鵝副粘病毒病感染的診斷與防治

柴 華，孫德君，孫曉峰，武 嘯，楊朋欣，秦立鑫

（哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司，哈爾濱 150069）

鵝副粘病毒病感染的診斷與防治

柴 華，孫德君，孫曉峰，武 嘯，楊朋欣，秦立鑫

（哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司，哈爾濱 150069）

鵝副粘病毒病是由禽Ⅰ型副粘病毒（APMV-1）引起的急性病毒性傳染病，對養(yǎng)鵝業(yè)危害極大，文章從發(fā)病情況、臨床癥狀、病理變化、實(shí)驗(yàn)室診斷幾個方面對鵝副粘病毒病作出診斷，并提出了相應(yīng)的防治措施，以減少該病的發(fā)病率和死亡率。

鵝副粘病毒?。恢饕∽?；防治

鵝新城疫是由新城疫病毒引起的鵝的急性、烈性和高度接觸性傳染病[1-3]。在國際病毒分類委員會（ICTV）第七次報告中，把新城疫病毒歸入禽副粘病毒Ⅰ型（AMPV-1），副粘病毒科；副粘病毒亞科的腮腺炎病毒屬。禽副粘病毒Ⅰ型（AMPV-1）僅有一個血清型，即新城疫病毒。新城疫病毒可引起雞、鴨、鵝等家禽和個別鳥類發(fā)病。本病具有很高的發(fā)病率和死亡率，一旦發(fā)生，會給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失，是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要傳染病之一[4-8]。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將新城疫列入A類動物疾病，同時我國將其列入一類動物疫病。

禽副粘病毒（AMPV）共有9個血清型，AMPV1～AMPV9，禽副粘病毒Ⅰ型（AMPV-1）是禽類感染的主要病原體，其典型代表為新城疫病毒。新城疫（ND）可以引起多種禽類發(fā)病，在世界歷史上經(jīng)歷了4次大流行，給全球經(jīng)濟(jì)帶來了巨大損失。1997年江蘇省首次出現(xiàn)鵝群爆發(fā)類似雞新城疫疫情。此后我國南方其他各省相繼出現(xiàn)此疫情，最后確診為副粘病毒感染，給當(dāng)?shù)仞B(yǎng)鵝業(yè)造成嚴(yán)重影響[9-11]。本病主要通過消化道及呼吸道傳播，不呈現(xiàn)明顯的季節(jié)性流行，各種品種及日齡的鵝均容易感染。此外，由于我國水禽養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大，發(fā)生鵝感染禽副粘病毒的情況也越來越常見，該病在臨診癥狀、組織學(xué)變化、病理變化等方面都表現(xiàn)出一定的特點(diǎn)，并且該病毒毒力可能有不斷增強(qiáng)的趨勢。

1 發(fā)病情況

2016年山東省某鵝場飼養(yǎng)了5 000多只30日齡肉鵝，病鵝初期表現(xiàn)精神不振、萎靡、體溫升高、行動無力，常蹲地不動。采食量和飲水量都減少，糞便呈灰白色。

臨床癥狀：病鵝初期表現(xiàn)精神不振，采食、飲水減少，有時勉強(qiáng)采食或飲水又隨即甩頭吐出；拉白色稀糞或水樣腹瀉，部分病鵝時常甩頭，并發(fā)出“咕咕”的咳嗽聲。病情加重后，病鵝雙腿無力，蹲伏地上，不愿行走。后期病鵝極度衰弱，渾身打顫，眼睛流淚，眼眶及周圍羽毛被淚水浸濕，有時鼻孔流出清亮水樣液體，頭頸顫抖，呼吸困難。最后常見病鵝相互擁擠在一起，遠(yuǎn)離其他尚能行動的鵝，體重迅速下降，并漸漸衰竭而死，重癥病鵝及病死鵝泄殖腔周圍羽毛常沾有大量白色糞便。

2 病理剖檢病變

病死鵝剖檢腸、胰腺、肝、腎的病理變化見圖1。

病死鵝剖檢以腸道出血，腸黏膜呈糠麩樣，有潰瘍，但無栓塞為特征。直腸更加明顯，可見散在的潰瘍灶，并有紅色結(jié)痂。肝臟腫大，質(zhì)地變硬，膽囊腫大，充滿膽汁；胰腺出血、有粟粒大小白色壞死灶；腎略腫大，輸尿管擴(kuò)張?；疾‰r鵝以腸黏膜出血為主，并伴有散在的潰瘍灶為特征性病理變化。

3 病理組織學(xué)變化

病鵝的腸、肝、心、胰腺、腎、脾病理切片見圖2。

病死鵝肝細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞、心肌細(xì)胞等常表現(xiàn)顆粒變性或空泡變性，氣管黏膜上皮細(xì)胞壞死脫落，纖毛消失。病鵝腸道黏膜多發(fā)生凝固性壞死，腸黏膜病變深入到黏膜下層和肌層，黏膜下層常見嚴(yán)重的充血、出血。胰腺腺泡結(jié)構(gòu)大部分破壞，常見大小不一的壞死灶。脾臟淋巴組織嚴(yán)重變性壞死和空泡化，淋巴細(xì)胞顯著減少，白髓結(jié)構(gòu)大部分消失，并可見均勻紅染的血漿滲出物。

