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    甲狀腺結節(jié)TSH受體基因突變和BRAF V600E突變檢測的臨床意義

    2017-08-31 12:01:31徐偉銘楊佩濃袁秋琦
    健康研究 2017年3期
    關鍵詞:基因突變檢測

    徐偉銘,楊佩濃,袁秋琦

    (1.臺州恩澤醫(yī)療中心(集團)恩澤醫(yī)院 病理科,浙江 黃巖 318050;2.臺州恩澤醫(yī)療中心(集團)臺州醫(yī)院 病理科,浙江 臺州 317000)

    健康科學臨床研究

    甲狀腺結節(jié)TSH受體基因突變和BRAF V600E突變檢測的臨床意義

    徐偉銘1,楊佩濃2,袁秋琦1

    (1.臺州恩澤醫(yī)療中心(集團)恩澤醫(yī)院 病理科,浙江 黃巖 318050;2.臺州恩澤醫(yī)療中心(集團)臺州醫(yī)院 病理科,浙江 臺州 317000)

    目的 探討甲狀腺結節(jié)TSH受體基因突變和BRAF V600E突變檢測的臨床意義。方法 收集120例甲狀腺結節(jié)患者外周血樣本,采用PCR擴增TSH受體基因第8號外顯子和BRAF V600E基因,并進行測序,統(tǒng)計不同性質甲狀腺結節(jié)TSH受體基因和BRAF V600E突變率;比較不同臨床特征(性別、年齡、腫瘤大小、被膜外侵犯、淋巴結轉移、多發(fā)病灶、AJCC分期)患者之間突變率的差異,多因素logistic回歸模型分析兩種突變分別與甲狀腺乳頭狀癌患者臨床特征的相關性。結果 120例甲狀腺結節(jié)組織病理學診斷為惡性的80例,其中53例(66.25%)患者發(fā)生TSH受體基因突變,59例(73.75%)患者發(fā)生BRAF V600E突變。單因素分析結果顯示,甲狀腺結節(jié)TSH受體基因突變與甲狀腺乳頭狀癌腫瘤大小、淋巴轉移、甲狀腺被膜外侵犯、多發(fā)病灶、AJCC分期等臨床病理特征有關(P<0.05);多因素分析顯示淋巴轉移、甲狀腺被膜外侵犯、多發(fā)病灶、AJCC分期均與甲狀腺結節(jié)TSH受體基因突變有關(P<0.05)。結論 TSH受體基因突變檢測和BRAF V600E突變檢測有助于判斷甲狀腺結節(jié)良惡性診斷;伴隨甲狀腺被膜外侵犯,TSH受體基因和BRAF V600E的突變均明顯增加。

    甲狀腺結節(jié);TSH受體基因突變;BRAF V600E突變;檢測

    甲狀腺結節(jié)是臨床常見的病癥,可以單發(fā),也可以多發(fā)[1]。大多數甲狀腺結節(jié)并無明顯的臨床癥狀,經高分辨率超聲檢查的檢出率為19%~67%,檢出率仍相對低,即便是進行細針穿刺細胞學輔助檢查,但仍有10%~40%甲狀腺結節(jié)不能確定,使得這部分患者治療缺乏針對性[2]。促甲狀腺激素(TSH, thyroid stimulating hormone)受體是甲狀腺細胞的一種特異性蛋白質,在生理狀態(tài)下參與甲狀腺濾泡上皮的分泌及生長[3],TSH受體基因與甲狀腺疾病的關系一直備受臨床關注。鼠類肉瘤濾過性毒菌致癌同源體B1(B-Raf and v-raf murine sacoma viraloncogene homolog B1,BRAF)基因是最重要的原癌基因之一,在BRAF突變中絕大部分突變形式為BRAF V600E突變,據報道,BRAF V600E突變檢測有助于甲狀腺癌的診斷[4]。本文檢測甲狀腺結節(jié)患者的TSH受體基因和BRAF V600E,觀察兩者的突變特征及突變率,以期為甲狀腺結節(jié)的基因檢測及靶向治療提供依據。

    1 資料和方法9:10 2017-7-20

    1.1 一般資料 選擇2013年5月—2016年10月我院收治的甲狀腺結節(jié)患者140例,男81例,女59例,平均年齡40.7±16.2歲?;颊咝g前經高分辨率超聲檢查,術后經病理學檢查確診為甲狀腺結節(jié)。

    1.2 基因組DNA抽提方法 治療前,抽取所有甲狀腺結節(jié)患者外周血5 mL,采用TakaRa基因組提取試劑盒提取外周血基因組DNA,具體步驟參照試劑盒操作說明。使用NaNodrop 2000c測定基因組DNA的濃度,將所有基因組DNA濃度稀釋成統(tǒng)一濃度,同時DNA質量要求A260/A280比值在1.8~2.0之間,A260/A230比值>2。

