條葉龍膽中環(huán)烯醚萜類化學(xué)成分及細(xì)胞毒活性研究△

周艷麗，張艷，李碩熙，李英琴，李博謙，王愛莉

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 佳木斯學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)

·基礎(chǔ)研究·

條葉龍膽中環(huán)烯醚萜類化學(xué)成分及細(xì)胞毒活性研究△

周艷麗，張艷*，李碩熙，李英琴，李博謙，王愛莉

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 佳木斯學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)

目的利用植物化學(xué)和現(xiàn)代譜學(xué)分析相結(jié)合的手段，針對(duì)性地開展條葉龍膽中特征性成分——環(huán)烯醚萜類化學(xué)成分的研究，并對(duì)所分離得到的環(huán)烯醚萜類單體成分進(jìn)行細(xì)胞毒活性試驗(yàn)，為新的抗腫瘤藥物研發(fā)提供物質(zhì)基礎(chǔ)。方法運(yùn)用現(xiàn)代植物化學(xué)的研究手段對(duì)條葉龍膽進(jìn)行針對(duì)性的提取、分離，并利用包括核磁共振(1D，2D NMR)、質(zhì)譜等多種譜學(xué)手段對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，采用MTT方法測(cè)定各單體環(huán)烯醚萜類化合物的細(xì)胞毒活性。結(jié)果從條葉龍膽乙醇提取物中分離得到了9個(gè)環(huán)烯醚萜類成分，分別鑒定為天目地黃苷A(1)，天目地黃苷E(2)，6-酮基-8-乙酰鉤果草苷(3)，6，7-去氫-8-乙酰鉤果草苷(4)，齒葉玄參苷A(5)，大花木巴戟苷C(morinlongoside C，6)，3′-O-β-D-吡喃葡萄糖基獐牙菜苷(7)，地黃新苷B(8)和地黃新苷C(9)。采用MTT方法對(duì)化合物1～9進(jìn)行細(xì)胞毒活性評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示化合物1、4、5、8對(duì)人源肝癌細(xì)胞HepG2增殖具有抑制活性，IC50值分別為13.6、12.0、7.5、9.0 μmol·L-1。結(jié)論環(huán)烯醚萜類化合物1～9均為從該植物中首次分離得到，且發(fā)現(xiàn)了對(duì)人源肝癌細(xì)胞HepG2增殖有一定抑制活性的環(huán)烯醚萜類成分。

條葉龍膽；環(huán)烯醚萜；細(xì)胞毒活性

條葉龍膽GentianamanshuricaKitag.為龍膽科(Gentianaceae)龍膽屬(Gentiana)多年生草本植物，生長(zhǎng)在海拔 100～1100 m的山坡草地、濕草地、路旁處，在我國多個(gè)省份均有分布[1]。該屬植物物種多樣，世界范圍內(nèi)有400余種，分布于歐洲、亞洲等地，而我國有247種，分布遍及全國[1]。文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)從該屬植物中分離得到的化學(xué)成分主要為環(huán)烯醚萜、黃酮等類成分[2-4]?，F(xiàn)代藥理研究不但顯示出其與傳統(tǒng)功效一致的保肝活性，而且呈現(xiàn)出了抗炎、止痛、抗病毒、抗腫瘤等方面的活性[2-4]?；邶埬憣僦参锔缓哂辛己每鼓[瘤活性的環(huán)烯醚萜類成分，為了給新的抗腫瘤藥物研發(fā)提供一定的數(shù)據(jù)支撐，筆者對(duì)條葉龍膽環(huán)烯醚萜類成分進(jìn)行了定向研究，從其乙醇提取物中共分離得到9個(gè)環(huán)烯醚萜類結(jié)構(gòu)，采用MTT方法對(duì)化合物1～9進(jìn)行細(xì)胞毒活性評(píng)價(jià)。

