微生物甾醇酯酶的研究進(jìn)展

任楠楠，王曉輝，遲乃玉，喬慧，張慶芳*

（1.大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，遼寧大連116622；2.遼寧省海洋微生物工程技術(shù)研究中心，遼寧大連116622）

微生物甾醇酯酶的研究進(jìn)展

任楠楠1，2，王曉輝1，2，遲乃玉1，2，喬慧1，2，張慶芳1，2*

（1.大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，遼寧大連116622；2.遼寧省海洋微生物工程技術(shù)研究中心，遼寧大連116622）

甾醇酯酶（EC 3.1.1.13）作為一種高活性的生物催化劑，在醫(yī)療檢測(cè)、食品、造紙工業(yè)及環(huán)保等領(lǐng)域具有極其廣泛的應(yīng)用價(jià)值。該文綜述了甾醇酯酶的微生物來源、分離純化、克隆表達(dá)、三維結(jié)構(gòu)與應(yīng)用方面的研究進(jìn)展，以期為甾醇酯酶的研究開發(fā)及產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

甾醇酯酶；微生物；克隆表達(dá)；分離純化；應(yīng)用

甾醇酯酶（EC 3.1.1.13）又稱為膽固醇酯酶，廣泛存在于生物體內(nèi)（包括人在內(nèi)的高等動(dòng)物與微生物）[1]。甾醇酯酶可在水相條件下催化甾醇酯水解生成甾醇和脂肪酸，在有機(jī)溶劑中通過酯化或酯交換進(jìn)行催化酯合成反應(yīng)[2]。甾醇酯酶作為一種重要的酶制劑，可幫助機(jī)體消化吸收油脂類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，因其與人體脂質(zhì)代謝及膽固醇吸收有關(guān)，甾醇酯酶是檢測(cè)血液中總膽固醇含量的重要酶制劑之一[3]。還有解決機(jī)械制漿造紙工藝中樹脂障礙問題的潛力[4]，由于其廣泛的底物特異性和穩(wěn)定性，在食品、醫(yī)藥、紙漿工業(yè)及化工行業(yè)等領(lǐng)域發(fā)揮重要作用[5]。自然界中，微生物生產(chǎn)的甾醇酯酶具有生產(chǎn)成本低、工藝簡(jiǎn)單、不易污染、不受季節(jié)影響及易形成規(guī)?；a(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，已成為目前研究熱點(diǎn)[6]。本文概述了甾醇酯酶的微生物來源，介紹了酶制劑的分離純化、基因的克隆表達(dá)和蛋白的三維結(jié)構(gòu)方面的研究進(jìn)展，并對(duì)其應(yīng)用前景進(jìn)行了展望，旨在全面深入地了解甾醇酯酶，為其理論研究與產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用提供參考。

1 甾醇酯酶的微生物來源

對(duì)微生物甾醇酯酶的首次報(bào)道來自UWAJIMA T等[7]的研究，之后陸續(xù)有科研人員在微生物中檢測(cè)到甾醇酯酶活性。據(jù)報(bào)道[6]，多種微生物都能分泌甾醇酯酶：在細(xì)菌中約幾十種菌能產(chǎn)生甾醇酯酶，有假單胞菌屬（Pseudomonas sp.）、不動(dòng)桿菌屬（Acinetobactersp.）、金黃桿菌屬（Chryseobacteriumsp.）、蠟樣芽孢桿菌屬（Bacillussp.）、紅球菌屬（Rhodococcussp.）和伯克霍爾德氏菌屬（Burkholderia sp.）等；放線菌的鏈霉菌屬（Streptomycessp.）的菌株也能分泌甾醇酯酶；沙眼衣原體（Chlamydia trachomatis）CT149分泌的甾醇酯酶專一水解膽固醇亞油酸酯并在Hela細(xì)胞中成功表達(dá)[8]；真菌中的鐮刀菌屬（Fusariumsp.）、木霉屬（Trichodermasp.）和線嘴殼菌屬（Ophiostomasp.）等的菌株均可產(chǎn)甾醇酯酶。不同的微生物甾醇酯酶都易形成多聚體，但其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及底物特異性等差異較大。目前，對(duì)產(chǎn)甾醇酯酶菌株的篩選主要采用以甾醇酯為唯一碳源的方法，同時(shí)以產(chǎn)物中的酸為依據(jù)添加指示劑進(jìn)行篩選。研究表明，微生物源的甾醇酯酶底物范圍廣，穩(wěn)定性較好，且能通過誘導(dǎo)提高酶產(chǎn)量，純化工藝也相對(duì)簡(jiǎn)單[9]，所以目前主要針對(duì)各種微生物來源的甾醇酯酶進(jìn)行研究和利用[10]。

