ABCG1在腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激中的機(jī)制研究*

薛嘉虹，朱參戰(zhàn)，胡艷超，欒春紅

（西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院 心內(nèi)科，陜西 西安710004）

ABCG1在腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激中的機(jī)制研究*

薛嘉虹，朱參戰(zhàn)，胡艷超，欒春紅

（西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院 心內(nèi)科，陜西 西安710004）

目的 探討三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G1（ABCG1）在腫瘤壞死因子α（TNF-α）誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激中的作用及可能的機(jī)制。方法 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞被特異性ABCG1 siRNA或ABCG1過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染或使用LXR（肝X受體）激活劑T0901317預(yù)處理，隨后給予腫瘤壞死因子（TNF-α）干預(yù)12 h。采用DCFHDAAM（2’7’-二氯熒光雙乙酸鹽）熒光探針檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧簇（ROS）的水平，分光光度儀測量還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷（NADPH）氧化酶活性，實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法（qRT-PCR）和Western blot檢測內(nèi)皮細(xì)胞NADPH氧化酶亞型非吞噬細(xì)胞氧化酶4（NOX4）表達(dá)及超氧化物歧化酶（SOD）的表達(dá)。結(jié)果 ABCG1表達(dá)上調(diào)抑制TNF-α誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激，同時抑制促氧化應(yīng)激的NADPH氧化酶的活性和NOX4的表達(dá)，促進(jìn)抗氧化的SOD表達(dá)。相反，ABCG1表達(dá)下調(diào)進(jìn)一步誘導(dǎo)ROS的產(chǎn)生，誘導(dǎo)NADPH氧化酶的活性和NOX4的表達(dá)，抑制SOD1表達(dá)。結(jié)論 ABCG1通過調(diào)節(jié)NADPH氧化酶/SOD抑制TNF-α誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激。

三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G1；氧化應(yīng)激；還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷氧化酶；超氧化物歧化酶

研究表明，氧化應(yīng)激以及在氧化應(yīng)激過程中產(chǎn)生的活性氧（reactive oxygen species，ROS）與多種心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展有著密切關(guān)系[1-4]。內(nèi)源性ROS產(chǎn)生除了主要來源于線粒體呼吸鏈外，還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷（reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH）氧化酶是體內(nèi)ROS產(chǎn)生的另一主要來源[2-4]。此外，機(jī)體也存在著清除過多產(chǎn)生ROS的抗氧化系統(tǒng)[3]，當(dāng)氧化和抗氧化作用失衡，即可導(dǎo)致大量ROS的產(chǎn)生。

ABCG1屬于三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G1（adenosine triphosphate binding cassette transporter G1，ABCG1）家族成員之一（矛盾），具有調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)游離膽固醇流出，防止泡沫細(xì)胞形成的作用[5-7]。此外，有研究發(fā)現(xiàn)，ABCG1也在內(nèi)皮細(xì)胞高度表達(dá)，其促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)固醇流出的作用對保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞正常功能具有十分重要的作用[8-11]。既往研究中，發(fā)現(xiàn)ABCG1表達(dá)上調(diào)可以降低TNF-α誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，其作用可能與抑制腫瘤壞死因子-α（tumour necrosis factor-α，TNF-α）誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激相關(guān)[12]。本研究擬進(jìn)一步探討ABCG1抑制TNF-α誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激可能涉及的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)干預(yù)

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）購自美國 ATCC 細(xì)胞庫。內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)在含10%胎牛血清的低糖培養(yǎng)基（dulbecco's modified eagle medium，DMEM）中，37℃、5%二氧化碳CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。培養(yǎng)的HUVECs給予10 ng/ml的TNF-α干預(yù)12 h，或者預(yù)先使用肝X受體（liver X receptors，LXRs）配體T0901317（5μg/ml，Sigma）預(yù)處理HUVECs 2 h，或HUVECs被轉(zhuǎn)染特異性ABCG1 siRNA或ABCG1過表達(dá)質(zhì)粒，24 h后，細(xì)胞再給予10 ng/ml TNF-α干預(yù)12 h。正常培養(yǎng)的HUVECs為對照組。

1.2 核糖核酸提取及逆轉(zhuǎn)錄和實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)

