肺腺癌組織中TTF-1表達(dá)變化及其與EGFR基因突變、患者預(yù)后的關(guān)系

張旭剛，李維青，高穎，李志田，姜福勝，魏博

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院，北京 100038)

肺腺癌組織中TTF-1表達(dá)變化及其與EGFR基因突變、患者預(yù)后的關(guān)系

張旭剛，李維青，高穎，李志田，姜福勝，魏博

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院，北京 100038)

目的 觀察肺腺癌組織甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1(TTF-1)表達(dá)變化，并分析其與表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)基因突變、患者預(yù)后的關(guān)系。方法 肺腺癌患者192例，觀察其TTF-1表達(dá)變化及EGFR基因突變情況，分析TTF-1陽(yáng)性表達(dá)、EGFR基因突變與肺腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系，另采用Kaplan-Meier生存分析、Log Rank檢驗(yàn)及Cox風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析影響患者預(yù)后的因素。結(jié)果 192例患者中，TTF-1陽(yáng)性表達(dá)157例(81.8%)、陰性表達(dá)35例(18.2%)，EGFR基因突變型80例(41.7%)、野生型112例(58.3%)。TTF-1陽(yáng)性表達(dá)與肺腺癌TNM分期相關(guān)，EGFR基因突變與肺腺癌患者性別、吸煙史相關(guān),P均<0.05。157例TTF-1陽(yáng)性患者中有79例(50.3%)發(fā)生EGFR基因突變，而35例TTF-1陰性患者中僅有1例(2.9%)發(fā)生EGFR基因突變，TTF-1陽(yáng)性表達(dá)與EGFR突變有相關(guān)性(P<0.05)。單因素生存分析顯示，TTF-1陽(yáng)性、EGFR基因突變、年齡、PS評(píng)分、TNM分期與患者預(yù)后相關(guān)(P均<0.05)。多因素生存分析顯示，TTF-1陽(yáng)性、EGFR基因突變、TNM分期早期、PS評(píng)分0～2分是肺腺癌遠(yuǎn)期生存的獨(dú)立影響因素(P均<0.05)。結(jié)論 檢測(cè)肺腺癌組織TTF-1表達(dá)情況有助于初步預(yù)測(cè)肺腺癌EGFR基因突變狀態(tài)及判斷患者預(yù)后。

肺癌；非小細(xì)胞肺癌；肺腺癌；甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1；表皮生長(zhǎng)因子受體

肺癌的發(fā)病率和病死率居所有腫瘤的前列，其中非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)占肺癌總數(shù)的80%以上，而腺癌發(fā)病率逐年升高，約占NSCLC的50%[1]。近年來(lái)，酪氨酸激酶抑制劑(TKIs)等靶向藥物的應(yīng)用，使肺癌患者預(yù)后及治療反應(yīng)優(yōu)于細(xì)胞毒性藥物，尤其是針對(duì)有表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)基因突變患者[2]。以EGFR基因?yàn)榘悬c(diǎn)治療NSCLC是目前治療肺癌的前沿手段，而且尋找可預(yù)測(cè)NSCLC患者EGFR基因突變及遠(yuǎn)期生存的免疫組化指標(biāo)備受關(guān)注。現(xiàn)階段檢測(cè)EGFR基因的方法多樣，主要有直接測(cè)序法、擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)、突變高效液相色譜法等，這些方法對(duì)組織標(biāo)本、實(shí)驗(yàn)設(shè)備等要求高，且因費(fèi)時(shí)、費(fèi)用高而不便于推廣。因此有必要尋找一種經(jīng)濟(jì)、便捷、準(zhǔn)確預(yù)測(cè)EGFR基因突變的指標(biāo)。甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1(TTF-1)常表達(dá)于肺及甲狀腺組織中，是肺腺癌特異的免疫組化診斷標(biāo)志物，有助于轉(zhuǎn)移性腺癌和原發(fā)性肺腺癌的鑒別[3]。既往文獻(xiàn)[4～6]表明，TTF-1表達(dá)與EGFR基因突變之間存在一致性，且TTF-1表達(dá)影響患者遠(yuǎn)期生存。本研究觀察了肺腺癌組織TTF-1表達(dá)變化，并分析其與EGFR基因突變、患者預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 選取北京世紀(jì)壇醫(yī)院保存的肺腺癌標(biāo)本192例份，其中手術(shù)標(biāo)本(切除或活檢)88例份，穿刺標(biāo)本47例份，支氣管鏡標(biāo)本32例份，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶標(biāo)本25例份?；颊吣?5例，女107例；年齡27～87歲，中位年齡56.5歲；≤65歲132例，>65歲60例；吸煙史(一生中連續(xù)或累積吸煙6個(gè)月以上)80例；TNM分期參照2009年國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)公布的修訂后的第七版國(guó)際肺癌分期法，其中Ⅰ期19例、Ⅱ期31例、Ⅲa期46例、Ⅲb期36例、Ⅳ期60例；采用美國(guó)東部協(xié)作腫瘤組的PS評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)分0～1分者165例，2分及以上者27例。

