蒲黃中鎂鹽、鈣鹽快速檢查方法的建立

李玉鳳 林春燕 董 媛 李忠瓊 張?chǎng)?/p>

云南省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，云南 昆明 650011

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蒲黃中鎂鹽、鈣鹽快速檢查方法的建立

李玉鳳 林春燕 董 媛 李忠瓊 張?chǎng)?

云南省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，云南 昆明 650011

目的：建立蒲黃中鎂鹽、鈣鹽快速檢查方法。方法：鎂鹽的檢查方法為取供試品將液，加氫氧化鈉試液，不得出現(xiàn)明顯渾濁。鈣鹽的檢查方法為取供試品溶液，加甲基紅指示液2滴，用氨試液中和，再滴加鹽酸至恰呈酸性，加草酸銨試液，不得出現(xiàn)明顯渾濁。結(jié)果：檢查蒲黃134批次，其中4批樣品檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。結(jié)論：采用化學(xué)反應(yīng)方法可快速、簡(jiǎn)便地檢查出蒲黃中是否摻入鎂鹽、鈣鹽。

蒲黃；鎂鹽；鈣鹽；快速檢查

中藥作為我國(guó)的傳統(tǒng)藥物，使用歷史悠久，在疾病的預(yù)防和治療中發(fā)揮著重要作用。但近年來(lái)少數(shù)不法分子和商家向中藥材中添加其他物質(zhì)，對(duì)患者的用藥安全造成了隱患，對(duì)中醫(yī)藥的信譽(yù)造成較大影響，甚至對(duì)其發(fā)展造成一定的阻礙[1-3]。

藥品快速檢驗(yàn)技術(shù)，具有快速、準(zhǔn)確、環(huán)保、易于推廣的特點(diǎn)。其可排除或抑制干擾因素，突顯目標(biāo)成分的特性，以獲得高置信度的結(jié)果?？稍诤?jiǎn)易的實(shí)驗(yàn)室、移動(dòng)實(shí)驗(yàn)室或監(jiān)督現(xiàn)場(chǎng)使用，并在較短時(shí)間內(nèi)完成，無(wú)需苛刻的試驗(yàn)條件[4]。其中理化鑒別技術(shù)具備檢驗(yàn)快速、方法簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確的特點(diǎn)，被廣泛運(yùn)用于快檢中[5-6]。

蒲黃為香蒲科植物水燭香蒲TyphaangustifoliaL．、東方香蒲TyphaorientalisPresl或同屬植物的干燥花粉，收載于《中國(guó)藥典》2015年版一部，具有止血、化瘀、通淋的功效。目前市售蒲黃的摻偽摻假現(xiàn)象嚴(yán)重，嚴(yán)重影響了藥材及飲片質(zhì)量，故對(duì)蒲黃進(jìn)行非法添加檢查具有必要性和重要性。在蒲黃摻偽摻假現(xiàn)象中，違法染色在文獻(xiàn)中多有報(bào)道[7-8]，而增重劑是不法商家用來(lái)增加藥材重量以謀取非法利益的另外一種手段，其中以蒲黃中加入鎂鹽、鈣鹽增重最為常見。其他藥材增重劑的鑒別主要是憑借檢驗(yàn)者經(jīng)驗(yàn)或顯微鑒別等方法來(lái)進(jìn)行，但易受到人員和設(shè)備的限制。現(xiàn)筆者對(duì)蒲黃的增重鑒別方法進(jìn)行研究，建立一種快捷、高效、簡(jiǎn)便的理化快檢方法，并用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法進(jìn)行驗(yàn)證[9]。該快檢方法可對(duì)蒲黃是否摻入鈣鹽、鎂鹽進(jìn)行快速初篩，有針對(duì)性地進(jìn)行抽查檢驗(yàn)，提高靶向抽驗(yàn)?zāi)芰10]，為實(shí)際工作提供一定的技術(shù)支撐。

1 儀器與材料

1.1 儀器 PS1000電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀(美國(guó)利曼-來(lái)伯斯公司)。

