水飛薊的基源鑒定與質(zhì)量分析

張 通，郭萬里，聶作明，周懷香，梁宗鎖，盛 清

(浙江理工大學(xué), a.生命科學(xué)學(xué)院；b.浙江省植物次生代謝調(diào)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，杭州 310018)

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水飛薊的基源鑒定與質(zhì)量分析

張 通a，郭萬里b，聶作明a，周懷香a，梁宗鎖b，盛 清a

(浙江理工大學(xué), a.生命科學(xué)學(xué)院；b.浙江省植物次生代謝調(diào)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，杭州 310018)

為了探究不同產(chǎn)地的水飛薊藥材是否達(dá)到藥典標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)分別采集于內(nèi)蒙古自治區(qū)、黑龍江省和遼寧省等地10個(gè)批次的水飛薊樣品進(jìn)行了檢測(cè)與分析。通過干燥法、熾灼法和熱浸法對(duì)水飛薊樣品的水分含量、灰分含量以及浸出物含量進(jìn)行檢測(cè)分析，結(jié)果表明：所有批次的樣品水分含量均小于10%，灰分含量均小于9%，浸出物含量均高于18%。同時(shí)，對(duì)水飛薊進(jìn)行了基源鑒定，通過性狀鑒定、顯微鑒定、DNA條形碼以及高效液相四種方法對(duì)采集到的樣品進(jìn)行基源鑒定研究和比較，結(jié)果表明：四種方法均能夠鑒別中藥材水飛薊，其中性狀鑒定法更為簡(jiǎn)便，而DNA條形碼技術(shù)和高效液相法準(zhǔn)確性更高。

基源鑒定; 質(zhì)量檢測(cè); DNA條形碼; 高效液相

0 引 言

水飛薊(Silybummarianum(L.) Gaertn.)又名水飛雉、奶薊子、奶薊等，為菊科水飛薊屬成員，1～2年生草本植物。原產(chǎn)于印度和巴基斯坦的喀什米爾山區(qū)，作為觀賞植物，北京植物園于1952年從英國(guó)引入[1]；而作為藥材種植，水飛薊則是由中國(guó)土產(chǎn)畜產(chǎn)進(jìn)口公司天津土產(chǎn)公司于1972年從德國(guó)引進(jìn)[2-3]。

水飛薊植株高約100～150 cm，莖直立，近圓柱形，具銳刺，多分枝。葉為大型羽狀或橢圓形披針狀，無葉柄，表面亮綠色，有乳白色斑紋，頭狀花序，管狀花，有紫色、白色兩種花色[4]。果實(shí)(即種子)為長(zhǎng)橢圓形，長(zhǎng)約5～7 mm，寬約3 mm，成熟后呈暗棕色或黑色；成熟的果實(shí)千粒重約21～27 g，水飛薊果實(shí)主要由種子胚和外皮兩部分構(gòu)成，無胚乳[5]。水飛薊藥用成分水飛薊素主要存在于果實(shí)外皮(即種殼)中，含量約為殼中的3%～5%，種胚中水飛薊素較少[6-7]。

水飛薊是一種歷史悠久的天然藥物，被多國(guó)藥典所收載，臨床上常用于治療急慢性肝炎、肝硬化、肝損傷等[8]。水飛薊賓、水飛薊亭、水飛薊寧及其同分異構(gòu)體構(gòu)成統(tǒng)稱為水飛薊素，是水飛薊藥材的藥用成分，其藥理作用機(jī)制包括抑制人體產(chǎn)生一氧化氮、阻斷部分真菌毒素與肝細(xì)胞膜受體特異性結(jié)合以及改善肝臟細(xì)胞酶活性等[9-10]。近年來水飛薊素的應(yīng)用被拓寬到癌癥的治療、抗炎和抗衰老等領(lǐng)域[11-12]，因此水飛薊的需求量也逐年上升。水飛薊素是目前市場(chǎng)上銷售的利加隆膠囊、復(fù)方益肝靈片等藥物的主要有效成分，西利賓胺和水林佳也是目前臨床治療肝炎、肝硬化和肝損傷的主要輔助藥物，其主要成分是水飛薊賓[13]。

