Ki67在瘢痕癌中的表達及其臨床意義

甘 雨，彭代智，段小冬，張宜瀾，劉 洋，黃亞蘭

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Ki67在瘢痕癌中的表達及其臨床意義

甘 雨，彭代智，段小冬，張宜瀾，劉 洋，黃亞蘭

甘 雨

目的 探討Ki67在瘢痕癌組織中的表達及與患者臨床特征的關(guān)系。方法 應用免疫組化SP法檢測Ki67在27例患者瘢痕癌組織中的表達，并結(jié)合瘢痕癌患者的臨床特征進行分析。結(jié)果 27例患者瘢痕癌組織的Ki67檢出率為100%。根據(jù)Ki67陽性細胞百分率將患者分為3組，≤10%組10例，11%～40%組10例，≥41%組7例。進一步分析發(fā)現(xiàn)各組的Ki67陽性細胞百分率與瘢痕潰瘍持續(xù)時間長短、浸潤深度和手術(shù)后復發(fā)相關(guān)，Ki67陽性細胞百分率越高，潰瘍持續(xù)時間越短（P＜0.05）、浸潤越深（P＜ 0.01）、手術(shù)后越易復發(fā)（P＜0.05）；而與瘢痕病程、潰瘍面積無關(guān)（P＞0.05）。結(jié)論 Ki67的表達在瘢痕癌浸潤深度和術(shù)后復發(fā)的臨床評估中具有重要的指導意義。

瘢痕癌；Ki67；皮膚潰瘍；腫瘤浸潤；術(shù)后復發(fā)

[J Pract Dermatol, 2017, 10(3):129-131]

瘢痕癌是指皮膚組織病理性瘢痕被覆上皮細胞發(fā)生惡性變的癌。瘢痕癌常見于深度燒傷后的陳舊性瘢痕以及其他一些經(jīng)久不愈或反復破潰的瘢痕創(chuàng)面[1]。瘢痕癌最初特指瘢痕鱗狀細胞癌，但隨著瘢痕內(nèi)其他一些細胞惡變的報道，現(xiàn)瘢痕癌泛指所有原發(fā)于體表瘢痕組織的惡性腫瘤[2,3]。隨著國家醫(yī)保覆蓋面的大幅度提高，越來越多的瘢痕癌患者開始需求診斷和治療。Ki67是一種核增殖性基因，其表達蛋白Ki67屬于非組蛋白抗原，可作用于除G0期以外所有的細胞周期階段[4]。本研究回顧性收集了27例瘢痕癌患者的臨床資料，并采用免疫組化技術(shù)觀察瘢痕癌組織中Ki67的表達，探討Ki67在惡性腫瘤轉(zhuǎn)化進程中的作用和關(guān)系，預期為瘢痕癌的臨床診斷、治療和復發(fā)判斷提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

我院燒傷科2012年3月—2016年7月經(jīng)過臨床和組織病理學檢查確診為瘢痕癌且無并發(fā)其他腫瘤、近期內(nèi)未接受過放療等相關(guān)治療的住院患者、且已行組織病理免疫組化檢查的患者27例。收集了其現(xiàn)病史、既往史、臨床表現(xiàn)、創(chuàng)面分泌物微生物培養(yǎng)、常規(guī)組織病理學和免疫組化檢查、治療措施、復發(fā)和預后等多項臨床資料。

1.2 方法

所有患者的瘢痕癌組織標本常規(guī)甲醛固定，24 h內(nèi)取材，石蠟包埋，連續(xù)5 μm厚度切片，蘇木精-伊紅（HE）染色。采用鼠抗人Ki67單克隆抗體、SP免疫組化試劑盒，并按照說明書操作進行免疫組化染色，光學顯微鏡下觀察細胞染色情況。Ki67顯色部位為細胞核，一旦有棕黃色顆粒出現(xiàn)即為陽性細胞。結(jié)果判斷以陽性細胞所占百分率表示，即高倍鏡下隨機選取5個視野，每個視野計數(shù)200個細胞，將陽性細胞數(shù)總和除以計數(shù)細胞總數(shù)。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 27例瘢痕癌患者的臨床特征

27例瘢痕癌患者中男18例（占66.7%），女9例（占33.3%），男女比例為3∶2。年齡23～78（50.3±12.0）歲，其中男患者平均年齡（48.9±12.0）歲，女患者平均年齡（49.5±12.5）歲。皮損部位分布：頭部10例（37.0%）、軀干2例（7.4%）、上肢3例（11.1%）、下肢12例（44.5%）。原發(fā)病發(fā)展為瘢痕癌間隔時間為10～70（32.9±15.8）年，潰爛持續(xù)時間為0.3～40（7.9±10.4）年，瘢痕潰爛面積為2～200（61.3±58.5）cm2。

