真菌毒素的危害、限量標(biāo)準(zhǔn)及快速定量檢測(cè)方法

□ 上海飛測(cè)生物科技有限公司 供稿

真菌毒素的危害、限量標(biāo)準(zhǔn)及快速定量檢測(cè)方法

□ 上海飛測(cè)生物科技有限公司 供稿

一種真菌可以產(chǎn)生多種不同的真菌毒素，不同的真菌亦可產(chǎn)生相同的真菌毒素。目前已知能產(chǎn)生真菌毒素的真菌有150余種，產(chǎn)生的真菌毒素約有300種，其中包括黃曲霉毒素、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮以及其衍生物類毒素、A型單端孢霉烯族、B型單端孢霉烯族等。一般真菌的生長(zhǎng)和繁殖都需要一定的溫、濕度條件，最適宜生長(zhǎng)溫度一般為20～30℃。當(dāng)真菌處于干燥、低溫或與其他真菌競(jìng)爭(zhēng)的應(yīng)激情況時(shí)，就會(huì)產(chǎn)生霉菌毒素，由于真菌生長(zhǎng)有一定的地域性，因此，不同區(qū)域占優(yōu)勢(shì)的真菌毒素種類也不同。

真菌毒素的分類

主要的真菌毒素有以下幾種：

DON（嘔吐毒素）

DON主要以玉米污染最為嚴(yán)重，其次為小麥麩，小麥及菜棉籽粕中的檢出率顯著低于前者。抽樣檢測(cè)中配合飼料檢出率100%，仔豬配合飼料超標(biāo)率46%，肉大雞配合飼料未見超標(biāo)，并且禽類對(duì)DON耐受性較強(qiáng)，而豬較敏感，仔豬尤為如此。

AFT（黃曲霉毒素）

蛋白原料易受到霉菌的感染，如花生、大豆、棉籽粕、苜蓿草等。花生極易感染黃曲霉菌，因此在使用花生麩時(shí)應(yīng)嚴(yán)格檢測(cè)其中黃曲霉毒素的含量。另外，玉米中也較易感染黃曲霉毒素。

在全國(guó)內(nèi)抽樣的1000份飼料中，黃曲霉毒素B1含量由高到低依次為棉粕、家禽配合飼料、菜粕、玉米、仔豬配合飼料、麥麩、豆粕、魚粉和小麥。我國(guó)飼料普遍受到黃曲霉毒素B1的污染，其含量在不同區(qū)域和飼料種類間存在差異。

ZEN（玉米赤霉烯酮）

玉米赤霉烯酮對(duì)畜禽的毒副作用主要表現(xiàn)為雌性激素亢進(jìn)，能引起豬和牛的不孕或流產(chǎn)。豬對(duì)霉菌毒素敏感，特別是哺乳或哺乳仔豬。在所有家畜中，豬對(duì)ZEN最為敏感，飼料中含有1mg/kg以上的ZEN就足以引起豬的雌激素中毒癥，玉米赤霉烯酮主要污染玉米，也可污染小麥、大麥、燕麥和小米等。

OTA（赭曲霉毒素）

OTA主要產(chǎn)生菌是赭曲霉、純綠青霉，這類產(chǎn)毒素的真菌廣泛生棲在玉米、大麥、小麥、花生、大豆、高粱、蕎麥、大米、棉籽以及某些青干飼草中，動(dòng)物食用被其污染的原料生產(chǎn)的飼料，可引起中毒。OTA對(duì)食品污染的范圍較廣，包括谷物、咖啡豆、豆類、可可豆、葡萄干、啤酒和葡萄汁等。

FB1（伏馬毒素）

伏馬毒素(Fumonisins)是一類霉菌毒素，又名煙曲霉毒素，廣泛存在于玉米、小麥、大米等糧谷類食品中，對(duì)人體健康有潛在的危害，在食品霉菌污染方面僅次于黃曲霉毒素。