基源鑒定即用各種方法鑒定中藥的來源物種，確定其真實(shí)性[14]；基源鑒定是中藥研究的基礎(chǔ)，也是中藥研究學(xué)的首要任務(wù)。性狀鑒定是最基礎(chǔ)的中藥材基源鑒定方法，是根據(jù)藥材的形狀、顏色、大小、氣味等特征對(duì)藥材進(jìn)行鑒定的方法，因其簡(jiǎn)潔、快速的特點(diǎn)至今仍被廣泛應(yīng)用。顯微鑒定是利用觀察顯微切片的結(jié)構(gòu)和特征來確定藥材的來源物種，這種方法對(duì)于結(jié)構(gòu)不同的物種十分有效。理化鑒定，則是利用物理的、化學(xué)的方法或分析儀器來確定藥材的真實(shí)性，常用的方法有薄層色譜法、紫外光譜法、高效液相法等，其中高效液相法既能夠用于藥材的基源鑒定還能夠用于評(píng)價(jià)質(zhì)量，并能夠準(zhǔn)確檢測(cè)中藥中有效成分或標(biāo)志性成分及其含量。DNA條形碼是利用基因組中一段公認(rèn)的、較短的序列進(jìn)行物種鑒定的一種分子技術(shù)，陳士林等建立的以ITS2為主，PsbA-trnH為輔的植物中藥材DNA條形碼鑒定系統(tǒng)快速、準(zhǔn)確而有效，備受歡迎，其“中藥材DNA條形碼分子鑒定法指導(dǎo)原則”已被2015版《中華人民共和國(guó)藥典》(以下簡(jiǎn)稱“中國(guó)藥典”)所收錄[15]。本文結(jié)合中國(guó)藥典、美國(guó)藥典及中藥材常用的鑒定方法對(duì)采集到的樣品進(jìn)行基源鑒定和質(zhì)量分析，為水飛薊進(jìn)一步的分子和藥理研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

10個(gè)批次的水飛薊樣品于2014年7月中旬和2015年7月中旬分別采集自遼寧省的盤錦市和海城地區(qū)，黑龍江省虎林市的云山農(nóng)場(chǎng)以及呼瑪縣地區(qū)，內(nèi)蒙古自治區(qū)的海拉爾縣地區(qū)、呼倫貝爾市的綽爾河農(nóng)場(chǎng)以及牙克石農(nóng)場(chǎng)，樣品編號(hào)、采集重量、采集時(shí)間和采集地點(diǎn)如表1所示。所有樣品在37 ℃干燥至恒重保存于4 ℃冰箱中。

表1 樣品采集地點(diǎn)及編號(hào)

1.2 質(zhì)量檢測(cè)分析

采用《中國(guó)藥典》的方法[16]對(duì)水飛薊進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)分析，具體過程如下：

水分含量的測(cè)定：用分析取水飛薊樣品2～4 g，置于40 mm×25 mm扁形稱量瓶中，并打開瓶蓋放置于真空干燥箱中，設(shè)置干燥箱溫度為105 ℃，干燥5 h，待冷卻后，稱重；再在上述樣品至于真空干燥箱中干燥1 h后稱重，若兩次稱重差異不超高5 mg，則依據(jù)減失的重量計(jì)算水飛薊中的含水量，若稱重差異超過5 mg，則繼續(xù)放入干燥箱中干燥，直至減失重量的差異不超過5 mg，計(jì)算水飛薊樣品中水分的含量。

