HPV DNA和E6/ E7 mRNA檢測對宮頸病變診斷價值比較研究

梁海燕??陳曉紅

[摘要] 目的 評價高危HPVE6/E7mRNA在宮頸病變中的臨床價值。 方法 將70例低度宮頸病變（慢性宮頸炎），子宮頸上皮內瘤變（CINI級）和78例高級別宮頸病變（包括CINⅡ級CINⅢ級和宮頸浸潤性癌）分為兩組。低度宮頸病變?yōu)閷φ战M，高級別宮頸癌組為實驗組。 分別進行HPV DNA分型和HPV E6/E7 mRNA檢測。結果 低度子宮頸病變和高度子宮頸病變的陽性率分別為14.2%和79.5%。HPV DNA分型檢測結果，低度子宮頸病變和高度子宮頸病變的陽性率分別為35.7%和85.7%。高風險HPV E6/E7 mRNA檢測特異性，陽性預測值，陰性預測值（85.8%，86.1%，83.5%）顯著高于（64.3%，70.5%，71.4%），差異有統(tǒng)計學意義。 結論 高危HPV E6/E7 mRNA檢測有效降低了臨床診斷中的過度檢查和過度治療的機會，避免了患者因高頻重復感染引起的經濟負擔和精神壓力。

[關鍵詞] 人乳頭瘤狀病毒HPV；HPV DNA檢測；HPV E6/E7檢測；宮頸癌；方法對比

[中圖分類號] R737.33 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）12-19-04

Comparative study of diagnostic value of HPV DNA and E6 / E7 mRNA detection in cervical lesions

LIANG Haiyan CHEN Xiaohong

Reproductive Medicine Center， the First Affiliated Hospital of Shantou University Medical College， Shantou 515031， China

[Abstract] Objective To evaluate the clinical value of high risk HPVE6/E7 mRNA in cervical lesions. Methods 70 patients with lower-grade cervical lesions （chronic cervicitis， cervical intraepithelial neoplasis， CINI-grade） and 78 patients with high-grade cervical lesions （including CINII grade， CINⅢ grade and cervical invasive carcinoma） were divided into two groups. Lower-grade cervical lesions were set as the control group while high-grade cervical lesions were set as the experimental group. They were respectively given HPV DNA typing and HPVE6/E7 mRNA detection. Results Detection of high risk HPVE6/E7 mRNA. Positive rates of lower-grade cervical lesions and high-grade cervical lesions were respectively 14.2% and 79.5%. Detection results of HPV DNA typing. Positive rates of lower-grade cervical lesions and high-grade cervical lesions were respectively 35.7% and 85.7%. Specificity， positive predictive value and negative predictive value of high risk HPVE6/E7 mRNA detection were respectively 85.8%， 86.1% and 83.5%， significantly higher than those 64.3%， 70.5% and 71.4%. Difference was statistically significant. Conclusion High-risk HPVE6/E7 mRNA detection can effectively reduce the chance of over-examination and over-treatment in clinical diagnosis and avoid the economic burden and mental stress caused by high-frequency repeated infection.

[Key words] Human papilloma virus HPV； HPV DNA detection； HPV E6/E7 detection； Cervical cancer； Method comparison

子宮頸癌是在宮頸陰道或移行帶、子宮頸內膜的上皮交界處發(fā)生的惡性腫瘤[1]。世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計顯示，乳腺癌和子宮頸癌是兩種主要疾病對女性健康的威脅，宮頸癌的發(fā)病率已躍居中國女性惡性腫瘤的第一位，發(fā)病趨勢向年輕化發(fā)展，發(fā)病率逐年攀升[2]。對宮頸癌的病因研究結果發(fā)現(xiàn)，人乳頭瘤病毒（HPV）是影響宮頸癌發(fā)生和發(fā)展的主要因素[3]。近年來，越來越多的HPV DNA檢測方法已被用于檢測宮頸病變，應用HPV DNA檢測方法可以有效降低宮頸癌的發(fā)病率，但HPV DNA檢測是檢測原癌基因轉錄的其中一種手段，但其HPV活性是不可預測的[4]。另有研究指出，高危HPV E6/E7 mRNA檢測手段可對病毒的活動程度和預測疾病的程度進行檢測，更有利于宮頸癌病情的判斷[5]。為了探索其檢測效果，本研究擬對高危HPV E6/E7 mRNA的臨床價值進行研究，結果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2016年1～12月在汕頭大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院婦產科收治患者148例。收集病例的納入標準為：成年有性生活史女性，有宮頸疾變癥狀（主要是接觸性出血，陰道分泌物異常，下腹痛，陰道異常流血等），排除其他系統(tǒng)腫瘤病理。對148例患者進行宮頸細胞（TCT）HPV DNA分型和高危HPV mRNA檢測，對于陽性患者進行陰道鏡宮頸活檢，并送到病理部病做理組織學檢查，以病理診斷報告為金標準。根據(jù)病理診斷結果分為兩組，低度宮頸病變（慢性宮頸炎，CIN I級患者）共有70例作為對照組，對照組年齡在30 ～ 62歲之間平均年齡為（32.8±1.7）歲。高度子宮頸病變（包括CINⅡ級，CINⅢ級和宮頸侵襲性癌為實驗組，年齡在30～65歲之間，平均年齡為（30.5±2.1）歲。兩組患者年齡，病程和病史無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

