冰凍紅細胞的制備與應用分析

黃飛??譚均強??高炳諫

[摘要] 目的 研究并探討冰凍紅細胞的制備方法及應用價值。 方法 對100份懸浮紅細胞（2016年6月～2017年1月本站采集2～6d內的RH（D）陰性紅細胞16U）標本在不同條件下進行制備，制備方法為甘油化、去甘油化，分別在不同放置時間、不同離心速度下將其制備成冰凍紅細胞，比較加甘油后不同放置時間的甘油殘留量、去甘油化過程中不同離心速度的各項冰凍紅細胞參數(shù)。 結果 加甘油后不同放置時間下，放置30min的標本甘油殘留量明顯低于放置15min的標本（P<0.05）；不同離心速度下，去甘油化后冰凍解凍紅細胞的各項參數(shù)均符合國家質檢標準，離心速度2600轉/min的標本其甘油殘留量、體外溶血率、游離血紅蛋白均明顯低于離心速度3300轉/min的標本（P<0.05），且其紅細胞回收率明顯高于離心速度3300轉/min的標本（P<0.05）。 結論 對紅細胞標本進行甘油化、去甘油化制備，可獲得優(yōu)質冰凍紅細胞，有利于保證輸血的安全性，緩解血液供需矛盾。

[關鍵詞] 冰凍紅細胞；制備；去甘油化；輸血

[中圖分類號] R457.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）11-146-03

Preparation and application of frozen red blood cells

HUANG Fei TAN Junqiang GAO Bingjian

Yunfu Central Blood Station，Yunfu 445300，China

[Abstract] Objective To study and explore the preparation method and application value of frozen red blood cells. Methods 100 suspension with white and red cell specimens （RH（D） negative erythrocyte 2-6d（16U） were collected in this station from June 2016 to January 2017） were prepared under different conditions.The frozen red blood cells were preparated by the preparation method of glycerol and glycerol，respectively in different time and different centrifugal speed under，at different times after the addition of glycerol for glycerol residues，red blood cell the parameters of different centrifugal speed in the process of freezing glycerol. Results The time of different placement with glycerol，glycerol residues placed specimens of 30min were significantly lower than that of 15min（P<0.05） were placed.Different centrifugal speeds，deglycerolizing after the parameters of frozen thawing red blood cell were in line with national quality inspection standards，centrifugal speed 2600rpm /min were the glycerol residue and residual white blood cells in vitro，and free hemoglobin were significantly lower than that of centrifugal speed 3300rpm/min samples （P<0.05），and the recovery rate of RBC was significantly higher than that of centrifugal speed 3300rpm/min samples （P<0.05）. Conclusion The red blood cells can be obtained by high quality frozen red blood cells.It is helpful to ensure the safety of blood transfusion and relieve the contradiction between supply and demand of blood.

[Key words] Frozen red blood cells；Preparation；De glycerol；Blood transfusion

冰凍紅細胞是利用冰凍保護劑將紅細胞保存于低溫環(huán)境下，冰凍紅細胞的保存時間長，且能夠維持紅細胞原有的ATP及2，3-dpg水平，可有效解決患者急救輸血，同時，自身輸血還可防止輸血反應與輸血相關疾病的傳播。但值得注意的是，紅細胞的代謝速度受保存溫度的影響。冰凍紅細胞是緩解血源供需矛盾、應對突發(fā)事件時采取的重要措施，而關于如何制備冰凍紅細胞關系到冰凍解凍紅細胞的質量[1-2]，本次研究采用ACP125全自動血細胞處理儀對冰凍紅細胞進行甘油化以及去甘油化制備，并對其冰凍解凍紅細胞質量進行分析后發(fā)現(xiàn)，各項參數(shù)均符合質量標準，現(xiàn)就研究進行報道。

1 資料與方法

1.1 一般資料

懸浮紅細胞標本共100袋（每袋2U），北京博德桑特輸采血器材科技開發(fā)中心生產(chǎn)的57%甘油160mL、9%氯化鈉溶液80mL，山東威高集團醫(yī)用高分子制品股份有限公司生產(chǎn)的0.9%氯化鈉溶液四聯(lián)袋750、200mL轉移袋，山東威高集團醫(yī)用高分子制品股份有限公司生產(chǎn)的1000mL轉移袋，美國血液技術公司生產(chǎn)的配套甘油化耗材LN225、去甘油化耗材LN235。

1.2 儀器

美國血液技術公司生產(chǎn)的ACP125全自動血細胞處理儀，德國賽默飛世爾公司生產(chǎn)的906-ULTS零下80℃冰箱，德國賽默飛世爾生產(chǎn)的Cryfuge 6000i大容量冷凍離心機，江蘇醫(yī)用儀器廠生產(chǎn)的37℃恒溫水浴箱，德國費森尤斯生產(chǎn)的無菌接口機，日本Sysmex KX-21全自動血球計數(shù)儀，長春迪瑞公司生產(chǎn)的CS-600B自動化生化分析儀，上海躍進醫(yī)療器械廠生產(chǎn)的Xk24-106007恒溫培養(yǎng)箱，美墨爾特（Memmert）生產(chǎn)的低溫細菌培養(yǎng)箱。