灰分含量的測(cè)定：將水飛薊樣品粉碎通過24目篩子后，精密稱定水飛薊樣品2～3 g，置于高溫爐中，緩緩加熱，提升溫度至600 ℃左右，使水飛薊樣品完全灰化至恒重。根據(jù)剩余的水飛薊殘?jiān)亓?，?jì)算水飛薊樣品中總灰分的含量。

浸出物含量的測(cè)定：取水飛薊樣品3 g，置于含有100 mL乙醇的250 mL容量的錐形瓶中稱取樣品重量；靜置0.5～1.0 h后，加熱錐形瓶，連續(xù)回流冷凝管并保持微沸1.0 h，關(guān)閉加熱套，待放冷后再次稱取樣品重量；用水補(bǔ)足減失的重量，用干燥器濾過，取濾液25 mL置于干燥的揮發(fā)皿中，用80 ℃水浴蒸干后，干燥3.0 h，迅速稱定重量，以干燥品計(jì)算水飛薊樣品中浸出物的含量。

1.3 基源鑒定

1.3.1 性狀鑒定

隨機(jī)從各個(gè)批次的水飛薊樣品中選取20粒種子用游標(biāo)卡尺測(cè)量種子的長(zhǎng)度和寬度，計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。千粒重：隨機(jī)從每個(gè)批次樣品中選取1000粒用分析天平稱量，重復(fù)5次，計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。同時(shí)，觀察并記錄不同批次樣品種子的形狀、大小和色澤等。

1.3.2 顯微鏡鑒定

從每個(gè)批次的樣品中隨機(jī)挑取5～10粒種子，用溫水浸泡3.0 h后切片，用毛筆將切好的種子橫剖面挑入盛有清水的培養(yǎng)皿中，挑取完整的薄的橫剖面制片，置于顯微鏡下觀察。

1.3.3 DNA條形碼鑒定

水飛薊DNA條形碼鑒定采用ITS2序列[17]進(jìn)行鑒定。具體過程如下：水飛薊DNA的提取將0.3 g的種子樣品通過外力磨碎，加入DNA Wash Buffer(Ascorbic acid、citric acid、PVP、HEPES free acid配制)1 mL清洗兩次，棄去上清；加入1 mL DNA plant zol:β-巰基乙醇(24∶1)溶液1 mL，充分混勻，置于65 ℃水浴鍋45 min，每15 min混勻一次；加入750 mL氯仿，混合均勻離心取上清；上清液加入適量體積的異丙醇混勻，離心棄去上清；加入75%乙醇對(duì)DNA進(jìn)行清洗，然后將所得到的DNA溶解至0.1 mmol/L進(jìn)行PCR反應(yīng)。PCR反應(yīng)：ITS2序列正向引物：5′-ATGCGATACTTGGT GTGAAT-3′，反向引物：5′-GACGCTTCTCCAG ACTACAAT-3′； 擴(kuò)增程序?yàn)椋?4 ℃、5 min；94 ℃、30 s， 56 ℃、30 s，72 ℃、45 s， 40 個(gè)循環(huán)；72 ℃、10 min。rTaq酶試劑盒由Takara公司提供，PCR反應(yīng)以25 μL為參照，包括1×Buffer，0.2 mmol/L dNTPs，0.1 mmol/L引物對(duì)和提取的DNA，0.5 μL rTaq酶，ddH2O至25 μL進(jìn)行在PCR儀進(jìn)行反應(yīng)。用濃度為1%瓊脂糖凝膠電泳對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，并且將所有的有條帶的樣品PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送到測(cè)序公司測(cè)序。采用MEGA軟件對(duì)測(cè)序的結(jié)果進(jìn)行拼接獲得相應(yīng)的DNA序列，將序列在中藥材DNA條形碼鑒定系統(tǒng)中進(jìn)行物種鑒定，確定序列相似性最高的物種。

