評價三種方法聯(lián)合檢測對靜止型α—地中海貧血診斷價值

劉發(fā)河+柯霞+周楚嬋

[摘要] 目的 探討MCV、亨氏小體和血紅蛋白電泳在靜止型α-地中海貧血的篩查中的價值。方法 對90例茂名市人民醫(yī)院2013～2015年確診的靜止型α-地中海貧血患者的結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，并對MCV、亨氏小體和血紅蛋白電泳單項檢測和平行檢測及系列檢測的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值進(jìn)行評價。 結(jié)果 MCV、亨氏小體試驗、血紅蛋白電泳單項檢測地中海貧血的靈敏度分別為 35.6%、50%、35.6%，特異度分別為 97.8%、92.2%、96.7%。MCV、亨氏小體試驗、血紅蛋白電泳平行聯(lián)合檢測的靈敏度和特異度分別為 57.8%、84.4%，系列聯(lián)合檢測的靈敏度和特異度分別為4.4%、100.0%。與各單項試驗比較 ，平行聯(lián)合檢測的靈敏度高（P<0.05）、系列聯(lián)合檢測的特異度高（P<0.05）。 結(jié)論 MCV、亨氏小體試驗和血紅蛋白電泳三者進(jìn)行平行聯(lián)合檢測可提高靈敏度，三者進(jìn)行系列聯(lián)合檢測可提高特異度。

[關(guān)鍵詞] 靜止型α-地中海貧血；MCV；亨氏小體；血紅蛋白電泳

[中圖分類號] R556 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）13-97-04

[Abstract] Objective To study the value of the combined tests of MCV， Heinz Body Test and Hemoglobin （Hb） electrophoresis for the diagnosis of static type alpha Mediterranean anemia. Methods Results of 90 cases of stationary alpha thalassemia patients diagnosed in Maoming people's Hospital from 2013 to 2015 was retrospectively analyzed. The MCV， Heinz Body Test and Hb electrophoresis were individually detected and parallelly detected. The sensitivity， specificity， accuracy， positive predictive value， and negative predictive value of the series of tests were evaluated. Results The sensitivity of MCV， Heinz body test and hemoglobin electrophoresis for individual detection of thalassemia was 35.6%， 50%， 35.6%， respectively. The specificity was 97.8%， 92.2% and 96.7%， respectively. The sensitivity and specificity of parallel combination detection of MCV， Heinz body test and hemoglobin electrophoresis were 57.8% and 84.4% respectively. The sensitivity and specificity of serial combined detection were 4.4% and 100% respectively. Compared with the individual tests， the sensitivity of parallel joint detection was higher （P<0.05）， and the specificity of serial joint detection was high （P<0.05）. Conclusion The parallel combination detection of MCV， Heinz body test and hemoglobin electrophoresis can increase sensitivity， and three series combined detection can improve the specificity of the three.

[Key words] Static type α-Mediterranean anemia； MCV； Heinz body； Hemoglobin electrophoresis

地中海貧血，又名“海洋性貧血”或“珠蛋白生成障礙性貧血”，是因為珠蛋白肽鏈合成障礙而造成的溶血性貧血。根據(jù)所缺乏的珠蛋白鏈種類及缺乏程度對地中海貧血予以命名及分類。α珠蛋白鏈缺乏者稱為α-地中海貧血，β珠蛋白鏈缺乏者稱為β-地中海貧血，依次類推[1-2]。

α-地中海貧血中，α基因位于16號染色體的短臂上，每條染色體上有兩個α基因，即正常人自父母雙方各繼承兩個α珠蛋白基因（αα/αα）。若一個α基因異常（α-/αα），患者無血液學(xué)異常表現(xiàn)稱為靜止型α-地中海貧血；若兩個α基因異常（α-/α-或--/αα），紅細(xì)胞呈低色素小細(xì)胞性改變，稱為標(biāo)準(zhǔn)型α-地中海貧血；若三個α基因異常（--/-α），有代償性溶血性貧血的表現(xiàn)，即HbH??；若四個α基因異常，完全無α珠蛋白生成，即胎兒水腫綜合癥，又稱Hb Barts病。其中，靜止型α-地中海貧血和標(biāo)準(zhǔn)型α-地中海貧血合稱為輕型α-地中海貧血。

