Day 3非優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)囊胚的應(yīng)用價(jià)值研究

柴三明，王志強(qiáng)，張 霖，楊 杰，王 稱,2，倪亞莉*

(1.甘肅省婦幼保健院生殖醫(yī)學(xué)中心，甘肅 蘭州 730050；2.甘肅省出生缺陷防控研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，甘肅 蘭州 730050)

·論 著·

Day 3非優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)囊胚的應(yīng)用價(jià)值研究

柴三明1，王志強(qiáng)1，張 霖1，楊 杰1，王 稱1,2，倪亞莉1*

(1.甘肅省婦幼保健院生殖醫(yī)學(xué)中心，甘肅 蘭州 730050；2.甘肅省出生缺陷防控研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，甘肅 蘭州 730050)

目的通過分析第3天(day 3，D3)移植及冷凍后非優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)的囊胚形成情況及其影響因素，探討非優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)囊胚在輔助生殖技術(shù)中的應(yīng)用價(jià)值。方法374例體外受精-胚胎移植新鮮周期資料，首先以是否有囊胚形成分為有囊胎形成組278例和無囊胎形成組96例，比較2組臨床及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)之間的差異；比較不同年齡組、常規(guī)受精(in vitro fertilization,IVF)和卵胞漿內(nèi)單精子注射(intra cytoplasmic sperm injection,ICSI) 2種授精方式、不同人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)注射日雌二醇(estradiol，E2)水平、不同成熟卵子數(shù)等因素之間囊胚形成率及優(yōu)質(zhì)囊胚率的差異，分析影響D3非優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)囊胚的臨床及實(shí)驗(yàn)室因素；比較不同D3胚胎質(zhì)量來源所形成囊胚的解凍妊娠率。結(jié)果374例患者共進(jìn)行D3非優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)1 938個(gè)，形成囊胚952個(gè)，囊胚形成率49.1%(952/1 938)，優(yōu)質(zhì)囊胚率30.4%(590/1 938)。按年齡分為2組，年齡<35歲組囊胚形成率50.7%(875/1 727)和優(yōu)質(zhì)囊胚率31.6%(546/1 727)均明顯高于年齡≥35歲組的36.5%(77/211)和20.8%(44/211)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。采用IVF受精后對(duì)非優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)，其囊胚形成率51.2%(694/1 356)、優(yōu)質(zhì)囊胚率33.0%(447/1 356)均較采用ICSI授精后43.4%(136/316)和25.6%(81/316)高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。隨著HCG日E2水平的增加和成熟卵子數(shù)量的增多，囊胚形成率和優(yōu)質(zhì)囊胚率也隨之增加。將D3非優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)后所形成的優(yōu)質(zhì)囊胚經(jīng)單囊胚冷凍后行解凍移植，其臨床妊娠率雖然明顯較同期D3為優(yōu)質(zhì)胚胎來源的囊胚解凍妊娠率低(42.5%vs57.5%)(P<0.05)，但仍然獲得了較好的臨床妊娠率。結(jié)論非優(yōu)質(zhì)胚胎囊胚培養(yǎng)可在一定程度提高患者的卵子利用率，節(jié)約治療成本，但根據(jù)患者年齡、受精方式、基礎(chǔ)內(nèi)分泌水平、成熟卵子數(shù)等自身?xiàng)l件的不同，其非優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)的利用價(jià)值及應(yīng)用效果也不盡相同。