1 儀器與材料

Bruker DRX-600核磁共振儀，Bruker HTC/Esquire 質(zhì)譜儀，硅膠(200～300目)、硅膠板(高效板，青島海洋化學(xué)有限責(zé)任公司)，凝膠LH-20(GE公司)，高效液相色譜儀(Agilent 1260)、Multiskan MK3酶標(biāo)儀(熱電公司)，Quintix125D-1CN分析天平(德國賽多利斯集團(tuán))。

HepG2、HCT-1116、BGC-823細(xì)胞(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)研究所)，四甲基偶氮唑鹽(MTT，Gibco公司)。

條葉龍膽于2014年7月采集于黑龍江省齊齊哈爾市碾子山地區(qū)，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)陳效忠副教授鑒定為龍膽科龍膽屬植物條葉龍膽GentianamanshuricaKitag.的根及根莖。藥材存放于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)佳木斯學(xué)院標(biāo)本館(編號(hào)：2014090703)。

2 提取與分離

取干燥藥材10 kg，粉碎后用95%乙醇水溶液回流提取3次，每次1 h。將3次提取得到的提取液合并，經(jīng)減壓干燥得到干浸膏2.0 kg，加水混懸后，依次用乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行萃取，萃取液分別進(jìn)行減壓濃縮干燥，得到乙酸乙酯部分和正丁醇部分。取正丁醇部分(共300.0 g)用D101大孔吸附樹脂柱色譜(12.0 cm×80.0 cm)分離，依次選用適量的純水，30%、60%、95%乙醇水溶液進(jìn)行分段洗脫。其中，60%乙醇水溶液洗脫部分經(jīng)真空干燥得到洗脫物78.0 g，運(yùn)用硅膠柱色譜法進(jìn)行進(jìn)一步色譜分離，梯度洗脫溶劑選用三氯甲烷-甲醇系統(tǒng)(體積比依次為20∶1，10∶1，6∶1，4∶1，3∶1，1∶1，0∶1)，經(jīng)收集合并洗脫液得到10個(gè)流分Fr.1～10。流分Fr.8(13.8 g)經(jīng)硅膠柱色譜[三氯甲烷-甲醇(50∶50)洗脫]得到16個(gè)亞組分Subfr.8(1～16)。流分Subfr.8(7)(3.0 g)經(jīng)過反復(fù)硅膠柱色譜后又經(jīng)LH-20凝膠柱色譜純化得到化合物3(17.0 mg)和4(15.0 mg)。Subfr.8(8)(2.0 g)經(jīng)LH-20凝膠柱色譜純化得到化合物2(8.1 mg)。流分Subfr.10(5.3 g)首先經(jīng)C18反相柱色譜進(jìn)行純化，再經(jīng)半制備HPLC(甲醇-水為流動(dòng)相，體積比為30∶70，流速為3.0 mL·min-1)進(jìn)一步純化得到化合物1(9.3 mg)和7(2.7 mg)。流分Fr.12(10.0 g)經(jīng)C18反相柱色譜分離，得到20個(gè)流分Subfr.12(1～20)。Subfr.12(5)(1.5 g)經(jīng)過制備型HPLC(甲醇-水為流動(dòng)相，體積比為40∶60，流速為5.0 mL·min-1)得到化合物5(12.0 mg)和6(8.5 mg)。Subfr.12(7)(1.0 g)經(jīng)過制備型HPLC(甲醇-水為流動(dòng)相，體積比為50∶50，流速為5.0 mL·min-1)得到化合物8(8.0 mg)和9(5.0 mg)。

3 體外抑制腫瘤細(xì)胞增殖活性評(píng)價(jià)(MTT法)

將3種待測(cè)細(xì)胞株(HepG2，HCT-1116，BGC-823)配制成1×105濃度的懸液，接種100 μL于96孔板，培養(yǎng)24 h；將待測(cè)樣品配制6個(gè)梯度濃度(0.10、0.50、0.25、1.25、6.25、31.25 μmol·L-1)，每個(gè)梯度濃度做6個(gè)重復(fù)，分別取100 μL至96孔板實(shí)驗(yàn)組，另外設(shè)空白組和對(duì)照組(紫杉醇)；作用48 h后，離心，棄上清液，加100 μL MTT，再使其作用4 h后，再次離心，棄上清液，加150 μL二甲基亞砜(DMSO)，振蕩約10 min，于570 nm下測(cè)其吸光度值[5]。

