• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    胰島素對(duì)2型糖尿病心肌病大鼠的心肌保護(hù)機(jī)制

    2017-08-23 11:19:19劉雅玲周辰潘曉東尹冬華
    實(shí)用老年醫(yī)學(xué) 2017年8期
    關(guān)鍵詞:心肌病心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激

    劉雅玲 周辰 潘曉東 尹冬華

    胰島素對(duì)2型糖尿病心肌病大鼠的心肌保護(hù)機(jī)制

    劉雅玲 周辰 潘曉東 尹冬華

    目的 探討胰島素干預(yù)對(duì)2型糖尿病心肌病(DCM)大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激和白介素-6(IL-6)水平的影響。 方法 16只雄性Wistar大鼠采用鏈脲佐菌素(STZ)+高脂飲食誘發(fā)2型糖尿病。隨機(jī)分為干預(yù)組(IN組,n=8)和糖尿病組(DM組,n=8),另選8只作為正常對(duì)照組(Con組,n=8)。IN組于成模第1周給予諾和靈30R皮下注射,而DM組和Con組予以等量生理鹽水皮下注射。成模8周后比較各組超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、IL-6水平的差異,并觀察心肌細(xì)胞病理學(xué)改變。 結(jié)果 心肌組織HE染色顯示DM組大鼠心肌纖維明顯減少、排列紊亂,橫紋消失,細(xì)胞核固縮或增大,間質(zhì)反應(yīng)性增生。與Con組比較,DM組大鼠血糖、心重(HW)/體重(BW) 比、MDA、IL-6水平升高(P<0.05),SOD、GSH水平均降低(P<0.05),IN組上述指標(biāo)均較DM組有改善(P<0.05)。 結(jié)論 胰島素對(duì)DCM大鼠心肌細(xì)胞有抗炎、抗氧化作用。

    胰島素; 白介素-6; 氧化應(yīng)激; 糖尿病; 心肌病

    糖尿病發(fā)病率逐年上升,其并發(fā)癥的危害不容忽視。其中糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)作為一項(xiàng)遠(yuǎn)期并發(fā)癥,越來越引起人們的重視。DCM是指排除了冠心病、高血壓及其他已知的疾病所致的心肌損傷后而診斷的一類獨(dú)立的、特異性的心肌病,其早期表現(xiàn)為心室舒張功能障礙,隨后可出現(xiàn)收縮功能受損,逐漸發(fā)展為充血性心力衰竭。DCM的發(fā)病機(jī)制尚未明了。近年來認(rèn)為,糖尿病是一種炎癥反應(yīng)性疾病,氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)在糖尿病心臟遠(yuǎn)期并發(fā)癥中有促進(jìn)作用[1]。胰島素作為體內(nèi)唯一降糖激素,其抗炎抗氧化的作用正引起廣泛關(guān)注[2]。本文擬探討胰島素在DCM大鼠中發(fā)揮抗炎、抗氧化作用的機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:南京軍區(qū)南京總醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心購入健康雄性Wistar大鼠28只。鏈脲佐菌素(STZ)購自美國Sigma公司,諾和靈30R(批號(hào):VVG0316)購自丹麥諾和諾德公司,鹽酸氯胺酮(2 ml:0.1 g)購自江蘇恒瑞醫(yī)藥公司,丙二醛(MDA)測定試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)測定試劑盒和谷胱甘肽(GSH)測定試劑盒購自南京建成生物研究所,白介素-6(IL-6)測定試劑盒購自上海超研生物科技公司,羅氏血糖儀購自羅氏公司,723可見分光光度計(jì)購自上海光譜儀器公司,光學(xué)顯微鏡(Olympus-BH2)購自日本Olympus公司。

    1.2 2型糖尿病大鼠模型的建立及分組動(dòng)物處理 20只6月齡的健康雄性Wistar大鼠,體質(zhì)量200~220 g,予以高脂飼養(yǎng)4周,過夜禁食12 h后,每只按25 mg/kg腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ溶于pH 4.4的0.1 mol/L檸檬酸緩沖液),于72 h、7 d斷尾取靜脈血測血糖,2次隨機(jī)血糖濃度均≥16.7 mmol/L為2型糖尿病造模成功。其中死亡1只,建模未成功3只,符合標(biāo)準(zhǔn)的16只大鼠進(jìn)入實(shí)驗(yàn),隨機(jī)分成2組:胰島素干預(yù)組(IN組,n=8)和糖尿病組(DM組,n=8),繼續(xù)高脂飼養(yǎng)。另選8只做正常對(duì)照(Con組,n=8),基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng),每只腹腔注射等量檸檬酸緩沖液。IN組每日下午五點(diǎn)至六點(diǎn),給予4 U諾和靈30R皮下注射,注射前及注射后2 h測血糖,避免低血糖。DM組和Con組予以等量生理鹽水皮下注射,共干預(yù)8周。

