以小鼠半數(shù)溶血值為指標對北沙參莖葉提取物的探索研究

宋麗麗 王志江 許一平 王瑜 呂方軍(山東中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，山東 煙臺 264199)

以小鼠半數(shù)溶血值為指標對北沙參莖葉提取物的探索研究

宋麗麗 王志江 許一平 王瑜 呂方軍(山東中醫(yī)藥高等專科學(xué)校，山東 煙臺 264199)

目的：以小鼠半數(shù)溶血值(HC50)為指標，對傘形科植物北沙參莖葉的提取物進行研究，為擴大其開發(fā)利用提供依據(jù)。方法：制備北沙參莖葉的水提取物和醇提取物，設(shè)置空白對照組、西洋參膠囊組及不同劑量的給藥組，連續(xù)給藥15天，第10天按體重注射綿羊紅細胞（sRBC）。5天后對小鼠進行眼球取血分離血清，取上清液1ml和都氏試劑3ml于試管內(nèi)，同時取10%sRBC0.25ml，加都氏試劑至4ml，于另一支試管內(nèi)充分混勻，于540nm處以對照（SA液）管作空白對照，測定吸光度值，計算HC50。結(jié)果：將不同劑量北沙參的莖葉提取物給小鼠灌胃給藥15天，與對照組對比，水提取物2.34g/kg劑量組、醇提取物2.34g/kg劑量組、西洋參膠囊組小鼠半數(shù)溶血值明顯升高（P＜0.05）。結(jié)論：北沙參莖葉具有調(diào)節(jié)體液免疫的作用。

北沙參莖葉提取液；半數(shù)溶血值；體液免疫

近些年國內(nèi)外學(xué)者對北沙參（根）的物質(zhì)基礎(chǔ)及藥理作用進行了大量的研究[1,2]。萊陽沙參，系人工栽培的北沙參，具有養(yǎng)陰清肺、益胃生津之功效，用于肺熱燥咳、勞嗽痰血、熱病津傷，咽干口渴等病癥，為養(yǎng)陰佳品[3]。從北沙參莖葉水溶性提取物和醇溶性提取物含量及多糖含量及各種溶劑提取物的薄層色譜[與吸收光譜來看，北沙參莖葉的物質(zhì)基礎(chǔ)非常豐富。

研究表明，北沙參莖葉提取物具有抑制環(huán)磷酰胺致小鼠外周血白細胞數(shù)、胸腺指數(shù)降低的作用，增強免疫低下小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬碳粒的K值及α指數(shù)的作用[4]；具有促進小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)的作用[5]。本研究旨在觀察北沙參莖葉提取物對小鼠半數(shù)溶血值(HC50)的影響，以確定其是否具有調(diào)節(jié)體液免疫的作用。以期為北沙參莖葉的開發(fā)利用提供理論支持。

1 實驗材料

1.1 實驗動物及飼料

動物：昆明種小鼠，雌性，體重17～22g，SPF級，許可證號：SCXK（魯）20030004，山東大學(xué)實驗動物中心提供。配合飼料（鼠）：山東省實驗動物中心濟南康大飼料有限公司提供，許可證號：SCXK（魯）20040014。

1.2 主要藥品與試劑

北沙參，兩年生，傘形科植物珊瑚菜（大紅袍品種），產(chǎn)地：山東省萊陽市高格莊鎮(zhèn)胡城村；采集時間：2011年10月；0.9%氯化鈉注射液，山東新華制藥股份有限公司，批號：20070112，規(guī)格：250ml∕瓶；西洋參膠囊，規(guī)格：0.5g∕粒，深圳萬基藥業(yè)有限公司，批號：20080512；；綿羊紅細胞sRBC（自制）。

1.3 試驗儀器

BSA224S-CW電子分析天平（上海金鵬分析儀器有限責(zé)任公司）WFJ2100型可見分光光度計（外商獨資上海合利儀器有限公司），，S-DK600電熱恒溫水箱（上海賀德實驗設(shè)備有限公司），TG20-W高速離心機（長沙湘智離心機儀器有限公司）。