生殖技術(shù)；囊胚；妊娠率

囊胚培養(yǎng)技術(shù)始于20世紀(jì)90年代，隨著輔助生殖技術(shù)的不斷發(fā)展，囊胚培養(yǎng)技術(shù)也隨之不斷改進(jìn)與完善。由于囊胚培養(yǎng)相比卵裂期胚胎延長了體外培養(yǎng)時(shí)間，可在一定程度上對(duì)攜帶有遺傳缺陷以及低發(fā)育潛能的胚胎進(jìn)行初步的篩選和淘汰，而能夠發(fā)育至囊胚的胚胎具有更高的發(fā)育潛能及臨床種植能力，可獲得更高的臨床妊娠率[1]。在體外受精治療不孕患者時(shí)，胚胎質(zhì)量是影響臨床治療結(jié)局的極其重要的因素，早期胚胎質(zhì)量的評(píng)估對(duì)其后續(xù)發(fā)育潛能具有十分重要的預(yù)測作用。目前國內(nèi)大多數(shù)輔助生殖機(jī)構(gòu)均采用早期胚胎的形態(tài)學(xué)評(píng)分評(píng)估胚胎質(zhì)量并進(jìn)行移植胚胎及冷凍胚胎的選擇，對(duì)形態(tài)學(xué)評(píng)分較低的移植和冷凍后的剩余胚胎則進(jìn)行繼續(xù)培養(yǎng)，待發(fā)育至囊胚階段后根據(jù)囊胚的形態(tài)學(xué)評(píng)分選擇質(zhì)量較好的囊胚進(jìn)行選擇性移植或冷凍，但第3天(day 3，D3)剩余胚胎囊胚培養(yǎng)的囊胚形成率、優(yōu)質(zhì)囊胚率、其在輔助生殖治療中的應(yīng)用價(jià)值及影響因素至今在生殖醫(yī)學(xué)領(lǐng)域尚不能達(dá)成共識(shí)。本研究分析甘肅省婦幼保健院生殖中心數(shù)據(jù)資料，探討D3非優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)囊胚在輔助生殖技術(shù)治療中的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年1—12月在甘肅省婦幼保健院接受輔助生殖治療并在新鮮周期進(jìn)行非優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)的不孕患者374例，年齡20～40歲，平均(29.8±4.5)歲。不孕原因：輸卵管因素302例，不明原因不孕72例。分組方法：①以是否有囊胚形成分為有囊胚形成組278例和無囊胚形成組96例，比較2組臨床及實(shí)驗(yàn)室相關(guān)指標(biāo)之間的差異；②以不同年齡、授精方式、不同人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)日雌二醇(estradiol，E2)水平、不同成熟卵子數(shù)等因素進(jìn)行分組，分析影響D3非優(yōu)質(zhì)胚胎囊胚培養(yǎng)的臨床及實(shí)驗(yàn)室因素；③以不同D3胚胎質(zhì)量進(jìn)行分組，比較組間囊胚解凍移植妊娠率。

1.2 臨床促排卵方案 所有患者均采用我中心常規(guī)短效長方案促排卵，患者于前次月經(jīng)黃體中期開始采用皮下注射促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑(GnRHa,Ipsen)，達(dá)降調(diào)標(biāo)準(zhǔn)后給予重組卵泡刺激素(Gona-F,Serono)或國產(chǎn)卵泡刺激素(麗申寶，珠海麗珠藥業(yè))150～300 U/d 直到扳機(jī)日。當(dāng)出現(xiàn)至少3個(gè)直徑>18 mm的卵泡后于當(dāng)晚21時(shí)肌內(nèi)注射HCG 5 000～10 000 U，36 h后取卵。

1.3 授精

1.3.1 常規(guī)受精(in vitro fertilization,IVF) 本中心常規(guī)受精主要采用短時(shí)受精方式，即在肌內(nèi)注射HCG后(40±1) h加精，加精3～6 h后反復(fù)吹打拆除顆粒細(xì)胞，判斷卵母細(xì)胞成熟度并根據(jù)第二極體排出與否初步評(píng)估受精情況，對(duì)常規(guī)受精失敗的卵母細(xì)胞實(shí)施補(bǔ)救性卵胞漿內(nèi)單精子注射(intra cytoplasmic sperm injection,ICSI)。授精后16～18 h觀察原核以確定是否受精并將受精卵移入卵裂期胚胎培養(yǎng)液(G-1TM，瑞典Vitrolife公司)繼續(xù)培養(yǎng)。

1.3.2 ICSI 取卵后將卵子置于受精液中進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，ICSI操作前拆除大部分顆粒細(xì)胞，觀察卵母細(xì)胞成熟度并對(duì)所有成熟卵母細(xì)胞行ICSI操作[ICSI操作液(G-MOPSTM，瑞典Vitrolife公司)，精子制動(dòng)液(7%PVP，美國SAGE公司)]。

