急性髓系白血病伴異常高表達(dá)CD7骨髓流式散點(diǎn)圖及形態(tài)學(xué)特征研究

趙 海 軍

(河北省三河市醫(yī)院,河北 三河 065200)

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急性髓系白血病伴異常高表達(dá)CD7骨髓流式散點(diǎn)圖及形態(tài)學(xué)特征研究

趙 海 軍

(河北省三河市醫(yī)院,河北 三河 065200)

目的 研究異常高表達(dá)CD7的急性髓系白血病(AML)骨髓流式散點(diǎn)圖及形態(tài)學(xué)特征。方法 采用流式細(xì)胞儀對(duì)確診的AML患者白血病細(xì)胞進(jìn)行免疫學(xué)表型分析，觀察其骨髓流式散點(diǎn)圖和形態(tài)學(xué)特征。

結(jié)果 9例CD7+AML患者中5例M2a，1例M3，2例M5b，1例M6。其抗原表達(dá)由高到低為CD33(100%)、CD13(100%)、CD117(100%)、CD38(88.9%)、MPO(88.9%)、CD64(77.8%)、CD34(77.8%)、HLA-DR(66.7%)、CD71(33.3%)、CD11b(22.2%)、CD15(22.2%)、CD25(22.2%),CD7+AML與CD7-AML在形態(tài)學(xué)上也有顯著不同。結(jié)論 在AML中不同F(xiàn)AB分型均可有CD7異常高表達(dá)，CD7+AML在流式細(xì)胞術(shù)、骨髓形態(tài)學(xué)等方面具有特殊之處。

急性髓系白血病；骨髓流式散點(diǎn)圖；CD7；流式細(xì)胞術(shù)

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)是髓細(xì)胞系起源的白血病細(xì)胞在血液、骨髓和其他組織中克隆性增殖的白血病。AML的正確分型對(duì)白血病的診斷、治療方案的制訂、療效與預(yù)后的判斷十分重要。由于白血病細(xì)胞存在抗原表達(dá)異質(zhì)性這一顯著特征，常出現(xiàn)某些抗原過(guò)弱表達(dá)、過(guò)度表達(dá)、不同系列抗原交叉表達(dá)及抗原跨階段表達(dá)等情況[1]，因此，單純依靠骨髓形態(tài)學(xué)特征診斷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)白血病進(jìn)行分型已經(jīng)不能滿足臨床需求，應(yīng)在此基礎(chǔ)上結(jié)合免疫學(xué)分型，使白血病診斷和分類(lèi)更加精確。我們采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)對(duì)我院收治的9例AML患者進(jìn)行免疫學(xué)分型，觀察CD7在AML中的表達(dá)情況，并分析CD7陽(yáng)性患者骨髓流式散點(diǎn)圖及其形態(tài)學(xué)特征。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2013-01—2014-12月三河市醫(yī)院血液內(nèi)科收治AML初診住院患者42例，經(jīng)骨髓細(xì)胞免疫分析檢測(cè)，確診9例CD7+AML，其中男3例，女6例；年齡31～69歲，中位年齡47歲。所有患者抽骨髓及外周血涂片經(jīng)瑞氏染色后分類(lèi)計(jì)數(shù)，按FAB分型標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)分型。所有病例最終根據(jù)患者的臨床表現(xiàn)、骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞化學(xué)染色及免疫分型確診。

1.2 儀器與試劑

流式細(xì)胞儀:FACS-Calibur型，購(gòu)自美國(guó)BD(Becton Dickinson)公司，功率15 MW，激光光源主要采用氬離子氣體激光器，2個(gè)激光光源波長(zhǎng)分別為488 nm及635 nm。

單克隆抗體：美國(guó)BD公司產(chǎn)品，所選用單克隆抗體有CD5、CD7、CD3、CD19、CD14、CD64、CD34、CD38、HLA-DR、CD13、CD71、CD33、CD16、CD11b、CD61、CD62b、CD15、CD117、MPO、CD4、CD8、CD10、CD25、CD79a。

相關(guān)試劑：美國(guó)BD公司產(chǎn)品，所用熒光包括FITC(異硫氰酸熒光素)、PE(藻紅蛋白熒光素)和PerCP(葉綠素蛋白)。

1.3 熒光標(biāo)記染色

采用直接免疫熒光標(biāo)記法，所有病例于治療前抽取骨髓2.0～3.0 mL，EDTA抗凝，標(biāo)記流式專(zhuān)用試管，每管加入FITC、PE和PercP標(biāo)記的抗體，同時(shí)設(shè)定陰性對(duì)照(IgGl與IgG2)，各管加入抗凝骨髓，避光孵育15 min，溶血素2 mL裂解紅細(xì)胞10 min，離心、棄上清，PBS洗滌2次，加PBS液，上機(jī)檢測(cè)。胞漿抗原的檢測(cè)：標(biāo)記膜抗原后加破膜劑10 min，PBS洗滌，加胞漿抗體，避光孵育15 min，PBS洗滌2次，加PBS液，上機(jī)檢測(cè)。