收集干預(yù)結(jié)束后的HUVECs，用Trizol（美國in vitrogen公司）一步法提取細(xì)胞總核糖核酸（ribonucleic acid，RNA）。以紫外分光光度計測定總RNA的純度（A260/A280）＞1.8。取2μg總RNA逆轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)脫氧核糖核酸（complementary deoxyribonucleic acid，cDNA）。采用 SYBR Green I嵌合熒光法，以 3-磷酸甘油脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPD）基因?yàn)閮?nèi)參照，實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative real time polymerase chain reaction，qRT-PCR）檢測HUVECs中NADPH氧化酶亞型NOX4及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD） 信使核糖核酸 （messenger ribonucleic acid，mRNA）的表達(dá)。引物的序列如下：NOX4正向引物5'-CTGGTGAATGCCCTCAACTT-3'，反向引物：5'-GGCCAGGAACAGTTGTGAAG-3'；SOD1 正 向 引物：5'-TAGCGAGTTATGGCGACGAA-3'，反向引物：5'-TGCTGTATTATCTCCAAACT-3'；SOD2 正 向 引物：5'-GCCCTGGAACCTCACATCA-3'，反向引物：5'-TGACCACCACCATTGAACTT-3'；GAPDH 正向引物：5'-TCATCCCTGCCTCTACTG-3'，反向引物：5'-T GCTTCACCACCTTCTTG-3'。反應(yīng)條件為：95℃溫育10 s，95℃ 5 s，54℃ 20 s，讀板溫度；72℃ 12 s共 40個循環(huán)。每個反應(yīng)做3個復(fù)孔。擴(kuò)增完畢后行熔解曲線分析，確定擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性。因目的基因與內(nèi)參照基因的擴(kuò)增效率一致，qRT-PCR統(tǒng)計分析采用2-ΔΔCt法。ΔΔCt=對照組△Ct（目的基因Ct-管家基因Ct）-各組△Ct（目的基因Ct-管家基因Ct）。

1.3 Western blot免疫蛋白檢測

收集干預(yù)結(jié)束后的HUVECs，加入RIPA裂解液進(jìn)行細(xì)胞裂解，于4℃離心10 min，棄除沉淀，用BCA法進(jìn)行蛋白質(zhì)定量。取50 g蛋白質(zhì)加入1×上樣緩沖液中，在100℃加熱10 min使蛋白質(zhì)變性。用10%十二烷基硫酸鈉（sodium dodecyl sulphate，SDS）聚丙烯酰胺凝膠（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）進(jìn)行電泳分離，轉(zhuǎn)硝酸纖維素膜（nitrocellulose filter membrane，NC），封閉液封閉 2 h，按說明書以1∶200加入兔抗人NOX4（美國Santa Cruz Biotechnology公司），兔抗人ABCG1（美國Santa Cruz Biotechnology 公司），4℃培育過夜，TBST（Tris-Hcl）緩沖溶液+吐溫洗3次，1∶2 000加入辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔二抗1∶5 000（美國Santa CruzBiotechnology公司），室溫培育1h，TBST洗3次，用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光液（enhanced chemilumincscence，ECL）（美國Amersham公司），冷電荷耦合元件（chargecoupled device，CCD） 照相機(jī)直接拍攝，Quality one軟件分析。β-actin（美國Santa Cruz Biotechnology公司）為對照組。

1.4 細(xì)胞內(nèi)活性氧檢測

干預(yù)結(jié)束后的HUVECs和20 mmol DCFH-DA熒光探針（美國Sigma-Aldrich公司）37℃孵育20min，磷酸鹽緩沖溶液（phosphate buffered solution，PBS）清洗3次，熒光顯微鏡測定細(xì)胞內(nèi)熒光素的強(qiáng)度以表示細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生的多少。

1.5 NADPH氧化酶活性檢測

根據(jù)細(xì)胞NADPH氧化酶活性光度法定量檢測試劑盒說明書進(jìn)行（上海一基實(shí)業(yè)有限公司）。樣品準(zhǔn)備好后，根據(jù)說明書依次加入緩沖液、反應(yīng)液、底物液，即刻放入分光光度儀，在λ=340nm處測定NADPH氧化酶的活性，結(jié)果為樣品總活性-樣品非特異性活性。