TS-2（T-2毒素）

T-2毒素是單端孢霉烯族毒素中毒性最強(qiáng)的一種，廣泛存在于自然界中。T-2毒素具有致畸性和弱致癌性，主要損傷動(dòng)物機(jī)體的造血器官(抑制骨髓和脾的再生造血功能)、免疫器官(降低免疫功能)、消化系統(tǒng)(引起消化道出血壞死)、神經(jīng)系統(tǒng)及生殖系統(tǒng)等。

真菌毒素對(duì)動(dòng)物和人的危害

真菌毒素類是由真菌類產(chǎn)生的具有毒性的次生代謝物，廣泛污染農(nóng)作物、食品及飼料等各種植物性產(chǎn)品(李鵬等，2005)。真菌毒素的特點(diǎn)主要有：普遍性、微量性、蓄積性、隱蔽性、協(xié)同性。危害人類健康的真菌毒素主要來源于麥角菌、曲霉、青霉、鐮刀菌和鏈格孢的次生代謝產(chǎn)物(D'Mello，2003)。產(chǎn)毒真菌類污染食品后，可使食用者中毒，有些毒素甚至可以誘導(dǎo)基因突變和產(chǎn)生致癌性作用，有些則顯示出對(duì)某些特定器官的毒性。

中國(guó)及主要國(guó)家對(duì)真菌毒素的限量標(biāo)準(zhǔn)

中國(guó)對(duì)食品中真菌毒素限量標(biāo)準(zhǔn)

中國(guó)對(duì)飼料中中真菌毒素限量標(biāo)準(zhǔn)

其他國(guó)家和組織真菌毒素限量標(biāo)準(zhǔn)

加拿大CFIA對(duì)飼料中真菌毒素的限量規(guī)定

歐盟對(duì)飼料真菌毒素的限量標(biāo)準(zhǔn)

真菌毒素常用檢測(cè)方法

目前檢測(cè)霉菌毒素的方法主要分為兩大類：確認(rèn)方法和快速方法。確認(rèn)方法主要基于理化儀器設(shè)備，如薄層色譜法(TLC)、氣相色譜法(GC)、高壓液相色譜法(HPLC)和各種聯(lián)用技術(shù)如氣質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)、液質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS)等；快速方法主要是基于免疫化學(xué)基礎(chǔ)上的免疫分析方法，如免疫親合柱-熒光檢測(cè)(IAC-FLD)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELlSA)和膠體金免疫層析方法等。

酶聯(lián)免疫吸附法ELISA和膠體金快速檢測(cè)卡是企業(yè)常用的快速檢測(cè)方法，但也均存在各自的優(yōu)缺點(diǎn)：ELISA方法的靈敏度相對(duì)較高，且能定量檢測(cè)，但操作的過程相對(duì)復(fù)雜，步驟較多，檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，對(duì)環(huán)境和人員要求高，環(huán)境和基質(zhì)干擾嚴(yán)重，且需要使用標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)操作人員危害比較大；膠體金檢測(cè)卡可以滿足現(xiàn)場(chǎng)快速的要求，能在5～10min內(nèi)快速測(cè)定，但是只能定性，且靈敏度較低，肉眼觀察主觀性較強(qiáng)，重復(fù)性差。

圖1 熒光微球

上海飛測(cè)黃曲霉毒素FPOCT快速定量檢測(cè)方法

上海飛測(cè)生物科技有限公司基于領(lǐng)先的熒光定量FPOCT技術(shù)平臺(tái)，開發(fā)出黃曲霉毒素?zé)晒舛靠焖贆z測(cè)系統(tǒng)，結(jié)合了膠體金快速、酶聯(lián)免疫定量以及色譜法準(zhǔn)確的特點(diǎn)，僅需8min即可快速準(zhǔn)確定量地測(cè)定出糧油谷物飼料中的黃曲霉毒素，靈敏度高（0.5ppb），線性范圍寬（1～75ppb），結(jié)果高度符合國(guó)標(biāo)法，為黃曲霉毒素的快速檢測(cè)和控制提供了一種全新的技術(shù)手段。