1.3.4 高效液相法鑒定

水飛薊素標(biāo)準(zhǔn)溶液制備：精密稱取水飛薊提取物粉末標(biāo)準(zhǔn)品7 mg(溶于2 mL甲醇中，20 min超聲處理，用甲醇稀釋到0.7 mg/mL；通過0.45 μm的濾膜過濾去除雜質(zhì)；稀釋5倍獲得0.14 mg/mL的水飛薊提取物粉末標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

水飛薊賓標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：精密稱取水飛薊賓標(biāo)準(zhǔn)品1 mg溶于2 mL的甲醇中，再分別稀釋制備成0.500、0.100、0.020、0.004、0.002 mg/mL的水飛薊賓標(biāo)準(zhǔn)溶液，20 min超聲處理；通過0.45 μm的濾膜過濾去除雜質(zhì)。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：根據(jù)水飛薊賓5個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，每個(gè)濃度的溶液進(jìn)樣3次，記錄峰面積，以每個(gè)峰面積的平均值x為橫坐標(biāo)，水飛薊賓標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度(mg/mL)y為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。

樣品溶液的制備的方法參考索氏萃取法[18]，具體過程如下：取約10 g充分研磨的水飛薊粉末精密稱定并置于一個(gè)連續(xù)回流的提取套管中，用小棉球塞住冷凝管的上端，將套管裝入250 mL的圓底燒瓶中(內(nèi)含150 mL的正己烷)，加熱4 h除去脂類成分；把裝有正己烷的圓底燒瓶從提取套管分離，棄去正己烷溶液，干燥萃取套管除去附著的正己烷；再將套管裝入配有 250 mL圓底燒瓶(內(nèi)含100 mL乙酸乙酯) 的連續(xù)提取器中，保持微沸，使溶劑輕輕回流。8 h后，把提取物定量轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中，添加甲醇至刻度作為樣品儲(chǔ)備溶液。取出1 mL樣品儲(chǔ)備溶液用甲醇稀釋25倍即得到樣品溶液。

表2 HPLC流動(dòng)相配比及洗脫時(shí)間

注：檢測(cè)波長(zhǎng)：UV288 nm；色譜柱：C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫：40 ℃；流速：1 mL/min；上樣量：10 μL；流動(dòng)相：溶液B：V甲醇∶V磷酸∶V水=20∶0.5∶80，溶液D：V甲醇∶V磷酸∶V水=80∶0.5∶20。

2 結(jié)果與分析

2.1 水飛薊的水分、灰分和浸出物含量測(cè)定

2015版中國(guó)藥典中關(guān)于藥材水飛薊的規(guī)定為：水分含量不得超過10%，灰分含量不得高于9%，浸出物含量不得低于18%[16]。不同產(chǎn)地水飛薊的水分、灰分、浸出物的含量測(cè)定結(jié)果如圖1所示。水分含量最高的藥材來自遼寧海城，達(dá)到7.065%，灰分含量最高的藥材來自于黑龍江云山農(nóng)場(chǎng)，達(dá)到5.306%，浸出物含量最高的藥材來自于遼寧海城，達(dá)到30.844%。圖1結(jié)果表明：所有產(chǎn)地水飛薊藥材的水分含量均低于10%，灰分含量均低于9%，而浸出物的含量則遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于18%，符合中國(guó)藥典的規(guī)定。

圖1 不同產(chǎn)地水飛薊藥材的水分、灰分及浸出物含量

2.2 基源鑒定

2.2.1 性狀鑒定

中國(guó)藥典中關(guān)于水飛薊的性狀描述為：呈長(zhǎng)倒卵形或橢圓形，長(zhǎng)5～7 mm，寬2～3 mm，表面淡灰棕色或黑褐色，光滑，有細(xì)縱花紋，頂端鈍圓，稍寬，有一圓環(huán)，中間具花柱殘跡，基部略窄[16]。通過實(shí)驗(yàn)測(cè)量得到水飛薊樣品的形狀、大小、色澤等性狀特征，并與中國(guó)藥典的描述進(jìn)行比較確定其真實(shí)性，如圖2所示。