1.4 檢測(cè)與分析

標(biāo)準(zhǔn)熒光微球校準(zhǔn)儀器，Cellquest軟件設(shè)置獲取條件，依次上樣獲取數(shù)據(jù)，每管獲取細(xì)胞數(shù)50 000個(gè)，以CD45/SSC雙參數(shù)二維散點(diǎn)圖設(shè)置方法進(jìn)行免疫表型分析，計(jì)算幼稚細(xì)胞群中白血病細(xì)胞的表面標(biāo)記量，抗原表達(dá)量≥20%判定為陽(yáng)性。

1.5 骨髓細(xì)胞形態(tài)分析

采集初診患者骨髓穿刺液涂片，經(jīng)瑞氏-姬姆薩混合染色液染色，光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用PEMS 3.1 for windows統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 CD7+AML和CD7-AML患者一般情況比較

CD7+AML和CD7-AML患者年齡、性別、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)及骨髓原始細(xì)胞計(jì)數(shù)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 FAB分型結(jié)果

9例CD7+AML患者中，5例M2a，1例M3，2例M5b，1例M6(圖1)。與同期確診的CD7-AML患者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

R2為白細(xì)胞裂孔細(xì)胞，橫、縱坐標(biāo)分別表示細(xì)胞群相應(yīng)抗體的熒光強(qiáng)度。

圖1 CD7+AML-M3患者免疫分型

2.3 免疫分型結(jié)果

9例CD7+AML患者抗原表達(dá)由高到低為CD33(100%)、CD13(100%)、CD117(100%)、CD38(88.9%)、MPO(88.9%)、CD64(77.8%)、CD34(77.8%)、HLA-DR(66.7%)、CD71(33.3%)、CD11b(22.2%)、CD15(22.2%)、CD25(22.2%)(表1)。

表1 CD7+AML患者FCM檢測(cè)免疫表性結(jié)果(n=9)

3 討 論

細(xì)胞表面抗原標(biāo)志隨著細(xì)胞分化的不同時(shí)期可以有序地獲得或消失，使細(xì)胞表型呈現(xiàn)時(shí)相性特征。所以，各個(gè)發(fā)育階段細(xì)胞的抗原表達(dá)特點(diǎn)已成為細(xì)胞分類(lèi)及亞群劃分和研究細(xì)胞分化成熟的有力指征[2]。CD7抗原是T細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中的一個(gè)特征性標(biāo)志，并用于T淋巴細(xì)胞白血病的診斷及其亞型的區(qū)分。隨著研究的深入，人們對(duì)CD7抗原有了新的認(rèn)識(shí)，目前認(rèn)為CD7抗原并非T淋巴細(xì)胞的特異性標(biāo)志抗原，具有多項(xiàng)分化潛能的造血干細(xì)胞階段也可表達(dá)此抗原[3]。FCM免疫分型是應(yīng)用單克隆抗體熒光標(biāo)記技術(shù)對(duì)各種白血病細(xì)胞內(nèi)外的特異性抗原進(jìn)行精細(xì)的檢測(cè)和判定，具有很高的敏感性、特異性和穩(wěn)定性，且能在短時(shí)間內(nèi)對(duì)大量細(xì)胞進(jìn)行定量分析，因而提高了白血病分型的準(zhǔn)確率，彌補(bǔ)了FAB形態(tài)學(xué)分型的不足[4]。

檢索PubMed及萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)，目前尚無(wú)CD7+AML-M3報(bào)道，其余FAB各分型均有CD7+AML病例報(bào)道，提示細(xì)胞分化程度越低，CD7陽(yáng)性表達(dá)率越高[5]。但本研究發(fā)現(xiàn)，CD7在AML的FAB各分型中均有不同程度的表達(dá)，本組9例CD7+AML患者中包括5例AML-M2a，2例AML-M5b，1例AML-M3及1例AML-M6，我們認(rèn)為可能與不同地域、不同人種、單抗的組合選擇及檢測(cè)病例的多少有關(guān)。髓系相關(guān)抗原中最特異和最敏感的指標(biāo)有CD33、CD13和CD117，本組病例中CD33、CD13、CD117的陽(yáng)性表達(dá)率均為100%，其他髓系相關(guān)抗原CD38、MPO的陽(yáng)性表達(dá)率為88.9%，CD64、CD34的陽(yáng)性表達(dá)率為77.8%，HLA-DR的陽(yáng)性表達(dá)率為66.7%。