1.1 細(xì)菌來源的甾醇酯酶

UWAJIMA T等[7]于1975年首次報(bào)道的具有水解甾醇酯活性的酶，由熒光假單胞菌（P.fluorescens）KY395分泌，分子質(zhì)量為129 ku，該酶也具有脂肪酶活性，但對(duì)長(zhǎng)鏈甾醇酯有顯著的偏好性；最適溫度55℃，在pH 5～12范圍內(nèi)均有活性。1976年，在相同菌種的菌株ATCC 21156中分離純化出兩種甾醇酯酶，這兩種酶不具有脂肪酶活性，對(duì)甾醇酯具有絕對(duì)特異性，最適底物為膽固醇亞油酸酯。來自該菌株的酶產(chǎn)品由于其高產(chǎn)量，已獲得專利保護(hù)并實(shí)現(xiàn)商品化。1994年，NISHIMURA M等[11]在門多薩假單胞菌（P.mendocina）3121分泌的脂肪酶中檢測(cè)到了甾醇酯酶活性，酶分子質(zhì)量為30 ku；2002年，SUGIHARA A等[12]描述了來自銅綠假單胞菌（P.aeruginosa）菌株的甾醇酯酶，等電點(diǎn)（isoelectric point，pI）為3.2，分子質(zhì)量約為53 ku，其熱穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性范圍與來自熒光假單胞菌（P.fluorescens）的甾醇酯酶相同。

從系統(tǒng)發(fā)育上看，伯克霍爾德氏菌（Burkholderiasp.）與假單胞菌（Pseudomonassp.）進(jìn)化關(guān)系最近，但是直到2006年，TAKEDA Y等[13]才首次從洋蔥伯克霍爾德氏菌（B.cepacia）ST200中篩選出真正意義上的甾醇酯酶，該酶不具有脂肪酶活性，僅具有芳香酯酶活性。其分子質(zhì)量約為37 ku，有較好的溫度耐受性（4～65℃）和pH穩(wěn)定性（5.5～12.0）。

國(guó)內(nèi)對(duì)產(chǎn)甾醇酯酶微生物的研究始于20世紀(jì)80年代。楊光禮等[14]從實(shí)驗(yàn)室保藏的菌株中篩選出一株產(chǎn)甾醇酯酶能力較強(qiáng)的菌株，經(jīng)鑒定為假單胞菌屬（Pseudomonassp.），命名為SIPI-215，并對(duì)菌株發(fā)酵條件和酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究；黃武華等[15]從土壤中分離出一株產(chǎn)甾醇酯酶能力較強(qiáng)的假單胞菌（Pseudomonassp.），得到菌株最適產(chǎn)酶條件；譚曉晶[16]首次從馬紅球菌（Rhodococcussp.）中分離得到甾醇酯酶，對(duì)粗酶液進(jìn)行了一系列純化，純化后的酶分子質(zhì)量58.0 ku，樣品純度達(dá)到94%，酶活10.56 U/mg，分別以膽固醇亞油酸酯和膽固醇油酸酯為底物時(shí)，酶的米氏常數(shù)（Km）值分別為2.2×105mol/L和3.1×105mol/L。曾誠(chéng)等[17]以植物甾醇酯為底物，首次采用熒光透明圈法從金黃桿菌屬（Chryseobacteriumsp.）中篩選出產(chǎn)甾醇酯酶菌株，通過分離純化最終得到分子質(zhì)量大小為39.0 ku的蛋白。該酶比酶活為2.443IU/mg，最適pH值為7.5，最適作用溫度40℃，在45℃以下，pH 5.0～9.0的范圍內(nèi)穩(wěn)定性較好。