    1.3 動(dòng)物處理 實(shí)驗(yàn)終點(diǎn),測終末點(diǎn)血糖,稱取大鼠體質(zhì)量(BW),予以鹽酸氯胺酮2 ml:生理鹽水8 ml,稀釋后按1 ml/100 g右下腹腔麻醉,打開腹腔,下腔靜脈采血5 ml備用后,迅速打開胸腔取出心臟放入冰生理鹽水中漂洗后稱心重(HW),取左室前壁。

    1.4 SOD、GSH、MDA測定 抽取下腔靜脈血約3 ml,2500 r/min離心10 min,取上清,采用化學(xué)比色法,按試劑盒說明書制備空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和各測定管,充分混勻,蒸餾水調(diào)零,測定各管吸光度(A)值,根據(jù)公式:樣品含量=(測定管A值-空白管A值)/(標(biāo)準(zhǔn)管A值-空白管A值)×標(biāo)準(zhǔn)品濃度,計(jì)算樣品中SOD、GSH、MDA含量。

    1.5 IL-6測定 抽取下腔靜脈血約2 ml,1000 r/min離心20 min,取上清,用酶聯(lián)免疫分析方法(ELISA)按試劑盒說明經(jīng)過加樣、洗滌、溫育等步驟測定IL-6。

    1.6 HE染色 左室前壁心肌組織經(jīng)甲醛固定、石蠟包埋、連續(xù)切片、浸染、沖洗、封膠,蓋片等步驟后,光鏡下觀察病理學(xué)變化,攝片。

    2 結(jié)果

    2.1 一般情況 Con組大鼠無糖尿病癥狀,生長及營養(yǎng)狀況良好,毛發(fā)有光澤,體重逐漸增加。DM組大鼠明顯多飲、多尿、多食及消瘦,皮毛污穢無澤;而IN組上述表現(xiàn)減輕,糖尿病癥狀得以改善。

    2.2 大鼠終點(diǎn)血糖、HW/BW的比較 與Con組比較,DM組和IN組血糖水平、HW/BW明顯增高(P<0.05);與DM組比較,IN組血糖水平、HW/BW降低(P<0.05)。見表1。

    表1 各組大鼠實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)時(shí)血糖濃度和HW/BW比值(, n=8)

    注:與Con組比較,*P<0.05,與DM組比較,△P<0.05

    2.3 各組SOD、GSH、MDA水平的比較 與Con組比較,DM組和IN組大鼠SOD、GSH水平明顯降低(P<0.05),MDA水平增高(P<0.05),與DM組比較,IN組SOD、GSH水平增高(P<0.05),MDA水平降低(P<0.05)。見表2。

    表2 各組大鼠SOD、GSH、MDA水平的比較(, n=8)

    注:與Con組比較,*P<0.05,與DM組比較,△P<0.05

    2.4 各組IL-6水平比較 與Con組比較,DM組和IN組大鼠IL-6水平明顯升高(P<0.05),與DM組比較,IN組IL-6水平明顯降低(P<0.05),見表3。

    表3 各組大鼠IL-6水平比較(, n=8)

    注:與Con組比較,*P<0.05,與DM組比較,△P<0.05

    2.5 心肌細(xì)胞HE染色 光鏡下觀察Con組心肌纖維結(jié)構(gòu)清晰,肌纖維呈短柱狀,相互連接成網(wǎng),排列整齊致密,橫紋清晰可見,細(xì)胞核居中呈圓形,大小均一(圖1-A);DM組心肌纖維減少、斷裂且排列紊亂,大量橫紋消失或模糊,細(xì)胞核增大,有固縮的細(xì)胞核,間質(zhì)增生,炎細(xì)胞浸潤(圖1-B);IN組心肌纖維結(jié)構(gòu)尚清晰,部分排列紊亂,橫紋可見,可見少量固縮的細(xì)胞核,間質(zhì)輕度增生性反應(yīng)(圖1-C)。

    注:A:Con組;B:DM組;C:IN組圖1 大鼠心肌細(xì)胞HE染色(×200)

