激光和強(qiáng)脈沖光對小型豬皮膚光老化的改善性治療研究

韓長元+焦婷+王金燕+宋為民

[摘要] 目的 建立可模擬臨床皮膚激光研究的光老化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，觀察不同類型的非剝脫激光和強(qiáng)脈沖光對模型動(dòng)物皮膚光老化的改善性治療作用。 方法 分別應(yīng)用強(qiáng)脈沖光，長脈寬1064 nm Nd：YAG激光，1320 nm Nd：YAG激光對光老化區(qū)域皮膚進(jìn)行照射治療2次，分別在激光治療前、第一次激光治療后2周、第二次激光治療后4周，檢測皮膚生理功能并行組織活檢，觀察皮膚真皮膠原的改變和皮膚羥脯氨酸含量的變化。 結(jié)果 與正常皮膚比較，紫外線照射區(qū)皮膚含水量和皮膚彈性下降，黑色素指數(shù)增加，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；經(jīng)激光和強(qiáng)脈沖光治療后，與未經(jīng)治療的光老化皮膚區(qū)相比較，皮膚含水量和血紅素含量無明顯變化（P>0.05），而皮膚彈性和羥脯氨酸含量均有明顯改善，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；病理顯示：激光和強(qiáng)脈沖光治療后，真皮內(nèi)膠原纖維增加。結(jié)論 強(qiáng)脈沖光和非剝脫激光能夠較快速地改善紫外線造成的皮膚光老化的一些表現(xiàn)，對表皮的損傷很小。

[關(guān)鍵詞] 激光；光老化；強(qiáng)脈沖光；羥脯氨酸

[中圖分類號] R758.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701（2017）17-0028-05

[Abstract] Objective To establish an animal model of photoaging experiment that can simulate clinical skin laser research，and to observe the therapeutic effect of different types of non-stripping laser and intense pulsed light on skin photoaging of model animal. Methods The areas of skin photoaging were treated with irradiation therapy twice by application of intense pulsed light， pulse length 1064 nm Nd： YAG laser， 1320 nm Nd： YAG laser， respectively. The physiological functions of the skin were examined and the tissue biopsy of the skin was performed before laser treatment，at 2 weeks after the first laser treatment and 4 weeks after the second laser treatment. The changes of dermal collagen and hydroxyproline content were observed. Results The skin water content and skin elasticity decreased and the melanin index increased in the UV irradiation area skin， compared with those in the normal skin， and the difference was significant（P<0.05）. There were no significant differences in skin moisture content and hemoglobin content between the untreated photoaging skin area and the photoaging skin area treated with laser and intense pulsed light（P>0.05）. While the skin elasticity and hydroxyproline content in the photoaging skin area treated with laser and intense pulsed light were significantly improved， compared with those in the untreated photoaging skin area， and there was a significant difference（P<0.05）. The pathology showed after laser and intense pulsed light treatment， intradermal collagen fibers increased. Conclusion Intense pulsed light and non-stripping laser can improve some performance of skin photoaging caused by ultraviolet light quickly， with small damage to the epidermis.

[Key words] Laser； Photoaging； Intense pulsed light； Hydroxyproline

皮膚的老化分為兩大類：皮膚的自然老化和皮膚的光老化。皮膚光老化的表現(xiàn)主要是皮溝加深，導(dǎo)致出現(xiàn)粗深的皺紋，早期出現(xiàn)毛細(xì)血管擴(kuò)張，晚期導(dǎo)致皮膚的小血管減少、毛細(xì)血管網(wǎng)消失以及會(huì)出現(xiàn)老年斑和其他色素斑。

近20余年來，新型的非剝脫性激光或強(qiáng)脈沖光照射技術(shù)，已開始成為皮膚光老化治療領(lǐng)域的熱點(diǎn)。但是，如何選擇合適的波長激光和強(qiáng)脈沖光技術(shù)改善皮膚光老化，以及各種設(shè)備和參數(shù)改善光老化的效果和安全性如何，國內(nèi)外的基礎(chǔ)研究還較少。