2 實驗方法

2.1 北沙參莖葉提取物的制備

取北沙參莖葉洗凈，通風(fēng)陰涼處晾干，50℃干燥98h后收集備用。稱取一定量樣品，用蒸餾水浸泡6h后，超聲提取3次，每次30min，提取液合并，濃縮，制成生藥含量1g∕ml的藥液，作為北沙參莖葉的水提物；用80%的乙醇超聲提取晾干后的殘渣2次，每次45min，提取液合并濃縮，制成生藥含量1g∕ml的藥液，作為水提后醇提物。

2.2 藥物劑量設(shè)置

北沙參莖葉用量：9g;小鼠的臨床等效劑量經(jīng)計算設(shè)為1.17g∕kg,所以，提取物低劑量：0.59g∕kg（小鼠臨床等效劑量的1∕2）；提取物的高劑量：2.34g∕kg（小鼠臨床等效劑量的2倍）。西洋參膠囊：臨床等效劑量的2倍。

2.3 動物分組與給藥

將小鼠按體重隨機分為6組，每組12只。標記為醇提取物0.59g∕kg組、醇提取物2.34g∕kg組、水提取物0.59g∕kg組、水提取物2.34g∕kg組、西洋參膠囊0.78g∕kg組、空白對照組灌胃給藥，每日1次，連續(xù)給藥15d，對照組灌胃等容量的生理鹽水。

2.4 檢測方法[2]

于試驗第10天，取綿羊血，用生理鹽水洗滌3次，每只小鼠腹腔注射2%(體積分數(shù))sRBC0.2ml。5d后即末次藥后1h，摘除眼球取血于離心管內(nèi)，常規(guī)方法分離血清。用SA緩沖液將血清稀釋200倍。取稀釋后的血清1ml置于試管內(nèi)，依次加入10%sRBC0.5ml，補體1ml(用SA液按1：8稀釋)。另設(shè)不加血清的對照管(以SA液代替)，置37℃恒溫水浴中保溫30min后，冰浴終止反應(yīng)。2000r∕min離心10min。取上清液1ml和都氏試劑3ml于試管內(nèi)。同時取10%sRBC0.25ml，加都氏試劑至4ml，于另一支試管內(nèi)充分混勻，放置10min后。于540nm處以對照管作空白，分別測定各管吸光度值。

樣品HC50=×稀釋倍數(shù)

3 實驗結(jié)果

北沙參莖葉提取物對小鼠半數(shù)溶血值的影響，結(jié)果見下表。

北沙參莖葉提取物對小鼠半數(shù)溶血值的影響(±s,n=12)

北沙參莖葉提取物對小鼠半數(shù)溶血值的影響(±s,n=12)

注：*P＜0.05與對照組比較

組別正常對照組醇提取物低劑量組醇提取物高劑量組水提取物低劑量組水提取物高劑量組劑量（g/kg）N．S 0．59 2．34 0．59 2．34半數(shù)溶血值101．51±11．31 106．19±34．23 128．42±36．71* 109．31±22．64 127．63±21．33*

由表1結(jié)果可知，將不同劑量北沙參的莖葉提取物給小鼠灌胃給藥15天，與對照組對比，水提取物2.34g∕kg組、醇提取物2.34g∕kg組、西洋參膠囊組小鼠半數(shù)溶血值明顯升高（P＜0.05），其他各組亦有升高的趨勢，但結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義。

4 結(jié)語

實驗表明：北沙參莖葉醇提取物和水提取物的高劑量組與西洋參膠囊組一樣，與對照組比較均能明顯增加小鼠血清半數(shù)溶血值，表明北沙參莖葉提出液具有調(diào)節(jié)體液免疫的作用。本研究為北沙參莖葉藥用、食用價值的開發(fā)提供了一些基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。北沙參莖葉的水提取物與醇提取物非常豐富，分別達45.65%和16.80%，這些藥理作用來源于哪些物質(zhì)基礎(chǔ)有待于進一步探討。

[1]原忠,趙夢飛,陳發(fā)奎,等.北沙參化學(xué)成分的研究[J].中草藥,2002,33(12):1063-1065.

[2]呂方軍,葉國華,許一平,等.北沙參莖葉提取液對免疫抑制小鼠免疫功能的影響[J].時珍國醫(yī)國藥,2012,23(4):936-937.

王志江，副教授。