基于iTRAQ標(biāo)記技術(shù)研究慢性淺表性胃炎脾虛證的唾液差異表達(dá)蛋白

賀佐梅，夏帥帥，邵 峰，吳華英，吳正治*，謝夢洲*

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)診斷研究所，湖南 長沙 410208；2.廣東醫(yī)學(xué)院附屬福田醫(yī)院，廣東 深圳 518033；3.湖南省2011數(shù)字中醫(yī)藥協(xié)同創(chuàng)新中心,湖南 長沙 410208）

·基礎(chǔ)研究·

基于iTRAQ標(biāo)記技術(shù)研究慢性淺表性胃炎脾虛證的唾液差異表達(dá)蛋白

賀佐梅1，夏帥帥1，邵 峰1，吳華英1，吳正治2*，謝夢洲1*

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)診斷研究所，湖南 長沙 410208；2.廣東醫(yī)學(xué)院附屬福田醫(yī)院，廣東 深圳 518033；3.湖南省2011數(shù)字中醫(yī)藥協(xié)同創(chuàng)新中心,湖南 長沙 410208）

目的 運(yùn)用iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選慢性淺表性胃炎（chronic superficial gastritis，CSG）不同中醫(yī)證候患者唾液中的潛在特異性生物標(biāo)志物，探索一種客觀化、規(guī)范化的中醫(yī)辨證方法。方法 采用iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)及后期生物信息學(xué)方法，篩選CSG脾虛證28例與CSG濕熱證28例對比以及與正常對照組28例對比的唾液差異蛋白質(zhì)分析。結(jié)果 CSG脾虛證對比CSG濕熱證，Ratio≥1.5的共有128個(gè)蛋白，Ratio≤0.667的共有39個(gè)蛋白；CSG脾虛證對比正常對照組Ratio≥1.5的共有113個(gè)蛋白，Ratio≤0.667的共有72個(gè)蛋白。篩選出多個(gè)重要蛋白，如Keratin家族、ANX家族和apolipoprotein家族中的多種亞型以及γ-谷氨酸轉(zhuǎn)移酶等，可能與CSG不同中醫(yī)證候的發(fā)生、發(fā)展有密切的關(guān)系。結(jié)論 iTRAQ唾液蛋白質(zhì)組技術(shù)篩選出了多個(gè)具有潛在價(jià)值的CSG中醫(yī)證候無創(chuàng)診斷的重要蛋白，值得進(jìn)一步深入研究。

慢性淺表性胃炎；中醫(yī)證候；脾虛證；濕熱證；分子診斷；唾液；定量蛋白質(zhì)組學(xué)；iTRAQ

中醫(yī)藥對于慢性胃炎的治療有獨(dú)特的優(yōu)勢，但是往往難于準(zhǔn)確把握證型。本文采用現(xiàn)代系統(tǒng)生物學(xué)方法——同位素標(biāo)記相對和絕對定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究慢性胃炎證型[1]，以慢性淺表性胃炎（chronic superficial gastritis，CSG）為代表，進(jìn)行胃炎中醫(yī)辨證客觀化、規(guī)范化的初步探索。CSG病因有虛實(shí)二因，本研究選取虛證（以脾胃氣虛證為代表）、實(shí)證（以濕熱蘊(yùn)脾證為代表）CSG患者的唾液標(biāo)本進(jìn)行研究。

本研究是基于iTRAQ及液相-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用(liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry，LC-MS/MS)，主要目的是定量檢測CSG脾虛證與濕熱證以及正常對照組的差異唾液蛋白表達(dá)情況，同時(shí)為進(jìn)一步篩選與CSG中醫(yī)證候相關(guān)的蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)組提供研究參考，從蛋白水平研究中醫(yī)證候的本質(zhì)。

1 資料與標(biāo)準(zhǔn)

