青海藏族和回族胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)與CYP2E1基因多態(tài)性*

迪 吉，趙君慧

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科 )

青海藏族和回族胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)與CYP2E1基因多態(tài)性*

迪 吉，趙君慧※

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科 )

目的 明確青海地區(qū)藏、回族胃癌患者CYP2E1基因SNP位點(diǎn)分布頻率，探討青海地區(qū)藏、回族胃癌患者CYP2E1基因SNP與環(huán)境因素的相關(guān)性。方法 在青海地區(qū)藏、回族病例中隨機(jī)選取研究對(duì)象，運(yùn)用病例對(duì)照研究，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為病例組和對(duì)照組，各96例，全血抽提基因組DNA。采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)、變性高效液相色譜分析(denaturing high performance liquid chromatography，DHPLC)方法研究青海藏族、回族CYP2E1基因多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphisms，SNP)及與胃癌的相關(guān)性。病例組與對(duì)照組之間位點(diǎn)基因型頻數(shù)分布差異采用χ2檢驗(yàn)。同期進(jìn)行病例組與對(duì)照組間胃癌高危因素調(diào)查。結(jié)果 1.CYP2E1基因5′-端位點(diǎn)在藏族病例組和對(duì)照組的分布頻率分別為c1/c1：80.2%、c1/c2：13.5%、c2/c2：6.3%；c1/c1：82.3%、c1/c2：15.6%、c2/c2：2.0%(P>0.05)；回族病例組和對(duì)照組的分布頻率分別為40.6%、52.1%、7.3%；71.88%、22.92%、5.2%(P<0.05)。結(jié)論 1.CYP2E1基因不是青海藏族人群胃癌的易感基因；2.CYP2E1基因是青?；刈迦巳何赴┑囊赘谢颍?.年齡、幽門(mén)螺旋桿菌、飲食習(xí)慣、高脂血癥、慢性萎縮性胃炎、家族胃癌病史是青海地區(qū)藏族人群罹患胃癌的主要環(huán)境危險(xiǎn)因素；4.年齡、大量進(jìn)食肉類(lèi)、幽門(mén)螺旋桿菌、慢性萎縮性胃炎、血小板數(shù)異常是青海地區(qū)回族人群罹患胃癌的主要環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)因素。

藏族 回族 胃癌 CYP2E1 基因多態(tài)性 易感性

細(xì)胞色素P4502El(cytochrome P4502E1，CYP2E1)是代謝酶類(lèi)基因，在人體內(nèi)是亞硝酸的重要代謝酶，而亞硝酸是導(dǎo)致胃癌的重要因素[1-5]。因此，CYP2E1基因多態(tài)性位點(diǎn)可能影響胃癌的發(fā)生。本課題擬用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)、變性高效液相色譜分析(denaturing high performance liquid chromatography，DHPLC)方法研究青海藏族、回族CYP2E1基因多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphisms，SNP)及與胃癌的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2014年12月～2016年12月，就診青海大學(xué)附屬醫(yī)院藏、回族胃癌患者各96例，設(shè)為病例組(未經(jīng)放化療)；同期就診的健康藏、回族體檢者各96例，設(shè)為對(duì)照組。其中藏族病例組男性60例，女性36例，年齡44.64±16.71；對(duì)照組男性55例，女性42例，年齡46.64±12.26； 回族病例組男性65例，女性34例，年齡42.14±11.71；對(duì)照組男性50例，女性46例，年齡44.04±14.62。

將兩組患者的CYP2E1基因型進(jìn)行Hardy-Weinberg遺傳平衡吻合度檢驗(yàn)。結(jié)果顯示兩組各基因型分布均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。

表1 藏、回族病例組與對(duì)照組人群Hardy-Weinberg平衡吻合度比較表

Table 1 Comparison of Hardy-Weinberg balanced anastomosis between Tibetan and Hui (case group and control group)

