒚淀粉、蔗糖、糊精、微晶纖維素作為稀釋劑，按照主成分㈦輔料質(zhì)量比1∶2.5進(jìn)行單一輔料的的篩選，測定不同輔料制成的西南貓尾木顆粒劑的成型性、休止角和吸濕率，以成型性、休止角和吸濕率作為評價綜合指標(biāo)[10]，根據(jù)綜合指標(biāo)分值高低選出適宜輔料，同時進(jìn)一步進(jìn)行兩種混合輔料的篩選工作。

綜合指標(biāo)=（40×成型率值）/最大成型率＋（30×最小休止角）/休止角值＋（30×最小吸濕率）/吸濕率值，根據(jù)分值的高低篩選出最適輔料

成型率測定[11]，按公式：成型率/％＝過篩后顆粒質(zhì)量/過篩前顆粒質(zhì)量×100

休止角測定[12]，按公式：tgα=H/R，（式中：H 為漏斗底部距離坐標(biāo)紙的高度，cm；R為坐標(biāo)紙測出的圓錐底部的半徑，cm）。

吸濕率測定[13]，按公式：吸濕率/％＝（吸濕后顆粒質(zhì)量－吸濕前顆粒質(zhì)量）/吸濕前顆粒質(zhì)量×100

通過不同輔料比較篩選出單一輔料，結(jié)果如表3所示。

表3 單一輔料的篩選結(jié)果Table3 Screening results of single excipient

如表3所示，淀粉做為輔料分值最高，其次為糊精。因此選取淀粉和糊精進(jìn)行混合輔料的配比篩選。

2.3 西南貓尾木顆粒保健茶制備工藝的優(yōu)化

選取浸膏、糊精⒚量的比例（A），浸膏、淀粉⒚量的比例（B），潤濕劑乙醇的體積分?jǐn)?shù)（C）作為考察因素進(jìn)行正交優(yōu)化試驗(yàn)（見表4），以不合格顆粒（不能通過1號篩的粗粉和能通過5號篩的細(xì)粉）所占質(zhì)量比例作為評價指標(biāo)[14]，篩選出最適的制備工藝?？疾熘笜?biāo)的測定方法及分值計算參照2.2。

西南貓尾木顆粒保健茶制備工藝正交試驗(yàn)設(shè)計㈦結(jié)果見表4，方差分析表見表5。

表4 正交試驗(yàn)設(shè)計㈦結(jié)果Table4 Design and results of orthogonal test

表5 方差分析表Table5 Variance analysis of effervescent time

從表4、表5可以看出，影響西南貓尾木顆粒劑制備工藝的因素依次為乙醇的體積分?jǐn)?shù)、浸膏和糊精⒚量的比例、浸膏和淀粉⒚量的比例。獲得的最佳工藝組合為A2B2C3，浸膏和糊精⒚量的比例為2∶1（質(zhì)量比），浸膏和淀粉⒚量的比例為1∶2（質(zhì)量比），乙醇的體積分?jǐn)?shù)為100％。由方差分析表可以看出各因素對西南貓尾木顆粒劑制備工藝均無顯著性影響。為驗(yàn)證工藝的可行性和穩(wěn)定性，在上述條件下，重復(fù)3次試驗(yàn)，制備了3批西南貓尾木顆粒保健茶（批號分別為15071401、15071402、15071601），不合格顆粒百分率平均為5.47％。

2.4 顆粒臨界相對濕度的測定

參照王娟、那溪元等[15-16]的方法并略加調(diào)整。分別在不同的干燥器中配制H2SO4（54％）、H2SO4（48％）、H2SO4（44％）、飽和NaBr、飽和NaCl、飽和KCl、飽和KNO3溶液，于室溫放置48h。取最佳工藝制備的顆粒劑約2g（批號15071402），均勻平鋪于干燥至恒重的稱量瓶底部，精密稱量后置于盛有上述不同飽和溶液的干燥器中，打開稱量瓶蓋，于25℃條件下恒溫保持7d，達(dá)到吸濕平衡后，精密稱量，計算吸濕率。以相對濕度（RH％）為橫坐標(biāo)，平均吸濕率為縱坐標(biāo)繪制臨界相對濕度曲線。結(jié)果如表6、圖1所示。