1.2 TTF-1檢測(cè)方法 組織標(biāo)本用10%中性甲醛固定，脫水后以石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，采用小鼠抗人TTF-1單克隆抗體試劑(北京中杉金橋生物技術(shù)公司，克隆號(hào)：SPT24)，以En Vision免疫組化法檢測(cè)TTF-1。TTF-1表達(dá)于細(xì)胞核，高倍視野下陽(yáng)性細(xì)胞為染色出現(xiàn)棕黃色或褐色。

1.3 EGFR基因突變檢測(cè)方法 采用擴(kuò)增阻滯突變系法進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，檢測(cè)外顯子18、19、20、21突變。EGFR基因突變檢測(cè)試劑盒(共29種突變位點(diǎn))購(gòu)于廈門艾德生物醫(yī)藥科技公司，采用StrataGene MX3000P實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(德國(guó))進(jìn)行擴(kuò)增，具體實(shí)驗(yàn)步驟參照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。結(jié)果判定：樣品的外控信號(hào)擴(kuò)增曲線的Ct值<26則提示有突變，Ct值≥26則為野生型。

1.4 患者生存觀察 總生存期定義為患者從病理確診開始至死亡或2016年3月30日。隨訪截止至2016年3月30日，隨訪時(shí)間2～71個(gè)月，中位隨訪時(shí)間23.5個(gè)月。所有患者中獲得隨訪181例(100例死亡，81例存活)，失訪11例。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)。單因素分析使用χ2檢驗(yàn)，多因素分析用非條件Logistic回歸分析。應(yīng)用Kaplan-Meier曲線進(jìn)行生存分析，組間差異采用Log Rank檢驗(yàn)。采用Cox風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析影響患者預(yù)后因素。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

192例患者中，TTF-1陽(yáng)性表達(dá)157例(81.8%)，陰性表達(dá)35例(18.2%)；EGFR基因突變型80例(41.7%)，野生型112例(58.3%)。TTF-1陽(yáng)性表達(dá)、EGFR基因突變與肺腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表1，由表1可知，TTF-1陽(yáng)性表達(dá)與肺腺癌TNM分期相關(guān)，EGFR基因突變與肺腺癌患者性別、吸煙史相關(guān)，P均<0.05。157例TTF-1陽(yáng)性患者中有79例(50.3%)發(fā)生EGFR基因突變，而35例TTF-1陰性患者中僅有1例(2.9%)發(fā)生EGFR基因突變，TTF-1陽(yáng)性表達(dá)與EGFR基因突變有明顯相關(guān)性(P<0.05)。

表1 TTF-1陽(yáng)性表達(dá)、EGFR基因突變與肺腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

TTF-1陽(yáng)性患者中位生存時(shí)間48個(gè)月(95%CI=35.1～60.9)，陰性患者13個(gè)月(95%CI=5.1～20.9)，Kaplan-Meier生存曲線顯示陽(yáng)性患者優(yōu)于陰性患者；EGFR基因突變型患者中位生存時(shí)間58個(gè)月(95%CI=46.3～69.7)，野生型患者28個(gè)月(95%CI=11.2～44.8)，K-M生存曲線顯示突變型患者優(yōu)于野生型患者。不同因素患者中位生存期比較見表2，由表2可知TTF-1陽(yáng)性、EGFR突變、年齡、PS評(píng)分級(jí)、TNM分期與患者預(yù)后相關(guān)，而性別及吸煙與患者預(yù)后無(wú)關(guān)。

表2 不同因素患者中位生存期比較

多因素COX回歸分析結(jié)果見表3，由表3可知TTF-1陽(yáng)性、EGFR突變、TNM分期早期、PS評(píng)分0～2分是肺腺癌遠(yuǎn)期生存的獨(dú)立影響因素，而高齡(年齡>65歲)不是其獨(dú)立影響因素。