圖1 病死鵝剖檢腸、胰腺、肝、腎病理變化

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 引物的設(shè)計合成

根據(jù)GenBank發(fā)表的NDV的F基因序列設(shè)計引物如下。

上游引物為P1：5'GCTCATTCAGGACGCAATA 3'；

下游引物為P2：5'TGTGATAATCCGTCGGTGACT 3'。

引物由吉林庫美生物工程技術(shù)有限公司合成。

4.2 病毒分離與鑒定

取疑似鵝副黏病毒的肝臟剪碎，按1∶5（W/V）比例加入滅菌PBS進(jìn)行勻漿處理，將勻漿液反復(fù)凍融3次，4 000 r·min-1離心30 min，取上清液備用。上清液中加雙抗（青霉素、鏈霉素）各3 000 U·mL-1，置4℃過夜，以8 000 r·min-1離心10 min，取制備的上清液以尿囊腔途徑接種10日齡SPF雞胚，0.1 mL·胚-1，于37℃孵育，每日觀察兩次，收獲120 h內(nèi)死亡的雞胚尿囊液，收集死胚尿囊液，進(jìn)行HA試驗(yàn)及PCR鑒定。

4.3 病毒DNA的提取及PCR擴(kuò)增

鵝副粘病毒F基因的PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果見圖3。

圖2 病鵝的腸、肝、心、胰腺、腎、脾病理切片

圖3 鵝副粘病毒F基因的PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果

病毒液采用TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0提取試劑盒，按說明書進(jìn)行病毒DNA的提取。

RT-PCR反應(yīng)：RNA模板14.5 μL，隨機(jī)引物2 μL混合，70℃水浴5 min，-20℃5 min；加入下列液體：5×Buffer 5 μL，dNTP 2 μL，RNAi 0.5 μL，MLV 1 μL；37℃水浴1 h，取出放入96℃水浴5 min，取出。PCR反應(yīng)采用25 μL體系，滅菌雙蒸水17 μL、10×PCR Buffer 2.5 μL、DNA溶液2.0 μL、dNTP（2.5 mmol·μL-1）2 μL、上下游引物1 μL、Taq酶0.5 μL。95℃變性5 min，1個循環(huán)，95℃變性1 min，67℃退火50 s，72℃延伸50 s，30個循環(huán)后，72℃延伸10 min。PCR反應(yīng)完畢后，取出PCR產(chǎn)物5 μL，進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳，于紫外燈下觀察電泳結(jié)果。電泳結(jié)果表明，待檢樣本中可擴(kuò)增出1條約500 bp的目的條帶（圖1）。再結(jié)合發(fā)病情況和剖檢變化，診斷為鵝副黏病毒感染。

5 防治措施

鵝副粘病毒病是一種急性、病毒性傳染病，目前尚缺乏特效藥物可以控制本病的發(fā)生。因此，平時應(yīng)加強(qiáng)鵝群的飼養(yǎng)管理，調(diào)整鵝群的飼養(yǎng)密度，注意搞好環(huán)境衛(wèi)生，經(jīng)常消毒鵝舍及用具，對4～8周齡的仔鵝可全群喂服維生素和抗菌藥物，或在飼草中添加自制大蒜酊。應(yīng)堅持預(yù)防為主的原則，及早接種疫苗，對已發(fā)病鵝群，要分病鵝和假定健康鵝區(qū)別對待，已發(fā)病鵝用抗血清治療，未發(fā)病鵝使用疫苗緊急接種：10～14日齡雛鵝每只肌注0.3 mL，青年鵝每只肌注0.5 mL，大鵝每只肌注1 mL，或種鵝產(chǎn)蛋前20 d時肌注0.5 mL·只-1。疫苗可在常溫下避光保存，使用方便，免疫效果好。全場清除糞便、污物、徹底消毒，不要隨便到外地引種，以防帶回疫病，已引進(jìn)的鵝要隔離飼養(yǎng)觀察。

對病鵝用抗鵝副粘病毒血清注射，同時用百毒殺帶鵝消毒和洗刷飲水槽、料槽等用具。用強(qiáng)力霉素或替米考星和百毒克等抗病毒類藥合用5～7 d，效果較好，還要供給足量多種維生素、電解質(zhì)多維等。加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，降低鵝群密度，注意搞好環(huán)境衛(wèi)生，勤打掃糞便，定期消毒，對病死鵝要做深埋處理。養(yǎng)鵝戶最好不要同時養(yǎng)雞、鴨，以免交叉感染，同時要特別注意做好預(yù)防工作。

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Diagnosis and Treatment of Goose Paramyxovirus Infection

CHAI Hua,SUN Dejun,SUN Xiaofeng,WU Xiao,YANG PengXin,QIN Lixin

（Harbin Pharmaceutical Group Biological Vaccine Co.,Ltd.,Harbin 150069,China）

Goose paramyxovirus disease is acute viral infectious disease caused by avian paramyxovirus(APMV-1).It is great harm to the goose industry.This paper reviewed the incidence,clinical symptoms,pathological changes,laboratory diagnosis aspects of goose paramyxovirus disease,and put forward the corresponding control measurestoreducethemorbidityandmortalityofthedisease.

goose paramyxovirus disease;main lesion;prevention and treatment

S835；S852.65+9.5

：A

：1001-0084（2017）07-0030-03

2017-05-16

柴華（1978-），男，黑龍江佳木斯人，碩士，高級獸醫(yī)師，主要從事于獸用生物制品研究。