本文選取與人類皮膚結(jié)構(gòu)和厚度相類似的小型豬做為研究光老化的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采取高劑量中波紫外線和長波紫外線短期聯(lián)合照射的方法，使小型豬皮膚產(chǎn)生光老化的表現(xiàn)，然后應(yīng)用不同波長激光和強(qiáng)脈沖光對光老化皮膚進(jìn)行治療。在一定范圍內(nèi)，激光的波長越長，則穿透深度越大，不同類型的激光作用于皮膚的深度是不一樣的，所以對皮膚光老化治療的效果也不盡相同。本實(shí)驗(yàn)通過兩種激光和強(qiáng)脈沖光對經(jīng)紫外線照射后形成的小型豬光老化皮膚的治療，比較三者之間在皮膚生理功能和羥脯氨酸含量的改善程度上的不同，對三者之間進(jìn)行探討。

1 材料與方法

1.1 材料來源

光老化皮膚的準(zhǔn)備：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選取健康雄性清潔級廣西巴馬小香豬3頭，以20瓦中波紫外線（UVB）燈管2只和40瓦的長波紫外線（UVA）燈管2只，安裝于SS-03紫外線光療儀上，組成照光設(shè)備。試驗(yàn)前測定小型豬背部皮膚的最小紅斑量（MED），采用80%的皮膚最小紅斑量作為首次的照射劑量，每次照射劑量為1.0 J/cm2。將小型豬置于固定器上進(jìn)行照射，選取白色皮膚區(qū)為實(shí)驗(yàn)研究區(qū)。選取右側(cè)一塊區(qū)域皮膚用白色手術(shù)方巾避光保護(hù)，作為正常皮膚對照區(qū)。將固定器放置在紫外線光療儀燈具下照射，每日1次，連續(xù)照射40 d[1]。

1.2 激光和強(qiáng)脈沖光照射治療

在小型豬背部選取3塊經(jīng)紫外線照射40 d后的皮膚，分別應(yīng)用強(qiáng)脈沖光（Intense pulsed laser）、1064 nm Nd：YAG激光和1320 nm Nd：YAG激光進(jìn)行照射治療，激光和強(qiáng)脈沖光每2周照射1次，共照射2次。各種激光和強(qiáng)脈沖光的照射能量參數(shù)分別為：1064 nm Nd：YAG激光：Spectr，脈寬300 us，2.2 J/cm2， 7 mm光斑，10 Hz；1320 nm Nd：YAG激光：脈寬 50 ms，（18～20）J/cm2，10 mm光斑，前冷40℃～43℃；強(qiáng)脈沖光：三波：40 J/cm2，3.0 ms，6.0 ms，6.0 ms，間隔25 ms。

1.3皮膚生理功能檢測

在紫外線照射區(qū)和各激光照射區(qū)，分別選取4塊皮膚，在激光治療前、第一次激光治療后2周和第二次激光治療后4周利用德國CK公司的多功能皮膚生理功能測試儀（MPA 9）來檢測小型豬皮膚的含水量、紅斑指數(shù)及皮膚彈性的變化[通過測定皮膚電容值測量出皮膚的角質(zhì)層水含量，以AU表示；皮膚彈性是通過共振時(shí)間檢測的，數(shù)值越小說明皮膚彈性越好（以Uv表示）；黑色素和紅斑以黑色素指數(shù)（MI）和血紅素指數(shù)（EI）表示，MI越大，說明皮膚越黑，EI越大，說明皮膚越紅]。

1.4 組織病理學(xué)標(biāo)本的制作和羥脯氨酸含量的測定

皮膚生理功能檢測結(jié)束后，在不同激光和強(qiáng)脈沖光照射治療區(qū)域和非治療區(qū)域分別切取4塊皮膚組織，10%甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，之后對組織切片進(jìn)行常規(guī)蘇木精-伊紅（HE）染色和VG染色，在顯微鏡底下觀察皮膚膠原的組織病理形態(tài)學(xué)改變，每塊區(qū)域取下的皮膚去除脂肪組織，準(zhǔn)確稱取濕重100 mg，用皮膚羥脯氨酸測定試劑盒（南京建成生物工程研究所，堿水解法）檢測皮膚羥脯氨酸含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料以（x±s）表示，多組間計(jì)量資料比較采用方差分析，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 皮膚生理功能的變化

2.1.1 紫外線照射結(jié)束后皮膚生理功能各項(xiàng)指標(biāo)的數(shù)值 在紫外線照射40 d后，皮膚含水量、黑色素指數(shù)和皮膚彈性與紫外線照射前相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.1.2 第一次治療后2周，小型豬皮膚含水量、血紅素指數(shù)和皮膚彈性數(shù)值 第一次治療后2周，激光和強(qiáng)脈沖光治療區(qū)與紫外線照射區(qū)比較皮膚生理功能變化無顯著性差異（P>0.05），見表2。