1.2 放線菌來源的甾醇酯酶

KAMEIT等[18]報(bào)道了來自淡紫灰鏈霉菌（Streptomyces lavendulae）H-646-SY的甾醇酯酶，首次設(shè)計(jì)纖維素親和層析的純化方法，分離出具有甾醇酯酶活性的蛋白，分子質(zhì)量為12.0 ku，這與NISHIMURA M等[11]由其核苷酸序列推導(dǎo)的結(jié)果類似。之后又從鏈霉菌屬的不同菌株中分離出三種新的甾醇酯酶，這三種酶的底物特異性范圍廣，水解不同長(zhǎng)度的甾醇酯，優(yōu)選膽固醇亞油酸酯、對(duì)硝基苯基酯和甘油三酯。

1.3 真菌來源的甾醇酯酶

真菌來源的甾醇酯酶研究起步較晚。目前，研究較熱門的是從線嘴殼菌（O.piceae）的甾醇酯酶。CALERO-RUEDAO等[19]首次在從線嘴殼菌（O.piceae）CECT 20416菌株中通過疏水層析的單一步驟純化得到分子質(zhì)量為56.5ku的甾醇酯酶，該酶底物特異性范圍廣，除了水解甾醇酯外，還能水解不同長(zhǎng)度的脂肪酸酯，在酸性條件下24 h仍能保持50%的活性，但當(dāng)pH＞8或溫度＞60℃時(shí)穩(wěn)定性較差。該酶催化效率遠(yuǎn)高于目前商業(yè)用的真菌甾醇酯酶（來自皺褶假絲酵母（C.rugosa）家族），其商業(yè)化應(yīng)用目前正在開發(fā)中。CEDILLO V B等[20]將其在畢赤酵母（P.pastoris）中重組表達(dá)，因在重組蛋白的N-末端摻入了額外的6～8個(gè)氨基酸，蛋白的聚集性降低，酶活顯著提高。VAQUERO M E等[21]將從線嘴殼菌（O.piceae）甾醇酯酶在釀酒酵母（S.cerevisiae）中重組表達(dá)，其催化效率介于畢赤酵母（P.pastoris）中表達(dá)的重組蛋白和天然蛋白之間。目前已經(jīng)評(píng)估了該酶的粗制備物在行業(yè)應(yīng)用中的效率，在畢赤酵母中產(chǎn)生的重組O.piceae甾醇酯酶在實(shí)驗(yàn)室條件下結(jié)果最好[22]，有望用于生產(chǎn)應(yīng)用。圖1顯示了對(duì)不同來源的甾醇酯酶的系統(tǒng)發(fā)育分析。

圖1 不同微生物來源的甾醇酯酶的系統(tǒng)發(fā)育分析Fig.1 Phylogenetic analysis of sterol esterase from different microorganism's origin

2 甾醇酯酶的分離純化及結(jié)構(gòu)

2.1 甾醇酯酶的分離純化

酶的分離純化是研究酶的分子結(jié)構(gòu)、生理功能以及應(yīng)用的基礎(chǔ)。至今國(guó)內(nèi)使用的甾醇酯酶主要依賴進(jìn)口，價(jià)格昂貴。究其原因，除了酶源問題外，酶的分離純化也未從根本上得到解決。甾醇酯酶是一種疏水性較強(qiáng)的蛋白，容易形成聚集體，不利于酶純化。添加表面活性劑能減輕蛋白之間的聚集作用，有助于甾醇酯酶的純化，一般多采用膽汁酸鹽或TritonX-100作為活化劑。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)[23]，在以往的純化研究中，超濾、透析、萃取、離子交換層析、凝膠層析、疏水層析、親和層析等常規(guī)技術(shù)相繼得到應(yīng)用。其中，疏水層析技術(shù)顯示出了極大的優(yōu)越性，尤其是對(duì)于工程菌產(chǎn)甾醇酯酶的純化。VAQUERO M E等[24]對(duì)在畢赤酵母（P.pastoris）中重組表達(dá)的甾醇酯酶采取單一的疏水層析（Octyl-Sepharose柱）進(jìn)行純化并取得理想的結(jié)果。不同來源的甾醇酯酶純化步驟及相關(guān)數(shù)據(jù)見表1，目前這方面研究仍是一大熱點(diǎn)。

表1 幾種甾醇酯酶純化步驟Table 1 Purification steps of several kinds of sterol esterase

2.2 甾醇酯酶的結(jié)構(gòu)