地中海貧血的檢查方法很多，目前國內(nèi)外用于明確診斷的是聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)結(jié)合其他分子生物學(xué)手段檢測A、B地中海貧血基因的方法，但基因分析要求條件高，操作煩瑣，尚不能廣泛應(yīng)用于各級醫(yī)院，特別是基層醫(yī)院[3-4]。因此，國內(nèi)一些實驗室仍用簡便、快捷的血液學(xué)檢測方法，如MCV、亨氏小體實驗、血紅蛋白電泳等。目前，國內(nèi)外已普遍應(yīng)用MCV來篩查地中海貧血基因攜帶者[5-6]。但各種檢測方法對靜止型α-地中海貧血的診斷價值、特別是幾種檢測方法聯(lián)合檢測對靜止型α-地中海貧血的診斷意義如何，尚未見報道。本研究對確診的90例靜止型α-地中海貧血成人患者和90例非地中海貧血的健康成人分別統(tǒng)計其MCV、亨氏小體實驗、血紅蛋白電泳結(jié)果，并將他們兩項或三項進(jìn)行平行聯(lián)合和系列聯(lián)合分析，比較各檢測方法在靜止型α-地中海貧血中的診斷價值。

1 對象與方法

1.1 一般對象

2013～2015年在我院（茂名市人民醫(yī)院）進(jìn)行基因分析確診為靜止型α-地中海貧血的90例患者，年齡為19～48歲，其中男35例，女55例；缺失3.7kb片段基因患者61例，缺失4.2kb片段基因患者29例，所有對象都排除了β-地中海貧血和缺鐵性貧血。以同樣例數(shù)，經(jīng)基因分析未見異常并排除地中海貧血和缺鐵性貧血等小細(xì)胞低色素貧血的健康成人做為對照組，年齡為19～48歲，其中男45例，女45例。

1.2 方法

應(yīng)用回顧性研究，收集已經(jīng)分子生物學(xué)分析確診為靜止型α-地中海貧血并排除β-地中海貧血和缺鐵性貧血的患者共90例的血液學(xué)指標(biāo)參數(shù)、亨氏小體試驗及血紅蛋白電泳結(jié)果，收集90例已經(jīng)分子生物學(xué)分析排除地中海貧血和缺鐵性貧血等小細(xì)胞低色素貧血及其它溶血性貧血等疾病的健康成人的血液學(xué)指標(biāo)參數(shù)、亨氏小體試驗結(jié)果及血紅蛋白電泳結(jié)果，對這兩組的數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行整理分析。

1.2.1 MCV測定 使用日本Sysmex XE-5000全自動血液分析儀及其配套試劑進(jìn)行檢測，既往的每日質(zhì)控均已及格。正常成人平均紅細(xì)胞體積（MCV）正常參考范圍為80 ～ 100fl，本試驗采用MCV<80fl為陽性結(jié)果，≥80fl為陰性結(jié)果。

1.2.2 亨氏小體試驗 參照茂名市人民醫(yī)院病理科的標(biāo)準(zhǔn)程序操作進(jìn)行試驗，以見到紅細(xì)胞內(nèi)有散在的或附著在膜上的圓形紫黑色顆粒的典型亨氏小體為陽性結(jié)果，反之為陰性結(jié)果。

1.2.3 血紅蛋白電泳試驗 使用美國海倫娜公司的Spife3000全自動電泳系統(tǒng)，參照茂名市人民醫(yī)院檢驗科的標(biāo)準(zhǔn)程序操作進(jìn)行試驗，正常參考值成年人HBA22.5% ～ 3.5%，本試驗以HBA2<2.5%為陽性結(jié)果，≥2.5%為陰性結(jié)果。