2.1.3 第二次治療后4周，小型豬皮膚含水量、血紅素指數(shù)和皮膚彈性數(shù)值 第二次治療后4周，與紫外線照射區(qū)比較，激光和強(qiáng)脈沖光治療區(qū)域的皮膚含水量、血紅素指數(shù)無明顯變化（P>0.05），而皮膚彈性有顯著性改變（P<0.05）。見表3。

2.2 皮膚組織的VG染色結(jié)果

光老化區(qū)：真皮膠原排列紊亂，真皮深層尚存在部分呈紅染、束狀排列的膠原纖維（封三圖1）。

強(qiáng)脈沖光、1064 nm Nd：YAG激光、1320 nm Nd：YAG激光治療區(qū)：真皮內(nèi)有新生膠原形成，成束膠原纖維明顯增多，真皮內(nèi)有較粗的成束膠原纖維排列（封三圖2、封三圖3、封三圖4）。

2.3皮膚組織的羥脯氨酸含量

治療結(jié)束后，正常皮膚區(qū)域和激光、強(qiáng)脈沖光照射區(qū)域皮膚較紫外線照射區(qū)的羥脯氨酸含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表4。

3 討論

在第一次照射治療后2周和第二次照射后4周，激光和強(qiáng)脈沖光治療區(qū)域皮膚的含水量跟光老化區(qū)相比，沒有顯著性差異，皮膚含水量是反映皮膚屏障功能的一個(gè)指標(biāo)，這說明兩種激光和強(qiáng)脈沖光在治療過程中對小型豬皮膚的皮膚屏障功能損傷較小。雖然沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但1320 nm激光治療區(qū)域較1064 nm激光和強(qiáng)脈沖光治療區(qū)皮膚含水量要高，這可能與1320 nm激光的動(dòng)態(tài)冷卻系統(tǒng)裝置有關(guān)，使1320 nm 激光對表皮的損傷最小。

第一次激光治療后的2周，跟光老化區(qū)域皮膚相比，激光和強(qiáng)脈沖光照射區(qū)域的皮膚彈性無明顯變化，數(shù)值顯示皮膚彈性沒有向年輕化方向發(fā)展，反而為老化表現(xiàn)，這可能跟激光短期內(nèi)照射后皮膚彈性纖維和膠原纖維熱變性，其性能發(fā)生了改變有關(guān)。但第2次治療后4周，激光和強(qiáng)脈沖光治療區(qū)域的皮膚彈性跟光老化皮膚區(qū)域相比，數(shù)值有了明顯地改善，可能是第二次治療后4周，膠原合成增多，膠原排列致密的結(jié)果。強(qiáng)脈沖光和兩種激光都可以通過刺激新生膠原的形成來改善皮膚彈性，得到顯著嫩膚效果。

第二次激光治療后4周，真皮深部出現(xiàn)成束致密排列的膠原纖維，說明強(qiáng)脈沖光和激光通過熱損傷作用，誘導(dǎo)真皮里新生的膠原形成。

治療結(jié)束后，跟光老化區(qū)域皮膚相比，強(qiáng)脈沖光和兩種激光照射治療區(qū)域皮膚羥脯氨酸含量明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明經(jīng)過激光和強(qiáng)脈沖光治療后，真皮中膠原蛋白的含量增加；但三者之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可能跟我們治療次數(shù)太少、觀察時(shí)間較短有關(guān)；1320 nm 冷觸激光區(qū)對光老化皮膚彈性指數(shù)和羥脯氨酸含量的改善，雖然沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但都較1064 nm激光治療區(qū)要好，這可能與不同波長的激光對皮膚的穿透深度不同有關(guān)，1320 nm激光因波長較長，對皮膚的穿透深度更深，可能對真皮膠原的改善也更明顯。雖然強(qiáng)脈沖光和激光都能顯著增加皮膚羥脯氨酸的含量，但經(jīng)過第二次治療后4周，激光和強(qiáng)脈沖光治療區(qū)域皮膚羥脯氨酸含量與正常皮膚區(qū)相比較，仍然較低，可能是我們觀察時(shí)間不夠引起的，這也說明了激光和強(qiáng)脈沖光只能部分地逆轉(zhuǎn)光老化，作用還是有限的。