    3 討論

    DCM是一種不可逆的慢性心肌損害。近年來國內(nèi)外研究表明DCM存在氧化應(yīng)激。長期的高糖高脂損害,使心肌細(xì)胞的線粒體在能量代謝過程中產(chǎn)生過多的氧自由基(ROS),從而消耗大量的ROS清除劑SOD、GSH,導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化而產(chǎn)生MDA。過量的ROS一方面造成心肌細(xì)胞自由基損傷,使心肌細(xì)胞能量代謝障礙,脂肪酸氧化增加;另一方面過多的ROS可能通過磷酸化激活A(yù)kt、JAK/STAT等多種通路上調(diào)IL-6的表達(dá)[3-4]。IL-6是一種多肽物質(zhì),可由免疫細(xì)胞、損傷心肌細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌。正常情況下,體內(nèi)存在一定低水平的IL-6以維持促進(jìn)生長和分化等多種生理功能。而持續(xù)過量的IL-6會(huì)破壞細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)導(dǎo)致心肌細(xì)胞炎性損傷[5-6]。這種作用是通過IL-6及其受體(IL-6R)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)實(shí)現(xiàn)的。IL-6R由兩種不同的膜蛋白組成,即特異性配基結(jié)合鏈IL-6Rα和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)鏈gp130。IL-6與IL-6Rα結(jié)合,再與gp130連接,形成gp130同源二聚體,通過gp130亞單位激活細(xì)胞內(nèi)JAK-STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,使STAT磷酸化聚合為復(fù)合體,進(jìn)入胞核中,與靶基因啟動(dòng)子序列的特定位點(diǎn)結(jié)合,促進(jìn)更多炎癥介質(zhì)轉(zhuǎn)錄,造成細(xì)胞損傷[7]。心肌細(xì)胞存在大量的gp130,是IL-6作用的靶細(xì)胞,大量炎癥介質(zhì)釋放導(dǎo)致心肌纖維破壞,心肌肥厚,間質(zhì)纖維化。

    本實(shí)驗(yàn)采用小劑量STZ部分破壞了大鼠胰島導(dǎo)致胰島素產(chǎn)生不足,配以高脂飼養(yǎng)產(chǎn)生胰島素抵抗,較好地模擬了T2DM的疾病特點(diǎn)。根據(jù)黃昶荃等[8]采用小劑量的STZ配合高脂飼料喂養(yǎng),誘導(dǎo)2型糖尿病模型,成模8周后即出現(xiàn)DCM。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,DM組大鼠出現(xiàn)“三多一少”的典型糖尿病癥狀,血糖增高,心體比(HW/BW)增加,提示DM組大鼠存在心臟肥大。在光鏡下DM組心肌纖維明顯減少且排列紊亂,間質(zhì)反應(yīng)性增生,與DCM的心肌病理變化一致。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DM組MDA高于Con組,SOD、GSH低于Con組,表明DM組大鼠體內(nèi)存在氧化應(yīng)激,生成過多的ROS,大量消耗了SOD、GSH,過氧化脂質(zhì)生成過量的MDA。同時(shí)DM組IL-6亦顯著高于Con組,表明IL-6在DM組大鼠中過度表達(dá),過量的IL-6會(huì)造成心肌炎性損傷,因此光鏡下看到DM組較Con組心肌組織損害加重。

    經(jīng)胰島素干預(yù)后,IN組大鼠的血糖、HW/BW顯著低于DM組,光鏡下心肌纖維的結(jié)構(gòu)和間質(zhì)增生情況均較DM組有所改善,提示胰島素可減輕糖尿病心肌病大鼠的心肌損傷。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),IN組MDA、IL-6水平低于DM組,高于Con組;SOD、GSH高于DM組,低于Con組;表明胰島素干預(yù)后,IN組氧化應(yīng)激減輕,IL-6表達(dá)降低,提示胰島素存在降糖之外的作用。相關(guān)研究表明:一方面胰島素能減輕氧化應(yīng)激,如通過其信號(hào)傳導(dǎo)通路降低線粒體產(chǎn)生的活性氧水平[9]、上調(diào)細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶的表達(dá),從而消除過多的ROS[10];另一方面胰島素可通過ERK通路、PI3K/FOXO-1通路影響STAT轉(zhuǎn)錄,阻斷IL-6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,抑制炎癥介質(zhì)的生成,從而抑制炎性反應(yīng),發(fā)揮保護(hù)作用[11-12]。

    綜上,本實(shí)驗(yàn)研究顯示DCM大鼠體內(nèi)存在氧化應(yīng)激和過度表達(dá)的IL-6,造成心肌炎性損傷和氧化損傷。氧化應(yīng)激和炎性反應(yīng)可能相互促進(jìn),共同參與了2型糖尿病心肌病發(fā)病機(jī)制。而胰島素具有抗炎、抗氧化等降血糖之外的作用,從而抑制炎性反應(yīng),發(fā)揮保護(hù)心肌的作用。這些作用機(jī)制還有待更深入的研究和發(fā)掘,為以后疾病治療提供新的思路和策略。

    [1] Elmarakby AA, Sullivan JC. Relationship between oxidative stress and inflammatory cytokines in diabetic nephropathy[J].Cardiovasc Ther, 2012,30(1):49-59.