與大部分酯水解酶一樣，甾醇酯酶在結(jié)構(gòu)上屬于α/β水解酶家族，具有構(gòu)成酶活性中心的催化三聯(lián)體結(jié)構(gòu)（絲氨酸Ser、組氨酸His和天冬氨酸Asp/谷氨酸Glu）[25]。在一級(jí)結(jié)構(gòu)上，甾醇酯酶除了三聯(lián)體氨基酸序列和“GXSXG”的五肽保守序列外，不同微生物的甾醇酯酶氨基酸序列同源性較低[26]；在二級(jí)結(jié)構(gòu)上，α/β水解酶折疊結(jié)構(gòu)為酶的活性位點(diǎn)提供了一個(gè)穩(wěn)定的支架，不同甾醇酯酶的二級(jí)結(jié)構(gòu)的差異體現(xiàn)在α-螺旋和β-折疊數(shù)量、β-折疊扭曲的角度、α-螺旋的空間分布位置等；在三級(jí)結(jié)構(gòu)上，脂肪酶分子在酶催化活性中心的上方，有一個(gè)α-螺旋形成的蓋子（lid）結(jié)構(gòu)，而酯酶分子的α-螺旋遠(yuǎn)離活性中心的上方。這一結(jié)構(gòu)差異正好與“脂肪酶具有界面激活而酯酶卻不具界面激活”的催化性質(zhì)相吻合。JAEGER K E等[27]詳細(xì)闡述了酶催化酯鍵斷裂的過程，將其分為4個(gè)階段：結(jié)合底物，形成瞬間的中間態(tài)，形成共價(jià)中間體以及?；尫?。因此，催化膽固醇酯水解的機(jī)制類似于胰凝乳蛋白酶那樣的絲氨酸蛋白酶，這是典型的酯酶的特點(diǎn)。

XIANG H等[28]研究發(fā)現(xiàn)，來自鏈霉菌的甾醇酯酶缺失了“GXSXG”的保守五肽序列，催化活性中心的三聯(lián)體結(jié)構(gòu)中缺乏保守的組氨酸（His），但是存在兩個(gè)保守的半胱氨酸（Cys）殘基，可形成二硫橋以穩(wěn)定三級(jí)結(jié)構(gòu)。同時(shí)它也不受絲氨酸蛋白酶抑制劑苯甲基磺酰氟（phenylmethanesulfonyl fluoride，PMSF）的影響。由此推斷，放線菌的甾醇酯酶與已知的酯酶相關(guān)性很小，可能存在不同的催化水解機(jī)制。

3 甾醇酯酶的克隆表達(dá)

隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，不同來源的微生物甾醇酯酶相繼被克隆，并在大腸桿菌（E.coli）、畢赤酵母（P.pastoris）、克魯維酵母（Kluyveromyces lactis）、曲霉（Aspergillussp.）等宿主中表達(dá)[21]。

XIANG H等[28]利用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse tran scriptase-polymerase chain reaction，RT-PCR）技術(shù)克隆了來自鏈霉菌（Streptomycessp.）X9的完整的甾醇酯酶基因片段，共1 336 bp，其中開放閱讀框（open reading frame，ORF）包括654 bp，編碼217個(gè)氨基酸殘基，分子質(zhì)量為18.8 ku。在起始密碼子上游5 bp處有Shine-Dalgarno序列（AAGGAGG），前38個(gè)氨基酸為信號(hào)肽部分，與來自阿維鏈霉菌（S.avermitilis）JCM5070的甾醇酯酶基因有64%的同源性。CALERO-RUEDA O等[19]將從線嘴殼菌O.piceaeCECT 20416的甾醇酯酶基因克隆并在畢赤酵母（P.pastoris）GS115中進(jìn)行異源表達(dá)，分別以pGEM-T Easy和pPIC9質(zhì)粒（Invitrogen TM AOX 1啟動(dòng)子）作為克隆載體和表達(dá)載體，獲得具有較高甾醇酯酶活性的重組蛋白。該酯酶基因的DNA序列和推導(dǎo)的氨基酸序列在GenBank/EBI數(shù)據(jù)庫(kù)中的編號(hào)為AY899847。該基因的ORF為1647bp，不含內(nèi)含子序列，編碼549個(gè)氨基酸，分子質(zhì)量為58.2 ku，前12個(gè)氨基酸為信號(hào)肽部分，其N末端的氨基酸序列與之前從野生菌株中純化獲得的蛋白質(zhì)的氨基酸序列一致。