1.6 ABCG1干擾和過表達(dá)

參考既往實(shí)驗(yàn)[13]，選用化學(xué)合成的ABCG1干擾序列正向引物：5'-GAGUCUUUCUUCGGGAACATT-3'，反向引物：5'-UGUUCCCGAAGAAAGACUCTT-3'（上海吉瑪生物制藥公司）。ABCG1 siRNA和隨機(jī)siRNA序列使用TurboFect siRNA轉(zhuǎn)染試劑（立陶宛Fermentas公司）轉(zhuǎn)染HUVECs，轉(zhuǎn)染24 h后細(xì)胞用于隨后的實(shí)驗(yàn)干預(yù)。綠色熒光標(biāo)記的ABCG1過表達(dá)質(zhì)粒EX-Z0509-M61和對照載體EX-EGFP-M61由美國Gene CopoeiaTM公司設(shè)計合成并轉(zhuǎn)染HUVECs，Western blot驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率，結(jié)果見[13]。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ABCG1表達(dá)改變對TNF-α誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響

TNF-α干預(yù)HUVECs后，內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度較對照組增加，而使用T0901317預(yù)處理HUVECs組，內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度則減弱，提示使用T0901317后內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)活性氧產(chǎn)生減少。當(dāng)進(jìn)一步使用ABCG1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HUVECs，使內(nèi)皮細(xì)胞ABCG1表達(dá)增高后，再給予TNF-α干預(yù)，內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度類似T0901317干預(yù)組，同樣較單純TNF-α干預(yù)的內(nèi)皮細(xì)胞熒光強(qiáng)度減弱。相反，使用ABCG1 siRNA轉(zhuǎn)染HUVECs后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度較單純TNF-α干預(yù)的內(nèi)皮細(xì)胞有所增強(qiáng)，提示活性氧進(jìn)一步產(chǎn)生。見圖1。

圖1 ABCG1表達(dá)改變對TNF-α誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響 （×100）

2.2 ABCG1表達(dá)改變對NADPH氧化酶活性的影響

在TNF-α干預(yù)組，HUVECs的ABCG1表達(dá)較對照組降低（t=31.00，P=0.001），NADPH 氧化酶活性則較對照組增加（t=30.10，P=0.001），使用 T0901317預(yù)處理或ABCG1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后再給予TNF-α干預(yù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著內(nèi)皮細(xì)胞ABCG1表達(dá)增加，NADPH氧化酶活性被逆轉(zhuǎn)，較TNF-α干預(yù)組降低（T0901317干預(yù)組 t=27.58，P=0.001，ABCG1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組t=29.76，P=0.001），幾乎接近對照組的水平。在使用ABCG1 siRNA轉(zhuǎn)染組，ABCG1表達(dá)進(jìn)一步降低，內(nèi)皮細(xì)胞NADPH氧化酶活性較對照組增加（FABCG1表達(dá)=12.858，PABCG1表達(dá)=0.000；FNADPH氧化酶活性=700.108，PNADPH氧化酶活性=0.000）。見圖 2。

圖2 ABCG1表達(dá)改變對NADPH mRNA氧化酶活性的影響

2.3 ABCG1表達(dá)改變對NOX4表達(dá)的作用NOX4作為NADPH氧化酶亞單位之一，與NADPH氧化酶的其他亞單位相比較，主要表達(dá)在內(nèi)皮細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，在TNF-α干預(yù)組，HUVECs的NOX4 mRNA表達(dá)和蛋白表達(dá)較對照組增加（t=48.00 和22.25，均P=0.000），而使用T0901317預(yù)處理或ABCG1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后再給予TNF-α干預(yù)，HUVECs的NOX4 mRNA表達(dá)和蛋白表達(dá)均較TNF-α干預(yù)組降低（在mRNA表達(dá)方面，tT0901317組=26.50，PT0901317組=0.000，tABCG1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組=19.33，PABCG1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組=0.000；蛋白表達(dá)方面 tT0901317組=24.50，PT0901317組=0.000；tABCG1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組=21.60，PABCG1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組=0.000）。使用ABCG1 siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，內(nèi)皮細(xì)胞NOX4 mRNA表達(dá)和蛋白表達(dá)較對照組增加（tNOX4mRNA表達(dá)=262.519，PNOX4mRNA表達(dá)=0.000；tNox4蛋白表達(dá)=304.004，PNOX4蛋白表達(dá)=0.000）。但與 TNF-α 干預(yù)組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.25和2.00，均P＞0.05）。見圖3。