    [2] 姜冬冬,韓亭亭,胡耀敏.胰島素抗炎機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 國際內(nèi)分泌代謝雜志,2012,32(5):331-334.

    [3] 吳建宇,王淑秋,王柏欣,等.實(shí)驗(yàn)性2型糖尿病大鼠心肌線粒體的氧自由基損傷[J].中國病理生理雜志,2010,26(1):233-237.

    [4] 王映梅,曲萍,鐵茹,等. 氧自由基增強(qiáng)脂肪細(xì)胞IL-6表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志,2010,39(2):146-149.

    [5] Fischer P, Hilfiker-Kleiner D. Survival pathways in hypertrophy and heart failure: the gp130-STAT axis[J]. Basic Res Cardiol,2007,102(5):393-411.

    [6] 周鳳華,賈鈺華,李麗君,等. IL-6預(yù)處理保護(hù)H2O2致心肌細(xì)胞損傷作用機(jī)制初探[J]. 熱帶醫(yī)學(xué)雜志,2011,11(9):1014-1017.

    [7] Rose-John S, Waetzig GH, Scheller J, et al. The IL-6/sIL-6R complex as a novel target for therapeutic approaches[J]. Expert Opin Ther Targets, 2007,11(5):613-624.

    [8] 黃昶荃,肖謙,趙柯湘,等. 2型糖尿病心肌病變模型建立方法的實(shí)驗(yàn)研究[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2007,32(1):15-17.

    [9] 劉雅玲,程訓(xùn)民,江時(shí)森,等.胰島素抑制糖尿病大鼠心肌細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2010, 35(7):798-801.

    [10]Wang X, Tao L, Hai CX.Redox-regulating role of insulin: the essence of insulin effect[J]. Mol Cell Endocrinol,2012,349(2):111-127.

    [11]Anderson CX, Sopasakis VR, Wallerstedt E, et al. Insulin antagonizes interleukin-6 signaling and is anti-inflammatory in 3T3-L1 adipocytes[J]. J Biol Chem,2007,282(13):9430-9435.

    [12]Wallerstedt E, Sandqvist M, Smith U, et al. Anti-inflammatory effect of insulin in the human hepatoma cell line HepG2 involves decreased transcription of IL-6 target genes and nuclear exclusion of FOXO-1[J].Mol Cell Biochem,2011,352(1):47-55.

    Effect of insulin on myocardial protection in type 2 diabetic rats with cardiomyopathy

    LIUYa-ling,ZHOUChen,PANXiao-dong,YINDong-hua.
    DepartmentofCadresofHealth,JiangsuProvinceOfficialHospital,Nanjing210024,China

    Objective To investigate the influence of insulin on oxidative stress and interleukin-6(IL-6) in type 2 diabetic rats with cardiomyopathy. Methods Sixteen male Wistar rats were induced to type 2 diabetes(T2DM) by streptozotocin(STZ) and high fat diet. They were randomly divided into intervention group (IN group,n=8) and diabetes mellitus group (DM group,n=8). Another eight rats fed with ordinary diet were chosen as normal control group (Con group,n=8). Novolin 30R was subcutaneously injected to the IN group in the first week, while the DM group and the Con group

    the same amount of saline by subcutaneous injection. Eight weeks later the levels of superoxide dismutase (SOD), glutathione (GSH), malondialdehyde (MDA) and IL-6 were compared among the three groups, and the pathological changes of myocardial cells were observed. Results HE staining showed that the cardiac muscle fibers in DM group was decreased and disarranged and cross striation disappeared, with karyopyknosis or enlarged nuclear. At the same time interstitial reactive proliferation were also observed in DM group. Compared with Con group, the levels of blood glucose, HW/BW, MDA and IL-6 were higher (P<0.05) in DM group; while the levels of SOD and GSH were lower (P<0.05). The above indexes were all improved in IN group than those in DM group(P<0.05). Conclusions Insulin has the anti-inflammatory and anti-oxidative effects in myocardial cells in diabetic cardiomyopathy rats.

