加味保元湯對(duì)慢性應(yīng)激大鼠海馬SOD、GSH-Px活性的影響

孫 莉，林寶旭，方硝杰，趙圓圓，徐 梅，侯 莉

（大連大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，遼寧 大連 116622）

加味保元湯對(duì)慢性應(yīng)激大鼠海馬SOD、GSH-Px活性的影響

孫 莉，林寶旭，方硝杰，趙圓圓，徐 梅，侯 莉

（大連大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，遼寧 大連 116622）

為了研究加味保元湯對(duì)慢性應(yīng)激大鼠海馬神經(jīng)元氧化應(yīng)激的影響，應(yīng)用慢性復(fù)合應(yīng)激建立抑郁癥大鼠模型，將24只SD大鼠隨機(jī)等分為正常對(duì)照組、模型組、加味保元湯組。采用分光光度法檢測(cè)大鼠海馬組織超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性。結(jié)果表明，模型組大鼠海馬組織SOD、GSH-Px活性明顯降低，與正常對(duì)照組比較有顯著性差異（P＜0.01）；經(jīng)加味保元湯干預(yù)治療后，大鼠海馬組織SOD、GSH-Px活性明顯提高，與模型組比較有顯著性差異（P＜0.01）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示加味保元湯對(duì)慢性應(yīng)激大鼠海馬神經(jīng)元氧化應(yīng)激損傷具有保護(hù)作用。

慢性應(yīng)激；大鼠；海馬；加味保元湯；氧化應(yīng)激

0 引言

長(zhǎng)期慢性應(yīng)激可引起海馬神經(jīng)元損傷[1,2]，進(jìn)而產(chǎn)生抑郁行為[3]，其機(jī)制可能與心理應(yīng)激誘發(fā)氧化應(yīng)激有關(guān)[4,5]。因此，清除活性氧自由基和修復(fù)氧化損傷，從而抑制海馬神經(jīng)元凋亡是抗應(yīng)激損傷，防治抑郁癥的有效方法之一。

本研究采用慢性復(fù)合應(yīng)激大鼠抑郁癥模型，檢測(cè)其海馬組織SOD及GSH-Px活性變化，并給予加味保元湯干預(yù)，研究加味保元湯對(duì)慢性應(yīng)激大鼠海馬組織SOD及GSH-Px活性變化的調(diào)節(jié)作用，探討其抗氧化應(yīng)激作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

SD大鼠24只，健康、雄性，體重180～220 g，清潔級(jí)。隨機(jī)等分為3組：正常對(duì)照組、模型組、加味保元湯組。

1.1.2 儀器與試劑

分光光度計(jì)：Thermo Fisher-1510（美國(guó)）。SOD、GSH-Px活性檢測(cè)試劑盒，BCA蛋白含量檢測(cè)試劑盒：江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司。加味保元湯由五味子、人參、黃芪、肉桂、甘草，分別以5：5：6：5：3比例構(gòu)成，由本校中藥研究室制備水提取物，動(dòng)物給藥劑量為260 mg/kg體重。

1.2 方法

1.2.1 大鼠抑郁癥模型制作

模型組和加味保元湯組應(yīng)激方法為：①束縛，每日開始及束縛時(shí)間不同，第1天4 h，隨后每2天增加0.5 h；②夾尾1 min；③25±1℃自來水游泳5 min。游泳裝置為直徑23 cm、高60 cm的測(cè)試桶。每天給予2種應(yīng)激，其中束縛每天進(jìn)行，另一種應(yīng)激在夾尾、25±1℃水游泳中每天交替給予一種，且此2種應(yīng)激方法累計(jì)進(jìn)行的平均次數(shù)相等，持續(xù)21 d，其中加味保元湯組應(yīng)激前給予加味保元湯水提取物灌胃，模型組應(yīng)激前給予等量生理鹽水灌胃。對(duì)照組不給予任何刺激，但給予等量生理鹽水灌胃。應(yīng)激期間各組均禁食、水。

