越鞠丸對大鼠實驗性急性心肌缺血的保護作用

胡 蓉 王金艷 周 爽

1.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，四川 成都 610036；2. 四川省中醫(yī)醫(yī)院，四川 成都 610036；3.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610036

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實驗研究

越鞠丸對大鼠實驗性急性心肌缺血的保護作用

胡 蓉1,2王金艷3周 爽3

1.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，四川 成都 610036；2. 四川省中醫(yī)醫(yī)院，四川 成都 610036；3.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610036

目的：觀察越鞠丸對大鼠急性心肌缺血的影響，證實其對心肌缺血的保護作用。方法：將60只大鼠隨機分為6組，每組10只，分別為陰性對照組、模型組、地奧心血康組、越鞠丸組(10、5、2.5g/kg)。尾靜脈注射垂體后葉素(Pit)誘導(dǎo)大鼠急性心肌缺血模型，檢測模型大鼠心電圖(ECG)、血清乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性。結(jié)果：越鞠丸10、5、2.5 g/kg可明顯降低Pit誘導(dǎo)心肌缺血模型大鼠ECG的ST段T波的抬高幅度(P<0.05)、降低血清中LDH、CK的活性(P<0.05)，同時升高血清中SOD及GSH-Px的活性(P<0.05)。結(jié)論：越鞠丸對大鼠急性心肌缺血損傷具有明顯保護作用，其機理可能與提高心肌組織抗氧化能力有關(guān)。

越鞠丸；心肌缺血；垂體后葉素；抗氧化能力

冠心病又稱缺血性心臟病或冠狀動脈粥樣硬化性心臟病，多由冠狀動脈的管壁狹窄，甚至閉塞，從而導(dǎo)致心肌的血流量減少，供氧不足，產(chǎn)生胸悶，胸部刺痛，心悸不寧等癥狀。屬于中醫(yī)學(xué)“厥心痛”、“胸痹”、“真心痛”等范疇，多因情志不遂、肝氣郁結(jié)，而致血、痰、火、濕、食諸郁，脈絡(luò)瘀阻、不通則痛，氣滯、血瘀是本病的主要病理因素[1]。越鞠丸又名穹術(shù)丸，由香附、川芎、蒼術(shù)、梔子、神曲同等份組成，具有行氣解郁之功效，主治六郁證。趙含森等[2]用越鞠丸加減治療心絞痛，獲得良好的療效；高輝遠[3]運用越鞠丸治療冠心病，療效明顯；周迎春等[4]用越鞠丸治療心肌梗死大鼠，發(fā)現(xiàn)其具有與卡托普利相近的抗心室重構(gòu)的作用，但其具體作用機制還有待進一步研究。筆者觀察越鞠丸對大鼠急性心肌缺血的保護作用，現(xiàn)報告如下。

1 材料與儀器

1.1 實驗動物 SD大鼠，雌雄各半，體重180～220g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SYXK(川)2011-049。

1.2 材料 越鞠丸(批號：20150424，北京同仁堂制藥有限公司)；地奧心血康膠囊(批號：1007113，成都地奧集團)；烏拉坦(批號：20100426，國藥集團化學(xué)試劑有限公司)，垂體后葉素(規(guī)格：6U/mL)。

1.3 儀器 BL-420生物機能實驗系統(tǒng)(泰盟)，Thermo低溫高速離心機(美國賽默飛世爾科技有限公司)，水恒溫儀(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)，全自動酶標(biāo)儀(美國賽默飛世爾科技有限公司)等。

2 方法

2.1 實驗分組及給藥 取心電圖檢測合格的大鼠60只，雌雄各半，隨機分為6組，即：陰性對照組、模型對照組、陽性對照組(地奧心血康膠囊5 g/kg)、越鞠丸高(10g/kg)、中(5g/kg)、低(2.5g/kg)3個劑量組，每組10只。各組動物每天灌胃給藥相應(yīng)藥物1次，連續(xù)5d，陰性對照組和模型組給予等體積生理鹽水。