1.2 材料 醋酸鎂(中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司，批號(hào)：F20020715)；氯化鈣 (國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20011160)；氫氧化鈉(上海試四赫維化工有限公司，批號(hào)：1007101)；硫酸(重慶川東化工集團(tuán)有限公司，批號(hào)：20150401)；鹽酸(重慶川東化工集團(tuán)有限公司，批號(hào)：20150901)。

2 方法與結(jié)果

2.1 陽(yáng)性樣品及檢出限度的確定 選擇2批次總灰分檢查值均為35%的蒲黃樣品，根據(jù)《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄中的一般鑒別試驗(yàn)方法，篩查結(jié)果提示疑似含有大量的鎂離子和鈣離子，對(duì)此2批次樣品及3批次正常樣品(按法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)符合規(guī)定)，采用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法(ICP-AES)進(jìn)行驗(yàn)證并測(cè)定其鎂離子和鈣離子的含量。

2.1.1 儀器條件與試劑 電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀頻率40.68MHz，RF發(fā)生器。功率：1.0KW，冷卻氣：16 L/min，輔助氣：0.5L/min，霧化器壓力：276KPa，樣品提升量：1.0mL/min。觀測(cè)高度：采用Mn 10μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液257.610nm進(jìn)行最佳觀測(cè)位置調(diào)整。元素測(cè)定波長(zhǎng)：鈣為317.933nm，鎂為285.213nm；實(shí)驗(yàn)用水為去離子水。試劑為鹽酸(1+1)(ρ=1.19g/mL)。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液和工作曲線

2.1.2.1 鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液(1mL溶液含Ca 0.1mg) 用移液管移取10mL鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液(1mg/mL)，置于100mL容量瓶中，加10mL鹽酸(1+1)，用水稀釋至刻度，搖勻。此溶液用時(shí)現(xiàn)配。

2.1.2.2 鎂標(biāo)準(zhǔn)溶液(1mL溶液含Mg 0.1mg) 用移液管移取10mL鎂標(biāo)準(zhǔn)溶液(1mg/mL)，置于100mL容量瓶中，加10mL鹽酸(1+1)，用水稀釋至刻度，搖勻。此溶液用時(shí)現(xiàn)配。

2.1.2.3 曲線的繪制 分別移取鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液和鎂標(biāo)準(zhǔn)溶液0、2、4、6、8、10mL置于一組100mL容量瓶中，加10mL鹽酸(1+1)，用水稀釋至刻度，搖勻。即得Ca、Mg元素濃度分別為0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。在相同測(cè)定條件下測(cè)定，以被測(cè)元素濃度為橫坐標(biāo)，各元素譜線強(qiáng)度為縱坐標(biāo)繪制工作曲線。Ca元素線性相關(guān)系數(shù)為0.9999，Mg元素線性相關(guān)系數(shù)為0.9999。

2.1.3 實(shí)驗(yàn)方法 精密稱取樣品0.1g置100mL容量瓶中，加10mL鹽酸(1+1)，用水稀釋至刻度，搖勻，待測(cè)。隨行做空白實(shí)驗(yàn)。

2.1.4 元素檢出限 用Ca元素和Mg元素的的工作曲線數(shù)據(jù)，以空白實(shí)驗(yàn)6次測(cè)定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差的3倍做檢出限，結(jié)果Ca元素的檢出限為0.021μg/mL，Mg元素的檢出限為0.001μg/mL。

2.1.5 精密度實(shí)驗(yàn) 選同一個(gè)樣品，按本方法重復(fù)測(cè)定6次。6次測(cè)定結(jié)果Ca元素RSD為0.47%，Mg元素RSD為0.30%。

2.1.6 方法回收率 在2個(gè)含Ca、Mg的樣品中加入一定量的Ca、Mg標(biāo)準(zhǔn)液，按2.1.3實(shí)驗(yàn)方法溶解后測(cè)定計(jì)算回收率得Ca的回收率為99.2%，Mg的回收率為98.7%。

2.1.7 驗(yàn)證結(jié)果 正常蒲黃樣品鎂離子含量約0.2%，鈣離子含量約0.5%，而2批次疑似樣品鎂離子含量分別為3.75%和3.13%，鈣離子含量分別為7.01%和4.94%。