從圖2可以看出，水飛薊藥材的形狀呈現(xiàn)橢圓形，頂端稍寬，可以清晰地看到花柱殘跡的圓環(huán)，底部比頂端略窄，藥材顏色可分為三種：黑褐色、棕色及灰白色，有縱細(xì)花紋貫穿于種皮之上。由表3可以看出，10個(gè)批次水飛薊藥材樣品的寬度在2.85～3.50 mm之間，長(zhǎng)度在6.40～7.50 mm之間，種子的千粒重在22～28 g之間，通過與藥典描述比較發(fā)現(xiàn)，樣品的形狀和顏色與藥典的規(guī)定完全吻合，但樣品的大小較藥典的規(guī)定稍大，分析后認(rèn)為樣品的大小與藥材的品質(zhì)優(yōu)劣有關(guān)，但不影響性狀鑒定的結(jié)果，因此以上性狀可以作為水飛薊基源鑒定的依據(jù)。

圖2 不同產(chǎn)地水飛薊藥材樣品

編號(hào)長(zhǎng)度/mm寬度/mm千粒重/gHC-13.15±0.4576.88±0.65825.642±0.77PJ-22.85±0.5386.64±0.32522.556±1.31PJ-33.25±0.2217.16±0.49322.588±0.25YKS-43.35±0.3947.09±0.50923.872±0.58YS-53.38±0.4777.01±0.32126.814±0.31CEH-63.32±0.7197.17±0.87827.972±0.37HLE-73.14±0.6446.93±0.24624.846±0.36HLE-83.20±0.3396.97±0.13322.697±0.83HLE-93.37±0.3037.38±0.34125.026±0.44HM-102.90±0.4416.44±0.43122.574±0.45

2.2.2 顯微鑒定

美國(guó)藥典規(guī)定的水飛薊的顯微鑒定的依據(jù)為：水飛薊果壁表皮由無色柵欄細(xì)胞構(gòu)成，無色柵欄細(xì)胞與表皮垂直排列，具有加厚的外側(cè)細(xì)胞壁，并有裂縫狀腔深入其內(nèi)[18]。通過顯微鏡對(duì)樣品的顯微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察和分析，結(jié)果如圖3和圖4所示。

圖3 熒光顯微鏡下的水飛薊種皮

圖3為圖4中樣品PJ-2的放大圖，通過圖3可以清晰地看到外側(cè)細(xì)胞壁、裂縫狀的腔以及無色柵欄細(xì)胞。不同顏色的種子的外側(cè)細(xì)胞壁細(xì)胞顏色不同，其中黑褐色種子的外側(cè)細(xì)胞壁細(xì)胞顏色深，表明含有更多的色素，棕色種子的外側(cè)細(xì)胞壁顏色較淺，色素含量少，而灰白色種子的外側(cè)細(xì)胞壁為無色，不含色素，裂縫狀的腔排布在外側(cè)細(xì)胞壁內(nèi)側(cè)與無色欄珊細(xì)胞相接與美國(guó)藥典描述的性狀一致。

圖4 各產(chǎn)地水飛薊熒光顯微鏡下的種皮

2.2.3 DNA條形碼鑒定

DNA條形碼技術(shù)是通過比較一段通用的DNA序列，對(duì)樣品的物種進(jìn)行鑒定的方法[17]。圖5為水飛薊藥材ITS2序列的PCR電泳圖，10個(gè)批次的樣品都成功擴(kuò)增目的片段，將PCR產(chǎn)物送往生物公司測(cè)序。