皮膚光老化引起可見的皮膚改變主要是皮膚的皺紋和微血管的改變，引起這些改變可能需要數(shù)十年的時(shí)間才會(huì)逐漸出現(xiàn)。在人體全面研究皮膚光老化是不現(xiàn)實(shí)的。過去的研究多以小鼠、大鼠、豚鼠為模型動(dòng)物，但沒有統(tǒng)一的照射紫外線光的方法和標(biāo)準(zhǔn)，更沒有標(biāo)準(zhǔn)的動(dòng)物模型。Harrison[2]和Horio等[2，3]使用無毛豚鼠和無毛小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型研究光老化，采取UVB和UVA聯(lián)合照射。張璃等[4]在小鼠皮膚外涂8-MOP，然后長波紫外線連續(xù)照射24 h之后，小鼠皮膚出現(xiàn)了表皮厚度不均一，真皮層變厚明顯，微血管擴(kuò)張并扭曲，周圍炎癥細(xì)胞浸潤，彈力纖維增粗等典型的光老化病理表現(xiàn)。但是小鼠和裸鼠的皮膚厚度很薄，與人體皮膚有較大差異，這些動(dòng)物模型對光老化的藥物研究可行，但是對激光穿透光老化皮膚的治療效果迥異。不同波長不同脈寬還有使用不同表皮冷卻技術(shù)的激光其皮膚穿透深度和熱量分布曲線不同，在人體皮膚上光熱作用于真皮淺層的某些激光，在小鼠和裸鼠上可能就穿透過深作用到了真皮深層甚至皮下組織，因此產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)也十分不同，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能沒有可比性。因此建立適合激光治療研究的皮膚光老化動(dòng)物模型，對研究人體皮膚光老化有重要的指導(dǎo)意義。

以往研究皮膚光老化的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，多以小鼠、大鼠或豚鼠為主。但這些動(dòng)物體型較小，皮膚較薄，跟人類的皮膚厚度相差較大，不同波長的激光其穿透深度不同，在人體上作用于真皮乳頭層的某些激光（如波長1064 nm、1320 nm激光），在小鼠和裸鼠上可能就穿透到了皮下組織，因此產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)也不盡相同，結(jié)果可能沒有可比性，無法模擬人類的光老化皮膚。國外Fourtanier A等[5]曾用小型豬作為研究光老化的動(dòng)物模型，小型豬的皮膚結(jié)構(gòu)和厚度非常接近人體皮膚，陳俊穎等[6]發(fā)現(xiàn)4月齡巴馬香豬皮膚角質(zhì)層、表皮層、真皮層厚度與成人皮膚各層厚度之間均無顯著差異。巴馬香豬皮膚真皮基質(zhì)組成和分布也和人類皮膚非常相似，主要由膠原纖維、彈力纖維及網(wǎng)狀纖維構(gòu)成，可以很好地模擬人的皮膚。

目前國內(nèi)尚未有以小型豬作為研究光老化動(dòng)物模型的報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)選取跟人類皮膚結(jié)構(gòu)和厚度都很接近的巴馬香豬作為研究光老化的動(dòng)物模型，研究了高強(qiáng)度紫外線對皮膚生理功能和真皮膠原的影響，跟小鼠、豚鼠等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物比較具有明顯的優(yōu)勢。

以往國內(nèi)研究激光或強(qiáng)脈沖光嫩膚作用的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，都是用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常皮膚作為研究對象，目前還缺乏在皮膚光老化模型動(dòng)物上的實(shí)驗(yàn)研究。像國內(nèi)黨永巖等[7，8]用昆明小鼠作為動(dòng)物模型，用波長595 nm的PDL激光，用三種能量的激光照射皮膚5次，每次間隔3 d，激光治療后觀察皮膚的組織學(xué)變化和真皮膠原蛋白含量的變化，并且也做了真皮內(nèi)皮膚羥脯氨酸含量的測定，發(fā)現(xiàn)激光照射后小鼠皮膚真皮厚度增加，成纖維細(xì)胞增加，皮膚的羥脯氨酸含量增加，結(jié)果與激光的能量參數(shù)大小沒有顯著差異。趙曉霞等[9]應(yīng)用波長1064 nm長脈寬Nd：YAG激光照射小鼠皮膚，應(yīng)用德國CK公司的皮膚生理功能測試儀進(jìn)行無創(chuàng)觀測，發(fā)現(xiàn)長脈寬1064 nm激光對小鼠皮膚屏障功能無明顯損害，多次激光照射可以改善皮膚彈性，有顯著的嫩膚效果。但是，以上這些報(bào)道都未涉及皮膚光老化的基礎(chǔ)研究。本實(shí)驗(yàn)在研究紫外線對皮膚損傷的基礎(chǔ)上，以紫外線照射后的小型豬為對象，進(jìn)一步研究了強(qiáng)脈沖光和不同種類激光對紫外線照射引起的光老化皮膚的治療作用，這比以往以正常動(dòng)物皮膚作為實(shí)驗(yàn)對象的研究更加深入。部分國內(nèi)外的臨床和基礎(chǔ)研究證實(shí)，激光和強(qiáng)脈沖光嫩膚后真皮膠原帶增厚，Ⅰ型前膠原、Ⅰ型前膠原mRNA表達(dá)增加及羥脯氨酸含量增多[7，10-12]。

