多肽bCAT通過下調(diào)白念珠菌HWP1基因表達(dá)抑制生物被膜的形成機(jī)制

許 珊， 張 舒，張 丹， 劉思佚，劉梳柯

多肽bCAT通過下調(diào)白念珠菌HWP1基因表達(dá)抑制生物被膜的形成機(jī)制

許 珊， 張 舒*，張 丹， 劉思佚，劉梳柯

目的 明確多肽bCAT抑制白念珠菌生物被膜形成能力，并探索其與黏附基因HWP1表達(dá)的關(guān)系。方法 標(biāo)準(zhǔn)菌株白念珠菌ATCC10231和臨床菌株作為研究對(duì)象，XTT法檢測其生物被膜形成能力，bCAT抗浮游白念珠菌的MIC值以CLSI-M27-A3方法確定，XTT法及菌落計(jì)數(shù)檢測bCAT抑制生物被膜形成作用，并計(jì)算代謝活性確定抑制50%生物被膜形成的MIC（BIC50），bCAT減少白念珠菌的黏附作用經(jīng)倒置顯微鏡下觀察及菌落計(jì)數(shù)法檢測，并采用RT-PCR 通過2-ΔΔCt法計(jì)算HWP1的表達(dá)量。統(tǒng)計(jì)方法為單因素方差分析，組內(nèi)比較采用Dunnett T3檢驗(yàn)。結(jié)果 標(biāo)準(zhǔn)菌株及臨床菌株均有較強(qiáng)生物被膜形成能力。bCAT抗浮游狀態(tài)的白念珠菌MIC值為40～80 μmol / L，BIC50為80～160 μmol / L；并且bCAT能減少白念珠菌的黏附作用，空白對(duì)照組菌落計(jì)數(shù)為 （27 822.22±2 472.74） cfu， bCAT濃度為160、80、40、20、10 μmol / L時(shí)的菌落個(gè)數(shù)分別為（5 355.55±1 264.03）cfu、（11 377.78±2 232.58 ）cfu、（17 488.89±1 136.27） cfu、（22 377.78±3 521.99）cfu、（26 044.44±1 329.57）cfu。組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=147.018，P=0.001），組內(nèi)比較發(fā)現(xiàn)160、80、40 μmol / L處理組與不含bCAT時(shí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。RT-PCR發(fā)現(xiàn)160 μmol / L處理組HWP1相對(duì)表達(dá)量為空白對(duì)照組的12.24 %。結(jié)論 bCAT能有效抑制白念珠菌生物被膜形成，其機(jī)制可能與降低HWP1基因的表達(dá)從而減少白念珠菌的黏附有關(guān)。具有一定的臨床前景。

白念珠菌； 生物被膜形成； 嗜鉻粒蛋白A； 抗黏附

白念珠菌（C. albicans）是目前最常見的機(jī)會(huì)性真菌感染病原體，其高死亡率與高治療成本與生物被膜的形成有關(guān)[1]。白念珠菌生物被膜是由孢子、菌絲及假菌絲組成的三維立體結(jié)構(gòu)[2]，是病原體為適應(yīng)環(huán)境變化的另一種生存形式，其生物學(xué)行為與浮游狀態(tài)完全不同，對(duì)常用的抗菌藥物耐藥且能逃避免疫宿主反應(yīng)[3-4]，給臨床治療帶來巨大困難，是目前抗感染治療中亟待解決的重要問題。

抑制白念珠菌生物被膜形成的研究具有重要的臨床意義。真菌細(xì)胞黏附于生物及非生物物質(zhì)表面是白念珠菌生物被膜形成的一個(gè)關(guān)鍵步驟[5]，HWP1是介導(dǎo)此過程的關(guān)鍵基因之一，有研究證實(shí)，不表達(dá)HWP1的白念珠菌突變株不能在血管導(dǎo)管表面形成生物被膜[6]。