4 結(jié)果

4.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末。ESI-MSm/z331 [M+H]+，結(jié)合1H-NMR和13C-NMR可知其分子式為C15H22O8。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.08(1H，d，J=7.8 Hz，H-1)，4.47(1H，m，Ha-3)，4.28(1H，m，Hb-3)，5.60(1H，dd，J=6.0，2.6 Hz，H-4)，6.26(1H，d，J=6.0 Hz，H-6)，5.97(1H，d，J=6.0 Hz，H-7)，2.75(1H，m，H-9)，1.33(3H，s，H-10)；Glc(葡萄糖基)δ：4.75(1H，d，J=8.4 Hz，H-1′)，3.33(1H，m，H-2′)，3.42(1H，t，J=8.4 Hz，H-3′)，3.37(1H，t，J=8.4 Hz，H-4′)，3.33(1H，m，H-5′)，3.87(1H，dd，J=12.0，2.0 Hz，Ha-6′)，3.71(1H，dd，J=12.0，6.0 Hz，Hb-6′)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：98.9(C-1)，66.6(C-3)，116.8(C-4)，141.7(C-5)，130.6(C-6)，145.7(C-7)，82.8(C-8)，55.9(C-9)，23.3(C-10)；Glcδ：100.5(C-1′)，74.9(C-2′)，77.9(C-3′)，71.8(C-4′)，78.4(C-5′)，62.9(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較[6]，確定化合物為天目地黃苷A，從該植物中首次分離得到。

化合物2：白色粉末。ESI-MSm/z635 [M+Na]+，結(jié)合1H-NMR和13C-NMR可知其分子式為C30H44O13。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.10(1H，d，J=10.0 Hz，H-1)，6.33(1H，m，H-3)，5.08(1H，dd，J=6.0，4.8 Hz，H-4)，3.25(1H，m，H-5)，3.90(1H，d，J=7.8 Hz，H-6)，3.47(1H，s，H-7)，2.47(1H，m，H-9)，4.26(1H，d，J=14.0 Hz，Ha-10)，3.79(1H，d，J=14.0 Hz，Hb-10)；Glcδ：5.00(1H，d，J=8.0 Hz，H-1′)，4.90(1H，dd，J=10.0，8.0 Hz，H-2′)，3.67(1H，m，H-3′)，3.40(1H，m，H-4′)，3.39(1H，m，H-5′)，3.97(1H，d，J=11.4 Hz，Ha-6′)，3.70(1H，m，Hb-6′)；1.70(1H，m，Ha-2″)，1.20(1H，m，Hb-2″)，1.90(1H，m，Ha-3″)，1.40(1H，m，Hb-3″)，1.85(1H，m，Ha-4″)，1.50(1H，m，Hb-4″)，6.78(1H，d，J=16.0 Hz，H-7″)，6.48(1H，d，J=16.0 Hz，H-8″)，5.90(1H，s，H-10″)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：96.0(C-1)，141.9(C-3)，104.8(C-4)，39.2(C-5)，80.0(C-6)，62.6(C-7)，66.6(C-8)，43.7(C-9)，62.1(C-10)；Glcδ：98.3(C-1′)，74.8(C-2′)，75.9(C-3′)，72.1(C-4′)，79.0(C-5′)，63.0(C-6′)；40.3(C-1″)，37.8(C-2″)，19.0(C-3″)，37.2(C-4″)，75.9(C-5″)，80.9(C-6″)，140.9(C-7″)，134.6(C-8″)，155.0(C-9″)，119.1(C-10″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較[6]，確定化合物為天目地黃苷E，從該植物中首次分離得到。