日光中的紫外線按照波長的長短，分為短波、中波和長波紫外線，短波紫外線大部分被大氣中的臭氧層吸收，所以地球表面的紫外線主要是長波紫外線和中波紫外線。有研究發(fā)現(xiàn)，UVB照射皮膚后可產(chǎn)生紅斑和結(jié)締組織的損傷，造成光老化[13，14]，UVA劇烈的照射后與 UVB 一樣也能使皮膚產(chǎn)生紅斑和血管的損傷，而且因?yàn)閁VA的穿透深度比較大，可以達(dá)到真皮，對真皮的影響更大，所以UVB 和 UVA 都是造成光老化的主要因素。因此，本實(shí)驗(yàn)采用UVB和UVA 混合照射的方法。照射結(jié)束后，小型豬的皮膚表面紋理出現(xiàn)粗亂，在顯微鏡下，小型豬皮膚的真皮膠原的排列非常紊亂，測定的皮膚羥脯氨酸含量較照射前降低，這說明短期高強(qiáng)度的紫外線照射能夠引起皮膚光老化的表現(xiàn)。

長期的日光照射可以影響皮膚的多種細(xì)胞成分和組織結(jié)構(gòu)的改變，日光中的紫外線照射可使彈力纖維變性并堆積，使其彈性和順應(yīng)性喪失，從而導(dǎo)致皮膚出現(xiàn)松弛和皺紋。膠原纖維是人體皮膚中最主要的蛋白質(zhì)，也是含量最豐富的蛋白質(zhì)，是維持皮膚張力和承受外界拉力的重要成分。成人皮膚中主要是Ⅰ型和 Ⅲ型膠原纖維，其中Ⅰ型膠原纖維約占皮膚膠原干重的85%，Ⅲ型膠原是幼稚、纖細(xì)的膠原纖維，是構(gòu)成真皮網(wǎng)狀纖維的主要成分。紫外線照射可影響Ⅰ型膠原的形成，使Ⅲ型膠原相對增加，最終導(dǎo)致成熟膠原束減少，皮膚出現(xiàn)松弛和皺紋。

本實(shí)驗(yàn)選取與人類皮膚相近的小型豬皮膚作為研究對象，經(jīng)UVB和UVA聯(lián)合照射之后，經(jīng)紫外線照射區(qū)域皮膚與未經(jīng)照射的正常皮膚相比較，皮膚含水量明顯下降，紫外線照射可以引起皮膚角質(zhì)層含水量減少，皮膚屏障功能受損，使皮膚出現(xiàn)干燥、粗糙等臨床表現(xiàn)。皮膚彈性的變化能夠反映真皮膠原的改變情況，經(jīng)長時(shí)間紫外線照射后，紫外線照射區(qū)的皮膚彈性較正常皮膚區(qū)域的皮膚彈性明顯下降，這說明紫外線長期照射可以使皮膚彈性下降，皮膚出現(xiàn)松弛、老化的表現(xiàn)。羥脯氨酸是膠原纖維和膠原蛋白中一種主要而又相對恒定的氨基酸，在其他蛋白質(zhì)中含量甚微，一般常用羥脯氨酸含量的7.46倍代表膠原蛋白的量[5]。紫外線照射區(qū)皮膚羥脯氨酸含量較正常皮膚區(qū)域皮膚明顯減少，紫外線能引起真皮膠原變性，使真皮膠原纖維含量發(fā)生變化。