嗜鉻粒蛋白A（chromogranin A，CGA）是腎上腺髓質(zhì)分泌的機(jī)體重要應(yīng)激激素蛋白原，在牛、人等多種屬內(nèi)高度保守，能在體內(nèi)水解生成一系列抗菌多肽，研究證實(shí)牛catestatin（bovinCGA344–364，bCAT）具有抗真菌作用[7]，在1.2～8.0 μmol / L的濃度范圍內(nèi)產(chǎn)生抑菌效應(yīng)[8]。但bCAT在抑制白念珠菌生物被膜形成方面尚無研究。本研究旨在明確bCAT是否具有抑制白念珠菌生物被膜形成作用，并進(jìn)一步探索其與HWP1基因表達(dá)的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 菌株

標(biāo)準(zhǔn)菌株為白念珠菌ATCC10231（重慶博培生物技術(shù)有限公司）和臨床菌株5株（編號(hào)分別為1、2、9、17、18，來源于重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院感染科實(shí)驗(yàn)室）。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料和方法

1.2.1 主要實(shí)驗(yàn)材料 YPD（Yeast Extract Peptone Dextrose Medium）液體培養(yǎng)基組成：酵母膏10 g，葡萄糖20 g，蛋白胨20 g，蒸餾水1 L；沙氏瓊脂培養(yǎng)基（SDA，Sabourand's agar medium）組成：葡萄糖40 g、酪蛋白胰酶消化物、動(dòng)物組織的胃酶消化物等量混合10 g 、瓊脂15 g加入純化水1 000 mL，高溫滅菌后倒入平皿。bCAT氨基酸序列：RSMRLSFRARGYGFRGPGLQL，由上?？齐纳锟萍加邢薰竞铣?；HWP1、ACT1引物由上海生工生物工程有限公司合成。XTT{c；3，3’-[1-（苯氨?；?3，4-四氮唑]-二（4-甲氧基-6-硝基）苯磺酸鈉}（北京索來寶公司）。甲萘醌（Sigma公司，美國）。

1.2.2 菌種和培養(yǎng)條件 將凍存于-80?℃白念珠菌接種于SDA平皿，37.0?℃培養(yǎng)24～48 h，肉眼觀察白色菌落形成；挑選單個(gè)白色菌落接種于YPD培養(yǎng)基中37.0?℃、100 r/min培養(yǎng)24 h以保證菌株的純度與活力。離心（1 000 r/min，10 min）后PBS溶液充分清洗殘留的YPD培養(yǎng)基后加入RPMI-1640培養(yǎng)基（Sigma公司，美國），使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后放置于4?℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 XTT法[9]判斷白念珠菌生物被膜形成能力 RPMI-1640培養(yǎng)基將菌液濃度調(diào)至106cfu/ mL，96孔板每孔加入100 μL，密閉創(chuàng)造微氧環(huán)境后37?℃生長24 h。PBS沖洗未形成生物被膜的浮游白念珠菌后，每孔加入100 μLXTT（0.5 mg / mL） / 甲萘醌（1 μmoL / L），37?℃避光作用2 h 后于多功能酶標(biāo)儀檢測490 nm處的D值，每次設(shè)置3個(gè)實(shí)驗(yàn)孔，并在非同一天中重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)。僅含XTT / 甲萘醌的空白對(duì)照孔D值（Dc）作為陰性對(duì)照判斷生物被膜形成能力，判斷標(biāo)準(zhǔn)如下[10]：D≤Dc，無生物被膜形成能力；Dc＜D≤2Dc，生物被膜形成能力較弱；2Dc＜D≤4Dc，生物被膜形成能力中等；D＞4Dc，生物被膜形成能力強(qiáng)。1.2.4 bCAT抗浮游狀態(tài)白念珠菌MIC值 抗浮游狀態(tài)白念珠菌MIC值的測定依照CLSI M27-A3的方法[11]，YPD培養(yǎng)基稀釋最終的藥物作用濃度為：bCAT 160～2.5 μmol / L。過程概括如下：96孔板每孔加入100 μL由YPD 培養(yǎng)基調(diào)至（1～5）×103/ mL 菌液，2倍稀釋法依次加入100 μL藥物至各孔，100 μL YPD培養(yǎng)基加100 μL菌液作為陽性對(duì)照孔菌液終濃度為（0.5～2.5）×103cfu/ mL，YPD 培養(yǎng)基200 μL作為陰性對(duì)照孔。37?℃培養(yǎng)24 h，bCAT對(duì)浮游狀態(tài)白念珠菌MIC 值判讀的終點(diǎn)為肉眼與陽性對(duì)照孔比較為清澈培養(yǎng)基的最小藥物濃度，每次設(shè)置3個(gè)實(shí)驗(yàn)孔，并在非同一天中重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)。