臨床上瘢痕癌的大體形態(tài)為兩種類型，浸潤潰瘍型（圖1a），共17例（63.0%）；外生菜花型（圖1b），共10例（37.0%）。27例瘢痕癌組織學分類包括25例高分化鱗狀細胞癌（93.0%），1例低分化鱗狀細胞癌（4.0%），1例軟組織肉瘤（4.0%）。術(shù)前細菌學培養(yǎng)顯示，13例患者傷口分泌物培養(yǎng)示陽性，主要以金黃色葡萄球菌（5例）、大腸埃希菌（4例）、銅綠假單胞菌（3例），其他菌（1例）。淋巴結(jié)增大5例（其中1例確診轉(zhuǎn)移），淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移26例。

27例患者術(shù)后隨訪時間5～56個月，平均（22.6 ±16.9）個月。共有6例（22.2%）復發(fā)，復發(fā)時間為術(shù)后（3.5±2.1）個月，其中2例術(shù)后接受放療的復發(fā)患者復發(fā)時間為（2.5±0.7）個月，4例術(shù)后未接受放療的復發(fā)患者復發(fā)時間為（4.0±2.4）個月。

2.2 Ki67的表達與瘢痕癌臨床特征的關(guān)系

27例瘢痕癌患者的組織樣本均表達Ki67，但根據(jù)其陽性細胞百分率高低程度，可分為3組，≤10%有10例，11%～40%有10例，≥41%有7例（表1）。3組瘢痕癌患者的傷口分泌物均培養(yǎng)出金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和銅綠假單胞菌，組間的檢出率比較差異無統(tǒng)計學意義。3組瘢痕癌患者的原發(fā)灶部位（頭頸、軀干、上肢、下肢）在各組中均有出現(xiàn)，組間比較差異無統(tǒng)計學意義。

2.2.1 Ki67的表達與瘢痕形成年限、潰瘍持續(xù)年限及潰瘍面積的關(guān)系 陽性細胞百分率與潰瘍持續(xù)年限之間存在明顯的負相關(guān)（r=-0.425，P=0.027）。陽性細胞百分率與瘢痕形成年限之間無相關(guān)關(guān)系（r=0.341，P=0.082＞0.05）。陽性細胞百分率與潰瘍面積之間無相關(guān)關(guān)系（r=0.168，P=0.401）?？梢?，Ki67陽性細胞百分率的增大與潰瘍持續(xù)時間長短有關(guān)，Ki67陽性細胞數(shù)百分率越高，瘢痕潰瘍時間越短；與瘢痕形成年限、腫瘤潰瘍面積大小關(guān)系不明顯。

圖1 瘢痕癌患者典型皮損

表1 27例瘢痕癌患者Ki67的表達與主要臨床特征的關(guān)系 （ˉs）

表1 27例瘢痕癌患者Ki67的表達與主要臨床特征的關(guān)系 （ˉs）

患者例數(shù)（n） 10 10 7 Ki67陽性細胞（%） 8.1±3.1 22.0±5.9 42.9±4.9瘢痕年限（y） 28.3±13.8 31.3±15.7 41.9±18.1 r=0.341 0.082潰瘍年限（y） 12.4±12.8 6.3±8.7 1.5±1.0 r=-0.425 0.027潰瘍面積（cm2） 47.5±59.0 66.4±54.4 73.7±68.1 r=0.168 0.401浸潤深度評分（n） χ2=18.357 0.000皮內(nèi)（+） 7 1 0皮下（++） 3 6 0肌肉骨骼（+++） 0 3 7術(shù)后復發(fā)情況χ2=6.667 0.036復發(fā)例數(shù)（n） 1 1 4復發(fā)百分率（%） 10.0 10.0 57.2

2.2.2 Ki67與瘢痕癌浸潤深度的關(guān)系 Ki67陽性細胞百分率與瘢痕癌組織浸潤深度之間有顯著的相關(guān)關(guān)系（χ2=18.357，P=0.000）。Ki67陽性細胞數(shù)百分率越高，瘢痕癌組織浸潤深度越深。

2.2.3 Ki67與瘢痕癌復發(fā)情況的關(guān)系 Ki67陽性細胞百分率與瘢痕癌患者術(shù)后復發(fā)情況之間有明顯的關(guān)系，其Ki67陽性細胞數(shù)百分率越高，患者術(shù)后復發(fā)的概率也會顯著增高（χ2=6.667，P=0.036）。