1.3 結(jié)果分析

1.3.1 聯(lián)合檢測 （1）、平行聯(lián)合檢測：即并聯(lián)試驗，采用平行聯(lián)合檢測判定原則，即幾個檢測方法中任何一個檢測方法出現(xiàn)陽性結(jié)果即判為平行檢測陽性。（2）系列聯(lián)合檢測：即串聯(lián)試驗，采用聯(lián)合檢測原則，即幾個檢測方法中所有檢測出現(xiàn)陽性結(jié)果才判斷為系列檢測陽性[7-8]。

1.3.2 診斷檢測評價指標(biāo) 為了描述本試驗的研究結(jié)果，選擇如下的統(tǒng)計學(xué)指標(biāo)來對本研究所收集整理來的結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析[8]：靈敏度（sensitivity，Se）=a/（a+c），又稱真陽性率，是診斷試驗?zāi)軐嶋H有病的人正確診斷為患者的能力，即患者被判為陽性的概率，該值越大，漏診病例越少；特異度（specificity，Sp）=d/（b+d），又稱真陰性率，是指在金標(biāo)準(zhǔn)中診斷為“無病”的例數(shù)中，診斷試驗結(jié)果為陰性的比例，真陰性例數(shù)越多，則特異度越高，誤診病例越少；準(zhǔn)確度（accuracy，Ac）=（a+d）/（a+b+c+d），也稱效率，可用真陽性與真陰性例數(shù)之和占總例數(shù)的百分率表示，理想試驗應(yīng)為100%；陽性預(yù)測值（positivepredictivevalue，PPV）=a/（a+b），是指真陽性例數(shù)占試驗結(jié)果陽性例數(shù)的百分比，表示試驗結(jié)果陽性者屬于真病例的概率；陰性預(yù)測值（negativepredictivevalue，NPV）=d/（c+d），是指真陰性例數(shù)占試驗結(jié)果陰性例數(shù)的百分比，表示試驗結(jié)果陰性者屬于非病例的概率。其中a為各檢測方法檢測患病組的陽性數(shù)，b為各檢測方法對照組的陽性數(shù)；c為各檢測方法檢測患病組中的陰性數(shù)，d為各檢測方法檢測對照組中的陰性數(shù)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

所有統(tǒng)計分析采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理，計數(shù)資料采用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 平均紅細(xì)胞體積（MCV）、亨氏小體試驗和血紅蛋白電泳各單項檢測結(jié)果

亨氏小體檢測在篩選地中海貧血中特異度稍低，MCV、血紅蛋白電泳靈敏度偏低。見表1、2。

2.2 平均紅細(xì)胞體積（MCV）、亨氏小體試驗、血紅蛋白電泳聯(lián)合檢測結(jié)果

平行檢測提高了診斷的靈敏度和陰性預(yù)測值（P<0.05），系列檢測提高了診斷的特異度和陽性預(yù)測值（P<0.05），見表3、4。

3 討論

α-地中海貧血是常見的單基因遺傳性溶血性血液病。在我國南方最常見的α-地中海貧血缺失類型按其發(fā)病率排序依次為--sea/αα，-α3.7/αα，-α4.2/αα[9-10]。--sea/αα為標(biāo)準(zhǔn)型α-地中海貧血雜合子，一般表現(xiàn)為輕型貧血；-α3.7/αα和-α4.2/αα屬靜止型α-地中海貧血，一般無臨床癥狀[11-12]，但若與標(biāo)準(zhǔn)型α-地中海貧血結(jié)合可產(chǎn)下嚴(yán)重影響個體生存質(zhì)量的缺失型HbH病的患兒[13]。缺失型HbH病的產(chǎn)前診斷對優(yōu)生優(yōu)育和提高人口素質(zhì)具有積極的意義[14-15]，因此有效地篩查診斷α-地中海貧血與靜止型α-地中海貧血尤顯重要。

