《正骨益中散》藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

詹立晶 畢 娜 楊思廣

《正骨益中散》藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

詹立晶 畢 娜 楊思廣

目的研究正骨益中散的原材料檢驗方法，對檢驗過程中的注意事項進(jìn)行分析。方法通過顯微鑒別、薄層色譜法分別對紅花、燙骨碎補(bǔ)、當(dāng)歸、續(xù)斷、乳香、沒藥、川芎、白芍八種中藥進(jìn)行鑒別，鑒別的過程進(jìn)行系統(tǒng)剖析，對關(guān)鍵環(huán)節(jié)和重點步驟做歸納和總結(jié)。結(jié)果顯微鑒別紅花特征明顯。川芎、白芍薄層色譜結(jié)果重復(fù)性好。結(jié)論該方法準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性良好，易于操作，可應(yīng)用于正骨益中散的質(zhì)量控制。

正骨益中散；顯微鑒別；薄層色譜；川芎；紅花；白芍

正骨益中散由紅花、燙骨碎補(bǔ)、當(dāng)歸、續(xù)斷、乳香、沒藥、川芎、白芍以上8味中藥制成。其為臨床院內(nèi)協(xié)定處方，具有接骨續(xù)筋、改善機(jī)體血運的功效，主要用于骨折中期患者，臨床療效顯著。為有效控制藥品質(zhì)量，根據(jù)其藥味及制法，對其8味組分?jǐn)M依次進(jìn)行顯微、薄層色譜法定性鑒別，以確保其內(nèi)在質(zhì)量。

1 試劑與試藥

1.1 原料

1.1.1 燙骨碎補(bǔ) 燙骨碎補(bǔ)凈骨碎補(bǔ)或片，照燙法用砂燙至鼓起，撞去毛。

1.1.2 續(xù)斷 斷科植物川續(xù)斷Dispacus asper Wall.exHenry的去除水分的根。秋天采集，除去跟頭及須根，以微火烘半干后，“發(fā)汗”至內(nèi)部轉(zhuǎn)為綠色時，再進(jìn)行烘干[1]。

1.1.3 紅花 科植物紅花Carthamus tinctorius L.的干制花。夏日花由黃色變紅色后采收后，進(jìn)行陰干或曬干[1]。

1.1.4 當(dāng)歸 形科植物當(dāng)歸Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根[1]。味甘平，性溫。功能補(bǔ)血和血，調(diào)經(jīng)止痛、潤腸通便[1]。

1.1.5 乳香 欖科植物乳香樹Boswellia carterii Birdw.和其同屬植物Boswellia bhaw-dajiana Birdw.樹皮滲出的樹脂[1]。

1.1.6 沒藥 欖科植物地丁樹Commiphora murrha Engl.或哈地丁樹Commiphora molmol Engl.的干燥樹脂[1]。

1.1.7 川芎 形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根莖[1]。

1.2 樣品實驗所用的中成藥、陰性對照品均由吉林省磐石市骨傷醫(yī)院提供。正骨益中散批號為20150720-1、20150720-2、20150720-3。

1.3 對照品紅花（批號：120907-201412）、當(dāng)歸（批號：120927-200613）、續(xù)斷（批號：121033-200306）、川芎（批號：120918-201411）、芍藥苷[批號：110736-200934（供含量測定用）]，以上對照品來源為中國食品藥品檢定研究院。

1.4 硅膠G薄層板預(yù)制薄層板：0×100 mm，厚度：0.20～0.25 mm，批號：20150905，青島海洋化工廠分廠；硅膠H預(yù)制板，規(guī)格：100×100 mm，厚度：0.20～0.25 mm，批號：20150827，青島海洋化工廠分廠；硅膠GF 254預(yù)制板，規(guī)格：100×100 mm，厚度：0.20～0.25 mm，批號：20141006，青島海洋化工廠分廠。薄層色譜所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

根據(jù)該品種的處方藥味及制法，8味中藥均以生藥原粉入藥。對處方中主藥、臣藥、佐藥擬依次進(jìn)行顯微、薄層色譜法定性鑒別，列入【鑒別】（1）（2）（3），以確保該藥的內(nèi)在質(zhì)量。

2.1 燙骨碎補(bǔ)鑒別實驗燙骨碎補(bǔ)經(jīng)砂燙后成分發(fā)生變化，《中國藥典》2010年版一部燙骨碎補(bǔ)項下已無顯微鑒別和薄層鑒別，并且燙骨碎補(bǔ)無研究報道，故在正文中未收載其鑒別項。