1.4 胚胎、囊胚培養(yǎng)及評(píng)分 參照Peter卵裂期胚胎評(píng)分系統(tǒng)[2]評(píng)估胚胎質(zhì)量，將第3天發(fā)育到7～10個(gè)卵裂球的Ⅰ、Ⅱ級(jí)胚胎定義為優(yōu)質(zhì)胚胎，其余低評(píng)分胚胎為非優(yōu)質(zhì)胚胎。選擇優(yōu)質(zhì)胚胎移植或冷凍保存，將剩余正常受精來源的非優(yōu)質(zhì)胚胎轉(zhuǎn)入囊胚培養(yǎng)液(G-2，瑞典Vitrolife公司) 繼續(xù)培養(yǎng)至第5天或第6天，參照Gardner囊胚評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[3]進(jìn)行囊胚形態(tài)學(xué)評(píng)分。①首先根據(jù)囊胚腔的大小和是否孵化，分為6個(gè)時(shí)期：1期，早期有腔室囊胚，囊胚腔小于胚胎總體積的1/2；2期，囊胚腔體積大于或等于胚胎總體積的1/2；3期，完全擴(kuò)張囊胚，囊胚腔完全占據(jù)了胚胎的總體積；4期，擴(kuò)張囊胚，囊臟腔完全充滿胚胎，胚胎總體積變大，透明帶變??；5期，正在孵出的囊胚，囊胚的一部分從透明帶中逸出；6期，孵出的囊胚，囊胚全部從透明帶中逸出。處于3～6期的囊胚，還需對(duì)內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行分級(jí)。②內(nèi)細(xì)胞團(tuán)：A級(jí)，細(xì)胞數(shù)目多，結(jié)合緊密；B級(jí)，細(xì)胞數(shù)目較少，結(jié)合較松散；C級(jí)，細(xì)胞數(shù)目極少。③滋養(yǎng)層細(xì)胞：A級(jí)，上皮細(xì)胞層由較多的細(xì)胞組成，結(jié)構(gòu)致密；B級(jí)，上皮細(xì)胞層由不多的細(xì)胞組成，結(jié)構(gòu)較松散；C級(jí)，上皮細(xì)胞層由稀疏的細(xì)胞組成。如某囊胚為4期囊胚，內(nèi)細(xì)胞團(tuán)評(píng)分為B，滋養(yǎng)層細(xì)胞評(píng)分為B，則該囊胚評(píng)分為4BB。將囊胚評(píng)分在4BB及以上者定義為優(yōu)質(zhì)囊胚。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 有囊胚形成組和無有囊胚形成組相關(guān)資料比較 按D3剩余胚胎繼續(xù)培養(yǎng)后是否有囊胚形成進(jìn)行分成2組。2組不孕年限、基礎(chǔ)催乳素(basal prolactin, bPRL)、基礎(chǔ)睪酮(basal testosterone,bT)、HCG日黃體生成素(luteinzing hormone,LH)、HCG日孕酮(progesterone,P)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；無囊胚形成組年齡、Gn時(shí)間、基礎(chǔ)卵泡刺激素(basal follicle-stimulating hormone,bFSH)的含量多于或大于有囊胚形成組，14 mm以上卵泡數(shù)、獲卵數(shù)、成熟卵子數(shù)、基礎(chǔ)黃體生成素(basal luteinzing hormone,bLH)、基礎(chǔ)雌二醇(basal estradiol,bE2)，HCG日E2低于有囊胚形成組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

組別例數(shù)年齡(歲)不孕年限(年)Gn時(shí)間(d)14mm以上卵泡數(shù)(個(gè))獲卵數(shù)(個(gè))成熟卵子數(shù)(個(gè))bLH(mU/L)有囊胚形成組27829.33±4.273.85±2.7911.03±1.6421.48±7.9816.90±6.9915.27±6.156.27±5.24無囊胚形成組9630.99±5.314.27±3.2611.47±1.8914.05±7.4310.42±5.869.36±5.454.48±3.11t2.7911.1942.0528.0048.1588.3454.019P0.0060.2330.0420.0000.0000.0000.000組別例數(shù)bE2(nmol/L)HCG日E2(nmol/L)bFSH(mU/L)bPRL(mU/L)bT(nmol/L)HCG日LH(mU/L)HCG日P(nmol/L)有囊胚形成組2780.20±0.1619.96±10.326.26±1.86293.62±177.873.50±15.271.37±2.553.37±2.77無囊胚形成組960.16±0.0914.17±11.346.71±1.92283.02±148.824.19±14.801.28±1.702.99±1.72t3.0414.4191.9930.5200.2970.3501.279P0.0030.0000.0470.6030.7670.7260.202