1.3 方法

在不同條件下（加甘油后放置15、30min，去甘油化過程中離心速度分別為2600、3300轉/min，每種條件下各50份紅細胞標本），對200份懸浮紅細胞標本進行制備，將其制備成冰凍紅細胞。

紅細胞甘油化：取懸浮紅細胞標本血袋，將1000mL轉移袋與無菌接口機連接，將血袋倒置，待血液流入1000mL轉移袋后與LN225甘油化耗材實施無菌接駁，將ACP125全自動血細胞分析儀啟動，選擇甘油化模式，加入復方甘油溶液，按照預設流速，經(jīng)血液泵將甘油緩慢置入血袋，并輕輕震蕩，使其混勻。

紅細胞去甘油化：待甘油與紅細胞在血袋中混勻后，在室溫下放置15或30min，再采取2600或3300轉/min的離心速度進行離心處理，將未吸收甘油去除，再將冰凍紅細胞置入專用紙盒，置于零下80℃冰箱中保存；2h后，取冰凍紅細胞置于37℃恒溫水浴箱中，使其復融，再將無菌接口機與LN235去甘油化耗材無菌接駁，將ACP125全自動血細胞分析儀啟動，選擇去甘油化模式，安裝好去甘油化管道，將血袋固定于細胞搖床，加入9%氯化鈉溶液和0.9%氯化鈉溶液，按照儀器說明書進行稀釋和洗滌，將冰凍紅細胞制備成冰凍解凍去甘油化紅細胞。

冰凍解凍去甘油化紅細胞制備完成后，取5mL紅細胞標本進行檢測，對其質量達標情況進行分析，如甘油殘留量不足10g/L、體外溶血率不足50%、游離血紅蛋白不足1.0g/L、紅細胞回收率達到80%，即可判斷為質量達標[3]。

1.4 觀察指標

比較加甘油后不同放置時間（15、30min）的甘油殘留量、去甘油化過程中不同離心速度（2600、3300轉/min）的各項冰凍紅細胞參數(shù)（甘油殘留量、體外溶血率、游離血紅蛋白、紅細胞回收率）。

1.5 統(tǒng)計學處理

數(shù)據(jù)處理采用SPSS19.0軟件進行處理，計量資料以（）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 加甘油后不同放置時間的甘油殘留量比較

加甘油后不同放置時間下，放置30min的標本甘油殘留量明顯低于放置15min的標本（P<0.05）

2.2 去甘油化不同離心速度下紅細胞的各項參數(shù)比較

不同離心速度下，去甘油化后冰凍解凍紅細胞的各項參數(shù)均符合國家質檢標準，離心速度2600轉/min的標本其甘油殘留量、體外溶血率、游離血紅蛋白均明顯低于離心速度3300轉/min的標本（P<0.05），且其紅細胞回收率明顯高于離心速度3300轉/min的標本（P<0.05）。

3 討論

紅細胞的代謝速度與保存溫度密切相關，保存溫度越低，紅細胞代謝速度越慢，故在低溫下保存紅細胞可起到延長紅細胞保存時間的作用[4-5]。冰凍紅細胞具有保存時間長、生理形態(tài)和生化特性接近正常液態(tài)紅細胞等優(yōu)點，臨床上常將冰凍紅細胞應用于部分血型稀有患者的輸血治療中[6-8]。冰凍紅細胞主要是通過特殊方法進行制備，既需要保證紅細胞處于冰凍狀態(tài)，延長保存時間，又需避免紅細胞膜及其內部結構不受破壞，因此，冰凍紅細胞的制備方法及過程十分重要，關系到冰凍紅細胞的質量以及臨床輸血安全性[9-12]。

甘油法是目前臨床制備冰凍紅細胞的主要方法，主要是通過在紅細胞中加入甘油，使甘油充分發(fā)揮防凍作用，從而避免紅細胞內部結構在低溫下受到破壞[13-14]。甘油法制備的冰凍紅細胞在臨床應用前需進行去甘油化，主要是將冰凍紅細胞加入至37℃恒溫水浴箱中使其復融，再采用氯化鈉溶液進行洗滌，可有效去除血袋中的甘油，實現(xiàn)紅細胞有效輸注[15-16]。本次研究采用甘油法對紅細胞進行冰凍制備，再對其進行去甘油化復融后發(fā)現(xiàn)，不同放置時間及離心速度下去甘油化后冰凍解凍紅細胞的各項參數(shù)均符合國家質檢標準，說明對紅細胞采用甘油法進行制備，可獲得高質量的冰凍紅細胞。

在本次研究結果中，放置30min的標本甘油殘留量明顯低于放置15min的標本（P<0.05），而離心速度2600轉/min的標本其甘油殘留量、體外溶血率、游離血紅蛋白均明顯低于離心速度3300轉/min的標本（P<0.05），其紅細胞回收率明顯高于離心速度3300轉/min的標本（P<0.05），這提示我們在采取甘油法制備冰凍紅細胞時需嚴格把握放置時間和離心速度，加甘油后放置30min可使甘油充分與紅細胞融合，而在去甘油化復融解凍時，采取2600轉/min的速度進行離心處理，可通過降低離心力，確保紅細胞不受破壞[17-19]。

綜上所述，對紅細胞標本進行甘油化、去甘油化制備，可獲得優(yōu)質冰凍紅細胞，有利于保證輸血的安全性，緩解血液供需矛盾。

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（收稿日期：2017-03-30）