1.2.5 bCAT抑制生物被膜形成實(shí)驗(yàn)方法 用XTT法和菌落計(jì)數(shù)法：RPMI-1640稀釋最終的藥物作用濃度為160～10 μmoL / L。96孔板各孔加入100 μL濃度為106cfu/ mL白念珠菌懸液，并采用2倍稀釋法依次加入100 μL藥物至各孔，陽性對(duì)照孔中加入100 μL RPMI-1640培養(yǎng)基，37?℃培養(yǎng)24 h 后PBS清洗2次以除去與孔底黏附不緊密的真菌后判斷結(jié)果。①XTT法計(jì)算代謝活性，方法同1.2.3。計(jì)算公式：代謝活性（metabolic activity）（%）=實(shí)驗(yàn)孔D490/ 陽性對(duì)照孔D490×100 %，當(dāng)代謝活性小于50 %時(shí)定義為抑制生物被膜形成有效，此時(shí)的MIC即為抑制50%生物被膜形成的MIC（BIC50）。每次設(shè)置3個(gè)實(shí)驗(yàn)孔并在非同一天中重復(fù)3次統(tǒng)計(jì)結(jié)果。②菌落計(jì)數(shù)法：將96孔板底部形成的生物被膜充分洗滌后接種于SDA平皿上，放入37?℃恒溫箱中，24～48 h計(jì)數(shù)（cfu）。

1.2.6 bCAT抗白念珠菌黏附作用 設(shè)置藥物濃度分別為160～10 μmoL / L。96孔板中加入菌液濃度106cfu/ mL，100 μL和100 μL藥物，37?℃作用4 h后PBS清洗2次，倒置顯微鏡下觀察真菌黏附作用并采用菌落計(jì)數(shù)[12]。

1.2.7 QRT-PCR方法分析 HWP1的表達(dá)采用熒光定量核酸擴(kuò)增檢測系統(tǒng)（Real-time Quantitative PCR Detecting System， QRT-PCR）分析黏附基因HWP1的表達(dá)。標(biāo)準(zhǔn)菌株為白念珠菌ATCC10231，bCAT處理組濃度設(shè)置為160 μmoL / L，不含bCAT為對(duì)照組，按前述抑制生物被膜形成實(shí)驗(yàn)方法處理后收集各組菌液。離心收集白念珠菌細(xì)胞用于RNA提取[步驟按前述RNA提取試劑盒（美國OMEGA公司）說明進(jìn)行]，反轉(zhuǎn)錄[步驟見QRTPCR試劑盒（上海創(chuàng)英生物科技有限公司）]后使用SmartSpec TM Plus（Bio-Rad Laboratories公司）檢測ssDNA濃度，加入引物及熒光劑后予以該公司生產(chǎn)的CFX96 Touch儀器檢測各組Ct值。每次設(shè)置3個(gè)重復(fù)孔，一共3次。ACT1作為內(nèi)參。引物堿基序列如下：

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，bCAT抑制白念珠菌生物被膜形成作用結(jié)果及菌落計(jì)數(shù)法檢測抗白念珠菌黏附作用結(jié)果多組間均數(shù)比較使用單因素方差分析，其兩兩比較使用T3檢驗(yàn)，QRT-PCR檢測bCAT下調(diào)白念珠菌HWP1基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)中對(duì)照組和處理組結(jié)果采用2-ΔΔCt法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果采用Graphpad prism 5作圖。