2.2 不同年齡及受精方式囊胚形成情況比較 374例患者進(jìn)行D3非優(yōu)質(zhì)胚胎培養(yǎng)1 938個(gè)，共形成囊胚952個(gè)，囊胚形成率49.1%(952/1 938)，優(yōu)質(zhì)囊胚590個(gè)，優(yōu)質(zhì)囊胚形成率30.4%(590/1 938)。按年齡分為2組，年齡<35歲組其囊胚形成率和優(yōu)質(zhì)囊胚率均明顯高于年齡≥35歲組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。根據(jù)患者自身?xiàng)l件不同，采用了多種受精方式，其中以IVF(251例)和ICSI為主(74例)，采用IVF受精后其囊胚形成率及優(yōu)質(zhì)囊胚率均較ICSI高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同年齡及不同授精方式囊胚形成率比較Table 2 Comparison of blastocyst formation rates at different ages and different fertilization methods (個(gè)數(shù),%)

2.3 不同E2水平和不同成熟卵數(shù)之間囊胚形成情況 根據(jù)HCG日E2水平分為≤12.81 nmol/L組、>12.81～18.30 nmol/L和>18.30 nmol/L組?！?2.81 nmol/L組囊胚形成率明顯低于>12.81～18.30 nmol/L組和>18.30 nmol/L組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；> 12.81～18.30 nmol/L組與>18.30 nmol/L組之間囊胚形成率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；3組間優(yōu)質(zhì)囊胚率差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。按照成熟卵子數(shù)分為≤4個(gè)、>4～15個(gè)，>15個(gè)3組，成熟卵子數(shù)≤4個(gè)組的囊胚形成率和優(yōu)質(zhì)囊胚率均較成熟卵子數(shù)>4～15個(gè)組和>15個(gè)組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 不同E2水平及不同成熟卵數(shù)之間囊胚形成率比較Table 3 Comparison of blastocysts formation rates between different E2 levels and different mature eggs (個(gè)數(shù)，%)

*P<0.05與①比較(χ2檢驗(yàn))

2.4 不同來源囊胚解凍移植情況比較 將D3非優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)后所形成優(yōu)質(zhì)囊胚單囊胚冷凍后行解凍移植，囊胚解凍后成功復(fù)蘇88例作為D3非優(yōu)質(zhì)胚胎組；同期解凍移植來源于D3優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)所形成的囊胚240例作為D3優(yōu)質(zhì)胚胎組。觀察2組臨床結(jié)局。相比D3優(yōu)質(zhì)胚胎來源的囊胚，D3非優(yōu)質(zhì)胚胎所形成囊胚的解凍妊娠率明顯較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 不同D3胚胎質(zhì)量來源的囊胚移植后臨床結(jié)局比較Table 4 Comparison of clinical outcome after blastocysts transplantation from different D3 embryo quality (例數(shù)，%)

3 討 論

在體外受精治療中，胚胎質(zhì)量是影響周期治療結(jié)果的重要因素之一[4-5]。隨著體外受精-胚胎移植技術(shù)的不斷發(fā)展以及囊胚培養(yǎng)技術(shù)的不斷提高，近年來許多輔助生殖機(jī)構(gòu)已開展囊胚培養(yǎng)技術(shù)，尤其非優(yōu)質(zhì)胚胎的囊胚培養(yǎng)已經(jīng)成為各生殖中心對(duì)移植冷凍后非優(yōu)質(zhì)胚胎的主要處理對(duì)策。許多研究表明，將非優(yōu)質(zhì)胚胎進(jìn)行體外繼續(xù)培養(yǎng)后，仍有一部分胚胎能發(fā)育為囊胚且在將這些囊胚進(jìn)行移植后可使不孕患者成功妊娠，提高患者的胚胎利用率及累積妊娠率，降低患者的治療成本[6-9]。本研究結(jié)果顯示非優(yōu)質(zhì)胚胎體外繼續(xù)培養(yǎng)后其囊胚形成率為49.12%，優(yōu)質(zhì)囊胚形成率為30.44%。略高于Zhu等[10]報(bào)道的囊胚形成率(43.59%)和優(yōu)質(zhì)囊胚率(24.25%)，這可能與不同中心之間在臨床超促排卵方案、實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)環(huán)境以及胚胎和囊胚評(píng)分系統(tǒng)的差異有關(guān)。非優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)仍然能夠獲得較為理想的囊胚形成率及優(yōu)質(zhì)囊胚率，將在一定程度上為不孕患者提供更多移植機(jī)會(huì)，提高不孕患者的卵子利用率。