3 討論

TTF-1是NKX2轉(zhuǎn)錄基因家族的成員之一，位于人類染色體14q13.3，編碼的蛋白含有371～378個(gè)氨基酸，生理情況分布于甲狀腺、呼吸道上皮的Ⅱ型Clara細(xì)胞及部分大腦前腹側(cè)核等[7]。研究發(fā)現(xiàn)，在肺腺癌和小細(xì)胞型肺癌中TTF-1高表達(dá)；然而在大細(xì)胞性肺癌和肺鱗癌中，TTF-1多不表達(dá)，臨床將TTF-1視為肺腺癌特異的免疫組化診斷標(biāo)志物。

本研究顯示，肺腺癌TTF-1陽(yáng)性率為81.8%(157/192)，此結(jié)果與亞洲人群報(bào)導(dǎo)相近(沙特阿拉伯人群為83.3%[8])，略高于西方人群(法國(guó)人群為66%[9]，英國(guó)人群為73%[10])。

表3 多因素COX回歸分析結(jié)果

進(jìn)一步分析TTF-1表達(dá)與EGFR基因突變的關(guān)系，本組157例TTF-1陽(yáng)性患者中有79例發(fā)生EGFR基因突變，而TTF-1陰性患者35例中僅有1例發(fā)生EGFR基因突變，提示TTF-1陽(yáng)性表達(dá)預(yù)測(cè)EGFR為突變型意義重大。Somaiah等[11]報(bào)道，224例TTF-1陰性表達(dá)患者僅有2例EGFR基因突變，TTF-1預(yù)測(cè)EGFR基因突變的靈敏度和特異度分別為99.1%、36.4%。相關(guān)基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)，EGFR基因突變最常見于“終末呼吸單位”的肺腺癌，其起源于Ⅱ型肺泡上皮、肺Clara細(xì)胞和無(wú)纖毛柱狀上皮細(xì)胞的肺組織中，而上述細(xì)胞常表達(dá)TTF-1[12]。

大部分研究?jī)A向于TTF-1陽(yáng)性表達(dá)是NSCLC患者有利預(yù)后因素，Chung[13]等研究分析496例晚期腺癌，TTF-1陽(yáng)性表達(dá)者總生存期27.4個(gè)月，而陰性表達(dá)者總生存期11.8個(gè)月，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。一項(xiàng)分析中[14]包括17項(xiàng)研究的2 235例患者，表達(dá)TTF1的NSCLC是生存有利的影響因素，尤其是在Ⅰ期及Ⅲb/Ⅳ期患者中。

Nakamura等[15]認(rèn)為，由于TTF-1生理狀況下參與調(diào)節(jié)肺上皮組織發(fā)育、分化，因此可以推測(cè)腫瘤中TTF-1陽(yáng)性代表著腫瘤尚保留一定的正常分化能力，說(shuō)明腫瘤細(xì)胞相對(duì)分化成熟，其侵襲力較弱。Winslow等[16]發(fā)現(xiàn)，低分化的肺癌中TTF-1表達(dá)多為陰性；TTF-1可以控制腫瘤分化程度及限制惡性細(xì)胞轉(zhuǎn)移的潛能。本研究單因素生存分析顯示，TTF-1陽(yáng)性、EGFR基因突變、年齡、PS評(píng)分、TNM分期與患者預(yù)后相關(guān)，多因素生存分析顯示TTF-1陽(yáng)性、EGFR基因突變、TNM分期早期、PS評(píng)分0～2分是肺腺癌遠(yuǎn)期生存的獨(dú)立影響因素。上述結(jié)果提示，TTF-1在肺腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用，其表達(dá)的缺失引起腫瘤侵襲性增強(qiáng)，分化程度降低，從而影響患者預(yù)后。

總之，TTF-1是一個(gè)預(yù)測(cè)肺腺癌EGFR基因突變狀態(tài)的免疫組化指標(biāo)，對(duì)于尚未開展EGFR基因檢測(cè)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)，可以檢測(cè)TTF-1用于靶點(diǎn)基因的初步篩選。TTF-1在肺腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要作用，其陽(yáng)性表達(dá)是肺腺癌患者有利的預(yù)后因素。

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北京市衛(wèi)生系統(tǒng)高層次衛(wèi)生技術(shù)人才隊(duì)伍建設(shè)專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)；北京市屬醫(yī)院科研培育計(jì)劃項(xiàng)目(PX2016044)；北京世紀(jì)壇醫(yī)院院青年基金資助項(xiàng)目(2015-q10)。

魏博(E-mail: weibos@126.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.31.012

R734.2

B

1002-266X(2017)31-0044-03

2017-06-14)