上海飛測(cè)黃曲霉毒素FPOCT快速定量檢測(cè)原理

將樣品滴加在加樣區(qū)時(shí)，樣品中的待測(cè)物與結(jié)合墊中的熒光微球標(biāo)記抗體結(jié)合并通過毛細(xì)作用向前層析，當(dāng)達(dá)到檢測(cè)區(qū)后，檢測(cè)線T線上固定的抗原與剩余的部分熒光微球標(biāo)記抗體結(jié)合，檢測(cè)線T線上結(jié)合的熒光微球標(biāo)記抗體的量與樣品中待測(cè)物的量成反比，質(zhì)控線C線結(jié)合的熒光標(biāo)記物樣品中待測(cè)物的量無關(guān)，其它熒光標(biāo)記物繼續(xù)層析達(dá)到吸收區(qū)。層析結(jié)束后，采用熒光讀數(shù)儀的讀取T線和C線的熒光強(qiáng)度并計(jì)算T/C值，通過儀器內(nèi)置的標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出樣品中待測(cè)物的含量。

圖2 熒光微球標(biāo)記抗體

圖3 熒光試紙條

上海飛測(cè)黃曲霉毒素FPOCT快速定量檢測(cè)方法與其他方法學(xué)性能比較

上海飛測(cè)黃曲霉毒素FPOCT快速定量檢測(cè)方法的特點(diǎn)

◆8min快速準(zhǔn)確定量： 集膠體金快速檢測(cè)、酶聯(lián)免疫定量檢測(cè)、色譜質(zhì)譜準(zhǔn)確檢測(cè)的特點(diǎn)于一身，可在8min內(nèi)實(shí)現(xiàn)黃曲霉毒素的快速準(zhǔn)確定量測(cè)定。

◆小巧便攜：既可用于實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)，也可用于收糧現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。

◆內(nèi)置定量標(biāo)準(zhǔn)曲線：儀器內(nèi)置標(biāo)準(zhǔn)曲線，無需檢測(cè)時(shí)再做標(biāo)準(zhǔn)曲線，既節(jié)省了成本，也避免了操作人員與霉菌毒素的接觸，保障操作人員的安全。

◆隨到隨檢：對(duì)檢測(cè)樣本量無要求，既可單個(gè)或少量樣本隨到隨檢，也可大量樣本同時(shí)檢測(cè)，檢測(cè)成本無區(qū)別。

◆基質(zhì)干擾?。夯跁r(shí)間分辨熒光技術(shù)原理，有效降低基質(zhì)干擾，既適用于小麥、玉米、高粱等原料檢測(cè)，也可對(duì)DDGS、麩皮、粕類等特殊樣本檢測(cè)，無需對(duì)提取液進(jìn)行任何pH的調(diào)節(jié)，操作方便，結(jié)果準(zhǔn)確。

◆操作簡(jiǎn)便：樣品提取完后僅需一步加樣即可，操作及其簡(jiǎn)便和人性化，操作人員僅需短期培訓(xùn)就能熟練掌握。

◆遠(yuǎn)程網(wǎng)絡(luò)支持：儀器可通過網(wǎng)絡(luò)自動(dòng)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線讀取、軟件升級(jí)、問題故障診斷、質(zhì)量控制等。

◆數(shù)據(jù)上傳及溯源管理：熒光定量分析儀具備數(shù)據(jù)無線上傳的功能，可根據(jù)客戶的需求定制開發(fā)相應(yīng)的數(shù)據(jù)管理和溯源管理系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)公司總部對(duì)各分公司、上級(jí)監(jiān)管部門對(duì)下級(jí)監(jiān)管部門或者監(jiān)管部門對(duì)各監(jiān)管對(duì)象檢測(cè)數(shù)據(jù)的實(shí)時(shí)掌握和分析。

◆性價(jià)比高：花膠體金試紙條的價(jià)格，獲得色譜質(zhì)譜檢測(cè)的質(zhì)量和結(jié)果，并且節(jié)省人力物力，大幅降低檢測(cè)費(fèi)用。