1.1 病例選擇

1.1.1 CSG診斷標(biāo)準(zhǔn) CSG的診斷依據(jù) 《內(nèi)科學(xué)》的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。CSG缺乏臨床上的特異性癥狀和體征，其確診主要依賴?yán)砘瘷z查，如內(nèi)鏡檢查和胃黏膜活檢的組織學(xué)。（1）內(nèi)鏡的診斷依據(jù):淺表性胃炎內(nèi)鏡可見黏膜出現(xiàn)紅斑(點(diǎn)、條狀、片狀)，粗糙不平或伴出血點(diǎn)或斑;（2）病理活檢的診斷依據(jù):炎性細(xì)胞浸潤局限在胃小凹和黏膜的固有層表面，淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞是主要的炎性細(xì)胞，而腺體完整無損。幽門螺旋桿菌（HP）感染時(shí)主要是活動(dòng)性炎癥，其中以中性粒細(xì)胞浸潤為主。

1.1.2 中醫(yī)證型診斷標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)《中醫(yī)臨床診療術(shù)語》所列的證候診斷標(biāo)準(zhǔn)（1997年），為了使辨證更具客觀性，盡可能減少人為因素干擾，本研究以證素辨證為基礎(chǔ)，運(yùn)用“中醫(yī)智能(輔助)診療系統(tǒng)”（“WF-Ⅲ中醫(yī)輔助診療系統(tǒng)”升級版），提取證素，進(jìn)行辨證。（1）脾虛證診斷標(biāo)準(zhǔn)：脾虛證包括脾氣虛證與脾陽虛證。脾氣虛證臨床表現(xiàn)[3]：腹脹納少，食后脹甚，大便溏薄，肢體倦怠，神疲乏力，少氣懶言，形體消瘦，面色萎黃，或見肥胖、浮腫，舌淡苔白，脈緩弱；脾陽虛證臨床表現(xiàn)[3]：納少腹脹，腹痛綿綿，喜溫喜按，形寒氣怯，四肢不溫，面白無華或虛浮，口淡不渴，大便稀溏，或見肢體浮腫，小便短少，或見帶下量多而清稀色白，舌質(zhì)淡胖或有齒痕，苔白滑，脈沉遲無力等；（2）濕熱蘊(yùn)脾證診斷標(biāo)準(zhǔn)：濕熱蘊(yùn)脾證臨床表現(xiàn)[4]：脘腹痞悶，納呆嘔惡，大便溏泄而不爽，肢體困重，渴不多飲，身熱不揚(yáng)，汗出不解，或身目鮮黃，或皮膚發(fā)癢，舌質(zhì)紅，苔黃膩，脈濡數(shù)。

1.1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) （1）符合診斷標(biāo)準(zhǔn)，年齡在20～75歲之間；（2）未經(jīng)治療；（3）自愿且能夠配合參加的受試對象。以上 3項(xiàng)必須全部符合才能納入。

1.1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) （1）不符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)者；（2）年齡＜20歲或＞75歲者；（3）患有口腔局部及唾液腺的炎癥、消化道潰瘍、腫瘤及先天性疾病；患有舍格倫綜合征、囊性纖維??；患有其他系統(tǒng)嚴(yán)重并發(fā)疾病。

1.1.5 質(zhì)量控制 （1）釆用統(tǒng)一診斷標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)一調(diào)查表格、統(tǒng)一調(diào)查方法;（2）調(diào)査者在調(diào)査時(shí)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行,減少調(diào)查者偏倚,確保資料的一致性和真實(shí)性;（3）電子胃鏡及病理結(jié)果均由1月內(nèi)三級甲等醫(yī)院診斷。

1.2 一般資料

本研究自2014年12月-2015年06月共收集符合診斷和納入標(biāo)準(zhǔn)的CSG脾虛證和濕熱證患者各28例，全部病例來源于湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院脾胃病科，均經(jīng)胃鏡檢查確診，采集患者入院第二天清晨的唾液。

