研究酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法檢測在涂陰肺結(jié)核患者的診斷價值

高東花+陳棟軍

[摘要] 目的 探討酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法（ELISPOT）在涂陰肺結(jié)核患者中的診斷價值。 方法 將2016年5月～2017年3月期間我院收治的346例肺結(jié)核患者，其中A組涂陰肺結(jié)核患者（180例）、B組為非涂陰肺結(jié)核患者（166例），兩組均采用ELISPOT檢測肺泡灌洗液、外周血液中分泌的結(jié)核抗原特異性干擾素的T淋巴細(xì)胞水平，之后繪制出兩組患者的工作特征曲線（ROC），并計(jì)算出曲線下的面積；將A組肺泡灌洗液做結(jié)核分枝桿菌核酸擴(kuò)增熒光檢測、涂片抗酸染色、培養(yǎng)分枝桿菌，比較診斷價值與陽性率。 結(jié)果 A組、B組患者的血液ELISPOT檢測的特異性分別為84.44%（152/180）與90.96%（151/166）；肺泡灌洗液ELISPOT檢測的特異性分別為92.78%（167/180）與94.58%（157/166）（P>0.05）；A組、B組患者的肺泡灌洗液ELISPOT檢測的ROC曲線下面積分別為0.938與0.869，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；涂陰肺結(jié)核的肺泡灌洗液ELISPOT 檢測的陽性率為91.67%（165/180），而結(jié)核分枝桿菌核酸擴(kuò)增熒光檢測、涂片抗酸染色、培養(yǎng)分枝桿菌的陽性率分別為34.44%（62/180）、15.56%（28/180）、31.67%（57/180）（P<0.05）。 結(jié)論 在涂陰肺結(jié)核患者的臨床診斷中，應(yīng)用ELISPOT檢測肺泡灌洗液中分泌的結(jié)核抗原特異性干擾素的T淋巴細(xì)胞水平，檢測效率高、敏感性與特異性強(qiáng)，可作為涂陰肺結(jié)核的診斷方法予以推廣。

[關(guān)鍵詞] 涂陰肺結(jié)核；酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法；肺泡灌洗液；診斷價值

[中圖分類號] R521 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）13-104-03

[Abstract] Objective To discuss the value of ELISPOT in Diagnosis of Smear negative pulmonary tuberculosis. Methods 346 cases with TB from May 1 2016 to March 2017 year in our hospital were selected as objects.The group A was smear negative pulmonary tuberculosis patients （180 cases），and the group B was non smear negative pulmonary tuberculosis patients （166 cases）.Bronchoalveolar lavage fluid and peripheral blood IFN-y T levels of two groups were detected by ELISPOT.The curve of the two groups （ROC） was drew，and AUC was calculated.Mycobacterium tuberculosis nucleic acid amplification fluorescence detection，Smear fast stain，and mycobacteria culture in bronchoalveolar lavage fluid of group A were done.Diagnostic value and positive rate were compared. Results Specificities of ELISPOT for blood in group A and group B were 84.44%（152/180）and 90.96%（151/166）；Specificities of ELISPOT for bronchoalveolar lavage fluid in group A and group B were 92.78%（167/180）and 94.58%（157/166）（P>0.05）.AUC of ELISPOT for bronchoalveolar lavage fluid in group A and group B were 0.938與0.869 （P<0.05）；The positive rate of ELISPOT for bronchoalveolar lavage fluid in smear negative pulmonary tuberculosis was 91.67%（165/180），and the positive rate of Mycobacterium tuberculosis nucleic acid amplification fluorescence detection，Smear fast stain，and mycobacteria culture were 34.44%（62/180），15.56%（28/180），31.67%（57/180）（P<0.05）. Conclusion In the clinical diagnosis of smear negative pulmonary tuberculosis patients，application of ELISPOT detection of IFN-y T levels in bronchoalveolar lavage fluid is of high detection efficiency，and high sensitivity and specificity，which can be used as a method for diagnosis of smear negative pulmonary tuberculosis to be promoted.

[Key words] Smear negative pulmonary tuberculosis；Enzyme-linked immunosorbent assay；Bronchoalveolar lavage fluid；Diagnostic value

我院應(yīng)用該技術(shù)來檢測肺泡灌洗液中分泌的結(jié)核抗原特異性干擾素的T淋巴細(xì)胞水平，并與其它檢測方法進(jìn)行了比較，旨在探討ELISPOT在涂陰肺結(jié)核患者中的診斷價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究對象為2016年5月1日～2017年3月18日期間我院收治的346例肺結(jié)核患者，所有患者均無肺結(jié)核病史、且均為人獲得性免疫缺陷病毒抗體檢測為陰性，符合電子支氣管鏡檢查指征，對本研究知曉并自愿參與。A組180例，均為涂陰肺結(jié)核患者，符合中華醫(yī)學(xué)會結(jié)核病學(xué)分會制定的肺結(jié)核診斷與治療指南中的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[1]。其中男86例、女94例；年齡19～72歲，平均（44.9±3.6）歲；117例為單純肺結(jié)核、52例伴有支氣管結(jié)核、11例伴有結(jié)核性胸膜炎。B組166例，均為非涂陰肺結(jié)核患者，其中男59例、女107例；年齡18～76歲，平均（47.3±1.8）歲；慢性阻塞性肺疾病合并肺感染16例、鱗癌83例、小細(xì)胞癌12例、腺癌28例、肺炎27例。兩組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。研究通過醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