結(jié)合探索性研究中非法染色檢查結(jié)果，此2批次樣品均檢出金胺O和皂黃染色，由此證明：疑似樣品含有超正常樣品10倍以上的鎂離子和鈣離子，確定系人為加入，涉嫌摻假、非法增重、非法染色，為鎂鹽、鈣鹽的陽(yáng)性樣品。

表1 蒲黃樣品中鎂離子與鈣離子的測(cè)定結(jié)果

2.1.8 檢出限度確定 根據(jù)鎂、鈣離子的測(cè)定結(jié)果，確定其限度以正常樣品的10倍計(jì)，即鎂離子不得過2%，鈣離子不得過5%。

2.2 對(duì)照溶液的制備 精密稱取醋酸鎂0.0907g，加入0.01mol/L鹽酸10mL，再加水10mL，作為鎂離子對(duì)照溶液A(含鎂離子0.51mg/mL)；精密稱取氯化鈣0.09120g，加入0.01mol/L鹽酸10mL，再加水10mL，作為鈣離子對(duì)照溶液A(含鈣離子1.24mg/mL)。

2.3 化學(xué)反應(yīng)的選擇及檢查濃度的確定 參照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄中鎂鹽和鈣鹽的化學(xué)鑒別，綜合考慮檢驗(yàn)成本，選擇以下兩個(gè)化學(xué)鑒別反應(yīng)。①取供試品溶液，加氫氧化鈉試液，即生成白色沉淀。分離，沉淀分成兩份，一份中加過量的氫氧化鈉試液，沉淀不溶；另一份中加碘試液，沉淀轉(zhuǎn)成紅棕色(鎂鹽)。②取供試品溶液(1→20)，加甲基紅指示液2滴，用氨試液中和，再滴加鹽酸至恰呈酸性，加草酸銨試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀不溶于醋酸，但可溶于稀鹽酸(鈣鹽)。

參照補(bǔ)充檢驗(yàn)方法(批準(zhǔn)件編號(hào)2010002)白鮮皮(飲片)中鎂鹽、鋁鹽的檢查方法，確定化學(xué)反應(yīng)。①取供試品將液，加氫氧化鈉試液，不得出現(xiàn)明顯渾濁(鎂鹽)。②取供試品溶液，加甲基紅指示液2滴，用氨試液中和，再滴加鹽酸至恰呈酸性，加草酸銨試液，不得出現(xiàn)明顯渾濁(鈣鹽)。

分別取鎂離子對(duì)照溶液A和鈣離子對(duì)照溶液A稀釋至不同濃度，觀察反應(yīng)狀態(tài)以確定稀釋倍數(shù)，結(jié)果見表2。

表2 鈣、鎂離子檢查陽(yáng)性濃度確定表

由表2可知，鎂離子反應(yīng)的檢查陽(yáng)性濃度為0.25mg/mL，鈣離子反應(yīng)的檢查陽(yáng)性濃度為0.03mg/mL。

2.4 供試品溶液的制備 根據(jù)鎂離子含量為2%折算，取樣量1g，加溶劑80mL，鎂離子含量為0.25mg/mL；鈣離子含量為5%折算，取樣量1g，加溶劑1600mL，鈣離子含量為0.03mg/mL。

為了保證取樣的均勻性，將取樣量定為2g，確定蒲黃中鎂鹽、鈣鹽檢查方法。取本品2g，加稀鹽酸溶液40mL，攪拌，濾過，取續(xù)濾液5mL，加水至20mL，混勻，作為供試品溶液。

2.5 快檢方法與結(jié)果 ①取供試品溶液2mL，加氫氧化鈉試液1.5mL，稍放置，不得出現(xiàn)明顯渾濁。②取供試品溶液2mL，加水至40mL，混勻，取2mL，加甲基紅指示液1滴，滴加氨試液至溶液由紅色變?yōu)辄S色，加草酸銨試液10滴，不得出現(xiàn)明顯渾濁。對(duì)所有134批次蒲黃樣品進(jìn)行檢查，結(jié)果共有4批次樣品呈陽(yáng)性反應(yīng)，不符合規(guī)定。