    insulin; IL-6; oxidative stress; diabetes mellitus; cardiomyopathy

    210024江蘇省南京市,江蘇省省級(jí)機(jī)關(guān)醫(yī)院干部保健科

    周辰,Email:zcly789@sina.com

    R 587.2

    A

    10.3969/j.issn.1003-9198.2017.08.009

    2016-03-25)

    猜你喜歡
    心肌病心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激
    左歸降糖舒心方對(duì)糖尿病心肌病MKR鼠心肌細(xì)胞損傷和凋亡的影響
    活血解毒方對(duì)缺氧/復(fù)氧所致心肌細(xì)胞凋亡的影響
    基于炎癥-氧化應(yīng)激角度探討中藥對(duì)新型冠狀病毒肺炎的干預(yù)作用
    伴有心肌MRI延遲強(qiáng)化的應(yīng)激性心肌病1例
    擴(kuò)張型心肌病中醫(yī)辨治體會(huì)
    心肌細(xì)胞慢性缺氧適應(yīng)性反應(yīng)的研究進(jìn)展
    氧化應(yīng)激與糖尿病視網(wǎng)膜病變
    槲皮素通過抑制蛋白酶體活性減輕心肌細(xì)胞肥大
    TAKO-TSUBO心肌病研究進(jìn)展
    氧化應(yīng)激與結(jié)直腸癌的關(guān)系
    不卡视频在线观看欧美| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产精品福利在线免费观看| 国产探花极品一区二区| 亚洲不卡免费看| 五月玫瑰六月丁香| 成人亚洲精品一区在线观看 | 99久久中文字幕三级久久日本| 亚洲成人精品中文字幕电影| 一边亲一边摸免费视频| 精品久久久久久电影网| 亚洲精品成人久久久久久| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 人体艺术视频欧美日本| 波野结衣二区三区在线| 男女无遮挡免费网站观看| 国产精品蜜桃在线观看| 韩国高清视频一区二区三区| 18禁在线播放成人免费| 成人国产av品久久久| av国产精品久久久久影院| 欧美bdsm另类| 国产永久视频网站| 国产精品国产三级专区第一集| 99久久精品国产国产毛片| 天美传媒精品一区二区| 成人漫画全彩无遮挡| 午夜精品一区二区三区免费看| av卡一久久| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲成人av在线免费| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 99久久精品国产国产毛片| 深爱激情五月婷婷| 国产男人的电影天堂91| 国产极品天堂在线| 国产男女超爽视频在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 久热久热在线精品观看| 毛片女人毛片| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲,一卡二卡三卡| 欧美性感艳星| 天美传媒精品一区二区| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 在线观看国产h片| 91久久精品国产一区二区三区| 少妇的逼好多水| 高清av免费在线| 国产精品一及| 男的添女的下面高潮视频| 久久亚洲国产成人精品v| 久久精品国产亚洲av天美| av.在线天堂| 午夜精品一区二区三区免费看| 别揉我奶头 嗯啊视频| 成年免费大片在线观看| 中文字幕制服av| 超碰97精品在线观看| 亚洲精品456在线播放app| 简卡轻食公司| 成年人午夜在线观看视频| 一个人观看的视频www高清免费观看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 国产免费一级a男人的天堂| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产有黄有色有爽视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产欧美日韩精品一区二区| 新久久久久国产一级毛片| av黄色大香蕉| 国产色爽女视频免费观看| 在线观看人妻少妇| a级一级毛片免费在线观看| 在线观看人妻少妇| 99久久精品一区二区三区| 中文资源天堂在线| 国产一区二区三区av在线| 男女那种视频在线观看| av在线观看视频网站免费| 日韩一本色道免费dvd| 久久热精品热| 身体一侧抽搐| 国产精品人妻久久久久久| 中文在线观看免费www的网站| 欧美3d第一页| 婷婷色综合www| 国产成人免费无遮挡视频| 麻豆国产97在线/欧美| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 精品人妻视频免费看| 国产老妇女一区| 91精品一卡2卡3卡4卡| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产美女午夜福利| 能在线免费看毛片的网站| 爱豆传媒免费全集在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 全区人妻精品视频| 成年版毛片免费区| 欧美精品一区二区大全| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 精品人妻偷拍中文字幕| 交换朋友夫妻互换小说| 精品人妻视频免费看| 久久99热这里只有精品18| 成人国产av品久久久| 男女啪啪激烈高潮av片| 久久久久久九九精品二区国产| 午夜福利高清视频| 男女边摸边吃奶| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产 一区精品| 久久久久久久久大av| 激情 狠狠 欧美| 99久久精品国产国产毛片| 大陆偷拍与自拍| 国产高清不卡午夜福利| 身体一侧抽搐| av国产免费在线观看| 成人国产麻豆网| 亚洲精品色激情综合| 男女边吃奶边做爰视频| 国产免费视频播放在线视频| 一本久久精品| 亚洲精品成人av观看孕妇| 