ELISPOT：分別取患者的肺泡灌洗液與外周血液各4mL，行酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法，1個點(diǎn)表示1個分泌IFN-y的T細(xì)胞，使用CTL公司酶聯(lián)斑點(diǎn)分析儀嚴(yán)格計(jì)數(shù)紫色斑點(diǎn)，若陰性對照孔的點(diǎn)數(shù)<13，且檢測孔的點(diǎn)數(shù)-陰性對照孔的點(diǎn)數(shù)≥13時，則將標(biāo)本判定為陽性；若陰性對照孔的點(diǎn)數(shù)≥13，且檢測孔的點(diǎn)數(shù)是陰性對照孔的2倍，則可將標(biāo)本判定為陽性[3]。

其他檢測方法：采集肺泡灌洗液，采用肺泡灌洗液涂片萋尼康酸染色法，并根據(jù)《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程》[4]來進(jìn)行BACTEC-MGIT960系統(tǒng)分枝桿菌快速培養(yǎng)，根據(jù)結(jié)核分枝桿菌核酸擴(kuò)增熒光檢測試劑的說明書來檢測結(jié)核分枝桿菌核酸擴(kuò)增熒光。

1.3 觀察評定標(biāo)準(zhǔn)[5-6]

本組研究對象的血ELISPOT瘀肺泡灌洗液工作特征曲線（ROC）的臨界值為：特異性90%時的T細(xì)胞斑點(diǎn)數(shù)目，并計(jì)算出其特異性與靈敏度。通過計(jì)算曲線下面積（AUC）來比較其診斷價值。若AUC<0.5，提示為無診斷價值，若0.5

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料以（）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者血ELISPOT、肺泡灌洗液檢測結(jié)果

兩組血液ELISPOT檢測陽率、肺泡灌洗液特異性比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。

2.2 ELISPOT檢測的ROC曲線結(jié)果

A組、B組患者的肺泡灌洗液ELISPOT檢測的ROC曲線下面積分別為0.938與0.869，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），A組診斷準(zhǔn)確性高于B組，其標(biāo)準(zhǔn)誤為0.034，95%置信區(qū)間0.864～1.005；B組診斷的準(zhǔn)確性為中等，標(biāo)準(zhǔn)誤為0.047，95%置信區(qū)間0.773～0.966。

2.3 肺泡灌洗液ELISPOT與其他方法比較

肺泡灌洗液ELISPOT與其他方法比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

3 討論

X線胸片、臨床表現(xiàn)、PPD試驗(yàn)以及痰細(xì)菌學(xué)檢查是肺結(jié)核診斷的主要依據(jù)，尤其是痰細(xì)菌學(xué)檢查，可作為診斷肺結(jié)核的第一標(biāo)準(zhǔn)[7-10]。涂陰肺結(jié)核是一種活動性肺結(jié)核，其3次痰涂片與1次痰培養(yǎng)Mtb結(jié)果均為陰性[11-12]。涂陰肺結(jié)核的臨床診斷往往缺少可靠依據(jù)，因此漏診、誤診問題頻頻發(fā)生，如何使用正確的方法來診斷涂陰肺結(jié)核成為眾多醫(yī)學(xué)工作者的研究重點(diǎn)。近年來，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法（ELISPOT）成為診斷涂陰肺結(jié)核的熱門技術(shù)，有資料顯示[6]，于病灶處直接分離單個核細(xì)胞并做ELISPOT檢測，能夠區(qū)分出結(jié)合感染是否有活動性，而且特異性與敏感性會更高。另有學(xué)者經(jīng)研究證實(shí)[13-16]：腹水、胸水中分泌的IFN-y斑點(diǎn)形成的細(xì)胞數(shù)量比靜脈血高出20倍以上，另有學(xué)者通過ELISPOT來檢測腦脊液，最終診斷為結(jié)核性腦膜炎的敏感性高達(dá)75%。

本研究中A組血液ELISPOT檢測陽性者152例，陽性率為84.44%；B組血液ELISPOT檢測陽性者151例，陽性率為90.96%；A組肺泡灌洗液ELISPOT檢測的特異性為92.78%，B組肺泡灌洗液ELISPOT檢測的特異性為94.58%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；A、B兩組患者的肺泡灌洗液ELISPOT檢測的ROC曲線下面積分別為0.938與0.869，A組診斷準(zhǔn)確性高于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；涂陰肺結(jié)核的肺泡灌洗液ELISPOT檢測的陽性率為91.67%，而結(jié)核分枝桿菌核酸擴(kuò)增熒光檢測、涂片抗酸染色、培養(yǎng)分枝桿菌的陽性率分別為34.44%、15.56%、31.67%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

綜上分析在涂陰肺結(jié)核患者的臨床診斷中，應(yīng)用ELISPOT檢測肺泡灌洗液中分泌的結(jié)核抗原特異性干擾素的T淋巴細(xì)胞水平，檢測效率高、敏感性與特異性強(qiáng)，可作為涂陰肺結(jié)核的診斷方法予以推廣。

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（收稿日期：2017-04-12）