圖5 水飛薊樣品PCR電泳圖

水飛薊ITS2序列長(zhǎng)度在214和216 bp之間，平均GC含量為63.08%，在154 bp處容易發(fā)生CT突變，而在178、189和201 bp處容易產(chǎn)生缺失。并將所有樣品的ITS2序列輸入到中藥材DNA條形碼鑒定系統(tǒng)(http://www.tcmbarcode.cn/china/)或在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中BLAST進(jìn)行同源性標(biāo)記，得到的序列相似性最高的物種均為水飛薊，序列相似性為100%。將所有樣品的ITS2序列與GenBank上數(shù)據(jù)庫(kù)與水飛薊相似性達(dá)到90%的序列構(gòu)建NJ進(jìn)化樹分析，結(jié)果如圖6所示。結(jié)果表明：水飛薊和其他薊屬的近源物種分別聚為一支，因此ITS2序列可以作為DNA條形碼鑒別水飛薊及其混偽品。

2.2.4 高效液相法鑒定

通過比較水飛薊素標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖(圖7中1號(hào)曲線)和樣品提取物色譜圖(圖7中2號(hào)曲線)發(fā)現(xiàn)，樣品提取物每一種成分與水飛薊素標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對(duì)保留時(shí)間是一致的，其中a峰為水飛薊亭，b峰為水飛薊寧，c峰為水飛薊賓A，d峰為水飛薊賓B，e峰為異水飛薊賓A，f峰為異水飛薊賓B，g峰為脫氫水飛薊賓，從圖6可以清晰地看到樣品中每一種成分的色譜峰，通過水飛薊賓標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖8)，y=5×10-8x，其中X軸表示通過高效液相測(cè)得的峰面積，Y軸表示成分的含量，只要將實(shí)驗(yàn)測(cè)得的數(shù)據(jù)即某種成分的峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程就可以計(jì)算出這種成分含量，因此該方法可以作為基源鑒定的依據(jù)，還可以運(yùn)用此方法測(cè)定水飛薊藥材中各種有效成分的含量。

3 討 論

水飛薊作為一種集具藥用價(jià)值和觀賞價(jià)值的經(jīng)濟(jì)作物，在我國(guó)種植面積非常廣泛，已經(jīng)成為藥農(nóng)增加收益的選擇之一。近年來隨著水飛薊抗腫瘤活性研究的逐漸深入，市場(chǎng)對(duì)于藥材水飛薊的需求量也越來越多，因此建立一套快捷、有效的水飛薊的鑒別方法與質(zhì)量檢測(cè)體系已經(jīng)迫在眉睫。本文通過干燥法、熾灼法和熱浸法對(duì)不同產(chǎn)地的水飛薊藥材的水分、灰分和浸出物進(jìn)行檢測(cè)，通過與中國(guó)藥典[16]的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，檢測(cè)這些水飛薊樣品是否符合要求。水分、灰分和浸出物作為評(píng)價(jià)藥材質(zhì)量的重要指標(biāo)，往往被忽略，然而這些指標(biāo)成分對(duì)于藥材的質(zhì)量和療效具有重要的作用。