本研究資料顯示，CD7+AML患者骨髓形態(tài)學(xué)與傳統(tǒng)CD7-AML患者骨髓形態(tài)學(xué)相比存在一定異質(zhì)性。觀察1例CD7+AML-M2a男性患者骨髓形態(tài)發(fā)現(xiàn)，原始粒細(xì)胞較CD7-AML-M2a的細(xì)胞有很大區(qū)別：體積偏小，胞核較大，多偏位，常為不規(guī)則形，有扭曲折疊，有凹陷或切跡，核染色質(zhì)呈細(xì)顆粒狀；胞質(zhì)量少，呈淡藍(lán)色(圖2)。上述形態(tài)描述，往往會(huì)被誤認(rèn)為是原始單核細(xì)胞，該病例極有可能被誤診為AML-M5。通過(guò)對(duì)我院初診治療的CD7+AML患者隨訪，發(fā)現(xiàn)其完全緩解率明顯低于CD7-AML患者，預(yù)后差，復(fù)發(fā)率高，與CD7+AML預(yù)后差的報(bào)道一致[6]，提示CD7抗原表達(dá)是AML預(yù)后不良的標(biāo)志。

黑色箭頭所指為原始粒細(xì)胞變異表達(dá)CD7細(xì)胞。

綜上，CD7+AML具有不同于CD7-AML的獨(dú)特特點(diǎn)，其流式散點(diǎn)圖、骨髓形態(tài)、治療效果及預(yù)后等方面均有其自身特點(diǎn)。有研究發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)結(jié)合組織化學(xué)染色不能精確診斷急性白血病[7]，如果完全依賴還可能導(dǎo)致誤診，另外POX染色小于3%也并非是診斷急性淋巴細(xì)胞白血病的通用參考指標(biāo)。這就要求形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)工作者不能單純依靠FAB分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)AML進(jìn)行分型，以免誤診或作出不準(zhǔn)確報(bào)告，建議結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)，必要時(shí)還可結(jié)合細(xì)胞遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等其他相關(guān)檢測(cè)，這樣才能夠?yàn)锳ML診斷、治療方案的制定及預(yù)后判斷提供可靠依據(jù)。

[1]李耀華,徐娟,孫雪靜,等.CD7在成人急性髓系白血病的表達(dá)及其在微小殘留病檢測(cè)中的應(yīng)用[J].首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2006(27):233-236.

[2]熊偉,薛惠良,陳炳才,等.表達(dá)CD7抗原的小兒急性髓性白血病28例臨床探討[J].中國(guó)實(shí)用兒科雜志,2002(17):558-559.

[3]吳紅紅,曹暉,王亞哲,等.CD7陽(yáng)性急性髓系白血病骨髓干/祖細(xì)胞5個(gè)基因表達(dá)的研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志,2009,17(2):298-303.

[4]要跟東,霍紅旗,李鵬,等.急性髓系及混合型白血病流式細(xì)胞術(shù)免疫分型檢測(cè)結(jié)果[J].白血病·淋巴瘤,2010(19):746-747.

[5]承璐雅,王偉光,莊靜麗,等.CD7+急性髓細(xì)胞性白血病臨床及實(shí)驗(yàn)室特征分析[J].內(nèi)科及危重癥雜志,2006,12(2):85.

[6]孟君霞,武永強(qiáng),唐廣,等.CD7抗原表達(dá)與急性髓系白血病臨床特征、細(xì)胞遺傳學(xué)特點(diǎn)及預(yù)后的關(guān)系[J].新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2016,33(6):508-510.

[7]張斌,蔡艷霞,周斌,等.變異異常高表達(dá)CD7伴漿細(xì)胞增多急性粒細(xì)胞白血病部分分化型一例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J].白血病·淋巴瘤,2013,22(12):754-755.

[責(zé)任編輯：李薊龍 英文編輯：劉彥哲]

Bone Marrow Flow Pattern and Morphological Characteristics of Acute Myeloid Leukemia with Abnormally High CD7 Expression

ZHAO Hai-jun

(Sanhe City Hospital,Sanhe,Hebei 065200,China)

Objective To study the bone marrow flow pattern and morphological characteristics of acute myeloid leukemia with abnormally high expression of CD7.Methods Flow cytometry was used to analyze the immunophenotype of leukemic cells in AML patients,and the bone marrow flow pattern and morphological characteristics were observed.Results There were five cases of M2a,one M3,two M5b and one M6 in nine cases of CD7+AML.The CD antigen expressions from high to low were CD33(100%),CD13(100%),CD117(100%),CD38(88.9%),MPO(88.9%),CD64(77.8%),CD34(77.8%),HLA-DR(66.7%),CD71(33.3%),CD11b(22.2%),CD15(22.2%)and CD25(22.2%),respectively.There were significant morphological differences between CD7+and CD7-AML.Conclusion Abnormally high expression of CD7was detectable in different FAB classification of AML and CD7+AML had special features in flow cytometry and bone marrow morphology.

acute myeloid leukemia;bone marrow flow pattern;CD7;flow cytometry

趙海軍(1977-)，男,河北三河人,主管檢驗(yàn)師,從事臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)。

R 733.71

B

10.3969/j.issn.1673-1492.2017.08.009

來(lái)稿日期：2016-09-12