化合物3：白色粉末。ESI-MSm/z405 [M+H]+，結(jié)合1H-NMR和13C-NMR可知其分子式為C17H24O11。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.45(1H，d，J=2.0 Hz，H-1)，5.57(1H，d，J=6.0 Hz，H-3)，5.13(1H，dd，J=6.0，2.0 Hz，H-4)，2.45(1H，d，J=6.3 Hz，Ha-7)，2.30(1H，d，J=6.3 Hz，Hb-7)，2.95(1H，d，J=1.6 Hz，H-9)，1.54(3H，s，H-10)，1.91(3H，s，OAc)；Glcδ：4.71(1H，d，J=7.6 Hz，H-1′)，3.45(1H，m，H-2′)，3.30(1H，m，H-3′)，3.37(1H，m，H-4′)，3.53(1H，m，H-5′)，3.82(1H，m，Ha-6′)，3.70(1H，m，Hb-6′)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：95.7(C-1)，145.4(C-3)，109.2(C-4)，73.8(C-5)，213.3(C-6)，50.1(C-7)，87.7(C-8)，56.2(C-9)，23.1(C-10)；Glcδ：99.6(C-1′)，73.8(C-2′)，77.5(C-3′)，71.7(C-4′)，77.2(C-5′)，61.7(C-6′)；171.6(1-OAc)，25.0(2-OAc)。以上數(shù)據(jù)與已知文獻(xiàn)的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較[7]，確定化合物為6-酮基-8-乙酰鉤果草苷，從該植物中首次分離得到。

化合物4：白色粉末。ESI-MSm/z389 [M+H]+，結(jié)合1H-NMR和13C-NMR可知其分子式為C17H24O10。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.45(1H，d，J=2.0 Hz，H-1)，5.76(1H，d，J=6.0 Hz，H-3)，5.23(1H，dd，J=6.0，2.0 Hz，H-4)，6.07(1H，dd，J=9.0，1.6 Hz，H-6)，5.84(1H，d，J=9.0，3.5 Hz，H-7)，3.26(1H，d，J=2.0 Hz，H-9)，1.40(3H，s，H-10)，2.02(3H，s，OAc)；Glcδ：4.52(1H，d，J=7.6 Hz，H-1′)，3.50(1H，m，2′)，3.56(1H，m，H-3′)，3.23(1H，m，H-4′)，3.37(1H，m，H-5′)，3.75(1H，m，H-6′a)，3.63(1H，m，H-6′b)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：95.0(C-1)，144.1(C-3)，107.8(C-4)，76.3(C-5)，133.9(C-6)，128.8(C-7)，90.7(C-8)，47.3(C-9)，23.5(C-10)；Glcδ：99.3(C-1′)，74.8(C-2′)，77.2(C-3′)，70.8(C-4′)，77.9(C-5′)，62.5(C-6′)；167.2(OAc-1)，25.6(OAc-2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較[7]，確定化合物為6，7-去氫-8-乙酰鉤果草苷，從該植物中首次分離得到。

化合物5：白色粉末。ESI-MSm/z805 [M+Na]+，結(jié)合1H-NMR和13C-NMR可知化合物分子式為C36H46O19。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.20(1H，m，H-1)，6.51(1H，m，H-3)，5.11(1H，m，H-4)，2.51(1H，m，H-5)，4.10(1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，3.67(1H，s，H-7)，2.61(1H，dd，m，H-9)，4.20(1H，d，J=13.4 Hz，Ha-10)，3.85(1H，d，J=13.4 Hz，Hb-10)；Glcδ：4.80(1H，d，J=7.6 Hz，H-1′)，3.25(1H，m，H-2′)，3.43(1H，t，J=9.0 Hz，H-3′)，3.27(1H，m，H-4′)，3.33(1H，m，H-5′)，3.65(1H，m，H-6′a)，3.95(1H，m，H-6′b)；Rhaδ：5.10(1H，m，H-1″)，5.31(1H，m，H-2″)，5.36(1H，m，H-3″)，5.20(1H，t，J=10.0 Hz，H-4″)，4.10(1H，m，H-5″)，1.25(1H，d，J=6.0 Hz，H-6″)，7.27(1H，d，J=2.0 Hz，H-2?)，7.00(1H，d，J=8.6 Hz，H-5?)，7.19(1H，dd，J=2.0，8.6 Hz，H-6?)，7.70(1H，d，J=16.0 Hz，H-7?)，6.47(1H，d，J=16.0 Hz，H-8?)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：95.6(C-1)，142.9(C-3)，103.7(C-4)，37.8(C-5)，85.2(C-6)，60.0(C-7)，66.9(C-8)，43.7(C-9)，61.7(C-10)，Glcδ：100.1(C-1′)，75.3(C-2′)，78.1(C-3′)，72.3(C-4′)，79.0(C-5′)，63.3(C-6′)；Rhaδ：98.2(C-1″)，71.7(C-2″)，71.0(C-3″)，72.5(C-4″)，68.6(C-5″)，18.0(C-6″)，129.3(C-1?)，112.0(C-2?)，151.4(C-3?)，153.8(C-4?)，112.9(C-5?)，124.9(C-6?)，148.0(C-7?)，115.9(C-8?)，168.5(C-9?)；172.0(OCOCH3-1)，21.0(OCOCH3-1)，172.0(OCOCH3-2)，21.0(OCOCH3-2)，56.6(OMe)，56.8(OMe′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較[8]，確定化合物為齒葉玄參苷A，從該植物中首次分離得到。