3 討論

瘢痕癌最常見于深度燒傷非手術(shù)治愈的陳舊性瘢痕，其次是慢性骨髓炎、靜脈瘀滯性潰瘍、壓瘡，以及其他各類遷延不愈創(chuàng)面或反復破潰的瘢痕[5]。據(jù)報道，燒傷瘢痕惡變的發(fā)生率為0.77%～2%[6]。有文獻報道瘢痕癌患者的年齡為18～84歲，平均50歲，從原發(fā)病發(fā)展至瘢痕癌的平均時間為31年[7]。本組患者的平均年齡、病變部位、潰瘍面積與文獻報道接近。瘢痕癌最常見的組織病理學類型為鱗狀細胞癌，其次為基底細胞癌，其他例如腺癌、黑素瘤、骨肉瘤、纖維肉瘤、脂肪肉瘤等較少見[7]。本組26例患者為鱗狀細胞癌、1例患者為軟組織梭形細胞肉瘤，與之相符。27例患者中有6例復發(fā)，其術(shù)后復發(fā)時間均在半年內(nèi)，提示在術(shù)后半年內(nèi)要加強隨訪。

Ki67是近年臨床上組織病理檢查常用的細胞增殖指標之一[8]。無論正常細胞株或腫瘤細胞株，其抗原性的表達隨細胞周期的進展而增加，它在G0期和G早期不表達，G1中期到后期始出現(xiàn)表達，S期到后半期增加明顯，G2/M期達高峰[9]，其在細胞分裂后迅速降解或丟失，它的表達是細胞處于分裂期的標志。Ki67能客觀反映細胞的增殖活性，是臨床上應用比較廣泛的增殖細胞標記物，并與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預后有關(guān)[10]。有研究表明Ki67的染色部位主要分布在腫瘤細胞的胞核中，而在正常皮膚組織中均無著色[11]，且隨著腫瘤惡性程度增高，其表達增強[12]。故本研究用Ki67的表達程度來分析瘢痕癌患者的瘢痕潰爛、潰爛面積、浸潤深度等臨床特征。本研究發(fā)現(xiàn)Ki67陽性細胞百分率與潰瘍持續(xù)時間長短可能有關(guān) ，其陽性細胞百分率的增高提示瘢痕發(fā)生潰爛的年限越短，越容易出現(xiàn)潰爛 ，且面積偏大，易于引起患者重視而到醫(yī)院就醫(yī)。通過觀察患者的臨床特征，Ki67陽性細胞百分率高的患者其瘢痕癌浸潤深度普遍比較深，其術(shù)后復發(fā)率相對較高，說明其細胞增殖程度越高，惡性程度越高；而Ki67陽性細胞百分率不高的患者其潰瘍持續(xù)時間較長，潰瘍面積和浸潤深度相對比較穩(wěn)定，說明其細胞增殖程度和惡性程度相對不高。雖然有人曾報道增生性瘢痕組織角質(zhì)形成細胞和成纖維細胞表達Ki67增多[13]，但最新文獻表明任何瘢痕組織（包括非病理性瘢痕和病理性瘢痕）的角質(zhì)形成細胞表達Ki67與正常皮膚無差別[14]。目前未見Ki67與瘢痕癌的相關(guān)臨床報道和基礎研究文獻支持這一初步結(jié)果，值得今后關(guān)注相關(guān)進展和進一步研究。

本研究還發(fā)現(xiàn)Ki67陽性細胞百分率與瘢痕癌組織浸潤深度、患者術(shù)后復發(fā)率有關(guān)。細胞的增殖活性越高，說明腫瘤組織生長越迅速，其浸潤深度自然就越深。而術(shù)后復發(fā)主要受手術(shù)根治程度的影響[15]，腫瘤組織增殖越活躍，浸潤深度越深，其徹底切除干凈的難度就越大，術(shù)后復發(fā)的概率相對就比較高。復發(fā)的6例患者，其Ki67陽性細胞百分率為（32.5±16.0）%。由此可見，Ki67反映了瘢痕癌患者腫瘤組織的潰爛持續(xù)時間、生長浸潤特點及手術(shù)后復發(fā)等臨床特征，這對于瘢痕癌的臨床診斷和治療方案確定起到重要的指導價值。

總而言之，本研究提示Ki67在瘢痕癌組織中的表達水平可反映瘢痕癌的發(fā)生、發(fā)展和預后等臨床特點，可作為瘢痕癌常規(guī)組織病理和免疫組化檢查的常規(guī)指標，為臨床制定瘢痕癌的相關(guān)診療常規(guī)提供重要的參考依據(jù)。

[1] Pekarek B, Buck S, Osher L. A comprehensive review on marjolin's ulcers: diagnosis and treatment [J]. J Am Col Certif Wound Spec, 2011, 3(3):60-64.

[2] Kowal-Vern A, Criswell BK. Burn scar neoplasms: a literature review and statistical analysis [J]. Burns, 2005, 31(4):403-413.

[3] Ochenduszkiewicz U, Matkowski R, Szynglarewicz B, et a1. Marjolin's ulcer: malignant neoplasm arising in scars [J]. Rep Praet Oncol Radiother, 2006, 11(3):135-138.