CSG脾虛證28例，其中男12例，女16例，年齡25～68歲，中位年齡55歲；CSG濕熱證28例，男13例，女15例，年齡27～67歲，中位年齡54歲；正常對照組28例,其中男18例，女10例；年齡23～68歲，中位年齡54歲，均來自于湖南中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院體檢科健康自愿者。該研究方案符合人體試驗(yàn)倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，并得到倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，受試者在受試前已知情，并簽署知情同意書。

2 方法

2.1 樣品收集

受試者取材前一天晚上臨睡前清水漱口3次（不再進(jìn)任何食物和藥物），采用非刺激性唾液采集方式，第二天晨起后漱口前空腹取材。由經(jīng)過培訓(xùn)的課題組專人取材，前5 min內(nèi)的唾液自然吞下后開始收集，患者將已經(jīng)消毒的無菌小圓柱形棉花含入口中，口腔唾液積聚至一定量后，將該棉花吐入置于冰浴中的10 mL唾液離心管內(nèi)。

樣品預(yù)處理：4℃下3 000 r/min離心5 min，收集上清液,冰浴上分裝在1.5 mL EP管中，每管300 μL，加入（1/100）的蛋白酶抑制劑 3 μL，于-80 ℃冰箱冷凍保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)取出樣本，冰浴解凍。

2.2 唾液蛋白提取、酶解與iTRAQ標(biāo)記

在每個(gè)樣品用10 kd超濾管濃縮后加入適量的裂解液，渦旋混勻，室溫提取30 min，40 000 g離心1 h取上清，采用Bradford方法對蛋白樣品進(jìn)行定量。取100 μg蛋白/樣溶液置于離心管中；加入2 μL Reducing Reagent，60 ℃反應(yīng) 1 h；加入 1 μL Cysteine-Blocking Reagent，室溫 10 min；將還原烷基化后的蛋白溶液加入10 kd的超濾管中離心20 min，棄掉收集管底部溶液。加入iTRAQ試劑盒中的Dissolution Buffer 100 μL，更換新的收集管，在超濾管中加入胰蛋白酶，37℃反應(yīng)過夜。次日，離心20 min，酶解消化后的肽段溶液離心于收集管底部。在超濾管中加入50 μL Dissolution Buffer再次離心20 min，與上步合并。

2.3 LC-MS/MS鑒定和數(shù)據(jù)分析

混合標(biāo)記后的樣品用100 μL流動(dòng)相溶解，14 000 g離心20 min，取上清液待用。取100 μL準(zhǔn)備好的樣本上樣。iTRAQ的質(zhì)譜分析是由Thermo-Q Exactive型質(zhì)譜完成，產(chǎn)生的質(zhì)譜原始文件采用Thermo公司的配套商用軟件Proteome Discoverer 1.3處理。

2.4 生物信息學(xué)分析

質(zhì)譜原始文件采用Thermo公司的配套商用軟件Proteome Discoverer 1.3處理。根據(jù)原始數(shù)據(jù)選取，差異倍數(shù)≥1.5或差異倍數(shù)≤0.67，所得結(jié)果進(jìn)入分析。通過Uniprot數(shù)據(jù)庫功能注釋及文獻(xiàn)調(diào)研篩選CSG相關(guān)蛋白，運(yùn)用 DAVID軟件從生物過程、細(xì)胞成分、分子功能注釋對蛋白進(jìn)行分類，選擇KEGG數(shù)據(jù)庫對蛋白所涉及的通路進(jìn)行分類和富集分析。

2.5 差異蛋白定量信息統(tǒng)計(jì)

根據(jù)原始數(shù)據(jù)的P-value，選取P≤0.05進(jìn)行過濾后，幾組對比實(shí)驗(yàn)的均值差異倍數(shù)≥1.5或差異倍數(shù)≤0.667，所得結(jié)果進(jìn)入分析。

3 結(jié)果

3.1 CSG脾虛證與CSG濕熱證對比

CSG脾虛證對比CSG濕熱證共進(jìn)行四組實(shí)驗(yàn)重 復(fù) （114/115，114/121，119/115，119/121）， 共 篩 查到1 195個(gè)蛋白，所有蛋白在4組均有表達(dá)。取四組均值，ratio≥1.5，共 128 個(gè)；Ratio≤0.667，共 39 個(gè)。