圖6 基于ITS2序列構(gòu)建的水飛薊及其它薊屬植物的NJ樹

1.標(biāo)準(zhǔn)品； 2.樣品圖7 水飛薊素高效液相色譜比較

圖8 水飛薊賓的標(biāo)準(zhǔn)曲線

中藥材品種的混亂及真?zhèn)舞b定方法的欠缺嚴(yán)重影響中醫(yī)藥的療效與安全，對(duì)于傳統(tǒng)的中藥材基源鑒定方法，性狀鑒定法快速簡(jiǎn)便，實(shí)用性強(qiáng)，但是準(zhǔn)確性不足，容易出錯(cuò)；顯微鑒定對(duì)于區(qū)別不同科屬的植物有著強(qiáng)大的優(yōu)勢(shì)，但是對(duì)于區(qū)別水飛薊的親緣物種時(shí)有一定的難度[14]；高效液相法準(zhǔn)確很高，但是對(duì)于設(shè)備要求比較高，如果想要進(jìn)一步檢測(cè)水飛薊中各種藥效成分的含量，如水飛薊賓、水飛薊亭、水飛薊寧的含量，可以采用高效液相法，既能夠準(zhǔn)確地對(duì)藥材進(jìn)行鑒定又能夠檢測(cè)藥效成分；DNA條形碼技術(shù)作為一種新的分子鑒定技術(shù)，因其準(zhǔn)確性高，簡(jiǎn)便易行的特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于多種中藥材及藥用植物的鑒定中，如冬蟲夏草的鑒定[19]、前胡的鑒定[20]等。本文通過上述四種方法對(duì)采集到的水飛薊樣品進(jìn)行了基源鑒定研究，各種方法的操作過程及步驟已在文中說明，這對(duì)于人們選擇一套合適的中藥材基源鑒定方法具有參考意義。目前中藥的安全問題已成為制約中藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展和獲得國(guó)際認(rèn)可的“瓶頸”，其中如何對(duì)藥材進(jìn)行基源鑒定對(duì)于解決這一問題有著重要意義。

4 結(jié) 論

本文通過干燥法對(duì)不同產(chǎn)地的水飛薊樣品的水分進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的水飛薊樣品均達(dá)到藥典規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于保持中藥材水飛薊中有效成分的藥效和長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存具有重要的意義。通過熾灼法檢測(cè)水飛薊樣品中的灰分含量發(fā)現(xiàn)，所有批次的樣品的灰分含量均低于9%(中國(guó)藥典的標(biāo)準(zhǔn))，能夠確保水飛薊的品質(zhì)。浸出物含量是中藥材質(zhì)量控制重要指標(biāo)之一，本文通過熱浸法對(duì)水飛薊的浸出物含量進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)所有批次的樣品均遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過藥典規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于制藥企業(yè)選購(gòu)水飛薊藥材用于生產(chǎn)實(shí)踐具有重要的意義。本文對(duì)采集自東北地區(qū)7個(gè)產(chǎn)地的水飛薊樣品采用四種方法進(jìn)行基源鑒定，對(duì)于鑒別不同來源的中藥材的品質(zhì)非常重要。不同品種的中藥材的最適鑒定方法也不同，本文開展的水飛薊基源鑒定對(duì)于中藥材鑒定的方法選擇具有借鑒意義。

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(責(zé)任編輯： 唐志榮)

Source Identification and Quality Analysis ofSilybumMarianum(L.) Gaertn. from Different Areas of Origin

ZHANGTonga,GUOWanlib,NIEZuominga,ZHOUHuaixianga,LIANGZongsuob,SHENGQinga

(a. College of Life Science; b. Key Laboratory of Plant Secondary Metabolism and Regulation of Zhejiang Province，Zhejiang Sci-Tech University, Hangzhou 310018; China)

To explore whetherSilybummarianum(L.)Gaertn. in different producing area reaches the pharmacopoeia criterion, 10 batches ofSilybummarianum(L.)Gaertn. collected from Inner Mongolia, Heilongjiang and Liaoning Province were detected and analyzed respectively. The moisture content, ash content and extractive content of the samples were detected by drying method, burning method and hot dipping method. The results show that the water content of all samples is less than 10%; the ash content is less than 9% and the content of extract is higher than 18%. Besides, source identification was carried out for the samples by four methods including character identification, microscopic identification, DNA barcoding and high performance liquid chromatography(HPLC). The results indicate that the four methods can identifySilybummarianum(L.)Gaertn. Character identification method is simpler, while DNA barcoding technique and HPLC present higher accuracy.

source identification; quality inspection; DNA barcoding; HPLC

10.3969/j.issn.1673-3851.2017.05.025

2016-11-30 網(wǎng)絡(luò)出版日期： 2017-04-25

國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目(81373908)

張 通(1992-)，男，河南南陽(yáng)人，碩士研究生，主要從事藥用植物分子方面的研究。

盛 清，E-mail：csheng@zstu.edu.cn

Q946.82

A

1673- 3851 (2017) 03- 0467- 08