1.2 方法

TCT檢測采用液基細胞學專用刷完全插入宮頸，順時針刷宮頸3～5周，收集子宮頸和子宮頸管脫落上皮細胞，把收集到細胞保存在含有細胞保存液瓶的中，涂片，固定，染色，然后由專業(yè)病理醫(yī)師讀片。使用國際癌癥協(xié)會的診斷標準推薦2001 TBS（The Bethesda System）分級系統(tǒng)進行CIN分級診斷。 HPV DNA分型使用凱普 HPV專用宮頸刷，靠近子宮頸輕微順時針旋轉5周，放入含有專用細胞儲存溶液管中。使用凱普醫(yī)學核酸分子雜交儀和它們的支持試劑，包括14個高危HPV（16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，66，68），5種低危HPV（6，11，42，43，44）和2種國內常見HPV亞型（53，CP8304），檢測程序包括樣品HPV DNA提取，PCR擴增，核酸分子快速轉移雜交和解釋結果， TCT檢測殘留標本用于高危HPV E6/E7 mRNA的檢測，試劑盒和儀器均購自上海生工，特異性檢測14種高危HPV（16，18，31 ，33，35，39，45，51，52，56，58，59，66和68），主要步驟包括細胞裂解，雜交捕獲mRNA，信號放大，底物發(fā)光反應，用冷光儀檢測的光子數(shù)量，Diacarta計算機軟件自動計算轉換結果獲得最終拷貝數(shù)，拷貝數(shù)>0判斷為陽性。通過陰道鏡取宮頸組織活檢，制成石蠟切片，由專業(yè)病理醫(yī)師閱片。組織病理學診斷分為：慢性宮頸炎，CIN Ⅰ級，CINⅡ級，CINⅢ級，宮頸浸潤性癌。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS17.0軟件分析上述數(shù)據(jù)，計量資料為（）的形式。數(shù)據(jù)通過t檢驗或非參數(shù)檢驗進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料用率或百分比描述兩組之間的差異。 兩種方法的靈敏度，特異性和陽性預測值和陰性預測值，用χ2檢驗進行比較。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩種檢測方法的檢出率對比結果

高危HPVE6/E7mRNA檢測結果，低度子宮頸病變和高度子宮頸病變的陽性病例分別為10例和62例，陽性率分別為14.2%和79.5%。HPV DNA分型檢測結果，低度子宮頸病變和高度子宮頸病變的陽性病例分別為25例和60例，陽性率分別為35.7%和85.7%。所有研究病例中HPVE6/E7mRNA檢測的陽性病例為72例，陽性率為48.6%。 HPV DNA分型檢測的陽性病例為85例，陽性率為57.4%。低度宮頸病變組中，高危HPV DNA的檢出率（35.7%）顯著高于高危HPV E6/E7 mRNA檢出率（14.2%），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），高級宮頸病變中，高危HPV E6/E7 mRNA的檢出率（79.5%）顯著低于高危HPV DNA檢出率（85.7%），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；高危HPV DNA分型檢出率（57.4%）高于高危HPV E6/E7 mRNA檢處率（48.6%），差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