年齡是目前已知的預(yù)示女性生育能力的重要因素之一，女性年齡與卵母細(xì)胞的質(zhì)量密切相關(guān)[11-12]。女性卵巢儲(chǔ)備功能隨著年齡的不斷增長而逐漸降低，其自主排卵能力以及體外受精治療成功率也隨之下降。在IVF助孕周期中，隨著女性年齡的不斷增大，其周期獲卵數(shù)不斷減少，胚胎種植率也明顯降低，提示其卵巢儲(chǔ)備庫卵母細(xì)胞數(shù)目和質(zhì)量貯備能力均在逐漸衰竭[13-14]。本研究結(jié)果顯示，年齡<35歲的患者，其非優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)后的囊胚形成率和優(yōu)質(zhì)囊胚率均明顯高于年齡≥35歲的患者。表明隨著年齡的不斷增加，其非優(yōu)質(zhì)胚胎的發(fā)育潛能也在不斷降低。

本研究通過比較不同授精方式之間囊胚形成情況，發(fā)現(xiàn)采用IVF授精后非優(yōu)質(zhì)胚胎的囊胚形成率和優(yōu)質(zhì)囊胚率明顯高于ICSI授精。這可能主要與2種不同授精方式的精卵結(jié)合機(jī)制有關(guān)，ICSI前卵母細(xì)胞脫顆粒、ICSI注射針對(duì)卵膜的穿刺、培養(yǎng)液隨著注射操作進(jìn)入胞漿等都可能對(duì)胚胎的后續(xù)發(fā)育潛能產(chǎn)生影響。此外，ICSI授精時(shí)授精者僅可通過精子形態(tài)學(xué)特征評(píng)估并選擇精子進(jìn)行注射，無法識(shí)別精子內(nèi)部結(jié)構(gòu)是否存在異常，而在進(jìn)行IVF授精時(shí)卵周顆粒細(xì)胞可對(duì)精子進(jìn)行進(jìn)一步篩選，使得在IVF過程中最后發(fā)生精卵結(jié)合的精子其DNA完整性明顯優(yōu)于不能結(jié)合的精子。相關(guān)研究表明，精子DNA碎片增多雖然并不影響卵母細(xì)胞授精，但可明顯降低其囊胚形成率，影響胚胎的后續(xù)發(fā)育潛能[15-17]。因此，相對(duì)于ICSI，常規(guī)IVF授精后的非優(yōu)質(zhì)胚胎具有更好的發(fā)育潛能，利用價(jià)值較高。

本研究通過比較有無囊胚形成2組間HCG日E2水平發(fā)現(xiàn)，有囊胚形成組HCG日E2水平明顯高于無囊胚形成組(P<0.05)。此外，本研究還分析了HCG日E2水平與非優(yōu)質(zhì)胚胎囊胚形成情況的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)HCG日E2水平≤12.81 nmol/L時(shí)，其囊胚形成率明顯低于>12.81～18.30 nmol/L組及>18.30 nmol/L組；而>12.81～18.30 nmol/L組與>18.30 nmol/L組之間，囊胚形成率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；3組間優(yōu)質(zhì)囊胚率差異差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。提示當(dāng)HCG日E2低于一定水平時(shí)，其可能通過影響胚胎的后續(xù)發(fā)育潛能而降低囊胚形成率。但本研究顯示不同HCG日E2水平時(shí)各組之間優(yōu)質(zhì)囊胚率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，這可能與本研究樣本量較小以及不同中心胚胎評(píng)估系統(tǒng)的差異所致，仍需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本加以探討。

本研究通過分析成熟卵子與非優(yōu)質(zhì)胚胎囊胚形成情況的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，隨著不孕患者所獲得的成熟卵子數(shù)不斷增加，其非優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)后囊胚形成率明顯提高，但當(dāng)所獲成熟卵子數(shù)≤4個(gè)時(shí)，其優(yōu)質(zhì)囊胚率將會(huì)明顯降低。提示對(duì)于周期所獲成熟卵子數(shù)≤4個(gè)的患者，非優(yōu)質(zhì)胚胎囊胚培養(yǎng)并非最佳的胚胎處理手段，可根據(jù)患者實(shí)際情況進(jìn)一步選擇D3冷凍或繼續(xù)培養(yǎng)囊胚，以求獲得最佳的效果。