免费看日本二区| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 在线观看一区二区三区激情| 中文资源天堂在线| 黄色一级大片看看| 亚洲av日韩在线播放| 久久久久久九九精品二区国产| 亚洲欧美日韩无卡精品| 最近最新中文字幕免费大全7| av在线天堂中文字幕| 91久久精品国产一区二区成人| 亚洲精品国产av成人精品| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产 一区 欧美 日韩| 人妻 亚洲 视频| 国产有黄有色有爽视频| 精品国产乱码久久久久久小说| 色吧在线观看| 免费av毛片视频| 综合色av麻豆| 精品一区二区三区视频在线| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 精品一区二区三卡| 亚洲欧美日韩东京热| 伦精品一区二区三区| 日本-黄色视频高清免费观看| 精华霜和精华液先用哪个| 97在线视频观看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 在线免费观看不下载黄p国产| 最近最新中文字幕大全电影3| 精品一区二区三区视频在线| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 男人添女人高潮全过程视频| 国产伦在线观看视频一区| 成年版毛片免费区| 欧美精品一区二区大全| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 欧美成人一区二区免费高清观看| 狂野欧美激情性bbbbbb| 中文字幕制服av| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲国产精品999| 99精国产麻豆久久婷婷| 91aial.com中文字幕在线观看| 亚洲国产精品专区欧美| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 97在线视频观看| 中国国产av一级| 国产精品嫩草影院av在线观看| 久久久久久久国产电影| 99久久精品一区二区三区| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲精品日韩av片在线观看| 久久久精品94久久精品| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产69精品久久久久777片| 亚洲av成人精品一区久久| 欧美+日韩+精品| 边亲边吃奶的免费视频| 搡女人真爽免费视频火全软件| 成人漫画全彩无遮挡| 一区二区三区乱码不卡18| 99热全是精品| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产毛片a区久久久久| 欧美最新免费一区二区三区| 永久网站在线| av在线观看视频网站免费| 国产成人91sexporn| 99热网站在线观看| 国产成人精品婷婷| 99九九线精品视频在线观看视频| 99九九线精品视频在线观看视频| 一区二区三区乱码不卡18| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲无线观看免费| 精品熟女少妇av免费看| 久久久午夜欧美精品| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 亚洲国产精品成人综合色| 韩国av在线不卡| 男女无遮挡免费网站观看| 成年女人在线观看亚洲视频 | 简卡轻食公司| 国产中年淑女户外野战色| 熟妇人妻不卡中文字幕| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 中国美白少妇内射xxxbb| 欧美潮喷喷水| 亚洲精品一二三| 色5月婷婷丁香| 午夜福利在线在线| 欧美日韩精品成人综合77777| av免费在线看不卡| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 大片免费播放器 马上看| 色网站视频免费| 在线a可以看的网站| 欧美xxⅹ黑人| 只有这里有精品99| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 日本爱情动作片www.在线观看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 欧美3d第一页| 男人添女人高潮全过程视频| 伦理电影大哥的女人| www.av在线官网国产| h日本视频在线播放| 永久网站在线| 中文字幕久久专区| 久久久久久久久久久免费av| 国产av不卡久久| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 亚洲欧美一区二区三区国产| 男插女下体视频免费在线播放| 亚洲一区二区三区欧美精品 | 亚洲自偷自拍三级| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 日韩国内少妇激情av| 男的添女的下面高潮视频| 国产爱豆传媒在线观看| 欧美日韩在线观看h| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 午夜福利在线观看免费完整高清在| 免费av不卡在线播放| 熟女av电影| 在线看a的网站| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 欧美bdsm另类| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 男女啪啪激烈高潮av片| 日本午夜av视频| 视频区图区小说| 精品久久久久久久久av| 久久久久网色| 亚洲欧美一区二区三区国产| 色视频www国产| 高清在线视频一区二区三区| 国产毛片在线视频| 亚洲国产日韩一区二区| 免费av不卡在线播放| freevideosex欧美| 国产精品久久久久久久电影| 你懂的网址亚洲精品在线观看| av福利片在线观看| 国产成人精品福利久久| 高清视频免费观看一区二区| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产黄片美女视频| 国产在线男女| 男女那种视频在线观看| 亚洲国产日韩一区二区| 夫妻性生交免费视频一级片| 欧美日韩综合久久久久久| 