2 結(jié)果

2.1 XTT檢測白念珠菌形成生物被膜能力

通過多功能酶標(biāo)儀檢測490 nm處的D值可用于檢測生物被膜形成能力。結(jié)果顯示：不含白念珠菌生物被膜空白對(duì)照孔Dc為0.122 6±0.012 8，ATCC10231的D為0.852 7±0.080 1，臨床菌株編號(hào)1、2、17、18的D為0.738 5±0.110 6、0.783 2± 0.095 1、0.562 7±0.081 9、0.734 4±0.082 2。均顯示較強(qiáng)生物被膜形成能力；9號(hào)臨床菌株的D為0.124 6±0.009 3，無形成生物被膜能力。見圖1。選擇臨床菌株1、2、17、18和標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC10231進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.2 bCAT抗浮游白念珠菌作用

bCAT是bCGA的水解產(chǎn)物中抗菌作用較強(qiáng)的抗菌多肽。本研究證實(shí)其具有抗浮游狀態(tài)白念珠菌作用，其MIC值為40～80 μmol / L（見表1）。臨床菌株與標(biāo)準(zhǔn)菌株結(jié)果類似。

2.3 bCAT抑制白念珠菌生物被膜形成

通過XTT法計(jì)算不同濃度bCAT下白念珠菌生物被膜的代謝活性判斷其抑制生物被膜形成能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，bCAT能有效抑制白念珠菌生物被膜的形成，BIC50為40～80 μmol / L（見表1）。以不含bCAT作用時(shí)的生物被膜代謝活性為100 %，計(jì)算bCAT濃度為160、80、40、20、10 μmol / L時(shí)的96孔板中白念珠菌代謝活性分別為（35.66±7.01） %、（33.55±4.82） %、（49.55±15.32） %、（61.57±6.12） %、（76.92±8.05） %（見圖2A）。表明bCAT能有效抑制白念珠菌生物被膜的形成。

菌落計(jì)數(shù)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：不含bCAT處理時(shí)的96孔板中菌落個(gè)數(shù)為（114 422.2±22 998.14）cfu，bCAT濃度為160、80、40、20、10 μmoL / L時(shí)的菌落個(gè)數(shù)為（57 688.89±7 268.97）、（69 813.33± 5 565.60）、（81 106.67±9 804.20）、（103 228.9± 5 084.78）、（109 728.9±8 687.77）cfu（見圖2B）。經(jīng)單因素方差分析，組內(nèi)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=35.840，P=0.001），組間比較采用T3檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)160、80、40 μmol / L處理組與不含bCAT時(shí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖1 XTT檢測白念珠菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC10231和5株臨床菌株生物被膜形成能力Figure 1 Bio fi lm formation ability of Candida albicans strains assessed by XTT assay， including standard strain ATCC 10231 and clinical strains

表1 bCAT抗白念珠菌參數(shù)Table 1 Minimum inhibitory concentration （MIC） and the lowest concentration showing 50 % inhibition on biof i lmformation （BIC50） of catestatin against C. albicans

圖2 XTT（A）及菌落計(jì)數(shù)（B）判斷bCAT抑制白念珠菌生物被膜形成Figure 2 Effect of catestatin （bCAT） on C. albicans biof i lm formation estimated by XTT assay-based metabolic activity （A） and colony count （B）

2.4 bCAT抑制白念珠菌生物被膜形成的機(jī)制

倒置顯微鏡下初步判斷bCAT能有效減少白念珠菌黏附于96孔板，不含bCAT的陽性對(duì)照孔可見微小菌落集落形成（見圖3Aa），隨著bCAT濃度升高，白念菌黏附數(shù)量明顯減少，bCAT濃度10、20、40、80、160 μmol / L（見圖3A b，c，d，e，f）的菌落依次減少，160 μmol / L僅見單個(gè)白念珠菌，未見集落形成。菌落計(jì)數(shù)發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組的菌落數(shù)為（27 822.22±2 472.74）cfu，濃度為160、80、40、20、10 μmol / L時(shí)的菌落個(gè)數(shù)為（5 355.55±1 264.03） 、（11 377.78±2 232.58） 、（17 488.89±1 136.27） 、（22 377.78±3 521.99） 、（26 044.44±1 329.57） cfu。經(jīng)單因素方差分析（AVONA），組內(nèi)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=147.018，P＜0.001），組間比較采用T3檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)160、80、40 μmol / L處理組與不含bCAT時(shí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（見圖3B）。