3.2 CSG脾虛證與正常對照組對比

CSG脾虛與正常組對比共進(jìn)行兩組對比實(shí)驗(yàn)（114/113,119/113），共得到1 197個(gè)蛋白，其中1個(gè)蛋白只在一組有表達(dá)。其余1 196個(gè)蛋白在兩組對比試驗(yàn)中都有表達(dá)。滿足兩組均值結(jié)果ratio≥1.5或者ratio≤0.667，共得到185個(gè)蛋白，其中ratio≥1.5的共113個(gè)蛋白，ratio≤0.667共72個(gè)蛋白。

4 數(shù)據(jù)的生物信息解析

數(shù)據(jù)的后期挖掘是闡釋實(shí)驗(yàn)信息和挖掘潛在的有價(jià)值蛋白質(zhì)的重要環(huán)節(jié)，因此在分析中主要參考了目前公認(rèn)的可信度較高的GO(Gene Ontology)數(shù)據(jù)庫，詳細(xì)信息見網(wǎng)站：http://www.geneontology.org。分析數(shù)據(jù)為之前研究團(tuán)隊(duì)得到存在差異表達(dá)的蛋白質(zhì)以及差異定量信息。

通過生物信息學(xué)分析工具DAVID對鑒定蛋白進(jìn)行GO功能注釋、功能富集分析及定位分析。蛋白質(zhì)的GO功能注釋包括三個(gè)方面內(nèi)容：蛋白質(zhì)參與的生物學(xué)過程（biological process，BP）、蛋白質(zhì)具有的分子功能（moleculer function，MF）以及蛋白質(zhì)所屬的細(xì)胞組分（cellular component，CC），在此主要討論差異蛋白所參與的生物學(xué)過程。蛋白質(zhì)所屬的細(xì)胞組分亦即蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位。

4.1 CSG脾虛證與濕熱證對比

4.1.1 上調(diào)蛋白 Ratio≥1.5的共有128個(gè)蛋白，GO數(shù)據(jù)庫可識(shí)別（Mapped）75個(gè)，不可識(shí)別（Unmapped）53個(gè)。有分類信息的69個(gè)，無分類信息的6個(gè)，92.0%的蛋白質(zhì)擁有BP注釋信息；將上調(diào)蛋白ID導(dǎo)入PANTHER系統(tǒng)，得出CSG脾虛證與CSG濕熱證對比，上調(diào)蛋白BP各分類組成。這些蛋白主要參與代謝、發(fā)育、細(xì)胞進(jìn)程、組織或生物起源細(xì)胞組件、定位、免疫、應(yīng)激反應(yīng)等生物學(xué)過程。

4.1.2 下調(diào)蛋白 Ratio≤0.667的共有39個(gè)蛋白，GO數(shù)據(jù)庫可識(shí)別 （Mapped）19個(gè)，不可識(shí)別（Unmapped）20個(gè)。有分類信息的18個(gè)，無分類信息的1個(gè)，94.7%的蛋白質(zhì)擁有BP注釋信息；將下調(diào)蛋白ID導(dǎo)入PANTHER系統(tǒng)，得出CSG脾虛證VS CSG濕熱證下調(diào)蛋白BP各分類組成。這些蛋白主要參與細(xì)胞進(jìn)程、代謝、生物調(diào)節(jié)、發(fā)育、定位、多細(xì)胞生物過程、免疫等生物學(xué)過程。