交换朋友夫妻互换小说| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 五月开心婷婷网| 欧美日韩在线观看h| 亚洲欧洲国产日韩| 2018国产大陆天天弄谢| 国产男女内射视频| 精品国产乱码久久久久久小说| 久久久亚洲精品成人影院| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产乱人视频| 高清午夜精品一区二区三区| 青春草视频在线免费观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 国产亚洲一区二区精品| 欧美3d第一页| 亚洲国产成人一精品久久久| 中文资源天堂在线| 夫妻性生交免费视频一级片| 在线看a的网站| 欧美三级亚洲精品| 国产免费一级a男人的天堂| xxx大片免费视频| 国产av国产精品国产| 2021少妇久久久久久久久久久| 男人狂女人下面高潮的视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲丝袜综合中文字幕| 久久久久久久久久成人| 免费av不卡在线播放| 少妇人妻一区二区三区视频| 色吧在线观看| 好男人在线观看高清免费视频| 如何舔出高潮| 国产91av在线免费观看| 99热6这里只有精品| 婷婷色综合www| 一本久久精品| 免费看日本二区| 免费人成在线观看视频色| 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲三级黄色毛片| 日本三级黄在线观看| 欧美+日韩+精品| 黄色配什么色好看| 久久鲁丝午夜福利片| 乱系列少妇在线播放| 简卡轻食公司| 亚洲图色成人| 国产成人午夜福利电影在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| av在线观看视频网站免费| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 午夜激情福利司机影院| 涩涩av久久男人的天堂| av福利片在线观看| 久久精品人妻少妇| 男女下面进入的视频免费午夜| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲精品,欧美精品| 国产极品天堂在线| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 欧美一区二区亚洲| 亚洲精品456在线播放app| videos熟女内射| 午夜免费男女啪啪视频观看| 99久久九九国产精品国产免费| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 日韩制服骚丝袜av| 久久久久久久久大av| 午夜激情久久久久久久| 综合色丁香网| 日韩欧美精品免费久久| 国产精品一区www在线观看| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产有黄有色有爽视频| 男人舔奶头视频| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产精品偷伦视频观看了| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 日本午夜av视频| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 亚洲av成人精品一二三区| 精品午夜福利在线看| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲综合精品二区| 天堂俺去俺来也www色官网| 日本黄色片子视频| 成年av动漫网址| 国产成人a区在线观看| 欧美变态另类bdsm刘玥| www.av在线官网国产| 午夜福利高清视频| 日本午夜av视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 免费观看的影片在线观看| 日本黄色片子视频| 在线观看一区二区三区激情| 国产成人freesex在线| 制服丝袜香蕉在线| 亚洲怡红院男人天堂| 精品久久国产蜜桃| 久久久久性生活片| 精品酒店卫生间| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 美女内射精品一级片tv| 天堂俺去俺来也www色官网| 人妻一区二区av| 日本黄大片高清| 国产 一区精品| 69人妻影院| 婷婷色av中文字幕| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 能在线免费看毛片的网站| 欧美 日韩 精品 国产| 国产免费又黄又爽又色| 青春草视频在线免费观看| 亚洲在久久综合| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 99久久中文字幕三级久久日本| 国模一区二区三区四区视频| 男人爽女人下面视频在线观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 欧美一级a爱片免费观看看| 97超碰精品成人国产| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产亚洲最大av| 久久午夜福利片| 久久人人爽人人片av| 狂野欧美激情性bbbbbb| 久久鲁丝午夜福利片| 日日啪夜夜撸| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 岛国毛片在线播放| av网站免费在线观看视频| 免费av毛片视频| 99久国产av精品国产电影| 中文字幕免费在线视频6| 免费黄频网站在线观看国产| 女人久久www免费人成看片| 色综合色国产| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 色视频在线一区二区三区| videos熟女内射| 国产欧美亚洲国产| 高清午夜精品一区二区三区| 交换朋友夫妻互换小说| 久久久午夜欧美精品| 五月伊人婷婷丁香| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 国产日韩欧美在线精品| 在线观看免费高清a一片| 99热这里只有是精品在线观看| 一本一本综合久久| 99热网站在线观看| 久久久a久久爽久久v久久| 身体一侧抽搐| 国产成人a∨麻豆精品| av在线播放精品| 久久久a久久爽久久v久久| 又大又黄又爽视频免费| 天天躁日日操中文字幕| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 亚洲图色成人| 亚洲av在线观看美女高潮| av在线蜜桃| av福利片在线观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 免费在线观看成人毛片| 国产精品一区二区三区四区免费观看| av网站免费在线观看视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 干丝袜人妻中文字幕| 大香蕉久久网| 一个人看的www免费观看视频| 欧美精品国产亚洲| 嫩草影院入口| 大码成人一级视频| 69人妻影院| 在线免费观看不下载黄p国产| av.