近幾年來強(qiáng)脈沖光開始應(yīng)用于臨床嫩膚治療。它不屬于激光，而是一種連續(xù)譜光。強(qiáng)脈沖光的工作原理與激光一樣，遵循選擇性光熱作用原理。在治療過程中其特定波長的光子能量會(huì)被皮膚擴(kuò)張的毛細(xì)血管或色素顆粒選擇性吸收、分解，可使皮下的膠原組織增厚，祛除皺紋，使肌膚變得光滑細(xì)嫩，恢復(fù)彈性[15]。

Bitter PH[16]治療了以面部紅斑、潮紅和不同程度光老化為表現(xiàn)的22例患者，3～4周進(jìn)行1次治療，總共進(jìn)行5次治療。治療參數(shù)包括550 nm濾光鏡，脈寬2.4～3.0 ms，能量（30～42）J/cm2。90%患者的紅斑獲得了75%的改善，84%的治療個(gè)體經(jīng)雙盲觀察者的評價(jià)，顯示細(xì)微的皺紋獲得了84%的改善，78%的患者皮膚粗糙程度獲得了明顯改善，49%的患者毛孔大小獲得了改善；Goldman MP[17]報(bào)道了5例患者在經(jīng)強(qiáng)脈沖光治療4次后6個(gè)月后，組織學(xué)的證據(jù)顯示有新的膠原形成。

長脈寬1064 nm摻釹：釔鋁石榴石激光（Nd：YAG）是臨床用于嫩膚治療比較常用的激光：1064 nm Nd：YAG激光是第一種用于非損傷性嫩膚的激光儀器，該激光在嫩膚治療中的效果已經(jīng)得到臨床研究的證實(shí)[18]。長脈寬1064 nm Nd：YAG激光可以對靶組織產(chǎn)生特異性的光熱效應(yīng)，并且通過后續(xù)的熱效應(yīng)達(dá)到嫩膚效果，在一定范圍內(nèi)，較長的脈寬能夠提供更多的能量，從而在真皮產(chǎn)生光熱作用而獲得較好的嫩膚效果。這種激光由于其脈寬較長，使表皮黑色素對激光的光能吸收較少，從而起到保護(hù)表皮的作用。

Cooltouch 1320 nm Nd：YAG激光波長較長，可以到達(dá)皮膚的真皮層，被膠原蛋白中的水分吸收，可以刺激真皮層，使新的膠原蛋白增多，并且呈有序排列，從而增加皮膚彈性，使皺紋得到舒展平整，并且這類激光通常與表皮的預(yù)先冷卻和后冷卻聯(lián)合進(jìn)行，可以避免真皮受到熱損傷時(shí)表皮也受損。一般經(jīng)過一系列治療后的數(shù)周至數(shù)月，在真皮中可以觀察到膠原合成增加。利用Cooltouch Ⅲ 1320 nm Nd：YAG治療光老化是非常安全的，Cooltouch激光的冷卻系統(tǒng)不斷給皮膚冷卻，使皮膚表面能夠始終保持在低溫狀態(tài)，皮膚表面不受損傷，當(dāng)皮膚達(dá)到一定溫度時(shí)，自動(dòng)停止激光發(fā)出，確保不損傷表皮[19]。Menaker GM等[20]研究10例患者使用這種儀器，32 J/cm2的能量治療眼周皺紋和耳后皮膚，有4例患者眼周皺紋獲得了改善，很少有色素沉著和疤痕的報(bào)道。組織學(xué)上，有5例患者在治療后1個(gè)月、有3例患者在治療后3個(gè)月顯示有膠原形成增加。

非剝脫性激光嫩膚是通過激光的光熱效應(yīng)使膠原蛋白發(fā)生變性，從而激活組織的自我修復(fù)過程，雖然這種激光的總臨床嫩膚效果不如剝脫性激光明顯，但該項(xiàng)技術(shù)不良反應(yīng)較小，不影響患者的正常生活。新型的無創(chuàng)或微創(chuàng)激光照射技術(shù)，已部分實(shí)現(xiàn)光老化的逆轉(zhuǎn)性（年輕化）治療，這些技術(shù)包括強(qiáng)脈沖光、1064 nm Nd：YAG激光和1320 nm Nd：YAG激光等，但它們也有不足，如IPL可能會(huì)引起皮膚的灼傷和驗(yàn)證后色素沉著，1064 nm激光在治療過程中可出現(xiàn)紫癜，1320 nm激光治療過程中疼痛比較嚴(yán)重。