2.2 續(xù)斷鑒別實驗

2.2.1 顯微鑒別 草酸鈣簇狀結(jié)晶較多，直徑約15～50 μm，散落于皺縮的薄壁細(xì)胞內(nèi)，多個排列成緊密條狀，或紡錘形薄壁細(xì)胞壁稍厚，或斜向交錯細(xì)紋理；緣紋孔導(dǎo)管與網(wǎng)紋導(dǎo)管的直徑約72（90）μm；木栓細(xì)胞為淡棕色，表面觀類長方形、類方形、多角形、長多角形，壁薄。草酸鈣簇晶特征同川芎、白芍。紡錘形薄壁細(xì)胞壁特征同當(dāng)歸。故在正文中未收載其顯微鑒別項。

2.2.2 薄層色譜 取試樣16 g，準(zhǔn)確加入氨試劑4 ml，搖均勻，靜置約1 h，加入30 ml三氯甲烷試劑，超聲約30 min，過濾，用4%鹽酸溶液30 ml多次振搖提取濾液，提取后的濾液以濃氨試劑調(diào)節(jié)pH呈堿性，到pH為10，三氯甲烷20 ml分次振搖提取，合并三氯甲烷液，濃縮至0.5 ml，作為供試品溶液。準(zhǔn)確稱取對照藥材斷續(xù)3 g，使用相同處理方法制成對照藥材溶液。稱取陰性對照（不含有斷續(xù)），使用相同處理方法，制備成陰性對照品供試溶液。點樣量：上述3種溶液各5 μl；薄層板：硅膠G；展開劑：乙醚-丙酮（1:1）；顯色：均勻噴涂良碘化鉍鉀試劑；實驗溫度：15 ℃；相對濕度：18%；展距：8 cm。在供試樣品的色譜圖和陰性對照色譜圖中，在和對照藥材色譜圖對應(yīng)的位置上，顯一樣顏色的點。陰性對照有干擾。正文中未收載其薄層鑒別項。3批樣品按上述方法檢測，結(jié)果重現(xiàn)性良好，見圖1。

圖1 續(xù)斷的薄層色譜圖（1.對照藥材；2.陰性對照；3.樣品20150720-1；4.樣品20150720-2；5.樣品20150720-3）

2.3 當(dāng)歸鑒別試驗

2.3.1 顯微鑒別 其韌皮薄壁的細(xì)胞呈紡錘形，細(xì)胞壁略厚，能觀察到極微細(xì)斜向交錯紋理在其表面，偶爾可觀察到菲薄的橫隔。梯紋導(dǎo)管以及網(wǎng)紋導(dǎo)管較常見，其直徑約為80 μm左右。偶爾可觀察到油室的碎片。紡錘形薄壁細(xì)胞壁特征同續(xù)斷。故在正文中未收載其顯微鑒別項。

2.3.2 薄層色譜 稱取試樣0.5 g，加入乙醚試劑20 ml，超聲震蕩10 min，進(jìn)行過濾，濾液蒸干后，向其殘渣中加入乙醇試劑1 ml溶解殘渣，即為供試品。稱取當(dāng)歸對照藥材0.5 g，采用相同前處理方法，制備對照藥材供試品。稱取陰性對照（其中不含當(dāng)歸），采用相同前處理方法，制備陰性對照藥材供試品。點樣量：上述3種溶液各10 μl；薄層板：硅膠G；展開劑：正己烷-乙酸乙酯（4:1）；顯色：硅膠板在365 nm紫外光燈下檢視；實驗溫度：15 ℃；相對濕度：18%；展距：8 cm。供試品的色譜和陰性對照色譜與對照藥材的色譜進(jìn)行對比，在對應(yīng)位置，都顯有相同顏色熒光斑點。陰性有干擾。故在正文中未收載其薄層鑒別項。3批樣品按上述方法檢測，結(jié)果重現(xiàn)性良好，見圖2。

圖2 當(dāng)歸的薄層色譜圖（1.對照藥材；2.陰性對照；3.樣品20150720-1；4.樣品20150720-2；5.樣品20150720-3）

2.4 紅花鑒別試驗

2.4.1 顯微鑒別 可見較多花冠和花絲及柱頭碎片，導(dǎo)管旁可見直徑約為66 μm長管狀分泌細(xì)胞，含有黃棕、紅棕色的分泌物質(zhì)。觀察花冠裂片頂端的表皮細(xì)胞時，能觀察到外壁突起并且呈短絨毛狀。顯微鑒別柱頭、花柱的上表皮細(xì)胞均分化為圓錐形的單細(xì)胞毛，先端呈現(xiàn)尖或者稍鈍狀?；ǚ鄣念w粒呈類圓、橢圓或者為橄欖形，直徑60 μm左右，能觀察到3個萌發(fā)孔，其外壁呈現(xiàn)齒狀突起狀?？捎^察到直徑2～6 μm的草酸鈣方狀結(jié)晶于薄壁細(xì)胞內(nèi)。其中“分泌細(xì)胞直徑約至66 μm，含黃棕色至紅棕色分泌物?；ǚ哿ｎ悎A形、橢圓形或橄欖形，直徑約60 μm，具有3個萌發(fā)孔，外壁有齒狀突起。特征較為明顯，在正文中收載其顯微鑒別項。