圖3 ABCG1表達(dá)改變對NOX4 mRNA和蛋白表達(dá)的影響

2.4 ABCG1表達(dá)改變對SOD mRNA表達(dá)的影響

SOD是體內(nèi)重要的抗氧化酶。當(dāng)TNF-α干預(yù)HUVECs后，HUVECs的SOD1和SOD2 mRNA表達(dá)較對照組降低（t=3.62 和 3.10，均 P ＜0.05），而使用T0901317預(yù)處理或ABCG1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，隨著ABCG1表達(dá)增加，內(nèi)皮細(xì)胞的SOD1和SOD2 mRNA表達(dá)較TNF-α干預(yù)組增加（FSOD1mRNA=800.119，PSOD1mRNA=0.000；FSOD2mRNA=504.138，PSOD2mRNA=0.000）。當(dāng)使用ABCG1 siRNA轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細(xì)胞使ABCG1表達(dá)降低后，內(nèi)皮細(xì)胞SOD1 mRNA表達(dá)較TNF-α干預(yù)組進(jìn)一步降低（t=3.22，P ＜0.05），而 SOD2 mRNA表達(dá)較TNF-α干預(yù)組輕微降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.051，P=0.06）。見圖 4。

圖4 ABCG1表達(dá)改變對SOD1和SOD2 mRNA表達(dá)的影響

3 討論

氧化應(yīng)激為各種原因?qū)е聶C(jī)體內(nèi)氧化與抗氧化之間平衡失調(diào)，活性氧簇產(chǎn)生過多，使機(jī)體處于促氧化狀態(tài)，引發(fā)各種各樣心血管疾病。當(dāng)前研究發(fā)現(xiàn)，炎癥因子TNF-α能促進(jìn)體外培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激產(chǎn)生，而作為脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)體的ABCG1可以通過影響NADPH氧化酶的促氧化作用和SOD的抗氧化作用從而調(diào)節(jié)TNF-α誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激的產(chǎn)生。

研究表明，ABCG1是促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出的重要膜轉(zhuǎn)運(yùn)體之一，能防止泡沫細(xì)胞形成，并有防止內(nèi)皮細(xì)胞激活，改善內(nèi)皮功能失調(diào)的作用[5-11]。ABCG1表達(dá)增加可以抑制內(nèi)皮細(xì)胞炎癥因子如TNF-α、IL-6及ICAM等的釋放[9-10]，從而有助于防治動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展。本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，ABCG1表達(dá)增加可抑制內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激的產(chǎn)生[11-12]。通過使用T0901317預(yù)處理內(nèi)皮細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)T0901317能降低TNF-α誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激。由于T0901317作為肝X受體配體，具有促進(jìn)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)體ABCG1表達(dá)的作用[5]，因此提示T0901317干預(yù)后的抗氧化應(yīng)激的作用可能與促進(jìn)ABCG1表達(dá)相關(guān)，進(jìn)一步通過ABCG1轉(zhuǎn)染使ABCG1表達(dá)增加也發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激明顯降低，而ABCG1干擾使ABCG1表達(dá)抑制則促進(jìn)炎癥因子誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激。正如TERASAKA[8]和TABET等[14]的研究所示，高密度脂蛋白降低氧化應(yīng)激的作用依賴于ABCG1的表達(dá)，間接提示ABCG1具有抑制氧化應(yīng)激的作用。而筆者既往研究發(fā)現(xiàn)，ABCG1能調(diào)節(jié)高糖誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激[11]，進(jìn)一步提示促進(jìn)ABCG1表達(dá)可能具有抑制多種原因誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激產(chǎn)生的作用，但機(jī)制尚不明確。

雖然線粒體電子傳遞鏈及黃嘌呤氧化酶、一氧化氮合酶和NADPH氧化酶等均可產(chǎn)生ROS，但研究顯示，NADPH氧化酶是人血管系統(tǒng)中產(chǎn)生的ROS主要來源之一[2-4]。其中NOX4可能作為血管內(nèi)皮細(xì)胞中主要的NADPH氧化酶參與內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)ROS的生成。研究顯示，TNF-α作為體內(nèi)重要的炎癥因子，可以通過激活NADPH氧化酶促進(jìn)氧化應(yīng)激的產(chǎn)生[15]。本研究同樣發(fā)現(xiàn)，TNF-α能促進(jìn)NADPH氧化酶的活性和表達(dá)增加，ABCG1表達(dá)改變不僅影響著NADPH氧化酶的活性，還影響著NOX4的基因和蛋白表達(dá)，從而提示ABCG1可能通過抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞中NADPH氧化酶的表達(dá)和活性發(fā)揮抗氧化應(yīng)激的作用。