在一定范圍內(nèi)，激光的波長越長，則穿透深度越大。不同類型的激光作用于皮膚的深度是不同的，所以對皮膚光老化治療的效果也不盡相同。本實(shí)驗(yàn)通過兩種激光和強(qiáng)脈沖光對經(jīng)紫外線照射后形成的小型豬光老化皮膚的治療，比較三者之間在皮膚生理功能、真皮膠原排列和羥脯氨酸含量的改善程度上的不同，結(jié)果顯示強(qiáng)脈沖光和非剝脫激光能夠較快速地改善紫外線造成的皮膚光老化的一些表現(xiàn)，對表皮的損傷很小。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 周夢云，宋為民，韓長元. 紫外線對小型豬皮膚的影響以及積雪苷對紫外線所致光老化防護(hù)作用的研究[J]. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2010，28（12）：623-625.

[2] Harrison JA，Walker SL，Plastow SR，et al. Sunscreens with low sun protection factor inhibit ultraviolet B and A photoaging in the skin of the hairless albino mouse[J]. Photodermatol Photoimmunol Photomed，1991，8（1）：12-20.

[3] Horio T，Miyauchi H，Asada Y. The hairless guinea pig as an experimental animal for photodermatology[J]. Photodermatol Photoimmunol Photomed，1991，8（2）：69-72.

[4] 張璃，梁虹. 小白鼠皮膚光老化模型的建立[J]. 廣東醫(yī)學(xué)，2005，26（12）：1642-1643.

[5] Fourtanier A，Berrebi C. Miniature pig as an animal model to study photoaging[J]. Photochem Photobiol，1989，50（6）：771-784.

[6] 陳俊穎，胡俊西，魏鴻. 人與巴馬香豬皮膚的比較生物學(xué)研究[J]. 中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2006，16（5）：288-290.

[7] 黨永巖，任秋實(shí)，楊青，等. 595 nm脈沖染料激光非損傷嫩膚治療對皮膚羥脯氨酸含量的影響[J]. 激光生物學(xué)報(bào)，2004，13（5）：369-371.

[8] 黨永巖，楊青，李萬榮，等. 595nm脈沖染料激光非損傷嫩膚的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[J]. 應(yīng)用激光，2004，24（4）：240-242.

[9] 趙曉霞，任秋實(shí)，劉華緒，等. GentleYAG 1064 nm激光治療對小鼠皮膚屏障功能及彈性的影響[J]. 中國皮膚性病學(xué)雜志，2006，20（8）：458-460.

[10] Goldberg DJ，Silapunt S.Histologic evaluation of a Q-switched Nd：YAG laser in the nonablative treatment of wrinkles[J].Dermatol Surg，2001，27：744-746.

[11] Trelles MA，Allones 1，luna R，et al.Facial rejuvenation with a nonablative 1320-nm Nd：YAG laser：A preliminary clinical and histologic evaluation[J].Dermatol Surg，2001，27：111-116.

[12] Orringer JS，Voorhees JJ，Hamilton T，et al.Dermal matrix remodeling after nonablative laser therapy[J]. J Am Acad Dermatol，2005，53：775-782.

[13] Peter EM，Butler FRCS，Salvaldore G，et al. Quantitative and qualitative effects of chemical peeling on photo-aged skin：An experimental study[J]. Plast Reconstr Surg，2001， 10（7）：222-228.

[14] Gilchrest BA. A review of skin ageing and it s medical therapy[J]. Br J Dermatol，1996，135：867-875.

[15] Goldberg DJ. New collagen formation after dermal remodeling with an intense pulsed light source[J]. Cutan Laser Ther，2000，2：59-61.

[16] Bitter PH. Non-invasive rejuvenation of photodamaged skin using serial full face intense pulsed light treatments[J].Dermatol Surg，2000，25：835-843.

[17] Goldman MP. Non-ablative laser treatment of wrinkles[J].Cos Dermatol，2000，15：17-20.

[18] Papadavid E，Katsambas A. Lasers for facial rejuvenation：A review[J]. Int J Dermatol，2003，42（6）：480-487.

[19] 高景恒.美容外科學(xué)[M]. 北京：北京科學(xué)技術(shù)出版社，2003：811.

[20] Menaker GM，Wrone DA，Williams RM，et al. Treatment of facial rhytids with a non-ablative laser：A clinical and histologic study[J]. Dermatol Surg，1999，25：440-444.

（收稿日期：2017-04-03）