1.2 原發(fā)性胃癌診斷標(biāo)準(zhǔn)

(1)經(jīng)組織病理學(xué)證實(shí)術(shù)后病理診斷；(2)符合2011年中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)胃癌專(zhuān)業(yè)委員會(huì)制定的原發(fā)性胃癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。

1.3 標(biāo)本

采集全血10 mL，進(jìn)行血清和單個(gè)核細(xì)胞分離。抽提基因組DNA，備用。

1.4 測(cè)定方法

采用PCR、DHPLC法檢測(cè)胃癌患者及健康人群CYP2E1表達(dá)水平；采取酚-氯仿法制備基因組DNA。

1.5 引物

設(shè)計(jì)和合成：

(1)構(gòu)建CYP2E1引物，設(shè)β球蛋白(β-globin，268bp)為內(nèi)對(duì)照：

5′CAA CTT CAT CCA CGA TCA CC3′

5′GAA GAG CCA AGA ACA GGT AC3′

(2)PCR擴(kuò)增CYP2E1基因5′端調(diào)控區(qū)RsaIRFLP位點(diǎn)。參數(shù)見(jiàn)表2。

表2 CYP2E1基因位點(diǎn)PCR擴(kuò)增參數(shù)表

Table 2 PCR amplification parameter for CYP2E1 gene locus

1.6 CYP2E1 SNP等位基因分型檢測(cè)方法

采用DHPLC法。

1.7 青海地區(qū)藏族、回族原發(fā)性胃癌高危因素調(diào)查方法

設(shè)置胃癌高危因素調(diào)查表[7-9]。受試者本人或家屬簽署知情同意書(shū)。

胃癌高危因素調(diào)查表內(nèi)容：性別、年齡[10、11]、民族、居住地、飲食習(xí)慣[12-14]、職業(yè)因素、特殊生活習(xí)慣，是否有患癌家族史[15、16]和基礎(chǔ)胃病史[17]等。病例組采用詢(xún)問(wèn)病人和查閱病歷方法。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS(Version 11.5)統(tǒng)計(jì)軟件。發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)與CYP2E1基因多態(tài)性采用Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，并行l(wèi)ogistic回歸，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CYP2E1基因多態(tài)性與青海藏族、回族胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系

2.1.1 CYP2E1基因5′-端Rsa I(rs2031920)調(diào)控區(qū)位點(diǎn)3種基因型(c1/c1，c1/c2，c2/c2)在病例組和對(duì)照組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。提示CYP2E1基因5′-端Rsa I位點(diǎn)等位基因型可能不是青海藏族胃癌的確切易感基因。見(jiàn)表3。

表3 青海藏、回族病例組與對(duì)照組人群CYP2E1基因頻率檢驗(yàn)結(jié)果表(%)

Table 3 CYP2E1 gene frequency test in case group and control group of Tibetan and Hui nationality at Qinghai(%)

基因/基因型藏族病例組(n=96)對(duì)照組(n=96)回族病例組(n=96)對(duì)照組(n=96)CYP2E1基因C1/C177(80．2)79(82．3)39(40．6)69(71．88)C1/C213(13．5)15(15．6)50(52．1)22(22．92)C2/C26(6．3)2(2．0)7(7．3)5(5．20)χ219．556P0．384?0．000

*：Fisher確切概率.

2.1.2 CYP2E1基因5′-端Rsa I(rs2031920)調(diào)控區(qū)位點(diǎn)3種基因型(c1/c1，c1/c2，c2/c2)在病例組和對(duì)照組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。表明CYP2E1基因5′-端Rsa I位點(diǎn)等位基因型是青海回族胃癌的確切易感基因。見(jiàn)表3。

2.2 青海藏、回族胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)與CYP2E1基因多態(tài)性的關(guān)系

2.2.1 環(huán)境危險(xiǎn)因素與青海藏、回族胃癌的單因素分析結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 青海藏、回族胃癌危險(xiǎn)因素logistic回歸單因素分析表