本研究在分子生物學(xué)確診的基礎(chǔ)上，系統(tǒng)評價MCV、亨氏小體試驗、血紅蛋白電泳及聯(lián)合檢測對靜止型α-地中海貧血的診斷價值。從本檢測結(jié)果可發(fā)現(xiàn)，單項檢測中MCV、亨氏小體試驗、血紅蛋白電泳的靈敏度為35.6%、50.0%、35.6%；特異度分別為97.8%、92.2%、96.7%。因血紅蛋白電泳在地中海貧血中臨床意義較大，故分別將其與MCV、亨氏小體兩兩或三者進(jìn)行聯(lián)合檢測。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血紅蛋白電泳與MCV平行聯(lián)合檢測的靈敏度提高至47.8%、三者平行聯(lián)合可提高至57.8%，陰性預(yù)測值達(dá)66.7%；血紅蛋白電泳與亨氏小體試驗系列聯(lián)合檢測的特異度可達(dá)100%，陽性預(yù)測值100%。因此，在基層醫(yī)院，若要進(jìn)行靜止型α-地中海貧血篩查時，可應(yīng)用MCV、亨氏小體和血紅蛋白電泳三者進(jìn)行平行聯(lián)合試驗進(jìn)行初步篩查；若進(jìn)行靜止型α-地中海貧血診斷確難以進(jìn)行基因分析時，可將三者系列聯(lián)合檢測可基本確診。

另一方面，靜止型α-地中海貧血基因型為（-α/αα），缺失了一個α基因。由于只有一個基因缺失或突變，臨床上無癥狀，僅在出生時血紅蛋白約含有1% ～ 2%的Hb Barts，可以通過血紅蛋白電泳檢出Barts區(qū)帶，但由于Barts含量低，約在出生兩個月后該區(qū)帶消失。一般而言，靜止型α-地中海貧血基因攜帶者不表現(xiàn)臨床癥狀，但是若一靜止型α-地中海貧血基因攜帶者和一標(biāo)準(zhǔn)型α-地中海貧血患者結(jié)婚，則有四分之一可能會產(chǎn)下一嚴(yán)重影響生活質(zhì)量的HbH病患兒，或兩靜止型α-地中海貧血基因攜帶者結(jié)婚，則有四分之一可能會產(chǎn)下一標(biāo)準(zhǔn)型α-地中海貧血患兒。本研究中顯示，MCV、亨氏小體試驗和血紅蛋白電泳三者進(jìn)行平行聯(lián)合檢測雖然可將靈敏度提升至57.8%，但仍有40%以上的靜止型α-地中海貧血會被漏診，漏診率仍然極高，因此為了盡最大可能防止HbH病患兒的出生，提高出生人口素質(zhì)，對于育齡夫婦這一類特殊人群，當(dāng)有一方懷疑或確診為標(biāo)準(zhǔn)型α-地中海貧血時，若條件允許，另一方應(yīng)進(jìn)行基因分析以確診或排除靜止型α-地中海貧血。

綜上所訴，平均紅細(xì)胞體積（MCV）、亨氏小體試驗和血紅蛋白電泳三者進(jìn)行平行聯(lián)合檢測對靜止型α-地中海貧血的檢出率比單項檢測的檢出率有了很大的提高，三者進(jìn)行系列聯(lián)合檢測時對靜止型α-地中海貧血的診斷有著較為明顯的意義。但對于育齡夫婦這一特殊人群，當(dāng)其進(jìn)行產(chǎn)前篩查時，若條件允許，應(yīng)建議其進(jìn)行分子生物學(xué)分析以確診或排除靜止型α-地中海貧血。

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（收稿日期：2017-02-13）