    1.3 TSH受體基因和BRAF V600E突變檢測 根據TSH受體基因第8號外顯子序列和BRAF V600E基因序列,在Oligo7.5軟件上設計其PCR引物,其中TSH受體基因第8號外顯子正向引物(TSH-8F): 5’-CCGCTCCATGCCTGTAGCGTAC-3’, TSH-8R:ACTCGCCATAGCTCCACACGTG,擴增片段長度為192bp;BRAF V600E-F:5’-TCATAGTAGTTGCTCTGATAGGAT-3’, BRAF V600E-R:5’-CGCCAATATTAATCAGTGCTA-3’,擴增片段長度為213bp,引物均由上海生工有限公司合成。PCR 20 uL反應體系為:基因組DNA1ul,10X PCR buffer 2 uL,dNTP 2 uL,正反向引物各1 uL,Taq酶0.5 uL,H2O 13.5 uL。反應在PCR儀中進行,擴增程序為:95 ℃預變性3 min, 95 ℃ 30 sec;56 ℃ 30sec;72 ℃ 60s,35個循環(huán),72 ℃延伸3 min。所有PCR擴增產物經1%瓊脂糖凝膠電泳證實后,采用膠回收試劑盒回收特異性擴增PCR條帶,將回收的條帶送往杭州優(yōu)思達生物技術有限公司進行測序,使用DNAStar軟件將測序的序列與理論序列進行比對。統(tǒng)計突變情況。

    1.4 干預手段 根據高分辨率超聲檢查結果分類,140例甲狀腺結節(jié)患者中20例進一步臨床觀察,120例患者進行手術治療,其中行甲狀腺全切除術36例,患側腺葉+峽部切除28例,32例同期行患側中央區(qū)淋巴清掃。

    1.5 統(tǒng)計學分析 應用SPSS 18.0統(tǒng)計學軟件處理數據;突變率比較采用卡方檢驗,多因素分析采用logistic回歸模型分析;P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結 果

    2.1 病理學診斷及突變檢測 120例甲狀腺結節(jié)組織病理學診斷為惡性的80例,病理診斷為良性的40例;惡性患者中53例患者發(fā)生TSH受體基因突變,突變率為66.25%;59例患者發(fā)生BRAF V600E突變,突變率為73.75%。

    2.2 不同臨床病理特征患者的突變率比較 病理診斷為惡性的80例甲狀腺結節(jié)患者均為甲狀腺乳頭狀癌,不同腫瘤大小、是否淋巴轉移、甲狀腺是否被膜外侵犯、是否多發(fā)病灶、不同AJCC分期患者的TSH基因突變率間差異顯著(均P<0.05),見表1。

    表1 不同臨床病理特征患者的TSH基因突變率和BRAF V600E突變率比較

    2.3 TSH基因突變和BRAF V600E突變的多因素分析 將單因素分析中具有意義的因素納入Logistic回歸模型行多因素分析,排除交互影響后,結果顯示淋巴轉移、被膜外侵犯、多發(fā)病灶、AJCC分期與甲狀腺結節(jié)TSH基因突變相關(P<0.05,表2);甲狀腺結節(jié)BRAF V600E突變與被膜外侵犯相關(OR=1.433,P=0.004)。

    表2 甲狀腺結節(jié)TSH基因突變多因素分析

    3 討 論

    甲狀腺結節(jié)是內分泌系統(tǒng)的多發(fā)病和常見病,甲狀腺結節(jié)往往是甲狀腺疾病首要或唯一的臨床表現(xiàn),其在人群中的發(fā)病率為3%~7%[5]。甲狀腺結節(jié)可有多種病因引起,如增生性結節(jié)性甲狀腺腫、腫瘤性結節(jié)、囊腫、炎癥性結節(jié)等,不同病因的甲狀腺結節(jié)治療方案也不同。

    TSH受體蛋白主要分布于甲狀腺上皮細胞表面,通過結合TSH,激活CAMP第二信號系統(tǒng)引起一系列生物反應,目前認為,許多甲狀腺疾病與TSH受體突變有關,其主要機制是TSH受體突變,使得TSH受體蛋白的結構和免疫源性改變,影響甲狀腺細胞的生長及分紅,造成甲狀腺功能紊亂[6]。本文中80例惡性甲狀腺結節(jié)患者中,53例患者發(fā)生TSH受體基因突變,突變率為66.25%,提示惡性甲狀腺結節(jié)患者伴發(fā)TSH受體基因突變。據報道,血清TSH濃度升高是病發(fā)分化型甲狀腺癌的獨立危險因素,也是影響頸淋巴結轉移的因素之一[7]。甲狀腺被膜外侵犯、淋巴轉移和晚期臨床病理分期(Ⅲ、Ⅳ期)是預測甲狀腺癌進展、復發(fā)、侵襲以及患者死亡的可靠指標[8],本研究結果顯示淋巴結轉移、甲狀腺被膜外侵犯、多發(fā)病灶、AJCC分期與甲狀腺結節(jié)TSH基因突變相關。提示TSH受體基因突變檢測有助于甲狀腺癌病情的預測。