2.2 越鞠丸對Pit誘發(fā)大鼠心肌缺血的保護作用 末次給藥30min后，腹腔注射20%烏拉坦0.5mL/100g麻醉，并將大鼠固定，取仰臥位，針狀電極小心刺入四肢皮下，測定心電圖，穩(wěn)定30min后除陰性對照但外，各組動物分別經(jīng)尾靜脈注射垂體后葉素(Pit)2U/kg，10s內(nèi)完成推注，記錄注射Pit后15、30、60、120、300s的心電圖與心率，注射30min后股動脈取血，離心，測定血清中LDH、CK、SOD、GSH-Px的活性[5-8]。

3 結(jié)果

3.1 越鞠丸對Pit誘發(fā)急性心肌缺血模型大鼠ECG的影響 尾靜脈注射Pit后，模型組大鼠各時間點ST段T波抬高明顯，與陰性對照組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，表明模型制作成功[9]。越鞠丸10、5、2.5 g/kg劑量組對ST段T波的抬高具有不同程度的抑制作用，與模型組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表1。

組別劑量/g·kg-10s15s30s60s120s300s陰性對照組-0.014±0.0050.013±0.0070.014±0.0120.012±0.0130.014±0.0090.009±0.012模型組-0.019±0.0120.115±0.047**0.122±0.053**0.085±0.053**0.064±0.042**0.066±0.047**陽性對照組50.021±0.0140.052±0.038#0.048±0.038#0.032±0.028#0.031±0.021#0.017±0.013##越鞠丸低劑量組2.50.014±0.0080.072±0.0530.068±0.045#0.052±0.0370.048±0.0270.041±0.032#越鞠丸中劑量組50.017±0.0100.070±0.0470.068±0.056#0.047±0.033#0.038±0.029#0.032±0.015#越鞠丸高劑量組100.014±0.0090.074±0.0650.072±0.0480.060±0.051#0.047±0.034#0.046±0.025#

注：與陰性對照組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05、##P<0.01。

3.2 越鞠丸對Pit誘發(fā)急性心肌缺血模型大鼠心率的影響 與陰性對照組比較，模型組大鼠各時間點心率顯著下降(P<0.05，P<0.01)，越鞠丸10、5、2.5g/kg劑量組與陽性藥物組能不同程度提高Pit所誘導(dǎo)的大鼠心率下降程度，但與模型組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見表2。

表2 越鞠丸對Pit誘導(dǎo)心肌缺血大鼠心率的影響 次/min)

注：與陰性對照組比較，#P<0.05、##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05。

3.3 越鞠丸對Pit誘發(fā)急性心肌缺血模型大鼠血清中LDH、CK、SOD及GSH-Px活性的影響 與陰性對照組比較，模型組大鼠血清中LDH及CK的活性均顯著升高，提示細(xì)胞膜通透性增加，從而導(dǎo)致LDH及CK從細(xì)胞內(nèi)外漏增加，且模型組大鼠血清中SOD及GSH-Px活性顯著降低(P<0.01)。越鞠丸10、5g·kg-1組及地奧心血康組可顯著降低心肌缺血大鼠血清中LDH及CK的活性(P<0.05、0.01)，抑制LDH及CK從細(xì)胞內(nèi)漏出，同時升高血清中SOD及GSH-Px的活性(P<0.05、P<0.01)，提示越鞠丸可通過增強心肌細(xì)胞抗氧化能力對急性缺血心肌產(chǎn)生保護作用，結(jié)果見表3。

組別劑量/g·kg-1LDHU/LCKU/mLSODU/mLGSH-PxU/mL陰性對照組-583.34±68.4372.28±24.76251.43±46.38402.38±38.21模型組-794.37±88.42##112.36±41.27##198.62±42.17##324.27±44.98##陽性對照組5622.17±46.35**80.25±12.47**238.42±36.49*378.44±65.12**越鞠丸低劑量組2.5702.65±66.84*100.26±47.53212.77±79.48347.29±112.43越鞠丸中劑量組5640.62±39.07**82.47±19.57**237.82±56.39**384.92±87.46*越鞠丸高劑量組10652.74±47.53*86.27±21.46*227.43±77.69*370.24±92.45*

注：與陰性對照組比較，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05、**P<0.01。

4 討論

Pit致急性心肌缺血主要是通過其強烈的收縮血管作用，從而使冠狀動脈痙攣，致使心肌供血不足，誘發(fā)ECG異常，主要表現(xiàn)為ST段抬高或低平，T波高聳或低平等。本實驗表明，越鞠丸能明顯對抗Pit造模后大鼠ECG中ST段的抬高，從而減輕心肌缺血所造成的損傷。