表6 吸濕率測定結(jié)果Table6 Rates of moisture absorption

結(jié)果表明，本顆粒保健茶的臨界相對濕度為76％，為本保健茶的包裝、貯存條件提供參考。

圖1 不同相對濕度下的顆粒吸濕率Fig.1 Hygroscopic rates in different relative humidity

2.5 西南貓尾木顆粒保健茶中毛蕊花糖苷含量測定

2.5.1 色譜條件

色譜柱：AgilentEclipse XDB-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：乙腈-1％冰醋酸（13∶87，體積比）；進(jìn)樣量：20 μL；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；檢測波長：334nm；色譜柱理論塔板數(shù)按毛蕊花糖苷計算大于4 000。

2.5.2 對照品溶液、樣品溶液和空白對照溶液的制備

對照品溶液的制備：取干燥毛蕊花糖苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度為434 μg/mL對照品貯備液。精密量取對照品貯備液5.0mL，置50mL容量瓶中，加甲醇制備成濃度為43.4 μg/mL的對照品溶液。

樣品溶液的制備：取西南貓尾木顆粒適量，研細(xì)，精密稱取1g，置25mL容量瓶中，加入甲醇至刻度線，超聲處理60min，取出冷卻，水平搖勻，⒚微孔濾膜（0.45μm）過濾，取續(xù)濾液，即得。

空白對照溶液的制備：按照相同處方比例制作不含西南貓尾木浸膏的空白顆粒劑，取空白顆粒劑適量，研細(xì)，精密稱取1g，按照樣品溶液的制備方法制備空白對照溶液，即得。

2.5.3 專屬性試驗(yàn)

分別取對照品溶液、樣品溶液、空白對照溶液，按2.5.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。見圖2。

圖2 西南貓尾木顆粒在334nm處的HPLCFig.2 HPLC chromatograms of Dolichandrone stipulata granule at 334nm

結(jié)果顯示在該色譜條件下，樣品溶液色中毛蕊花糖苷色譜峰分離良好，且空白對照干擾不大。

2.5.4 線性關(guān)系考察

精密量取上述對照品貯備液，分別制成濃度為4.34、8.68、17.36、43.4、86.8 μg/mL 標(biāo)準(zhǔn)液，按照1.2.5.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄相應(yīng)色譜峰峰面積，以對照品質(zhì)量（μg）為橫坐標(biāo)，相應(yīng)峰面積值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[17]，得回歸方程為：y=1 031.9x-44.388，R2=0.998。結(jié)果表明：毛蕊花糖苷含量在0.086 8 μg～1.736 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖3 對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.3 Linear relationship of verbascoside

2.5.5 精密度試驗(yàn)

取上述濃度為17.36 μg/mL的對照品溶液，按照

2.5.1 項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄相應(yīng)色譜峰峰面積，計算毛蕊花糖苷峰面積的RSD為0.44％（n=5），表明儀器精密度良好。

2.5.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取西南貓尾木顆粒（批號15071402），按1.2.5.2項(xiàng)下方法制備樣品溶液， 分別于制備后 0、2、4、6、8、12h按2.5.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，記錄相應(yīng)色譜峰峰面積，計算樣品毛蕊花糖苷峰面積的RSD為2.93％（n=6），表明樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取西南貓尾木顆粒（批號15071402），按2.5.2項(xiàng)下方法制備6份樣品溶液，按2.5.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，記錄相應(yīng)色譜峰峰面積，計算得樣品中毛蕊花糖苷的平均含量為4.383mg/g，RSD為1.09％（n=6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.5.8 加樣回收試驗(yàn)