Table 4 Single factor logistic regression analysis of gastric cancer risk factors in Tibetan and Hui at Qinghai

(1)藏族單因素分析結(jié)果：病例組與對(duì)照組在性別、血小板、飲酒及吸煙因素方面與胃癌發(fā)生無(wú)關(guān)，其余7個(gè)因素均達(dá)到顯著性水平，是胃癌的危險(xiǎn)因素。

(2)回族單因素分析結(jié)果：病例組與對(duì)照組在年齡、幽門(mén)螺旋桿菌、肉類(lèi)、血小板、慢性萎縮性胃炎方面與胃癌發(fā)生相關(guān)，是胃癌的危險(xiǎn)因素。

2.2.2 多因素分析結(jié)果見(jiàn)表5～6、圖1。

表5 青海藏族胃癌危險(xiǎn)因素logistic回歸多因素分析表

Table 5 Multiple factor analysis of logistic regression of risk factors of gastric cancer in Qinghai Tibetan

因素βS．E．χ2POR年齡-0．8820．3327．0640．0080．414肉類(lèi)1．9900．7796．5240．0117．314幽門(mén)螺旋桿菌-1．8760．7665．9770．0140．153高脂血癥3．2770．79217．1210．00026．492慢性萎縮性胃炎-1．3480．6244．6620．0310．260蔬菜-2．2190．7997．7140．0059．201家族胃癌史3．7770．87618．6000．00043．694

表6 青?；刈逦赴┪ｋU(xiǎn)因素logistic回歸多因素分析表

Table 6 Logistic regression multiple-factor analysis of risk factors of gastric cancer in Qinghai Hui nationality

因素βS．E．χ2POR年齡-0．8820．3327．0640．0080．414肉類(lèi)1．8960．8165．3910．0206．658幽門(mén)螺旋桿菌1．8630．51413．1140．0006．443慢性萎縮性胃炎2．2690．44925．5210．0009．672血小板2．0910．60112．1060．0018．094

(1)環(huán)境危險(xiǎn)因素與青海藏族胃癌的關(guān)系：在上述單因素分析的基礎(chǔ)上，對(duì)選出的11個(gè)變量進(jìn)行非條件logisitc回歸分析，年齡、幽門(mén)螺旋桿菌、飲食習(xí)慣(肉類(lèi)食用過(guò)多)、高脂血癥、慢性萎縮性胃炎、飲食習(xí)慣(蔬菜食用不足)、家族胃癌病史共7個(gè)因素，達(dá)到顯著性水平，是胃癌發(fā)生的影響因素，進(jìn)入logisitc回歸模型(α=0.05)。

(2)環(huán)境危險(xiǎn)因素與青?；刈逦赴┑年P(guān)系：在上述單因素分析的基礎(chǔ)上，對(duì)選出的9個(gè)變量進(jìn)行非條件logisitc回歸分析，年齡、幽門(mén)螺旋桿菌、肉類(lèi)、血小板、慢性萎縮性胃炎等5個(gè)因素達(dá)到顯著性水平，是胃癌發(fā)生的影響因素，進(jìn)入logisitc回歸模型(α=0.05)。

(3)CYP2E1基因多態(tài)性位點(diǎn)結(jié)果圖1。

①CYP2E1 基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖：泳道1、2、3、4、5為擴(kuò)增產(chǎn)物(413bp)，M為分子量標(biāo)記：所用DNA對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品為Marker 1(100bp ladders)