[4] 史飛濤, 秦守杰, 孔武明. 中期因子與Ki67在大腸癌中的表達及其臨床意義 [J]. 中國實用醫(yī)刊, 2012, 39(15):12-14.

[5] Saaiq M, Ashraf B. Marjolin's ulcers in the post-burned lesions and scars [J]. World J Clin Cases, 2014, 2(10):507-514.

[6] Copcu E. Marjolin's ulcer: a preventable complication of burns? [J]. Plast Reconstr Surg, 2009, 124(1):e156-164.

[7] Das KK, Chakaraborty A, Rahman A, et al. Incidences of malignancy in chronic burn scar ulcers: experience from bangladesh [J]. Burns, 2015, 41(6):1315-1321.

[8] Sueta A, Yamamoto Y, Hayashi M, et al. Clinical significance of pretherapeutic Ki67 as a predictive parameter for response to neoadjuvant chemotherapy in breast cancer: is it equally useful across tumor subtypes? [J]. Surgery, 2014, 155(5):927-35.

[9] 姚開泰. 抑瘤基因、細胞周期、DNA修復與腫瘤易感性 [J]. 中國科學基金, 1995, (2):17-23.

[10] Gurgel CA, Ramos EA, Azevedo RA, et al. Expression of Ki-67, p53 and p63 proteins in keratocyst odontogenic tumours: an immunohistochemical study [J]. J Mol Histol, 2008, 39(3):311-316.

[11] 李麗麗, 樸冰, 崔英, 等. COX-2和Ki67在鮑恩病皮損中的表達 [J].實用皮膚病學雜志, 2014, 7(2):107-109.

[12] 謝紅付, 程曉明, 李吉. COX-2在皮膚鱗狀細胞癌中的檢測 [J]. 中國皮膚性病學雜志, 2005, 19(8):452-454.

[13] 王擎, 付晉鳳, 葛茂星, 等. Ki67核增殖抗原在增生性瘢痕組織中的表達與意義 [J]. 國際醫(yī)藥衛(wèi)生導報, 2008, 14(8):18-22.

[14] Limandjaja GC, Broek LJ, Waaijman T, et al. Increased epidermal thickness and abnormal epidermal differentiation in keloid scars [J]. Br J Dermatol, 2016, 176(1):116.

[15] Aliperti LA, Predina JD, Vachani A, et al. Local and systemic recurrence is the Achilles heel of cancer surgery [J]. Ann Surg Oncol, 2011, 18(3):603-607.

Expression of Ki67 in scar carcinoma and its clinical significance

GAN Yu，PENG Dai-zhi，DUAN Xiao-dong，et al

Institute of Burn Research, Southwest Hospital, State Key Laboratory of Trauma, Burns and Combined Injury, the Third Military Medical University, Chongqing 400038, China

Objective To investigate the expression of Ki67 in scar carcinoma tissues and its correlations with the clinical characteristics of the patients with scar carcinoma. Methods A total of 27 patients who had been pathologically diagnosed as scar carcinoma were enrolled in this retrospective study. The expression of Ki67 in scar carcinoma tissues from those 27 cases was measured by immunohistochemical method. The correlations between Ki67 protein expression and each relevant clinical characteristic were also analyzed. Results The detection rate of Ki67 protein in scar carcinoma tissues was 100% (27/27). According to the percentage of Ki67-positive cells, the patients were divided into three groups, i.e. ≤10% (10 cases), 11%～40% (10 cases) and ≥41% (7 cases). The percentage of Ki67-positive cells in scar carcinoma tissues was significantly associated with ulcer duration(P＜0.05), depth of invasion(P＜0.01) and post-operation recurrence(P＜0.05). However, the expression of Ki67 was not correlated with scar duration and ulcer size in scar carcinoma tissues(P=0.082, P=0.401). Conclusion The expression of Ki67 in scar carcinoma tissues would provide a meaningful evidence for evaluating invasion depth and recurrence after operation.

Scar carcinoma；Ki67；Skin ulcer；Invasion depth；Recurrence

R739.5

A

1674-1293(2017)03-0129-03

2017-01-06

2017-03-11）

（本文編輯 耿建麗）

10.11786/sypfbxzz.1674-1293.20170301

第三軍醫(yī)大學第一附屬醫(yī)院重大領域技術(shù)創(chuàng)新計劃一般項目（SWH2016ZDCX3021）

400038 重慶，第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院全軍燒傷研究所，創(chuàng)傷、燒傷與復合傷國家重點實驗室（甘雨，彭代智，段小冬，張宜瀾，劉洋，黃亞蘭）

甘雨，碩士研究生在讀，研究方向：皮膚瘢痕癌的診療，

E-mail: 106462755@qq.com

彭代智，E-mail: dzpengmd@126.com