4.1.3 CSG脾虛證與濕熱證對比差異蛋白參與的相關(guān)通路 CSG脾虛證與CSG濕熱證對比差異蛋白參與的相關(guān)通路見表1。

表1 CSG脾虛證與CSG濕熱證對比差異蛋白參與的相關(guān)通路

4.2 CSG脾虛證與正常對照組對比

4.2.1 上調(diào)蛋白 Ratio≥1.5的共有113個(gè)蛋白，GO數(shù)據(jù)庫可識(shí)別（Mapped）60 個(gè)，不可識(shí)別（Unmapped）53個(gè)。有分類信息的55個(gè)，無分類信息的5個(gè)，91.7%的蛋白質(zhì)擁有BP注釋信息；將上調(diào)蛋白ID導(dǎo)入PANTHER系統(tǒng)，得出胃炎虛證與正常對照組對比上調(diào)蛋白BP各分類組成。這些蛋白主要參與代謝、發(fā)育、細(xì)胞進(jìn)程、定位、組織或生物起源細(xì)胞組件、應(yīng)激反應(yīng)等生物學(xué)過程。

4.2.2 下調(diào)蛋白 Ratio≤0.667的共有72個(gè)蛋白，GO數(shù)據(jù)庫可識(shí)別（Mapped）35 個(gè)，不可識(shí)別（Unmapped）37個(gè)。有分類信息的31個(gè)，無分類信息的4個(gè)，88.6%的蛋白質(zhì)擁有BP注釋信息；將下調(diào)蛋白ID導(dǎo)入PANTHER系統(tǒng)，得出CSG脾虛證VS正常對照組對比，下調(diào)蛋白BP各分類組成。這些蛋白主要參與細(xì)胞進(jìn)程、代謝、生物調(diào)節(jié)、發(fā)育、定位、生物附著、免疫等生物學(xué)過程。4.2.3 CSG脾虛證與正常對照組對比差異蛋白參與的相關(guān)通路 CSG脾虛證與正常對照組對比差異蛋白參與的相關(guān)通路見表2。

5 討論

將篩選到的差異表達(dá)蛋白（ratio≥1.5或者ratio≤0.667）在pubmed數(shù)據(jù)庫中一一進(jìn)行檢索，在此討論文獻(xiàn)記錄較多的幾個(gè)候選蛋白 （完整的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)包括了CSG濕熱證組與正常對照組的對比，并且實(shí)際的實(shí)驗(yàn)也完成了該部分的內(nèi)容，但由于數(shù)據(jù)太多，所以該論文并未納入該部分內(nèi)容）。

角蛋白（Cytokeratin，CK）家族 CK異常表達(dá)與HP感染、非甾體抗炎藥物導(dǎo)致的胃損傷密切相關(guān)。Todorovic V等[5]認(rèn)為HP感染導(dǎo)致Cytokeratin家族中各亞型的不同表達(dá)共同作用于胃黏膜，多種亞型可損壞胃黏膜上皮的緊密連接，導(dǎo)致胃黏膜的損傷，并證實(shí)在正常胃竇黏膜的表皮到深層的腺體，都可以見到CK8的表達(dá)；Zhao Y等[6]發(fā)現(xiàn)，HP感染導(dǎo)致的胃損傷，包括急性胃炎、萎縮性胃炎、腸化生及胃癌病變，皆可發(fā)現(xiàn)Keratin異常表達(dá)。Attallah AM等[7]在1996年的研究中發(fā)現(xiàn)CK1在正常胃黏膜無表達(dá)，而在失去活力的凋亡胃黏膜上皮細(xì)胞中可見持續(xù)表達(dá)。吳軍[8]的研究發(fā)現(xiàn)，CK16、CA72-4和CEA三種腫瘤指標(biāo)聯(lián)合檢測可考慮作為新的胃癌指標(biāo)。Attallah AM和Kang HS[5]的研究結(jié)果皆表明，CK1在受損的胃黏膜均升高。Todorovic V等通過對比HP（+）的胃炎患者、HP（-）的胃炎患者及正常對照組，結(jié)果 HP（+）的胃炎患者Cytokeratin 18（CK18）明顯升高，而CK19及CK20表達(dá)下調(diào)；HP（+）的胃炎患者中CK7表達(dá)上調(diào)，且表達(dá)量與炎癥程度密切相關(guān)，而在HP（-）的胃炎患者及正常對照組中均未發(fā)現(xiàn)CK7的表達(dá)。Schwerer MJ等[9]早在1997年的研究就表明HP感染導(dǎo)致的胃炎中CK7,8,18 and 19表達(dá)增加，而CK20表達(dá)下降；Lauwers GY[10]研究則提示在非甾體消炎藥物引起的胃?。╪on-steroidal anti-inflammatory drug，NSAID） 中，CK 8,18 and 19表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)一步加大。Cohen M等[11]發(fā)現(xiàn)CK7及CK20與有無HP感染及受損胃黏膜的部位有關(guān)系。此外，相較于正常胃小凹黏膜上皮及HP（+）胃炎，CK5和CK6在腸化生胃黏膜明顯降低，CK僅在腸化生組表達(dá)，CK13在所有組都有表達(dá)[12]。在糜爛性胃炎（erosive gastritis，EG)中 keratin-5 表達(dá)上調(diào)[13]。Keratin還可用于胃黏膜細(xì)胞的染色，用于追蹤B淋巴細(xì)胞、Russell體及其他胃黏膜細(xì)胞的生理變化過程[14-16]。綜上可見，Keratin家族的異常表達(dá)與胃黏膜損傷密切相關(guān)。本研究中，Keratin家族中有10種亞型在CSG脾虛證與正常對照組對比中，胃炎脾虛證組表達(dá)上調(diào)。