a：CYP2E1 基因CC位點(diǎn)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖

b：CYP2E1 基因CT位點(diǎn)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖

c：CYP2E1 基因TT位點(diǎn)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖

圖1 CYP2E1基因多態(tài)性位點(diǎn)結(jié)果圖

Figure 1 Results of CYP2E1 gene polymorphic loci

a：CYP2E1 基因rs2031920位點(diǎn)野生型(C/C)DHPLC分型圖

A：CYP2E1 基因rs2031920位點(diǎn)野生型(C/C)DHPLC分型的測(cè)序驗(yàn)證圖

b：CYP2E1 基因rs2031920位點(diǎn)雜合突變型(C/T)DHPLC分型圖

B：CYP2E1 基因rs2031920位點(diǎn)雜合突變型(C/T)DHPLC分型的測(cè)序驗(yàn)證圖

c：CYP2E1 基因rs2031920位點(diǎn)雜合突變型(T/T)DHPLC分型的測(cè)序驗(yàn)證圖

C：CYP2E1 DHPLC總圖

圖2 DHPLC檢測(cè)CYP2E1基因多態(tài)性位點(diǎn)圖

Figure 2 Maps for CYP2E1 gene polymorphic locus detected by DHPLC

3 討論

某一基因多態(tài)性基因型的分布頻率在患者人群與正常人群中統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異，可以認(rèn)為此多態(tài)性基因是這種疾病的影響素因之一。特定的變異與環(huán)境因素和基因-環(huán)境相互作用致胃癌的發(fā)生率增高[18]。藏族、回族是青海地區(qū)主要少數(shù)民族，也是青海地區(qū)胃癌發(fā)病的主要人群[19-21]。對(duì)于胃癌相關(guān)的SNP研究，可以積累隔離民族的遺傳學(xué)資料。

本研究顯示CYP2E1基因5′-端Rsa I位點(diǎn)等位基因型不是青海藏族胃癌的確切易感基因，是青?；刈逦赴┑拇_切易感基因，提示同在青海地區(qū)的不同民族間存在CYP2E1基因多態(tài)性。

年齡、幽門(mén)螺旋桿菌、飲食習(xí)慣、高脂血癥、慢性萎縮性胃炎、家族胃癌病史是青海地區(qū)藏族人群罹患胃癌的主要環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)因素，多進(jìn)食蔬菜是降低胃癌發(fā)生的保護(hù)因素。

年齡、大量進(jìn)食肉類(lèi)、感染幽門(mén)螺旋桿菌、罹患慢性萎縮性胃炎、血小板異常是青海地區(qū)回族人群罹患胃癌的主要環(huán)境危險(xiǎn)因素。

研究已表明CYP2E1多態(tài)性與胃癌發(fā)生有密切關(guān)系，周濤等[22]研究表明，胃癌組c1/c1基因型的分布頻率高于對(duì)照組，揭示了CYP2E1 c1/c1基因型與胃癌遺傳易感性相關(guān)。陳元鴻等[23]研究顯示，攜帶CYP2E1 c2/c2 基因型個(gè)體的CYP2E1酶活性比c1/c1型或c1/c2型攜帶者的酶活性高，攜帶CYP2E1 c1/c2或c2/c2基因型的個(gè)體比c1/c1基因型攜帶者患胃癌風(fēng)險(xiǎn)低，進(jìn)一步說(shuō)CYP2E1 c1/c1基因型是腫瘤易感基因。Elingarami S[24]則對(duì)中國(guó)江蘇北部胃癌人群進(jìn)行病例對(duì)照研究發(fā)現(xiàn)CYP2E1基因多態(tài)性是胃癌風(fēng)險(xiǎn)的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。