KONTKANEN H等[29]將嗜熱真菌Melanocarpus albomycesVTTD-96490的甾醇酯酶STE1轉(zhuǎn)入pHAK4/77，在里氏木霉（T.reesei）中進(jìn)行表達(dá)（纖維二糖水解酶啟動(dòng)子），通過凝膠過濾層析，測(cè)得其分子質(zhì)量為120 ku，以二聚體形式存在，而野生菌株中的甾醇酯酶以四聚體形式存在，雖然兩者都有5%的N連接的糖基化，但是兩者的糖基化模式可能有輕微不同。氨基酸序列顯示其重組SET1疏水性氨基酸殘基達(dá)41.1%。推測(cè)重組STE1內(nèi)部隱藏的C端His標(biāo)簽?zāi)芙档褪杷裕瑢?dǎo)致二聚體結(jié)構(gòu)的形成。

4 微生物甾醇酯酶的應(yīng)用

4.1 臨床上測(cè)定膽固醇含量

心腦血管疾病是危害人類健康的一種常見疾病[30]，而膽固醇含量是診斷和預(yù)防心腦血管疾病的重要指標(biāo)。目前，臨床上已經(jīng)形成了多種血液膽固醇的檢測(cè)方法（化學(xué)法、酶法、同位素稀釋法、質(zhì)譜分析法等）[31]，其中，膽固醇的酶法檢測(cè)是一種重要的方法。

自ALLAIN C C等[32]于1974年首次提出膽固醇的的酶法檢測(cè)后，膽固醇酯酶的實(shí)際應(yīng)用正式被開創(chuàng)。檢測(cè)原理是：膽固醇酯依次在膽固醇酯酶（cholesterol esterase，COE）和膽固醇氧化酶（cholesteroloxidase，COD）的作用下生成脂肪酸，△4-膽甾烯（cholest-4-en-3-one）和H2O2。常規(guī)酶法檢測(cè)是通過用Tninder顯色系統(tǒng)檢測(cè)終點(diǎn)產(chǎn)物H2O2含量（波長(zhǎng)500 nm處用比色法檢測(cè)所得的吸光度值與樣品中的總膽固醇濃度對(duì)應(yīng)的線性關(guān)系，可以通過預(yù)先制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線求出對(duì)應(yīng)的總膽固醇濃度）來計(jì)算膽固醇酯含量。具體反應(yīng)如下：

隨著科學(xué)的發(fā)展，對(duì)常規(guī)酶法檢測(cè)不斷改進(jìn)，出現(xiàn)了許多新方法（如膽固醇脫氫酶法、熒光法、電極法、熱敏電阻法等）[33]。雖然方法不斷改進(jìn)，但基本原理不變，反應(yīng)第一步都需要膽固醇酯酶的參與，這使膽固醇酯酶在測(cè)定膽固醇含量上起著不可替代的作用。因此研發(fā)高質(zhì)量的膽固醇酯酶制劑具有重要意義。

4.2 酶法合成植物甾醇酯

植物甾醇是一類普遍存在于植物體中的微量活性成分，具有降低血液中膽固醇、防治心血管疾病、抗氧化等功效，被譽(yù)為“生命的鑰匙”[34-35]。2010年，我國(guó)衛(wèi)生部批準(zhǔn)植物甾醇和甾烷醇作為新資源食品[36]，植物甾醇成為功能性食品研發(fā)的熱點(diǎn)。但是，植物甾醇在油相中溶解度低，在食品體系中添加時(shí)經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)結(jié)晶現(xiàn)象，穩(wěn)定性也不及甾醇酯，因此考慮用將植物甾醇改性轉(zhuǎn)變成甾醇酯的方式添加到食品中，制成功能性食品。其主要合成方法有化學(xué)法和酶法，酶法具有合成條件溫和、副產(chǎn)物少、安全性高等優(yōu)點(diǎn)，因此具有很好的應(yīng)用前景。羅日明[37]通過酶法催化合成的甾醇酯（肉豆蔻酸植物甾醇酯和月桂酸植物甾醇酯）在油脂中的溶解度比植物甾醇提高了3～7倍。且有研究顯示各類甾醇酯均具有良好的降膽固醇功能[36]。

