惡性血液病患者化療前后TBNK淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)及其臨床意義

唐 軍

（九江市婦幼保健院檢驗(yàn)科，江西九江332000）

惡性血液病患者化療前后TBNK淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)及其臨床意義

唐 軍

（九江市婦幼保健院檢驗(yàn)科，江西九江332000）

目的探討惡性血液病患者化療前后TBNK淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)及其臨床意義。方法采用流式細(xì)胞儀對(duì)兩組患者進(jìn)行外周血TBNK淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)，分析化療前后的變化，觀察組患者的免疫功能變化及其與病情進(jìn)展之間的聯(lián)系和病情的變化及預(yù)后。結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，觀察組的所有患者指標(biāo)均低于對(duì)照組，且急性患者比非急性患者更低。在治療后，40例患者中有25例患者TBNK淋巴細(xì)胞亞群有明顯變化，得到了緩解。治療前，觀察組患者CD3、CD4+、CD3+/CD8+、D16+CD56+指標(biāo)較低，治療后明顯提高，通過指標(biāo)的變化分析患者免疫功能和病情的變化。結(jié)論化療前，惡性血液病患者的TBNK各項(xiàng)指標(biāo)異常，化療后得到有效的緩解，表明通過檢測(cè)TBNK淋巴細(xì)胞亞群有助于了解患者的免疫功能和病情的變化情況，值得推廣應(yīng)用。

惡性血液病；化療；TBNK淋巴細(xì)胞亞群

血液病是目前威脅著人類健康的一類重大疾病，是一種原發(fā)于造血系統(tǒng)的疾病，其中，惡性血液病是所有惡性腫瘤發(fā)病率排第6位的一類疾病[1]。目前治療惡性血液病的主要手段是化療，但化療藥物通?！皵澄也环帧保跉⑺啦∽兗?xì)胞的同時(shí)，也會(huì)殺傷人體正常免疫細(xì)胞。感染是惡性血液病患者死亡的重要原因，大量的文獻(xiàn)表明[2]：化療會(huì)對(duì)機(jī)體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生損害，導(dǎo)致患者免疫力下降，增加其發(fā)生感染的機(jī)率。如何在化療、免疫調(diào)節(jié)劑應(yīng)用和預(yù)防感染中找到一個(gè)平衡點(diǎn)，對(duì)患者進(jìn)行恰如其分的治療，是臨床工作者經(jīng)常要碰到的問題，這需要臨床醫(yī)生確切的掌握每個(gè)患者的免疫情況。本次研究，旨在通過對(duì)TBNK淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)，了解患者的免疫功能變化及其與病情進(jìn)展之間的聯(lián)系，了解病情的變化及預(yù)后，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料觀察組選擇2014年3月～2015年3月我院接受診治的惡性血液初治病患者共40例，男27例，女13例，年齡20～65歲，平均年齡（35.22±2.1）歲。均于MICM確診為急慢性白血病，其中，急性白血病22例，慢性白血病5例、惡性淋巴瘤9例、多發(fā)性骨髓瘤4例。對(duì)照組選擇同時(shí)期到我院健康體檢者30例，其中，男16例，女14例，年齡22～67歲，平均年齡（35.31±2.3）歲。所有病例診斷均符合血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)，兩組的年齡、性別等一般資料差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法檢測(cè)時(shí)間和次數(shù)：惡性血液病患者分別采用DA、DVP、CHOP、COMP等方案治療，2l d為1個(gè)周期。所有病例及正常對(duì)照組均空腹抽晨血，檢測(cè)惡性血液病患者治療前、有效緩解、未緩解、化療緩解后鞏固治療各階段及正常人的外周血分別3次測(cè)定TBNK淋巴細(xì)胞亞群。

標(biāo)本收集：（1）收集正常人外周血和各類惡性血液病初治患者外周血，無(wú)菌條件下采集以EDTA-K抗凝2 mL；（2）收集化療有效緩解的患者與未能緩解患者化療前后外周血，無(wú)菌條件下采集以EDTA-K抗凝2 mL；（3）收集化療緩解后各類惡性血液病患者鞏固治療各階段外周血，無(wú)菌條件下采集以EDTA-K抗凝2 mL；

TBNK細(xì)胞檢測(cè)：應(yīng)用熒光直接標(biāo)記法及流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞膜表面CD3/CD4/CD8/CD45/CD16+56/ CD19。取試管加入調(diào)節(jié)細(xì)胞數(shù)為1×106細(xì)胞數(shù)的外周血，加入試劑20μL，室溫下避光孵育15～20 min→加入1 mL紅細(xì)胞裂解液→室溫下避光15 min→1 200轉(zhuǎn)/min離心5 min兩遍→500μLPBS重懸細(xì)胞，上機(jī)測(cè)定。調(diào)用MultiSET軟件，圈淋巴細(xì)胞門，讀取數(shù)據(jù)。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)所有病例診斷均參照血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)，不符合此標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)臨床診斷為非惡性血液病患者。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，計(jì)量資料采用“s”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者外周血TBNK淋巴細(xì)胞亞群治療前后的檢測(cè)變化比較從觀察組的40例患者治療前后的TBNK淋巴細(xì)胞數(shù)據(jù)比較，治療后的惡性血液病患者CD3、CD4+、CD3+/CD8+、D16+CD56+指標(biāo)有明顯的提高，前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 惡性血液病患者和健康人群TBNK淋巴細(xì)胞分布特點(diǎn)觀察組的CD3、CD4+、CD3+/CD8+、D16+CD56+指標(biāo)均低于對(duì)照組，且急性患者的CD3+/CD8+最低為（0.97±0.32）。隨著病情的緩解，指標(biāo)都在升高并恢復(fù)至正常水平，緩解后各項(xiàng)指標(biāo)和對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