在线天堂| 久久ye,这里只有精品| 蜜桃久久精品国产亚洲av| av国产免费在线观看| 毛片女人毛片| 国产探花在线观看一区二区| 精品人妻视频免费看| 亚洲精品影视一区二区三区av| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 视频区图区小说| 美女视频免费永久观看网站| 秋霞伦理黄片| 国产黄色免费在线视频| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产精品99久久久久久久久| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲av在线观看美女高潮| 男女边摸边吃奶| 午夜福利视频精品| 亚洲在久久综合| 少妇人妻一区二区三区视频| 毛片一级片免费看久久久久| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产亚洲91精品色在线| 国产黄色视频一区二区在线观看| 欧美激情久久久久久爽电影| 男女国产视频网站| 三级国产精品片| 亚洲无线观看免费| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲国产精品成人久久小说| 中国美白少妇内射xxxbb| 精品国产乱码久久久久久小说| 欧美成人一区二区免费高清观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 久久99精品国语久久久| 日本爱情动作片www.在线观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 精品久久久久久电影网| 最近的中文字幕免费完整| 国产成人精品福利久久| www.色视频.com| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲精品色激情综合| 亚洲在线观看片| 综合色丁香网| 国产探花极品一区二区| 99久国产av精品国产电影| 欧美xxⅹ黑人| 男人狂女人下面高潮的视频| 深夜a级毛片| 免费看av在线观看网站| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 亚洲自偷自拍三级| 成人一区二区视频在线观看| 九色成人免费人妻av| 亚洲国产日韩一区二区| 丝袜美腿在线中文| 久久99热6这里只有精品| 亚洲av欧美aⅴ国产| 欧美日韩亚洲高清精品| 婷婷色综合大香蕉| 一级毛片aaaaaa免费看小| 我的女老师完整版在线观看| 欧美潮喷喷水| 欧美国产精品一级二级三级 | 久久99热这里只频精品6学生| 久久久久久久久久人人人人人人| 一二三四中文在线观看免费高清| 在线看a的网站| 国产淫片久久久久久久久| 国产精品福利在线免费观看| 国产乱来视频区| 最近最新中文字幕免费大全7| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 亚洲欧洲日产国产| 五月开心婷婷网| 91精品伊人久久大香线蕉| av网站免费在线观看视频| 国产精品99久久99久久久不卡 | 亚洲精品中文字幕在线视频 | 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 久久久久网色| 又大又黄又爽视频免费| 国产精品久久久久久精品古装| av免费观看日本| 中文字幕久久专区| 日韩强制内射视频| av天堂中文字幕网| 一区二区三区乱码不卡18| 中文欧美无线码| 久久久久久久大尺度免费视频| 一级a做视频免费观看| 日本三级黄在线观看| 搡老乐熟女国产| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 嫩草影院入口| 中文字幕av成人在线电影| 在线免费观看不下载黄p国产| 七月丁香在线播放| tube8黄色片| 午夜免费鲁丝| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲精品第二区| 日韩欧美 国产精品| 亚洲图色成人| 欧美日韩在线观看h| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 九九在线视频观看精品| 国产精品一二三区在线看| 91aial.com中文字幕在线观看| 男人添女人高潮全过程视频| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产 一区 欧美 日韩| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 99久久精品国产国产毛片| 国产成人freesex在线| 国产免费一区二区三区四区乱码| 久久久久久久久久成人| 亚洲国产精品成人综合色| 天堂中文最新版在线下载 | 丝袜喷水一区| 国产成人精品婷婷| 国产又色又爽无遮挡免| 免费观看性生交大片5| 少妇高潮的动态图| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产精品99久久久久久久久| 男女边吃奶边做爰视频| 国产 一区 欧美 日韩| 色哟哟·www| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 有码 亚洲区| 国产日韩欧美亚洲二区| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲人成网站在线播|