2.4.2 薄層色譜 準(zhǔn)確稱取0.5 g供試品，向其中加入丙酮（80%）5 ml，密封后振搖約15 min，靜置分層，移取上層液體為供試品。稱取質(zhì)量為0.5 g的對照藥材紅花，依據(jù)供試品前處理方式，制備為對照品溶液。稱取陰性對照（即樣品中不含紅花），依據(jù)供試品前處理方式，制備陰性對照溶液。點樣量：上述3種溶液各5 μl；薄層板：硅膠H；展開劑：乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7:2:3:0.4）；顯色：在日光下進(jìn)行檢視；實驗溫度：15 ℃；相對濕度：18%；展距：8 cm。供試品色譜中和對照品色譜相應(yīng)的位置上，沒有相同色斑點，故在正文中未收載其薄層鑒別項。3批樣品按上述方法檢測，結(jié)果重現(xiàn)性良好，如圖3。

圖3 紅花的薄層色譜圖（1.對照藥材；2.陰性對照；3.樣品20150720-1；4.樣品20150720-2；5.樣品20150720-3）

2.5 白芍鑒別試驗

2.5.1 顯微鑒別 糊化淀粉粒團(tuán)塊較多，草酸鈣簇晶直徑11～35 μm，存在于薄壁細(xì)胞中，常排列成行，或一個細(xì)胞中含數(shù)個簇晶。具緣紋孔導(dǎo)管和網(wǎng)紋導(dǎo)管直徑20～65 μm。纖維長梭形，直徑15～40 μm，壁厚，微木化，具大的圓形紋孔。草酸鈣簇晶特征同川芎、續(xù)斷。故在正文中未收載其顯微鑒別項。

2.5.2 薄層色譜 稱取試樣0.5 g，向其中加入10 ml乙醇浸提，振蕩器振搖5 min，過濾后將濾液蒸干，加入1 ml乙醇，即為供試品溶液。稱取芍藥苷對照品，加入乙醇制備成1 mg/1 ml的溶液，即為對照品溶液。陰性對照溶液的制備取陰性對照（即不含有芍藥苷的樣品），依據(jù)供試品溶液制備方法，制備陰性對照溶液。點樣量：上述3種溶液各10 μl；薄層板：硅膠G；展開劑：三氯甲烷:乙酸乙酯:甲醇:甲酸的比例為40:5:10:0.2；實驗溫度：15 ℃；相對濕度：18%；展距：8 cm；顯色：均勻噴入香草醛硫酸溶液（5%），進(jìn)行加熱使斑點清晰。供試品色譜與對照品色譜相對應(yīng)的位置，顯有相同的藍(lán)紫色斑點。故在正文中收載其薄層鑒別項。3批樣品按上述方法檢測，結(jié)果重現(xiàn)性良好，見圖4。

圖4 白芍的薄層色譜圖（1.對照品；2.陰性對照；3.樣品20150720-1；4.樣品20150720-2；5.樣品20150720-3）

2.6 川芎鑒別試驗

2.6.1 顯微鑒別 可見較多淀粉顆粒，單粒呈橢圓、長圓、類圓、卵圓以及腎形，其直徑為5～16 μm，長為21 μm左右，臍點可能呈點狀、長縫狀以及人字狀；偶爾可觀察到復(fù)粒，2～4單個分粒組成。薄壁細(xì)胞中可觀察到草酸鈣結(jié)晶，多呈直徑約為10～25 μm的類圓形團(tuán)狀、類簇晶狀?？捎^察到，表面呈多角形具有微波狀彎曲的深黃棕色木栓細(xì)胞?？梢姸鄶?shù)油室已破損，偶爾可觀察到油室的碎片，其分泌細(xì)胞的細(xì)胞壁薄，內(nèi)含油滴比較多。導(dǎo)管以螺紋導(dǎo)管為主，也可見網(wǎng)紋導(dǎo)管和梯紋導(dǎo)管，直徑為14～50 μm。草酸鈣簇晶特征同白芍、續(xù)斷。故在正文中未收載其顯微鑒別項。

2.6.2 薄層色譜 稱取供試品質(zhì)量為1 g，向其中加入20 ml乙醚試劑，加熱反復(fù)回流l h，過濾后將濾液蒸干，加乙酸乙酯2 ml溶解殘渣，即為供試品溶液。稱取川芎的對照藥材質(zhì)量1 g，依據(jù)供試品處理方式制備成對照藥材溶液。稱取陰性對照（即為不含有川芎的樣品），依據(jù)供試品處理方式，制成陰性對照溶液。點樣量：上述3種溶液各10 μl；薄層板：硅膠GF 254；展開劑：正己烷-乙酸乙酯（3:1)；顯色：在波長為254 nm的紫外光燈下檢視；實驗溫度：15 ℃；相對濕度：18%；展距：8 cm。供試品色譜中與對照藥材色譜在其相對應(yīng)的位置上，呈現(xiàn)相同顏色斑點。故在正文中收載其薄層鑒別項。3批樣品按上述方法檢測，結(jié)果重現(xiàn)性良好，見圖5。