    本文結果還顯示,80例惡性甲狀腺結節(jié)患者中,59例患者發(fā)生BRAF V600E突變,突變率為73.75%,提示惡性甲狀腺結節(jié)患者伴發(fā)BRAF V600E突變[9]。本文中BRAF V600E突變與甲狀腺被膜外侵犯相關,與腫瘤大小、淋巴結轉移、多發(fā)病灶、AJCC分期等無關[10]。

    綜上所述,TSH受體基因突變檢測和BRAF V600E突變檢測有助于判斷甲狀腺結節(jié)良惡性診斷;伴隨甲狀腺被膜外侵犯,TSH受體基因和BRAF V600E的突變均明顯增加。

    [1]孫志龍,鄔一軍,陳健忠,等.改良小切口甲狀腺切除術治療甲狀腺結節(jié)的應用價值[J].浙江創(chuàng)傷外科,2015,20(5):946-948.

    [2]吳永黎,張含旭,葛俊平.2728例體檢人群甲狀腺結節(jié)的流行病學調查[J].健康研究,2012,32(4):270-272.

    [3]Wu X, Yu L, Han J,etal. Coexistence of thyroglobulin antibodies and thyroid peroxidase antibodies correlates with elevated thyroid-stimulating hormone level and advanced tumor stage of papillary thyroid cancer[J]. Endocrine,2014,46(3):554-560.

    [4]朱曉娥,袁耿彪,范永增,等.甲狀腺癌中BRAF、RET、MEN1、FOXE1等基因相關SNP位點的篩選及臨床價值[J].重慶醫(yī)學,2012,41(34):3580-3582.

    [5]謝秀靜.超聲和CT在甲狀腺良惡性結節(jié)并存中的診斷應用[J].中華危重癥醫(yī)學雜志電子版,2015,8(4):258-260.

    [6]魏軍平,劉媛.TSH受體單克隆抗體研究進展[J].醫(yī)學研究雜志,2015,44(3):1-3.

    [7]姚禮,王勇,嚴軼群,等.血清中TSH濃度和分化型甲狀腺癌患者頸淋巴結轉移的關系[J].海南醫(yī)學院學報,2014,20(9):1257-1259.

    [8]Mallick UK. The Revised American Thyroid Association Management Guidelines 2009 for Patients with Differentiated Thyroid Cancer: an Evidence-Based Risk-Adapted Approach[J]. Clinical Oncology,2010,22(6):472-474.

    [9]萬漢鋒,張彬,王勇,等.甲狀腺結節(jié)BRAF V600E突變檢測的臨床意義[J].中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2014,49(6):468-472.

    [10]魯海珍,邱田,應建明,等.BRAF V600E突變與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特征的關系[J].中華病理學雜志,2014,43(12):794-798.

    Clinical value of detection of TSH receptor gene and BRAF V600E mutation in thyroid nodules

    XU Wei-ming1, YANG Pei-nong2, YUAN Qiu-qi1

    (1.DepartmentofPathology,EnzeHospital,TaizhouMedicalCenter,Huangyan318050;2.DepartmentofPathology,TaizhouHospital,EnzeMedicalCenter,Taizhou317000,China)

    Objective To explore the clinical value of TSH receptor gene and BRAF V600E mutation in thyroid nodules. Method Peripheral blood samples of 120patients with thyroid nodules were collected. The eighth-exon of TSH receptor gene and BRAFV600E gene were amplified with PCRand then sequenced. The mutation rate of TSH receptor gene and BRAFV600E in the different thyroid nodules were compared and their correlation with the clinical features of patients with papillary thyroid carcinoma (gender, age, tumor size, capsule invasion, lymph node metastasis, multiple lesions and AJCC staging) were then analyzed. The indexeswith statistical significance analyzed bysingle factor analysis were enrolled into the analysis of multi factor logistic regression model. Findings 80 of120 patients with thyroid nodules were pathologically diagnosed as malignant. TSHgene mutation occurred in 53 cases (66.25%) and BRAFV600E mutation occurred in 59 cases. Single factor analysis showed that the mutation of the TSH receptor gene in thethyroid gland was correlated with the clinical pathological characteristics, including the size of the papillary thyroid carcinoma, lymph node metastasis, thyroid capsule invasion, multiple lesions, and AJCC staging. Multivariate analysis further confirmed that the mutation of the TSH receptor gene in thyroid gland was correlated with the lymph node metastasis, thyroid capsule invasion, multiple lesions, and AJCC staging. Results of single factor analysis and multivariate analysis both showed that the mutation of BRAF V600E in thyroid gland was associated with the invasion of the thyroid gland. Conclusion The detection of TSH receptor gene and BRAF V600E mutation could help to determine the diagnosis of benign and malignant thyroid nodules. With the external invasion of the thyroid gland, the TSH receptor gene and BRAF V600E mutations were significantly increased.

    thyroid nodule; TSH receptor gene mutation; BRAF V600E mutation; detection

    2016-10-20

    徐偉銘(1980-),男,浙江臺州人,本科,主管技師。

    10.3969/j.issn.1674-6449.2017.03.010

    R736.1

    A

    1674-6449(2017)03-0271-03

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