1.2.2 SOD及GSH-Px活性測(cè)定

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，大鼠斷頭取腦，冰上分離提取大鼠海馬組織，并按其重量：體積為1:9加入冰生理鹽水，用玻璃勻漿器制備10%組織勻漿，3000 r/min低溫離心15 min，留取上清液待進(jìn)行測(cè)定。采用改良黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD活性，以分光光度計(jì)波長(zhǎng)為550 nm檢測(cè)吸光度。采用谷胱甘肽過氧化物酶法以分光光度計(jì)波長(zhǎng)為412 nm檢測(cè)吸光度，再采用BCA蛋白含量檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，計(jì)算GSH-Px的活性。SOD及GSH-Px活性測(cè)定按說明書操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

與對(duì)照組比較，模型組大鼠海馬組織 SOD、GSH-Px活性明顯降低， 有顯著性差異（P＜0.01）；加味保元湯組與模型組比較，大鼠海馬組織 SOD、GSH-Px活性明顯提高，有顯著性差異（P＜0.01），與對(duì)照組比較，無顯著性差異（P＞0.05）。說明慢性應(yīng)激可致大鼠海馬組織SOD、GSH-Px活性明顯降低，加味保元湯干預(yù)治療后，大鼠海馬組織SOD、GSH-Px活性明顯提高，結(jié)果表1。

表1 各組大鼠海馬SOD和GSH-Px含量比較（X±S）

3 討論

抑郁癥是一種常見的情感性疾病，其中長(zhǎng)期慢性日常壓力是引發(fā)抑郁的主要原因。抑郁癥的發(fā)生發(fā)展與大腦功能密切相關(guān)，其中海馬是關(guān)鍵的情緒整合區(qū)，極易受到應(yīng)激的損傷[6,7]，其機(jī)制可能與心理應(yīng)激誘發(fā)氧化應(yīng)激有關(guān)[4,5]。

氧化應(yīng)激是指體內(nèi)的自由基及其產(chǎn)物超過機(jī)體抗氧化防御機(jī)制的一種病理狀態(tài)?；钚匝酰≧OS）是細(xì)胞內(nèi)有氧呼吸產(chǎn)生的一系列副代謝產(chǎn)物[8]，其升高或氧化還原平衡改變時(shí)，就會(huì)出現(xiàn)氧化應(yīng)激，通過對(duì)生物膜的損傷，對(duì)蛋白質(zhì)的氧化損傷，對(duì)DNA的氧化損傷，對(duì)凋亡通路的影響等一系列直接和間接效應(yīng)介導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡的發(fā)生。

SOD是一種氧自由基清除劑，能對(duì)超氧陰離子自由基進(jìn)行歧化反應(yīng)，生成過氧化氫，然后由GSH-Px和/或過氧化氫酶催化生成水，使機(jī)體免受自由基的攻擊，SOD活力高低能間接反映機(jī)體清除氧自由基的能力[9]。腦內(nèi)過氧化氫酶含量極低，清除過氧化氫主要依靠GSH-Px完成[10]。所以，測(cè)定SOD和GSH-Px的活性，能在一定程度上反映機(jī)體的自由基清除能力，即反映抗氧化應(yīng)激的能力。

保元湯具有補(bǔ)氣溫陽之功效，由人參、黃芪、甘草、肉桂等四味藥組成。五味子有寧心安神功效[11]，在保元湯中加入五味子，形成加味保元湯。前期實(shí)驗(yàn)表明，加味保元湯對(duì)慢性應(yīng)激大鼠海馬神經(jīng)元損傷具有一定的保護(hù)作用[2]，本次實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究慢性應(yīng)激致大鼠海馬神經(jīng)元損傷的氧化應(yīng)激機(jī)制，并探討加味保元湯對(duì)氧化應(yīng)激損傷大鼠海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用。研究結(jié)果顯示，慢性應(yīng)激使大鼠海馬組織 SOD、GSH-Px活性明顯降低，加味保元湯干預(yù)后，大鼠海馬組織SOD、GSH-Px活性較模型組明顯提高，說明慢性應(yīng)激誘導(dǎo)的大鼠海馬組織中存在氧化應(yīng)激損傷，加味保元湯對(duì)慢性應(yīng)激大鼠海馬組織 SOD和GSH-Px的活性具有增強(qiáng)作用，因而能提高機(jī)體清除自由基的能力，抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)，這也可能是加味保元湯對(duì)慢性應(yīng)激大鼠海馬神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用機(jī)制之一，加味保元湯對(duì)應(yīng)激致大鼠海馬神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

[1] Pablos R M D, Herrera A J, Espinosa-Oliva A M, et al.Chronic stress enhances microglia activation and exacerbates death of nigral dopaminergic neurons under conditions of inflammation [J]. Journal of Neuroinflammation, 2014, 11(1):1-18.