化合物6：白色粉末。ESI-MSm/z559 [M+Na]+，結(jié)合1H-NMR和13C-NMR可知化合物分子式為C22H32O15。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.40(1H，d，J=5.6 Hz，H-1)，7.50(1H，m，H-3)，3.70(1H，m，H-5)，6.11(1H，dt，J=2.0，5.5 Hz，H-6)，5.70(1H，dt，J=2.0，5.5 Hz，H-7)，3.10(1H，m，H-8)，2.50(1H，m，H-9)，3.90(1H，m，H-10a)，3.80(1H，m，H-10b)；Glcδ：4.70(1H，d，J=8.0 Hz，H-1′)，3.30(1H，m，H-2′)，3.40(1H，m，H-3′)，3.37(1H，m，H-4′)，3.32(1H，m，H-5′)，3.92(1H，m，Ha-6′)，3.75(1H，m，Hb-6′)；Glc 4.36(1H，d，J=7.0 Hz，H-1″)，3.27(1H，m，H-2″)，3.40(1H，m，H-3″)，3.33(1H，m，H-4″)，3.30(1H，m，H-5″)，3.90(1H，dd，J=2.0，12.0 Hz，Ha-6″)，3.70(1H，dd，J=8.5，12.0 Hz，Hb-6″)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)Aglyconeδ：97.7(C-1)，153.3(C-3)，112.1(C-4)，40.7(C-5)，136.0(C-6)，131.8(C-7)，48.9(C-8)，45.3(C-9)，72.5(C-10)，171.0(C-11)；Glcδ：100.3(C-1′)，74.9(C-2′)，78.0(C-3′)，71.9(C-4′)，78.6(C-5′)，62.9(C-6′)；Glcδ：103.9(C-1″)，75.5(C-2″)，78.0(C-3″)，71.7(C-4″)，78.3(C-5″)，62.8(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較[9]，確定化合物為大花木巴戟苷C，從該植物中首次分離得到。