為進(jìn)一步探索bCAT抑制生物被膜形成的具體分子機(jī)制，我們采用RT-PCR檢測對(duì)HWP1表達(dá)的影響，結(jié)果采用2-ΔΔCt法分析發(fā)現(xiàn)：濃度為160 μmol / L處理后的HWP1的相對(duì)表達(dá)量為12.24 %，有效減少了HWP1的表達(dá)（見圖3C）。

圖3 bCAT對(duì)白念珠菌黏附過程的影響Figure 3 Effect of catestatin （bCAT） on adhesion of C. albicans

3 討論

生物被膜形成是中心靜脈導(dǎo)管及其他植入生物材料應(yīng)用后發(fā)生感染的主要危險(xiǎn)因素之一[13]。被膜形成后白念珠菌的致病力增強(qiáng)，對(duì)棘白菌素類、三唑類等藥物表現(xiàn)出耐藥性，造成慢性感染，治療困難，帶來不良臨床后果[14-15]。

XTT法是目前公認(rèn)的研究生物被膜的標(biāo)準(zhǔn)方法[16]。XTT作為線粒體脫氫酶的作用底物，被活細(xì)胞還原成水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物。當(dāng)XTT與電子偶合劑（甲萘醌）聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，其產(chǎn)生水溶性甲臜產(chǎn)物的吸光度與活細(xì)胞的數(shù)量成正比，本實(shí)驗(yàn)中XTT法證實(shí)了白念珠菌臨床菌株具有不同的生物被膜形成能力。Rajendran等[17]研究發(fā)現(xiàn)，生物被膜形成能力是影響白念珠菌血流感染病死的主要危險(xiǎn)因素。本研究還明確了bCAT具有抑制白念珠菌生物被膜形成的作用，其BIC50為80～160 μmoL / L，而游離狀態(tài)白念珠菌的MIC值為40～80 μmoL / L。進(jìn)一步驗(yàn)證了白念珠菌生物被膜狀態(tài)生物學(xué)行為與浮游狀態(tài)的不一致。

生物被膜形成過程包括黏附、小菌落形成、成熟及擴(kuò)散，因此黏附是生物被膜形成的第一步，由一系列黏附素介導(dǎo)[5]。本研究在倒置顯微鏡下觀察到不含bCAT的空白對(duì)照組中4 h時(shí)白念珠菌微小菌落聚集形成，而在bCAT處理時(shí)明顯減少，高濃度（160 μmol / L）時(shí)未見微小菌落的聚集。因此初步證實(shí)bCAT抑制白念珠菌生物被膜形成與減少黏附相關(guān)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示bCAT能有效減少白念珠菌黏附于96孔板，濃度大于40 μmol / L時(shí)與空白對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。白念珠菌作為一種機(jī)會(huì)性感染病原體，機(jī)體處于正常免疫狀體時(shí)共生于胃腸道、陰道等部位，免疫狀態(tài)低下時(shí)真菌細(xì)胞與宿主細(xì)胞相互作用并黏附于宿主細(xì)胞，是真菌細(xì)胞定植及致病的中心環(huán)節(jié)[18]，也是形成生物被膜的關(guān)鍵步驟。

本研究中RT-PCR證實(shí)bCAT處理后HWP1基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量為12.24 %。HWP1是白念珠菌重要的毒力因子之一，在菌絲相中高表達(dá)，還能介導(dǎo)生物被膜形成時(shí)真菌與細(xì)胞外基質(zhì)以及真菌細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用[5，19]，翻譯后的HWP1蛋白是第1個(gè)經(jīng)體外研究發(fā)現(xiàn)的介導(dǎo)生物被膜形成的細(xì)胞壁蛋白，不僅能介導(dǎo)白念珠菌與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附，同時(shí)能促進(jìn)白念珠菌間的聚集，形成微菌落，進(jìn)一步形成生物被膜。體外研究發(fā)現(xiàn)缺乏HWP1的白念珠菌突變株不能在中心靜脈導(dǎo)管表現(xiàn)形成生物被膜[6]。Khodavandi等[20]研究證實(shí)，抑制白念珠菌生物被膜形成作用與下調(diào)HWP1基因的表達(dá)相關(guān)，且HWP1能介導(dǎo)白念珠菌黏附并入侵胃腸道上皮細(xì)胞并形成菌落而致病。HWP1作為介導(dǎo)白念珠菌黏附的關(guān)鍵基因之一，推測bCAT減少白念珠菌的黏附作用與下調(diào)該基因有關(guān)。本研究也證實(shí)了bCAT下調(diào)了黏附基因HWP1的表達(dá)。