另一方面，機(jī)體是一個有機(jī)的整體，當(dāng)氧化應(yīng)激產(chǎn)生過多時，抗氧化系統(tǒng)可代償性激活，以減少ROS的產(chǎn)生[3]。體內(nèi)已知的抗氧化系統(tǒng)包括抗氧化酶類系統(tǒng)和非酶類抗氧化劑，其中SOD是體內(nèi)重要的抗氧化酶，可將毒性高的ROS轉(zhuǎn)換為毒性較低的過氧化氫（hydrogen peroxide，H2O2），隨后由谷胱甘肽過氧化物酶和H2O2酶繼續(xù)作用，使H2O2轉(zhuǎn)變成完全無害的水（H2O）和氧氣（Oxygen，O2）。SOD 有 3種亞型，其中有核細(xì)胞主要表達(dá)SOD1和SOD2。本研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α抑制抗氧化的SOD的表達(dá)，而ABCG1表達(dá)增加促進(jìn)TNF-α干預(yù)下內(nèi)皮細(xì)胞SOD1和SOD2基因的表達(dá)，而ABCG1表達(dá)降低則抑制內(nèi)皮細(xì)胞SOD1基因的表達(dá)，SOD2表達(dá)輕微降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。提示ABCG1可能通過調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞中抗氧化的SOD的表達(dá)進(jìn)一步發(fā)揮抗氧化應(yīng)激的作用。

總之，本研究提示ABCG1具有拮抗TNF-α誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激的作用，其機(jī)制可能涉及調(diào)節(jié)NADPH氧化酶/SOD的促氧化應(yīng)激和抗氧化應(yīng)激間的平衡。期望今后的臨床治療將促進(jìn)ABCG1表達(dá)作為新型的抗氧化措施，為心血管疾病提供新的防治方案。

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ABCG1 inhibits TNF-α-induced oxidative stress by regulating NADPH oxidase and superoxide dismutase*

Jia-hong Xue,Can-zhan Zhu,Yan-chao Hu,Chun-hong Luan
(Department of Cardiovascular Medicine,the Second Affiliated Hospital of College of Medicine,Xi'an Jiaotong University,Xi'an,Shaanxi 710004,China)

ObjectiveTo explore the role of ATP-binding cassette sub-family G member 1 (ABCG1)in oxidative stress production induced by tumor necrosis factor α (TNF-α)and its possible mechanisms.MethodsHuman umbilical vein endothelial cells (HUVECs)were transfected with specific ABCG1 siRNA or ABCG1 overexpression plasmid or pretreated with liver X receptor agonist T0901317,then were cultured with TNF-α for 12 hours.Intracellular reactive oxygen species (ROS)levels were measured using 6-carboxy-2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate,diacetoxymethyl ester(CDCFHDA-AM)fluorescence and nicotinamide adenine dinucleotide phosphate-oxidase (NADPH oxidase)activity was measured by spectrophotometer.Real time PCR and Western blot were employed to measure the expression of Nox4,one of NADPH oxidase subunit and the expression of superoxide dismutase (SOD).ResultsABCG1 upregulation inhibited TNF-α-induced oxidative stress.Furthermore,the activity of NADPH oxidase and the expression of Nox4 were also suppressed by ABCG1 overexpression,but the expression of antioxidant SOD was promoted.Conversely,downregulation of ABCG1 by ABCG1 siRNA both increased the ROS production and promoted the NADPH oxidase activity and Nox4 expression.However,the expression of SOD1 was inhibited.ConclusionsThe results suggest thatABCG1 attenuates TNF-α-induced oxidative stress by regulating NADPH oxidase and SOD.

adenosine triphosphate binding cassette transporter G;oxidative stress;reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase;superoxide dismutase

R363

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.11.003

1005-8982（2017）11-0014-06

2016-10-27

國家自然科學(xué)基金（No：81100210）