固相萃取

周守安++畢思遠(yuǎn)++李曉娜++王炳志++付輝++朱海

摘要：本文建立固相萃取柱富集，采取氣相色譜法測(cè)定地表水中甲拌磷。本方法操作簡(jiǎn)便，萃取時(shí)間短，富集效率高，檢出限低，精密度和加標(biāo)回收率符合分析測(cè)試要求，有機(jī)試劑用量少，適用于地表水中甲拌磷的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：固相萃取；氣相色譜法；地表水；甲拌磷

基金項(xiàng)目：中國(guó)博士后科學(xué)基金資助項(xiàng)目（No.2017M611382）；深圳市技術(shù)攻關(guān)項(xiàng)目（項(xiàng)目名稱：重20160117：水產(chǎn)品藥物殘留快速檢測(cè)關(guān)鍵技術(shù)研發(fā)，No.JSGG20160429184803117）

中圖分類號(hào)：O657.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A DOI編號(hào)： 10.14025/j.cnki.jlny.2017.15.010

甲拌磷是透明的、有輕微臭味的油狀液體，是一種高效高毒的有機(jī)磷殺蟲劑，主要用途是內(nèi)吸殺蟲、殺螨劑，具胃毒、觸殺和熏蒸作用。人體吸入、食入、經(jīng)皮吸收甲拌磷，會(huì)抑制膽堿酯酶活性，造成神經(jīng)生理功能紊亂及肺、肝、腎等損傷，對(duì)人體健康造成嚴(yán)重危害。由于甲拌磷在農(nóng)業(yè)方面使用較多，極易污染水體，對(duì)環(huán)境危害較大，因此準(zhǔn)確可靠測(cè)定水中甲拌磷的含量是有必要的。測(cè)定水中甲拌磷常采用氣相色譜法，但分析前需要對(duì)水樣進(jìn)行富集預(yù)處理[1]。目前，水中有機(jī)物前處理方法有液液萃取法、固相萃取法、頂空進(jìn)樣法和吹掃捕集法等，其中固相萃取法具有操作簡(jiǎn)單、省時(shí)省力、有機(jī)試劑用量少、易于自動(dòng)化和價(jià)格低等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于有機(jī)物的富集預(yù)處理中[2-4]。通過試驗(yàn)研究，采用Waters Oasis HLB固相萃取小柱對(duì)地表水樣品進(jìn)行富集前處理，選用乙酸乙酯作為洗脫劑，以氣相色譜法測(cè)定地表水中的甲拌磷，這個(gè)方法能夠滿足水中痕量甲拌磷的檢測(cè)要求。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1主要試驗(yàn)儀器和試劑

安捷倫7890N氣相色譜儀及化學(xué)工作站，配火焰光度檢測(cè)器（FPD）；美國(guó)?？艫uto SPE-06C型全自動(dòng)固相萃取儀；N-EVAP112型氮吹濃縮儀；Milli-Q A10型超純水機(jī)；Waters Oasis HLB固相萃取小柱。

甲醇、乙酸乙酯均為色譜純；鹽酸、氫氧化鈉和氯化鈉均為分析純；無水硫酸鈉，優(yōu)級(jí)純，于400℃下烘烤4小時(shí)以去除干擾物；100ug/ml甲拌磷標(biāo)準(zhǔn)溶液，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科學(xué)研究所。

1.2氣相色譜條件

色譜柱：DB-1毛細(xì)管色譜柱（30m×0.25mm，250μm）；載氣為高純氮?dú)猓兌取?9.999%），載氣流速為2.0mL/min，尾吹流量20mL/min；進(jìn)樣方式為分流進(jìn)樣，分流比為10∶1，進(jìn)樣量為1μL；進(jìn)樣口溫度200℃；FPD檢測(cè)器溫度250℃；柱溫140℃，保持10分鐘。

1.3水樣采集及處理

將地表水樣沿玻璃采樣瓶壁緩緩倒入瓶中，水樣充滿后液面上不留有空間，塞緊瓶口使水樣處于密封狀態(tài)。水樣采集后最好當(dāng)天分析，如不能及時(shí)分析，應(yīng)將水樣放置在4℃冰箱中避光保存[5]。

將HLB固相萃取小柱安裝在全自動(dòng)固相萃取儀上，依次用5毫升乙酸乙酯、5毫升甲醇和5毫升超純水進(jìn)行淋洗、活化萃取柱。取200毫升經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾后的地表水樣品，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值近中性，開啟全自動(dòng)固相萃取儀真空泵，將水樣在真空作用下以4.0毫升/分鐘的流速通過活化后的HLB固相萃取小柱。水樣過完后繼續(xù)真空抽干萃取柱，去除柱中殘留的水分，用5毫升乙酸乙酯作為洗脫劑反相洗脫固相萃取柱。洗脫液收集后經(jīng)無水硫酸鈉脫水后，放置于氮吹濃縮儀氮?dú)獯祾呓桑靡宜嵋阴ザㄈ葜?.0毫升后，供測(cè)定用[6]。