表2 CSG脾虛證與正常對照組對比差異蛋白參與的相關(guān)通路

膜聯(lián)蛋白（Annexin，ANX）家族 Jorge YC等[17]通過對比研究胃炎、胃腺癌和正常胃黏膜樣本，結(jié)果發(fā)現(xiàn)胃炎和胃腺癌患者的ANXA1表達(dá)均增加，表明ANXA1與胃黏膜炎癥及癌性病變密切相關(guān)。Kang HS等[18]通過 MALDI TOF質(zhì)譜分析對比HP（-）正常胃黏膜及HP（+）胃炎黏膜，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HP（+）胃炎黏膜的annexin IV表達(dá)下調(diào)。Park JS等[19]發(fā)現(xiàn)annexin A3在正常胃黏膜及胃腺癌細(xì)胞系均可見表達(dá)。HP感染導(dǎo)致宿主細(xì)胞漿膜裂解，胞外Ca2+內(nèi)流，進(jìn)而應(yīng)激性地導(dǎo)致annexin家族中的annexin A1和annexin A4轉(zhuǎn)位至漿膜[20]。annexin-1可激活Lipoxins（脂氧素），脂氧素具有抗炎、護(hù)胃作用，而annexin-1本身也具有消炎和保護(hù)胃黏膜的作用[21]。Annexin V可作胃黏膜細(xì)胞凋亡的標(biāo)記[22]。本研究中，Annexin家族中有4種亞型在CSG脾虛證與正常對照組對比中，胃炎脾虛證組表達(dá)上調(diào)。

apolipoprotein家族 He QY等[23]發(fā)現(xiàn)apolipoprotein A-I和alpha1-antitrypsin（α抗胰蛋白酶）的退化和新陳代謝，是胃黏膜炎癥反應(yīng)的應(yīng)答機(jī)制。Liu C等[24]發(fā)現(xiàn) 5906.5、6635.7和 8716.3三個(gè)質(zhì)譜峰，經(jīng)鑒定分別為fibrinogen α-chain（纖維蛋白原α鏈）,apolipoprotein A-II和 apolipoprotein C-I，這三個(gè)峰組成的胃癌診斷模型，敏感性93.85%(61/65)，特異性94.34%(50/53)，可見 α-chain（纖維蛋白原 α 鏈）,apolipoprotein A-II和apolipoprotein C-I是潛在的可應(yīng)用于臨床的胃癌診斷分子。本研究中，apolipoprotein家族中有5種亞型在CSG脾虛證與正常對照組對比中，CSG脾虛證組表達(dá)上調(diào)。