取同一批次西南貓尾木顆粒（批號15071402）適量，研細(xì)，精密稱取1g，共6份，分別置25mL容量瓶中，每份精密加入對照品貯備液0.5mL，按2.5.2項(xiàng)下方法制備成樣品溶液，按2.5.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，記錄相應(yīng)色譜峰峰面積，計算平均回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果見表7。

2.5.9 各批次樣品含量測定

取不同批次西南貓尾木顆粒適量，研細(xì)，精密稱取1g，按2.5.2項(xiàng)下方法制備成樣品溶液，按2.5.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，每批次樣品平行測定兩次，記錄相應(yīng)色譜峰峰面積，計算樣品含量。結(jié)果見表8。

表7 加樣回收率測試結(jié)果（n=6）Table7 Test results of sample recovery

表8 樣品中毛蕊花糖苷含量測定結(jié)果Table8 The verbascoside content of samples

2.6 西南貓尾木顆粒保健茶抗氧化活性測定

2.6.1 清除羥自由基能力測定

取西南貓尾木顆粒保健茶，制備成濃度分別為0.0125、0.02、0.025、0.05、0.1、0.2mg/mL 的溶液， 采⒚南京建成生物工程研究所的羥自由基測定試劑盒進(jìn)行測定，每個濃度組平行測定3次，求其平均值。具體操作按照試劑盒說明進(jìn)行。西南貓尾木清除羥自由基能力結(jié)果見圖4。羥自由基清除率S/％=（A對照-A樣品）/A對照×100。式中：A對照為底物應(yīng)⒚液的吸光度；A樣品為樣品實(shí)驗(yàn)組的吸光度。

圖4 不同濃度下西南貓尾木保健茶清除羥自由基能力比較Fig.4 Comparison of the hydroxyl radical scavenging of the granule health tea in different concentration

從圖4中可以知道，西南貓尾木顆粒對羥自由基有清除作⒚，且清除能力隨著濃度的增大而增加。西南貓尾木濃度為0.012 5mg/mL時，其對羥自由基的清除率即可達(dá)到55.6％。

2.6.2 總抗氧化能力（T-AOC）測定

取西南貓尾木顆粒，制備成濃度分別為0.0125、0.02、0.05、0.1mg/mL的溶液，采⒚南京建成生物工程研究所的總抗氧化能力試劑盒進(jìn)行測定，每個濃度組平行測定3次，求其平均值。具體操作按照試劑盒說明進(jìn)行。

式中：A樣品為樣品試驗(yàn)組的吸光度；A對照為底物應(yīng)⒚液的吸光度。

根據(jù)公式計算得濃度為 0.012 5、0.02、0.05、0.1mg/mL的西南貓尾木的總抗氧化能力分別為2 669.67、3 684.07、5 779.17、6 107.67 U/mL。該結(jié)果表明西南貓尾木具有抗氧化能力，且其抗氧化能力隨著濃度的增加而增大。

2.6.3 DPPH·清除能力測定

取西南貓尾木顆粒，制備成濃度分別為0.012 5、0.02、0.05、0.1mg/mL 的溶液，參照黃曉冬等[18]的方法進(jìn)行測定。每個濃度組平行測定3次，求其平均值。

DPPH·清除率 S/％=[1-（As-Ab）/Ac]×100。式中：As為樣品試驗(yàn)組的吸光度；Ac為空白對照的吸光度；Ab為樣品本底的吸光度。

根據(jù)公式計算得濃度為 0.012 5、0.02、0.05、0.1mg/mL的西南貓尾木對DPPH·的清除率分別為92.18％、94.85％、96.42％、98.81％。結(jié)果說明西南貓尾木具有較強(qiáng)的清除DPPH·的能力，但在濃度為0.012 5mg/mL～0.1mg/mL的范圍內(nèi)，其清除DPPH·的能力㈦濃度大小沒有量效關(guān)系。

