八角茴香的抑菌實(shí)驗(yàn)

任孟瑤

摘要： 為了研究八角茴香的抑菌效果。用95%酒精和無菌水提取出八角茴香的抑菌活性物質(zhì)，配置好培養(yǎng)基后將大腸桿菌菌液涂布，利用濾紙片擴(kuò)散法研究這種中藥的抑菌效果。95%酒精提取或無菌水提取的這種中藥具有抑菌效果，從抑菌圈的大小能反應(yīng)出八角茴香的抑菌能力大小不同。利用95%酒精提取的效果優(yōu)于無菌水提取。

關(guān)鍵詞：八角茴香； 大腸桿菌； 紙片擴(kuò)散法； 抑菌效果

Bacteriostatic test of star anise and Chinese prickly ash

Abstract： in order to study the antibacterial effect of Illicium verum. The antibacterial active substances of Illicium verum were extracted with 95% alcohol and sterile water. After the medium was laid， the Escherichia coli liquid was coated， and the bacteriostatic effect of the Chinese medicine was studied by filter paper diffusion method. 95% alcohol extraction or aseptic water extraction of this kind of Chinese medicine has bacteriostatic effect， from the size of the bacteriostatic ring can reflect the antibacterial ability of star anise is different in size. The result of 95% alcohol extraction is better than that of aseptic water extraction.

Key words： star anise； Escherichia coli； disk diffusion method； bacteriostatic effect

八角茴香的抑菌實(shí)驗(yàn)

1.前言

越來越多的化學(xué)農(nóng)藥在使用過程中對環(huán)境的破壞，已經(jīng)引起人們的關(guān)注。有很多植物是抑菌活性物質(zhì)的天然寶庫，產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物高出40萬種 [1～4]。從植物的代謝物中提取或者人工開發(fā)出來的新型抑菌殺蟲藥物，漸漸成為現(xiàn)代的藥物熱點(diǎn)之一[5]。

八角茴香（Illicium verum Hook.f.）即大茴香，屬木蘭常綠喬木，形狀很特殊，果實(shí)有五個(gè)角，呈五角星的形狀，成熟后表現(xiàn)為棕紅色[6]。是我國特產(chǎn)的中藥，可以刺激神經(jīng)，具有殺菌止痛，防流感的作用[7]。

2.材料

2.1菌種

大腸桿菌（Eseherichia coli），由山西大同大學(xué)生物系微生物實(shí)驗(yàn)室提供。

2.2中藥提取物

市場購買的八角茴香。

2.3試劑藥品

牛肉膏，蛋白胨，NaCl，95%酒精，0.1 mol/l NaOH溶液，無菌水。

2.4儀器

全自動數(shù)顯立式高壓蒸汽滅菌鍋（上海博訊醫(yī)療生物儀器股份有限公司）、電子分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）、數(shù)顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）、全溫振蕩培養(yǎng)箱（常州市金壇晨陽電子儀器廠）、生化培養(yǎng)箱（武漢博爾斯科學(xué)儀器設(shè)備有限公司）。

3.實(shí)驗(yàn)方法

3.1中藥提取液的制備

取市場購買的八角茴香的果實(shí)，洗凈自然晾干，搗碎，稱取10 g，2份。使用95%酒精提取，在兩份材料中分別加入100 ml 95%乙醇試劑和無菌水。選用60℃水浴2 h提取3次，過濾并合并濾液，八角母液濃度為0.1 g/ml，移到錐形瓶中，最后密封在冰箱中4℃冷藏備用[8]。

3.2提取液梯度制備

取若干15 ml試管。設(shè)95%酒精提取的八角為A組；無菌水提取的八角為B組。各設(shè)置10%、20%、30%的濃度梯度并設(shè)有空白對照。每組4個(gè)試管。

3.3紙片擴(kuò)散法的抑菌測定

3.3.1菌種活化培養(yǎng)和菌懸液制備

實(shí)驗(yàn)前一天將大腸桿菌富集培養(yǎng)，置于全溫震蕩培養(yǎng)箱中37℃，150 r/min下培養(yǎng)過夜。用生理鹽水調(diào)整菌液濃度。

3.3.2濾紙片制備

將濾紙片剪成6 mm的圓片狀，并進(jìn)行滅菌。

3.3.3平板涂布

分配置液體、固體培養(yǎng)基滅菌，別取3～4滴菌懸液滴加于滅菌后的固體培養(yǎng)基表面，涂抹均勻。

取濾紙片分別放入A、B組試管中浸泡后取出來，每個(gè)皿上做4個(gè)重復(fù)，然后放在恒溫培養(yǎng)箱中，設(shè)置溫度為37℃。培養(yǎng)一天后，取實(shí)驗(yàn)效果好的培養(yǎng)皿測定抑菌圈大小。

4.結(jié)果與分析

4.1抑菌圈的測定結(jié)果

測量2組實(shí)驗(yàn)得到的抑菌圈大小，同一培養(yǎng)皿內(nèi)4個(gè)抑菌圈取平均值，整理數(shù)據(jù)如表2。由抑菌圈直徑的大小得到敏感度表3。（20 mm以上極敏，15-20 mm高敏，10-14 mm中敏，10 mm以下低敏，0 mm不敏[9]）。

Table 2 diameter of the average inhibitory circle in the four experiments of A， B

Table 3 sensitivity of four groups of experiments： A， B

由表2可知，八角茴香的提取物濃度越高，抑菌效果越強(qiáng)。

5.討論

最終的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，菌體培養(yǎng)一段時(shí)間后分別加入這種中藥的浸提液繼續(xù)培養(yǎng)，八角茴香用95%酒精提取的方法要優(yōu)于用無菌水。

實(shí)驗(yàn)表明，八角茴香提取物的抑菌效果較好。但是一般其成分極其復(fù)雜，介于實(shí)驗(yàn)室和器材的局限性，并且八角茴香的產(chǎn)地、生長環(huán)境、品種質(zhì)量和提取物的提取工藝方法等因素有許多的不同之處，這些都會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生一些影響。對于提取液中什么成分對什么菌種的抑制效果和抑菌得機(jī)理還需要進(jìn)一步研究和探討。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李金培， 張玉珍. 植物源農(nóng)藥的利用[J]. 世界農(nóng)業(yè)， 1998， （12）： 28-30.

[2] 張雁冰， 艾國民， 王克讓， 等. 馬桑葉提取物的殺蟲殺菌活性初步研究[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2006， （01）： 60-63.

[3] 孟慶杰， 王光全. 植物激素及其在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2006， （04）： 9-12.

[4] 杜華， 王玲， 孫炳劍， 等. 防治植物病害的生物農(nóng)藥研究開發(fā)進(jìn)展[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2004， （09）： 39-42.

[5] 周紅晞. 高等植物源農(nóng)藥[J]. 農(nóng)藥譯叢， 1994， （02）： 1-6.

[6] 林祁. 八角屬植物的分類學(xué)訂正[J]. 植物分類學(xué)報(bào)， 2000， （02）： 167-181.

[7] 靳士英， 婁海容. 八角茴香與達(dá)菲[J]. 現(xiàn)代醫(yī)院， 2006， （03）：6-9..

[8] 孟昭禮， 吳獻(xiàn)忠， 高慶霄， 等. 銀杏提取液對四種植物病原菌的抑菌作用[J]. 植物病理學(xué)報(bào)， 1995， （04）： 357-360.

[9] WS/T 125-1999， 紙片法抗菌藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)[s].