γ-谷氨酸轉(zhuǎn)移酶 (gamma-glutamyltransferase，GGT)GGT與胃部的炎癥密切相關(guān)。Rimbara E等[25]發(fā)現(xiàn)，γ-谷氨酸轉(zhuǎn)移酶激活，可消耗谷氨酸鹽，可減少IL-8介導(dǎo)的炎癥損傷。本研究中，GGT在2組重復(fù)對比實(shí)驗(yàn)中，CSG脾虛證組下調(diào)0.677倍。

綜上所述，研究團(tuán)隊(duì)認(rèn)為唾液中Keratin家族、ANX家族和apolipoprotein家族中的多種亞型以及GGT的變化可作為CSG中醫(yī)證候無創(chuàng)診斷的潛在生物標(biāo)志物之一。

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（本文編輯 楊 瑛）

Research of Saliva Differential Expressed Proteins in Chronic Superficial Gastritis with Spleen Deficiency Syndrome Based on ITRAQ Labeling

HE Zuomei1,XIA Shuaishuai1,SHAO Feng1,WU Huaying1,WU Zhengzhi2*,XIE Mengzhou1*
(1.Diagnostic Research Institute of TCM,Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410007,China;2.Futian Affiliated Hospital of Guangdong Medical Institute,Shenzhen,Guangdong,518033,China;3.2011 Collaborative Innovation Center of Digital Chinese Medicine of Colleges and Universities in Hunan Province,Changsha,Hunan 410208,China)

ObjectiveTo screen the potentialspecific biomarkerin saliva ofchronic superficialgastritis(CSG)with different TCM syndromes by iTRAQ quantitative proteomics,and to explore the objective and standard TCM syndromes differentiation methods.MethodsSaliva samples were taken from 28 cases of CSG patients with spleen deficiency syndrome (group A),28 cases of CSG patients with damp-heat syndrome (group B)and 28 cases of normal control volunteers(group C),in which differential expressed proteins were analyzed by iTRAQ quantitative proteomics and bioinformatics methods.Results1.In the comparison between group A and group B,it screened out 128 up-regulated proteins (ratio≥1.5)and 39 down-regulated proteins (ratio≤0.667).2.In the comparison between group B and group C,it screened out 113 up-regulated proteins (ratio≥1.5)and 72 down-regulated proteins (ratio≤0.667).3.This study screened out a large number of differential expression proteins in saliva,including various subtypes in Keratin family,ANX family,apolipoprotein family,and γ-glutamyltransferase,which may be related to the occurrence and development of different syndromes of CSG.Conclusion The multiple poten-tial molecular biomarkers in saliva to diagnose CSG with different TCM syndromes were screened by iTRAQ quantitative proteomic technology,which is worthy of further study.

chronic superficial gastritis;TCM syndromes;spleen deficiency syndrome;damp-heat syndrome;molecular diagnosis;saliva;quantitative proteomics;iTRAQ

R285.5；R573.3+1；R393

A

doi:10.3969/j.issn.1674－070X.2017.08.001

2017-01-03

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81273665）；湖南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)診斷國家重點(diǎn)學(xué)科開放基金項(xiàng)目（2015ZYZD09）；湖南省2011數(shù)字中醫(yī)藥協(xié)同創(chuàng)新中心。

賀佐梅，女，博士研究生在讀，主要從事中醫(yī)診斷學(xué)研究。

*吳正治，男，博士，教授，博士研究生導(dǎo)師，E-mail:szwzz001@163.com;謝夢洲，女，博士，教授，E-mail:xiemz64@163.com。

本文引用：賀佐梅，夏帥帥，邵 峰，吳華英，吳正治，謝夢洲.基于iTRAQ標(biāo)記技術(shù)研究慢性淺表性胃炎脾虛證的唾液差異表達(dá)蛋白[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，37（8）：813-818.