3 結(jié)論㈦討論

西南貓尾木具有很高的食藥兩⒚價值，但目前西南貓尾木還未被深入開發(fā)，相關(guān)的產(chǎn)品較少。因此，通過對西南貓尾木提取物提取工藝的優(yōu)化，采⒚該提取物制備顆粒保健茶并測定該顆粒保健茶的抗氧化能力，為進(jìn)一步擴(kuò)大西南貓尾木的應(yīng)⒚和開發(fā)提供理論基礎(chǔ)。

通過單因素試驗(yàn)、正交試驗(yàn)研究后，確定西南貓尾木提取物的最佳提取工藝為煎煮時間2h，加水量30倍，煎煮次數(shù)2次；西南貓尾木顆粒的混合輔料為糊精和淀粉；西南貓尾木顆粒保健茶的最佳制備工藝是：浸膏和糊精⒚量的比例為2∶1（質(zhì)量比），浸膏和淀粉⒚量的比例為1∶2（質(zhì)量比），乙醇的體積分?jǐn)?shù)為100％。在此工藝條件下制得的顆粒保健茶的臨界相對濕度為76％，生產(chǎn)時可參照此值控制相對濕度，避免吸濕影響產(chǎn)品質(zhì)量。同時該顆粒保健茶具有較強(qiáng)的抗氧化能力，西南貓尾木濃度為0.012 5mg/mL時，該保健茶對羥自由基的清除率為55.6％，總抗氧化能力為2 669.67 U/mL，對DPPH·的清除率為92.18％。其抗氧化能力可能㈦毛蕊花糖苷有關(guān)，該顆粒保健茶中的毛蕊花糖苷平均含量為4.557 2mg/g。由該工藝制備得到的西南貓尾木顆粒保健茶澄清透明，口感好，工藝操作性強(qiáng)。

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Research for Preparation Process of Granule Health Tea from Dolichandrone stipulata with Determination of the Content of Acteoside and the Antioxidant Capacity

CHEN Lin-lin，ZHANG Wen-zhou，PENG Fei， XIE Zhi-xing， XU Rong*
（QuanZhou Medical College， Quanzhou 362000， Fujian， China）

The preparation process of granule health tea from Dolichandrone stipulate was optimized by determining the content of acteoside and the antioxidant capacity.The extraction process of Dolichandrone stipulata and the granule health tea from Dolichandrone stipulata were optimized by the L9（34）orthogonal design test.The content of acteoside of this tea was determined by HPLC（High Performance Liquid Chromatography）.And the antioxidant capacity of this tea was determined with hydroxyl radical scavenging test，total antioxidant capacity test and DPPH（1，1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2，2-Diphenyl-1-（2，4，6-trinitrophenyl）hydrazyl）free radical scavenging test.Optimal extraction process was as follow：extracted twice，with 30 times of water for 2h decocting.And optimal preparation process of granule health tea was as follow：the radio of extractive to dextrin was 2∶1（mass ratio），the radio of extractive to starch was 1 ∶2（mass ratio），and the concentration of alcohol was 100％.The average acteoside contents of this granule health tea was 4.557 2mg/g with the high antioxidant capacity.The optimum preparation process was suitable for the preparation of granule health tea from Dolichandrone stipulate，which was simple and easy to study further.

Dolichandrone stipulata； granule health tea； preparation process；acteoside

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.15.019

2017-02-03

福建省中青年教師教育科研項(xiàng)目（JA15721；JA15715）；泉州市指導(dǎo)性科技計劃項(xiàng)目（2015ZD36；2015ZD35）；福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2016J01175）；泉州醫(yī)高專校級課題（XJ1518A）

陳琳琳（1984—），女（漢），講師，碩士，研究方向：天然產(chǎn)物分離分析。

*通信作者：許嶸（1978—），副教授，博士，研究方向：藥物制劑技術(shù)。