3 討論

在溶劑的選擇中，取3份2g的同一樣品，分別加入1mol/L鹽酸溶液、稀鹽酸，6mol/L鹽酸溶液40mL溶解，濾過，加水稀釋后分別進(jìn)行鈣、鎂的反應(yīng)，結(jié)果稀鹽酸沉淀反應(yīng)較明顯，稀鹽酸溶液配制也較為簡(jiǎn)單，因此選擇稀鹽酸溶液來(lái)制備供試品溶液。

實(shí)驗(yàn)設(shè)定的限度為樣品中鎂離子含量超過2%，鈣離子含量超過5%可檢出。也就是說限定了陽(yáng)離子，所以根據(jù)摻偽物中陰離子的不同，能夠檢出的摻偽比例也會(huì)有變化。以最為常見的摻偽物碳酸鈣和硫酸鎂為例，碳酸鈣摻偽比例為12.5%可檢出，而硫酸鎂摻偽比例為10%時(shí)可檢出(根據(jù)質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)算可得)。

中藥材增重既影響中藥飲片計(jì)量的準(zhǔn)確使用，又影響中藥的臨床療效。且使用工業(yè)無(wú)機(jī)鹽進(jìn)行增重，可能危害人民群眾的身體健康，應(yīng)予以嚴(yán)厲打擊。

[1]符江,荊文光,章軍,等.中藥中非法添加問題研究現(xiàn)狀與分析[J].中草藥.2014，45(3)：437.

[2] 李爭(zhēng).摻雜、摻偽的中藥飲片鑒別方法探討[J].北方藥學(xué), 2016，13(4):135.

[3] 魏引平,徐虹.從藥材種植、飲片加工、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)三個(gè)重點(diǎn)環(huán)節(jié)談中藥質(zhì)量管理[J].中國(guó)藥事, 2015，29(1):36.

[4] 王震紅,楊永剛,叢佳.淺談快檢技術(shù)在食品藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用[J].中國(guó)藥事，2012(11)：1222.

[5] 薛玉梅,黃麗丹,王鼎.六味地黃丸系列中成藥快檢方法研究[J].藥物分析雜志，2009，29(2):282.

[6] 薛玉梅,黃麗丹,王鼎,等.杞菊地黃丸快檢方法研究[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2008，27(5):46.

[7] 翟清,楊志偉,石鑫磊,等.染色蒲黃中檸檬黃的檢測(cè)方法研究[J].中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)，2015，19(5): 69.

[8] 胡青,孫健,張甦,等.中藥中48種非法染色色素的TLC法檢測(cè)[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2015，46(7):695.

[9] 莊舒翔,劉天揚(yáng).中藥微量元素的檢測(cè)與質(zhì)量控制[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2012，8(1)：41.

[10]戚健良，陳勁松.充分利用快檢技術(shù)加速藥品靶向抽驗(yàn)[J].中國(guó)藥師， 2004，9(7)：740.

The Rapid Identification Of The Magnesium Salt and Calcium Salt In Pollen Typhae

LI Yufeng LIN Chunyan DONG Yuan LI Zhongqiong ZHANG Wenjie*

Yunnan Institute for Food and Drug Control, Kunming 650011，CHINA

Objective To establish a rapid specific method for the identification of magnesium salt and calcium salt in pollen Typhae and carried out methodology validation.Methods Check method of magnesium salt for the sample liquid, adding sodium hydroxide solution, there shall be no obvious turbidity.Check method of calcium salt for the testsolution, plus 2 drops of methyl red indicator solution, using ammonia solution and adding hydrochloric acid to it is acidic, with ammonium oxalate solution, no obvious turbidity.Results 134 samples of Typhae pollen with magnesium salt and calcium salt check, 4 samples of Typhae pollen in which the test result is positive.Conclusion This study provided a new reference for the rapid detecting of magnesium salt and calcium salt added into pollen typhae.

Pollen Typhae; Magnesium Salt；Calcium Salt; Rapid Identification

李玉鳳(1980-)，女，漢族，本科，研究方向?yàn)樗幤焚|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail:762726853@qq.com

張?chǎng)?1965-)，女，漢族，本科，主任藥師，研究方向?yàn)橹兴?、民族藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。 E-mail: zwj0871@126.com

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1007-8517(2017)13-0019-03

2017-05-25 編輯：穆麗華)