但也有研究報(bào)道CYP2E1基因多態(tài)性不是胃癌的危險(xiǎn)因素。Park GT[25]在韓國(guó)胃癌患者中發(fā)現(xiàn)，CYP2E1基因型分布的整體與對(duì)照組無(wú)顯著性差異。González A[26]的研究表明，在哥斯達(dá)黎加人群中CYP2E1基因多態(tài)性可能與胃癌的風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)(OR0.09，IC95%：0.01-0.83)。Zhang MX[27]則在32病例對(duì)照研究的薈萃分析中闡述中國(guó)人群中CYP2E1多態(tài)性與胃癌易感性相關(guān)，但不夠明確。僅在亞組研究中可以確定CYP2E1基因多態(tài)性增加吸煙人群胃癌的危險(xiǎn)。而非吸煙人群中CYP2E1基因多態(tài)性與胃癌的風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)聯(lián)。CYP2E1多態(tài)性與胃癌易感性的關(guān)系還需要進(jìn)一步探討。上述研究報(bào)道結(jié)果并不一致，甚至自相矛盾的原因可能為，個(gè)體對(duì)活化解毒環(huán)境中各種前致癌物的能力存在遺傳差異；樣本量大小不一。因此，還需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本數(shù)量研究CYP2E1多態(tài)性，且須結(jié)合當(dāng)?shù)厝朔N、民族特點(diǎn)及主要病因。 CYP2E1多態(tài)性與腫瘤易感性間的聯(lián)系研究將有助于闡明腫瘤病因及發(fā)病機(jī)制，對(duì)防治腫瘤，尤其是早期篩查腫瘤高危人群有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

青海地區(qū)各民族因宗教習(xí)俗與外界基因交流較少，選擇青海藏族、回族作為研究樣本具有可靠性。

相比青海其他民族，胃癌發(fā)病率較高，推測(cè)胃癌發(fā)生中遺傳因素可能發(fā)揮了重要作用。因此，在研究藏、回族胃癌的易感基因時(shí)須篩查相關(guān)SNP。

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Risk of Gastric Cancer and Polymorphism of CYP2E1 Gene in Tibetan and Hui at Qinghai

DI Ji，ZHAO Jun-hui※

(Department of oncology，Affiliated Hospital of Qinghai University)

Objective To check the frequency of Qinghai Tibetan and Hui CYP2E1 in patients with gastric carcinoma SNP gene frequency distribution，and investigate the correlation between CYP2E1 gene SNP and environmental factors in Tibetan and Hui patients with gastric cancer at Qinghai province.Methods In the case of Tibetan and Hui nationality in Qinghai area，the subjects were randomly selected，the case control study was divided into the case group and the control group according to the random number table，each with 96 cases，Whole blood extraction genomic DNA.PCR and DHPLC were used to study the correlation between CYP2E1 SNP and gastric cancer，The difference of genotype frequency distribution between the case group and the control group was analyzed by χ2test.The high-risk factors of gastric cancer between case group and control group were investigated at the same time.Results The frequencies of the 5′-CYP2E1 gene in Tibetan case group and control group were c1/c1：80.2%，c1/c2：13.5%，c2/c2：6.3%；c1/c1：82.3%，c1/c2：15.6%，c2/c2：2.0%，respectively.(P>0.05)；The frequency distribution of the case group and the control group was 40.6%，52.1%，7.3%；71.88%，22.92%，5.2%，respectively(P<0.05).Conclusions 1.CYP2E1 gene is not a susceptible gene of gastric cancer in Qinghai Tibetan population.2.CYP2E1 gene is a susceptible gene of gastric cancer in Hui people in Qinghai.3.Age，Helicobacter pylori，dietary habits，hyperlipidemia，chronic atrophic gastritis and family history of gastric cancer are the main environmental risk factors for gastric cancer in Tibetan population in Qinghai area.4.Age，large amount of meat，Helicobacter pylori，chronic atrophic gastritis and abnormal platelet count are the main environmental risk factors for gastric cancer in Hui people in Qinghai area.

Tibetan Hui nationality Gastric cancer CYP2E1 Gene polymorphism susceptibility

*：青海大學(xué)科研項(xiàng)目(ASRF-2012-01)；青大附院科研項(xiàng)目(2012-QYY-12)；※：通信作者，教授，青海大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，Email：zjh196@yeah.net 迪吉(1977～)，女，藏族，青海籍，碩士生，副主任醫(yī)師

R735.2

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10.13452/j.cnki.jqmc.2017.02.007

2017-02-06