化合物7：白色粉末。ESI-MSm/z543 [M+Na]+，結(jié)合1H-NMR和13C-NMR可知化合物分子式為C22H32O14。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.50(1H，d，J=2.0 Hz，H-1)，7.60(1H，s，H-3)，3.09(1H，m，H-5)，1.68(2H，m，H-6)，3.85(1H，m，Ha-7)，4.37(1H，m，Hb-7)，5.51(1H，m，H-8)，2.70(1H，m，H-9)，5.30(1H，m，Ha-10)，5.28(1H，m，Hb-10)；Glcδ：4.70(1H，d，J=7.0 Hz，H-1′)，3.22(1H，m，H-2′)，4.45(1H，m，H-3′)，3.30(1H，m，H-4′)，3.21(1H，m，H-5′)，3.60(1H，m，Ha-6′)，3.55(1H，m，Hb-6′)；Glc 4.56(1H，d，J=7.0 Hz，H-1″)，3.30(1H，m，H-2″)，3.32(1H，m，H-3″)，3.40(1H，m，H-4″)，3.29(1H，m，H-5″)，3.66(1H，m，Ha-6″)，3.57(1H，m，Hb-6″)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：98.3(C-1)，154.5(C-3)，105.5(C-4)，28.8(C-5)，26.0(C-6)，70.0(C-7)，133.8(C-8)，44.0(C-9)，121.0(C-10)，169.2(C-11)；Glcδ：100.1(C-1′)，74.6(C-2′)，87.8(C-3′)，70.3(C-4′)，78.0(C-5′)，62.9(C-6′)；Glcδ：105.0(C-1″)，75.8(C-2″)，78.3(C-3″)，71.8(C-4″)，78.6(C-5″)，62.6(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較[10]，確定化合物為3′-O-β-D-吡喃葡萄糖基獐牙菜苷，從該植物中首次分離得到。

化合物8：白色粉末。ESI-MSm/z683 [M+Na]+，結(jié)合1H-NMR和13C-NMR可知化合物分子式為C29H40O17。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.55(1H，d，J=2.6 Hz，H-1)，6.30(1H，dd，J=6.0，2.6 Hz，H-3)，5.00(1H，dd，J=6.0，3.0 Hz，H-4)，3.00(1H，dd，J=9.0，2.0 Hz，H-5)，5.10(1H，m，H-6)，2.31(1H，m，Ha-7)，2.10(1H，m，Hb-7)，2.63(1H，dd，J=10.0，2.6 Hz，H-9)，1.46(3H，s，H-10)；Glcδ：4.66(1H，d，J=8.0 Hz，H-1′)，3.20(1H，dd，J=9.0，8.0 Hz，H-2′)，3.38(1H，t，J=9.0 Hz，H-3′)，3.28(1H，m，H-4′)，3.30(1H，m，H-5′)，3.90(1H，m，Ha-6′)，3.68(1H，m，Hb-6′)；7.70(1H，d，J=2.0 Hz，H-2″)，7.22(1H，d，J=8.6 Hz，H-5″)，7.70(1H，dd，J=8.6，2.0 Hz，H-6″)，3.88(1H，s，OMe)；Glcδ：5.08(1H，d，J=7.2 Hz，H-1?)，3.53(1H，dd，J=9.0，8.0 Hz，H-2?)，3.50(1H，t，J=9.0 Hz，H-3?)，3.39(1H，t，J=9.0 Hz，H-4?)，3.45(1H，m，H-5?)，3.88(1H，m，Ha-6?)，3.69(1H，m，Hb-6?)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：93.6(C-1)，141.5(C-3)，104.7(C-4)，39.8(C-5)，81.0(C-6)，47.9(C-7)，79.6(C-8)，52.0(C-9)，26.2(C-10)；Glcδ：99.6(C-1′)，75.0(C-2′)，78.7(C-3′)，72.0(C-4′)，78.1(C-5′)，62.9(C-6′)；125.8(C-1″)，114.4(C-2″)，150.7(C-3″)，152.6(C-4″)，116.6(C-5″)，124.6(C-6″)，167.8(C-7″)，56.9(OMe)；Glcδ：101.3(C-1?)，74.8(C-2?)，78.3(C-3?)，71.6(C-4?)，78.0(C-5?)，62.6(C-6?)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較[11]，確定化合物為地黃新苷B，從該植物中首次分離得到。