2.2 兩種檢測方法的病理診斷結果比較

高危HPV DNA分型檢測敏感度（85.7%）高于高危型HPV E6/E7 mRNA（79.5%），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。高危HPV DNA分型檢測的特異性（64.3%）低于HPV E6/E7 mRNA（85.8%），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。高危HPV DNA分型檢測陽性預測值（70.5%）低于HPV E6/E7 mRNA檢測的陽性預測值（86.1%），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。高危HPV DNA分型檢測陰性預測值（71.4%）低于HPV E6/E7 mRNA（83.5%），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。通過比較可知，除靈敏度較低之外，HPV E6/E7 mRNA檢測的特異性，陽性預測值和陰性預測值均高于HPV DNA分型檢測的特異性，陽性預測值和陰性預測值。說明高危HPV E6/E7 mRNA檢測可以更好地診斷宮頸疾病，特別是對于高度病變的宮頸疾病，診斷價值較高。具體見表2 ～ 3。

3 討論

子宮頸癌是婦科的常見惡性腫瘤之一，人群的發(fā)病率在女性惡性腫瘤中名列前茅，發(fā)病率居第二位[6]。近年來，發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢，根據(jù)相關的研究結果顯示，2011年宮頸癌死亡人數(shù)是2000年的1.3倍，且具有發(fā)病率輕化的趨勢，由區(qū)域經濟、種族和其他因素，宮頸癌發(fā)病率和死亡率在全國各地區(qū)之間有顯著差異[7]。 HPV是存在于宮頸細胞中的雙鏈閉合環(huán)狀DNA病毒，其含有約7900個堿基對，并屬于嗜上皮病毒[8]。臨床研究已經發(fā)現(xiàn)，基于基因組核酸病毒的不同，HPV病毒可以分類為不同的基因型[9]。到目前為止，已經發(fā)現(xiàn)了超過150種HPV亞型，其中40種與生殖器上皮感染相關[10]。 E6 / E7基因在HPV早期編碼區(qū)出現(xiàn)是宮伴隨著頸癌惡化發(fā)生的。一旦病毒細胞中的E6 / E7基因高度表達，高水平的E6 / E7提示子宮頸癌變細胞高度惡化[11]。E6/E7 mRNA作為E6和E7基因產物與癌基因活性相關，HPV感染水平可用檢測病毒中的高危E6 / E7 mRNA水平進行判斷[12]。

在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)低度宮頸病變組中，高危HPV DNA分型的檢出率（35.7%）顯著高于高危HPV E6/E7 mRNA（14.2%），差異有統(tǒng)計學意（χ2=5.59，P=0.018）。高級別宮頸病變組中，高風險HPV E6/E7 mRNA檢測率（79.5%）明顯低于高危HPV DNA分型（85.7%），差異有統(tǒng)計學意義（χ2= 6.12，P=0.031）。高危HPV DNA檢出率（57.4%）高于高危HPV E6/E7 mRNA（48.6%），差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.13，P=0.975）。這項研究的結果與以前的研究一致，也就是說，隨著宮頸病變級別的加重，高危HPVE6/E7mRNA檢出率也有所上升，主要原因是早期HPV感染，細胞內病毒致癌基因表達量低，隨著病情進展，細胞內E6 / E7 mRNA大量轉錄，導致E6、E7癌基因的高水平表達[13]。近年來，研究表明E6 / E7 mRNA拷貝數(shù)在宮頸癌診斷和治療方面有一定價值。也證實隨著宮頸病變的進展，細胞內E6 / E7 mRNA表現(xiàn)出高水平的表達，E6 / E7 mRNA拷貝數(shù)增加，E6，E7癌蛋白基因表達量增加[14]。

同時，本研究還發(fā)現(xiàn)高風險HPV E6/E7 mRNA檢測的特異性，陽性預測值，陰性預測值高于高危HPV DNA分型檢測，高風險HPV E6/E7 mRNA檢測能更好地診斷子宮頸疾病，特別是對于高度病變的宮頸疾病，診斷價值更高，與以往研究結果一致[15-16]，我們可以認為高危HPV E6/E7 mRNA檢測在臨床診斷中具有高價值，與高危HPV DNA分型檢測相比，檢測結果更準確。在實際工作中可以考慮使用聯(lián)合檢測方法進行檢測，如高危HPV E6/E7 mRNA檢測與細胞學結合診斷疾病，既可提高宮頸疾病診斷的水平，也可減少漏診率。

綜上所述，高危HPV E6/E7 mRNA檢測作為常用的診斷手段在臨床診斷宮頸癌癥時可與轉錄活性的診斷結合，大大降低了過度檢查和過度治療的機會，避免了短期高頻率檢查和反復感染對患者造成的經濟負擔和精神壓力。因此，高危HPV E6/E7 mRNA檢測在臨床上具有非常重要應用價值。

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（收稿日期：2017-03-15）