本研究通過比較不同來源囊胚解凍后單囊胚移植的臨床妊娠率發(fā)現(xiàn)，D3非優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)后其優(yōu)質(zhì)囊胚的解凍移植仍然能夠獲得較好的臨床妊娠率，但相比D3優(yōu)質(zhì)胚胎來源的囊胚，其解凍移植后的臨床妊娠率明顯較低。表明D3非優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)后優(yōu)質(zhì)囊胚解凍移植的臨床妊娠率雖然低于D3優(yōu)質(zhì)胚胎來源的囊胚，但其仍然具有較高的利用價(jià)值，可作為D3移植后無更多可利用胚胎患者的胚胎處理方案，從而提高該部分患者的卵子利用率，降低患者的治療成本。

綜上所述，D3非優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)后仍然具有形成囊胚和優(yōu)質(zhì)囊胚的潛能，但其囊胚形成率及優(yōu)質(zhì)囊胚率與患者自身?xiàng)l件的優(yōu)劣有關(guān)。有關(guān)臨床因素對(duì)D3非優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)影響的相關(guān)研究較少。本研究結(jié)果顯示，年齡、HCG日14 mm以上卵泡數(shù)、獲卵數(shù)、成熟卵子數(shù)、基礎(chǔ)LH、基礎(chǔ)E2以及HCG日E2水平均與非優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)后囊胚形成有關(guān)。因此，在實(shí)際臨床工作中，應(yīng)該根據(jù)患者臨床及實(shí)驗(yàn)室因素綜合考慮，評(píng)估非優(yōu)質(zhì)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)在不孕不育患者中應(yīng)用的合理性。

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(本文編輯：許卓文)

Study on application value of blastocysts derived from poor quality embryos on day 3

CHAI San-ming1, WANG Zhi-qiang1, ZHANG Lin1, YANG Jie1, WANG Cheng1,2, NI Ya-li1*

(1.ReproductiveMedicalCenterofGansuProvincialMaternityandChild-careHospital,Lanzhou730050,China; 2.CultivationBaseofKeyLaboratoryofGansuProvincialBirthDefectsPreventionandControl,Lanzhou730050,China)

Objective To explore the application value of blastocysts derived from poor quality embryos on day 3(D3) through its blastulation rate and high quality blastocyst formation rate. Methods Three hundred and seventy-four in vitro fertilization-embryo transplantation were divided into two groups with blastulation or not after further culture of poor quality embryos on D3. Women′s age, insemination methods, estradiol on the day of human chorionic gonadotropin injection and the number of mature oocytes were also analyzed. Results The blastulation rate of 1 938 D3 poor quality embryos from 374 patients was 49.1%(952/1 938) and the high quality blastocyst formation rate was 30.4%(590/1 938). The blastocyst formation rate of patients low than 35 years old was 50.7%(875/1 727) and the high quality blastocyst formation rate was 31.6%(546/1 727), which was statistically higher than the patients more than 35 years old 36.5%(77/211), 20.8%(44/211). In vitro fertilzation blastulation rate and high quality blastocyst formation rate was significantly higher than intra cytoplasmic sperm injection blastulation rate: 51.2%(694/1 356)vs43.0%(136/316), high quality blastocyst formation rate:33.0%(447/1 356)vs25.6%(81/316). Patients who have more mature oocytes and much higher estradiol on the day of human chorionic gonadotropin injection, they would have more blastocyst and high quality blastocyst. The clinical pregnancy rate after transplanted the blastocysts came from D3 poor quality embryos was 42.5%, which was significantly lower than the blastocysts from D3 high quality embryos(57.5%). Conclusion Further culture of D3 poor quality embryos can increase the utilization ratio of patients oocytes and decrease the costs of treatment. But according to the patient′s age, the mode of fertilization, the basal endocrine level, the number of mature eggs and other conditions, the utility value and application effect of non quality embryo continuous culture are not the same.

reproductive techniques; blastula; pregnancy rate

2017-03-21；

2017-05-05

甘肅省衛(wèi)生行業(yè)科研計(jì)劃項(xiàng)目(GSWSKY-2015-19)；甘肅省國際科技合作專項(xiàng)(1504WKCA060)；甘肅省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室專項(xiàng)(1506RTSA158)

柴三明(1968-)，男，甘肅秦安人，甘肅省婦幼保健院副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事生殖醫(yī)學(xué)研究。

*通訊作者。E-mail：niyali@126.com

R339.2

A

1007-3205(2017)08-0901-06

10.3969/j.issn.1007-3205.2017.08.008