由于生物被膜細(xì)胞外基質(zhì)的屏障作用、持留細(xì)胞等機(jī)制，有生物被膜時(shí)白念珠菌細(xì)胞能逃避機(jī)體免疫反應(yīng)，且目前多數(shù)抗真菌藥物對(duì)生物被膜治療作用不大[21]。因此，許多研究者將目光投向具有較強(qiáng)抗真菌作用的抗菌多肽[22]。bCAT作為抗菌多肽有可能成為新型抗真菌藥物應(yīng)用于臨床，例如涂層于植入材料表面以抑制白念珠菌生物被膜的形成。

本研究證實(shí)了白念珠菌臨床菌株生物被膜形成的不同能力，明確了bCAT能抑制白念珠菌形成生物被膜，其機(jī)制可能為下調(diào)HWP1的表達(dá)從而減少白念珠菌的黏附。這一結(jié)果具有一定的臨床應(yīng)用前景，需要在非白念珠菌及體內(nèi)證實(shí)bCAT抑制真菌生物被膜形成的作用。

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Effect of catestatin on inhibiting C. albicans biofilm formation by downregulating the expression of HWP1

XU Shan, ZHANG Shu, ZHANG Dan, LIU Siyi, LIU Shuke. （Department of Intensive Care Medicine, the First Aff i liated Hospital of Chongqing Medical University, Chongqing 400013, China）

Objective To investigate whether catestatin (bovine chromogranin A 344-364) can inhibit the biof i lm formation of Candida albicans and examine its relationship with the expression of adhesion gene HWP1. Methods Clinical strains and standard strain ATCC 10231 of C. albicans were studied. XTT [2,3-bis-(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxanilide] method was used to assess the ability of C. albicans biof i lm formation. Antifungal activity against planktonic Candida cells was evaluated in terms of minimum inhibitory concentrations (MICs) according to the description in CLSI-M27-A3. XTT assay and colony count were used to assess the effect of catestatin on inhibiting C. albicans biofilm formation. The lowest concentration showing 50 % inhibition on biof i lm formation (BIC50) was decided by calculating the metabolic activity. The adhesion of C. albicans reduced by catestatin was visualized under an inverted microscope and quantified by colony count. The expression of HWP1 was analyzed by RT-PCR. One-way analysis of variance (ANOVA) and Dunnett’s T3 test were used to compare the results. Results Clinical strains and standard strain ATCC 10231 of C. albicans showed strong ability in forming biofilm. Catestatin exhibited MICs ranging from 40 μmol/L to 80 μmol/L against planktonic C. albicans cells, andBIC50of 80-160 μmol/L in inhibiting C. albicans bio fi lm formation. Catestatin reduced the adhesion of C. albicans. The colonyforming unit (CFU) was 27 822.22±2 472.74 in blank control group, while the CFU was 5 355.55±1 264.03, 11 377.78±2 232.58, 17 488.89±1 136.27, 22 377.78±3 521.99, and 26 044.44±1 329.57 in the presence of 160, 80, 40, 20, and 10 μmol/L catestatin, respectively (F=147.018, P=0.001). The difference between control group and 160, 80, and 40 μmol/L catestatin was statistically signi fi cant (P＜0.05). RT-PCR found the expression of HWP1 in the presence of 160 μmol/L catestatin was about 12.24 % of that in blank control group. Conclusions Catestatin can effectively prevent C. albicans bio fi lm formation. This effect may be related to the down-regulated expression of adhesion gene HWP1 by catestatin, which results in reduced adhesion of C. albicans. Promising clinical prospect is expected for this fi nding.

C. albicans; bio fi lm formation; chromogranin A; anti-adherent

R978.5

A

1009-7708 ( 2017 ) 04-0387-06

10.16718/j.1009-7708.2017.04.008

2016-09-18

2017-02-02