目前最常用的檢測(cè)淋巴細(xì)胞亞群，包括T淋巴細(xì)胞（CD3）、B淋巴細(xì)胞（CD19）、NK細(xì)胞（CD16+56+）、輔助性T淋巴細(xì)胞（CD3+CD4+）、抑制性T淋巴細(xì)胞（CD3+CD8+）[3]。CD4+細(xì)胞可協(xié)助B細(xì)胞分泌抗體和調(diào)節(jié)其他T細(xì)胞的免疫應(yīng)答，能夠識(shí)別血液腫瘤細(xì)胞分泌的可溶性抗原，釋放IL-2，IFN-γ，IL-4等細(xì)胞因子，激活巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞，促進(jìn)B淋巴細(xì)胞活化和抗體的形成，從而起到抗腫瘤作用[4]；CD8+細(xì)胞常表現(xiàn)細(xì)胞毒活性，是主要的細(xì)胞毒效應(yīng)細(xì)胞；NK細(xì)胞是機(jī)體防御腫瘤的天然屏障，腫瘤細(xì)胞能被它直接或者分泌出細(xì)胞因子而殺傷，腫瘤發(fā)展和發(fā)生轉(zhuǎn)移的原因往往是因?yàn)槠浠钚缘慕档?。分泌抗體和介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答是B淋巴細(xì)胞的主要功能?；罨腂淋巴細(xì)胞可以分泌抗原，誘導(dǎo)T細(xì)胞免疫和巨噬細(xì)胞補(bǔ)體系統(tǒng)一起殺死腫瘤細(xì)胞[5]。

胸腺肽是臨床上應(yīng)用很廣的一種免疫調(diào)節(jié)劑，能誘導(dǎo)T細(xì)胞的分化成熟，增加細(xì)胞因子的生成和增強(qiáng)B細(xì)胞的抗體應(yīng)答，起到維持機(jī)體免疫平衡，提高機(jī)體抵抗疾病的能力。已有報(bào)導(dǎo)證實(shí)[6]：化療的同時(shí)使用胸腺肽可以保護(hù)增強(qiáng)免疫細(xì)胞的活性，保證化療的如期進(jìn)行，還能調(diào)動(dòng)提高機(jī)體免疫活性細(xì)胞達(dá)到機(jī)體免疫功能良性循環(huán)。

正常情況下機(jī)體免疫狀態(tài)的維持，靠各種免疫細(xì)胞之間相互作用，使各細(xì)胞的指標(biāo)達(dá)到一種穩(wěn)定的狀態(tài)[7]。近年的相關(guān)研究表明[8]，Th（輔助性T淋巴細(xì)胞）及Ts（抑制性T淋巴細(xì)胞）的平衡是維持機(jī)體免疫內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的一個(gè)中心環(huán)節(jié)，其比值可直接反映機(jī)體細(xì)胞免疫功能狀態(tài)，當(dāng)Th/Ts比值很低時(shí)，機(jī)體細(xì)胞免疫處于受抑制的狀態(tài)，增加機(jī)體發(fā)生感染的概率，同時(shí)也預(yù)示著患者的預(yù)后較差，容易發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移。

本次研究證明，惡性血液病患者TBNK細(xì)胞比值及其功能和正常的健康人群相比更低，如與免疫功能有關(guān)的CD3+CD8+指標(biāo)，其功能低下會(huì)導(dǎo)致腫瘤持續(xù)生長(zhǎng)；CD4+、D16+CD56+細(xì)胞在體內(nèi)抗瘤免疫中具有重要作用。經(jīng)化療后可以改善CD3、CD4+、CD3+/CD8+、D16+CD56+各項(xiàng)指標(biāo)的比值，緩解后免疫功能恢復(fù)到正常水平。

綜上所述，治療前的惡性血液患者和治療后的惡性血液患者TBNK淋巴細(xì)胞的比值有明顯差異，檢測(cè)TBNK淋巴細(xì)胞亞群的比值，對(duì)評(píng)價(jià)治療后的療效、患者的免疫功能變化及其與病情進(jìn)展之間的聯(lián)系和病情的變化及預(yù)后方面有著一定的臨床價(jià)值，值得廣為應(yīng)用。

表1 兩組患者外周血TBNK淋巴細(xì)胞亞群治療前后的檢測(cè)變化比較（）

表1 兩組患者外周血TBNK淋巴細(xì)胞亞群治療前后的檢測(cè)變化比較（）

注：t、P值所得數(shù)據(jù)，來(lái)源于觀察組治療前和治療后的數(shù)據(jù)比較

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10.3969/j.issn.1009-4393.2017.21.079