LDH、CK廣泛存在于細(xì)胞漿內(nèi)，故心肌細(xì)胞損傷時，細(xì)胞膜通透性增加，漏出細(xì)胞外的LDH和CK增加，從而導(dǎo)致血液中二者含量增加，活性升高。因此，血清中CK和LDH的量與心肌損傷及壞死程度呈正相關(guān)。SOD和GSH-Px能及時清除Pit誘發(fā)心肌缺血所產(chǎn)生的氧自由基，心肌缺血時，該酶的活性降低，導(dǎo)致氧自由基堆積，可轉(zhuǎn)變?yōu)榱u基自由基，后者活性更強，可引起細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能更大的損傷，從而加劇缺血組織的損傷，因此SOD和GSH-Px活性的高低能間接反映機體清除氧自由基的能力。實驗結(jié)果表明，越鞠丸能顯著降低Pit誘導(dǎo)急性心肌缺血模型大鼠血清中LDH、CK的活性，提示越鞠丸對心肌細(xì)胞細(xì)胞膜具有保護作用，從而減少LDH及CK的漏出；血清中SOD和GSH-Px的活性明顯升高，提示越鞠丸可通過提高心肌組織抗氧化能力，保護心肌細(xì)胞膜，進而保護缺血受損的心肌組織[10]。

越鞠丸由香附(醋制)、川芎、梔子(炒)、蒼術(shù)(炒)、六神曲(炒)組成，具有理氣解郁，寬中除滿之功效。方中香附味辛，歸肝、脾經(jīng)，能散能行，具有行氣解郁，調(diào)經(jīng)止痛之功效，為活血調(diào)經(jīng)之要藥；川芎辛溫，歸肝、膽經(jīng)，具有活血行氣，祛風(fēng)止痛之功效；梔子為苦寒之物，歸心、肺、三焦經(jīng)，具有清熱解毒、涼血散瘀之功效；蒼術(shù)辛溫而苦，具有祛風(fēng)散寒，燥濕健脾之功效。全方行氣活血藥與清熱藥相配伍，共同達到行氣活血、通脈止痛的作用。實驗表明越鞠丸能對抗急性心肌缺血大鼠心電圖ST段的抬高，降低模型大鼠血清中LDH、CK活性，升高SOD、GSH-Px的活性，減輕心肌缺血對心臟的傷害。因此，越鞠丸對急性心肌缺血具有良好的保護作用。

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Effect of Yueju Pill on Protective Mechanism of Experimental Rats with Myocardial Ischemia

HU Rong1,2WANG Jinyan3ZHOU Shuang3

1.Affiliated Hospital of Chengdu Traditional Chinese Medical University, Chengdu 610036,China; 2.Sichuan Traditional Chinese Medicine Hospital, Chengdu 610036, China;3. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610036, China

Objective To study the protective effect of Yueju pill on experimental rats with myocardial ischemia (MI). Methods 60 rats were randomly divided into 6 groups, 10 in each group, the control group, the model group, the Diao Xinxuekang capsule group and the Yueju pill group (10、5、2.5g/kg). The MI model was made by iv injection of high dose pituitrin (Pit) in rats. The activities of lactate dehydrogenase (LDH) and creatine kinase (CK) in the serum were measured in rats. The changes of ST wave were determined by electrocardiogram (ECG), and the activities of LDH, CK, superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px) in the serum on the MI model induced by Pit. Results On the MI model induced by Pit in rats, Yueju pill (10 and 5g/kg) markedly decreased the elevation of segment ST of ECG (P<0.05), reduced the activities of LDH and CK, and increased the activities of SOD and GSH-Px in the serum of rats (P<0.05). ConclusionYuejupill exerts significant cardioprotective effects against acute ischemic myocardial injury in rats, likely that it could enhance anti-oxygen capability and improve energy metabolism in myocardial cells.

Yuju Pill; Myocardial Ischemia (MI); Pituitrin (Pit); Antioxidant Ability

胡蓉(1978-)，女，漢族，碩士研究生，主治醫(yī)師，研究方向為中西醫(yī)結(jié)合防治心血管疾病的研究。E-mail：hurongde11@163.com

R285.5

A

1007-8517(2017)14-0047-03

2017-05-11 編輯：程鵬飛)