化合物9：白色粉末。ESI-MSm/z697 [M+Na]+，結(jié)合1H-NMR和13C-NMR可知化合物分子式為C30H42O17。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.55(1H，d，J=2.6 Hz，H-1)，6.30(1H，dd，J=6.0，2.6 Hz，H-3)，5.00(1H，dd，J=6.0，3.0 Hz，H-4)，3.00(1H，dd，J=9.0，2.0 Hz，H-5)，5.10(1H，m，H-6)，2.31(1H，m，Ha-7)，2.10(1H，m，Hb-7)，2.63(1H，dd，J=10.0，2.6 Hz，H-9)，1.46(3H，s，H-10)；Glcδ：4.66(1H，d，J=8.0 Hz，H-1′)，3.20(1H，dd，J=9.0，8.0 Hz，H-2′)，3.38(1H，t，J=9.0 Hz，H-3′)，3.28(1H，m，H-4′)，3.30(1H，m，H-5′)，3.90(1H，m，Ha-6′)，3.68(1H，m，Hb-6′)；7.70(1H，d，J=2.0 Hz，H-2″)，7.22(2H，s，H-2″和H-6″)，3.88(6H，s，OMe)；Rhaδ：5.35(1H，d，J=1.2 Hz，H-1?)，4.15(1H，m，H-2?)，3.90(1H，m，H-3?)，3.45(1H，m，H-4?)，4.25(1H，m，H-5?)，1.20(3H，d，J=6.0 Hz，H-6?)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：93.6(C-1)，141.5(C-3)，104.7(C-4)，39.8(C-5)，81.0(C-6)，47.9(C-7)，79.6(C-8)，52.0(C-9)，26.2(C-10)；Glcδ：99.6(C-1′)，75.0(C-2′)，78.7(C-3′)，72.0(C-4′)，78.1(C-5′)，62.9(C-6′)；125.8(C-1″)，114.4(C-2″)，150.7(C-3″)，152.6(C-4″)，116.6(C-5″)，124.6(C-6″)，167.8(C-7″)，56.9(OMe)；Rhaδ：101.3(C-1?)，72.8(C-2?)，72.3(C-3?)，73.6(C-4?)，71.5(C-5?)，18.0(C-6?)。以上數(shù)據(jù)與已知文獻(xiàn)的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較[11]，確定化合物為地黃新苷C，從該植物中首次分離得到。

4.2 體外抑制腫瘤細(xì)胞增殖活性結(jié)果

僅化合物1、4、5、8對(duì)人源肝癌細(xì)胞HepG2增殖呈現(xiàn)出一定的抑制活性，其IC50值分別為13.6、12.0、7.5、9.0 μmol·L-1，陽性藥紫杉醇IC50值為0.003 μmol·L-1。

5 結(jié)果和討論

本文對(duì)條葉龍膽進(jìn)行化學(xué)成分和生物活性研究，并且首次從該植物中分離得到9個(gè)環(huán)烯醚萜苷類化合物，其中4個(gè)化合物具有選擇性抑制HepG2增殖活性。本研究結(jié)果對(duì)于從條葉龍膽中尋找抗腫瘤先導(dǎo)化合物具有一定的參考意義。

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IridoidsfromGentianamanshuricaandTheirAnti-tumorActivity

ZHOU Yanli，ZHANG Yan*，LI Shuoxi，LI Yingqin，LI Boqian，WANG Aili

(JiamusiCollege，HeilongjiangUniversityofChineseMedicine，Jiamusi154007，China)

Objective:To study the iridoids inGentianamanshuricaand their cytotoxic activity aiming at the new anti-tumor drug discovery.MethodsPhytochemical investigation and cytotoxic activity were carried out.ResultsNine iridoids were obtained and elucidated as rehmachingiioside A (1)，rehmachingiioside E (2)，6-keto-8-acetylharpagide (3)，6，7-dehydro-8-acetylharpagide (4)，scrodentoside A (5)，morinlongoside C (6)，3′-O-β-D-glucopyranosyl sweroside (7)，rehmaglutoside B (8)，and rehmaglutoside C (9).Among them，compounds 1，4，5，and 8 exhibited anti-tumor activity against HepG2 cell with IC50values of 13.6，12.0，7.5，and 9.0 μmol·L-1，respectively.ConclusionThe compound 1-9 were isolated fromG.manshuricafor the first time.

Gentianamanshurica；iridoid；anti-tumor activity

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.9.006

黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)?；?201736)

*

張艷，講師，研究方向：中草藥微量活性成分；Tel：(0545)6103257；E-mail:tonyyan20081982@163.com

2017-01-14)