[2] 劉超, 潘曉艷, 朱慧娟, 等. 加味保元湯對(duì)束縛應(yīng)激大鼠海馬 CA3區(qū)神經(jīng)元損傷的影響[J]. 大連大學(xué)學(xué)報(bào), 2014,35(3): 94-97.

[3] Zhao L, Xiao H, Gao X, et al. H-MRS Analysis for prefrontal Cortex,Hippocampus and Thalamus of Adolescent patients with Depression [J].Journal of Medical Imaging & Health Informatics, 2015, 5(6): 1229-1232..

[4] 鐘靜玫, 郭強(qiáng), 武紹遠(yuǎn), 等. 抑郁癥與氧化應(yīng)激[J]. 中華行為醫(yī)學(xué)與腦科學(xué)雜志, 2011, 20(7): 665-666.

[5] 侯慶. 心理應(yīng)激、腦海馬損傷與抑郁癥[J]. 中國(guó)臨床康復(fù),2005, 9(32): 174-176.

[6] Magarinos A M, McEwen B S. Stress-induced atrophy of apical dendrites of hippocampal CA3 neurons: comparison of stessors [J]. Neuroscience, 1995, 69(1): 83-88.

[7] Khan S A, Ryali V, Bhat P S, et al. The hippocampus and executive functions in depression[J]. Industrial Psychiatry Journal, 2015, 24(1): 18-22.

[8] Daiber A. Redox signaling(cross-talk) from and tu mitochondria involves mitochondrial pores and reactive oxygen species[J]. Biochim Biophys Acta, 2010, 1797(6-7):897-906.

[9] 張益, 葉燕. 阿托伐他汀對(duì)阿爾茨海默病患者血清 SOD、MDA和ox-LDL 的影響[J]. 重慶醫(yī)學(xué), 2009, 38(12): 1527-1528.

[10] Sinet P M, Heikkila R E, Cohen G. Hydrogen peroxide production by rat brain in vivo[J]. J Neurochem, 1980, 34(6):1421-1428.

[11] 李莉. 五味子酚等三種抗氧化劑對(duì)氧化應(yīng)激損傷中樞神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用機(jī)理研究[J]. 生理科學(xué)進(jìn)展, 1998,29(1): 35-38.

Effects of Modified Baoyuantang on the Activities of Hippocampal SOD and GSH-Px in Chronically Stressed Rats

SUN Li, LIN Bao-xu, FANG Xiao-jie, ZHAO Yuan-yuan, XU Mei, HOU Li
(College of Medicine, Dalian University, Dalian 116622, China)

The objective of this research was to study the effect of Modified Baoyuantang on the activities of hippocampal SOD and GSH-Px in chronically stressed rats. Depression in rats was established by chronic multiple stress. Twenty-four SD rats were randomly and equally divided into the following groups: 1. control group; 2.stressed group; 3. stressed group fed with Modified Baoyuantang. Hippocampal superoxide dismutase(SOD) and glutathione peroxidase(GSH-Px) activities were examined by spectrometer. The results showed that the activities of SOD and GSH-Px were significantly decreased in the stressed group (p ＜ 0.01, compared to those in the control group). Rats fed with Modified Baoyuantang had significantly elevated SOD and GSH-Px activities (p ＜ 0.01,compared to those in the stressed group). The results indicated that Modified Baoyuantang had a protective effect on the oxidative damage of hippocampal neurons in the chronically stressed rats.

chronic stress; rats; hippocampus; modified Baoyuantang oxidative stress

R285.5

A

1008-2395(2017)03-0051-03

2017-02-12

遼寧省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（201611258003）。

孫莉（1964-），女，副教授，研究方向：生理學(xué)、心理應(yīng)激與行為醫(yī)學(xué)。