1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制

準(zhǔn)確移取100μL濃度為100ug/L甲拌磷標(biāo)準(zhǔn)溶液至10毫升容量瓶中，用乙酸乙酯定容至標(biāo)線，配制濃度為1000μg/L甲拌磷標(biāo)準(zhǔn)中間液。用微量注射器準(zhǔn)確吸取1μL、4μL、10μL、20μL、30μL甲拌磷標(biāo)準(zhǔn)中間液到1毫升乙酸乙酯溶液中，配制濃度為1.00μg/L、4.00μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、30.0μg/L的甲拌磷標(biāo)準(zhǔn)系列。

2 結(jié)果與討論

2.1線性回歸方程和方法檢出限

取甲拌磷標(biāo)準(zhǔn)系列按照1.2氣相色譜條件由低濃度到高濃度依次進(jìn)樣分析，測(cè)定相應(yīng)的峰面積。以甲拌磷峰面積為縱坐標(biāo)，其質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，甲拌磷在1.00～30.0μg/L濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=2343X+28.67，相關(guān)系數(shù)r=0.9994。

在上述氣相色譜條件下對(duì)濃度為1.00g/L的甲拌磷溶液平行測(cè)定7次，計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)偏差S分別為0.0319μg/L。檢出限按MDL=S·t（n-1，0.99）計(jì)算，式中t（n-1，0.99）為置信度為99%、自由度為n-1時(shí)t值，n為重復(fù)次數(shù)，當(dāng)n=7時(shí)，t值取3.143，計(jì)算出地表水中甲拌磷的檢出限為0.10μg/L[7]。

2.2洗脫劑的選擇

洗脫液的選擇直接影響到甲拌磷測(cè)定結(jié)果的回收率，本文對(duì)濃度為10μg/L甲拌磷水樣按上述步驟進(jìn)行固相萃取后，分別選用正已烷、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮作為洗脫液，對(duì)萃取柱進(jìn)行洗脫后分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，由以上4種洗脫液對(duì)相同體積、相同濃度和相同萃取條件下測(cè)得甲拌磷的回收率，乙酸乙酯對(duì)HLB固相萃取小柱的洗脫效果最好，甲拌磷測(cè)定結(jié)果的回收率在90%。因此，本文選用乙酸乙酯作為洗脫液。

2.3水樣流速的選擇

本文試驗(yàn)了濃度為10μg/L甲拌磷水樣以2mL/min、4mL/min、6mL/min、8mL/min流速通過活化后的HLB固相萃取小柱，考察甲拌磷在萃取柱上的富集效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，水樣在流速為2mL/min、4mL/min時(shí)甲拌磷回收率較高，但考慮到流速過低會(huì)影響樣品處理時(shí)間，因此本文選擇流速為4mL/min較合適。

2.4色譜圖

本文選用DB-1型毛細(xì)管色譜柱對(duì)濃度為20μg/L的甲拌磷標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行色譜分析，根據(jù)色譜峰保留時(shí)間定性。在上述色譜條件下，甲拌磷出峰較快，峰形較好且靈敏度最高，見圖1。

2.5方法精密度試驗(yàn)

在上述色譜條件下對(duì)濃度為10.0μg/L甲拌磷溶液平行分析7次，計(jì)算其測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.47%，說明本方法具有良好的重現(xiàn)性，見表1。

2.6樣品加標(biāo)回收率試驗(yàn)

用上述方法對(duì)5份地表水樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果每份水樣中均未檢出甲拌磷成分。在上述5份水樣中分別加入一定濃度的甲拌磷標(biāo)準(zhǔn)溶液，按樣品的前處理方法制成待測(cè)溶液，在上述氣相色譜條件下進(jìn)行測(cè)定與分析，考察方法的加標(biāo)回收率（見表2）。甲拌磷的加標(biāo)回收率在93.6%～104.8%間，表明本方法滿足分析測(cè)試要求。

3結(jié)論

本文建立了固相萃取——?dú)庀嗌V法測(cè)定地表水中甲拌磷的方法，實(shí)際操作表明，甲拌磷在1.00～30.0μg/L濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系，加標(biāo)回收率為93.6%～104.8%，7組水樣重復(fù)性RSD低于2%，測(cè)定結(jié)果令人滿意。本方法操作簡(jiǎn)單，富集效率高，檢出限低，精密度和加標(biāo)回收率符合分析測(cè)試要求，有機(jī)試劑用量少，適用于地表水中甲拌磷的測(cè)定。

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作者簡(jiǎn)介：周守安，大專學(xué)歷，研究方向：食品安全檢測(cè)。

通訊作者：畢思遠(yuǎn)，博士，副研究員，碩士生導(dǎo)師，研究方向：食品安全檢測(cè)。