圖5 川芎的薄層色譜圖（1.對照藥材；2.陰性對照；3.樣品20150720-1；4.樣品20150720-2；5.樣品20150720-3）

2.7 乳香、沒藥《中國藥典》2010年版一部乳香、沒藥項下已無顯微鑒別和薄層鑒別，并且乳香、沒藥無研究報道。故在正文中未收載其鑒別項。

2.8 點樣量研究①白芍：分別取芍藥苷對照品、3批樣品依法制成對照品溶液和供試品試液，分別移取以上兩種試液，體積5 μl、10 μl、20 μl，點于硅膠G薄層板上，展開，顯色，點樣量10 μl時效果較好。②川芎：分別取川芎對照藥材、3批樣品依法制成對照藥材溶液和供試品溶液，吸取上述兩種溶液各5 μl、10 μl、20 μl，分別點于硅膠G薄層板，展開，顯色，點樣量10 μl時效果較好。

2.9 不同溫濕度條件下薄層實驗考察

2.9.1 不同濕度（同一實驗溫度：15 ℃） 分別取芍藥苷對照品、3批樣品，分別在濕度為18%、32%、58%條件下，按照白芍薄層鑒別方法進(jìn)行實驗。分別取川芎對照藥材、3批樣品，分別在濕度為18%、32%、58%條件下，按照川芎薄層鑒別方法進(jìn)行實驗。濕度控制：將已點樣的薄層板分別放在濕度為18%的干燥器中（硫酸100:水95.5）、32%的干燥器中（硫酸68:水100）、58%的干燥器中（硫酸39.5:水100），放置5 h。小結(jié)：濕度對結(jié)果影響較?。▓D6-11）。

圖6 白芍（濕度：18%）

圖7 白芍（濕度：32%）

圖8 白芍（濕度：58%）

圖9 川芎（濕度：18%）

圖10 川芎（濕度：32%）

圖11 川芎（濕度：58%）

2.9.2 不同溫度（同一實驗濕度：18%） 分別取芍藥苷對照品、3批樣品，分別在溫度15 ℃、22 ℃、30 ℃條件下，按照白芍薄層鑒別方法依法實驗；分別取川芎對照藥材、3批樣品，分別在溫度15 ℃、22 ℃、30 ℃條件下，按照川芎薄層鑒別方法依法實驗。小結(jié)：溫度對結(jié)果影響較?。▓D12-17）。

圖12 白芍（溫度15 ℃）

圖13 白芍（溫度22 ℃）

圖14 白芍（溫度30 ℃）

圖15 川芎（溫度15 ℃）

圖16 川芎（溫度22 ℃）

圖17 川芎（溫度30 ℃）

2.10 檢查 按《中國藥典》2015年版四部附錄散劑項下0115有關(guān)的各項規(guī)定檢查：①外觀均勻度，②水分，③裝量差異，④微生物限度檢查：除另有規(guī)定外，照微生物限度檢查法（附錄0115）檢查。

3 討論

3.1 顯微鑒別法鑒別續(xù)斷、當(dāng)歸、白芍、川芎的顯微特征相近；燙骨碎補(bǔ)、乳香、沒藥無顯微特征。顯微鑒別只收載了紅花，見圖18。

圖18 紅花的顯微鏡檢結(jié)果

3.2 薄層色譜續(xù)斷、當(dāng)歸薄層色譜中陰性有干擾；紅花樣品中無斑點；燙骨碎補(bǔ)、乳香、沒藥無薄層鑒別。薄層鑒別只收載了川芎、白芍。

正骨益中散沒有質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)沒有鑒別測定項目。根據(jù)該品種的處方藥味及制法，對處方中紅花進(jìn)行顯微鑒別，川芎、白芍采用薄層色譜鑒別。經(jīng)過多次實踐，其實驗的重復(fù)性良好，并且實驗結(jié)果穩(wěn)定可靠，便于實際工作中的控制操作。可以實現(xiàn)對正骨益中散的質(zhì)量控制，能夠取得滿意的效果。使正骨益中散的藥效以及成分質(zhì)量得到有效保證，確保其臨床效果。

[1] 中華人民共和國國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015:40,133,151,186,223,329.

10.12010/j.issn.1673-5846.2017.07.006

吉林省吉林市食品藥品檢驗所，吉林吉林 132000

詹立晶（1988.10-），本科學(xué)歷，助理工程師。研究方向：中藥