4.3 制漿造紙工業(yè)，解決樹脂障礙

造紙工業(yè)術(shù)語“樹脂障礙”中的樹脂主要指木材原料中各種天然的疏水性有機(jī)物質(zhì)，包括甘油三酯、甾醇酯、樹脂酸等[38]。在造紙生產(chǎn)過程中，這些化合物可以單獨(dú)或者與不溶性填料、無機(jī)鹽和涂布劑等作用產(chǎn)生沉積，嚴(yán)重影響造紙產(chǎn)品的質(zhì)量及產(chǎn)量，被統(tǒng)稱為“樹脂障礙”。早在20世紀(jì)90年代初，日本Juji公司率先提出用酶法水解甘油三酯減少樹脂障礙。目前已將一些商業(yè)化的酶制劑（如resinase）用于解決這一問題，但是這些酶制劑缺乏甾醇酯酶活性，不能水解木材甾醇酯。因此，提出將甾醇酯酶與脂肪酶結(jié)合使用的設(shè)想，共同解決樹脂障礙問題，以期生產(chǎn)出穩(wěn)定性和韌性更好的紙張。CALERO-RUEDA O等[19]最先使用由從線嘴殼菌（O.piceae）分泌的甾醇酯酶降解木漿中的甾醇酯，并取得理想效果。葉聿程等[39]以天然樹脂為唯一碳源篩選出一株降解樹脂能力較強(qiáng)的粉塵腸桿菌（Enterobacter pulveris）Z57，降解率為6%。ZENG C[40]以植物甾醇酯為唯一碳源，從土壤中篩選出一株高產(chǎn)甾醇酯酶的金黃桿菌（Chryseobacteriumsp.）jx-39，其甾醇酯酶對(duì)不同碳鏈長(zhǎng)度的脂肪酸膽固醇酯和對(duì)硝基苯酚酯具有廣泛的底物特異性，顯示該酶具有解決樹脂障礙的潛力。

除此之外，甾醇酯酶也可作為清潔催化劑應(yīng)用于化工、紡織等行業(yè)，具有很大的應(yīng)用潛力，因此挖掘穩(wěn)定的、催化效率高的甾醇酯酶在實(shí)際的工業(yè)化生產(chǎn)中尤其重要。

5展望

目前研究報(bào)道的甾醇酯酶活力較低，底物專一性范圍較寬，它們中的大多數(shù)也可以同時(shí)水解不同長(zhǎng)度的脂肪酸鏈，這并不利于專一性地水解甾醇酯，因此限制了該酶的廣泛應(yīng)用?？蒲泄ぷ髡卟粩嗯Y選底物特異性強(qiáng)的高產(chǎn)甾醇酯酶菌株、優(yōu)化提高甾醇酯酶的生產(chǎn)水平且降低生產(chǎn)成本。除此之外，隨著分子生物學(xué)、基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)等學(xué)科的發(fā)展，提高甾醇酯酶的異源表達(dá)水平，改善甾醇酯酶的酶學(xué)性質(zhì)，研究甾醇酯酶與底物的作用機(jī)理將是今后的科研熱點(diǎn)和趨勢(shì)。這將為甾醇酯酶在不同領(lǐng)域的開發(fā)應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

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Research advance in sterol esterase from microorganisms

REN Nannan1,2,WANG Xiaohui1,2,CHI Naiyu1,2,QIAO Hui1,2,ZHANG Qingfang1,2*
(1.College of Life Science and Biotechnology,Dalian University,Dalian 116622,China;
2
.Liaoning Technology of Marine Microbiological Engineering Research Center,Dalian 116622,China)

Sterol esterase(EC 3.1.1.13),as a high activity biocatalyst,has extremely broad application value in medical detection,food,paper industry and environmental protection,etc.The research advance of microorganism's origin,separation and purification,cloning and expression,three-dimensional structure and application of sterol esterase were summarized,which might lay foundation for research,development and industrialization application of sterol esterase.

sterol esterase;microorganism;cloning and expression;separation and purification;application

Q556.1

0254-5071（2017）06-0009-05

10.11882/j.issn.0254-5071.2017.06.002

2017-05-12

國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃‘863計(jì)劃’項(xiàng)目（2007AA021306）

任楠楠（1992-），女，碩士研究生，研究方向?yàn)槲⑸锱c酶工程。

*通訊作者：張慶芳（1965-），女，教授，博士，研究方向?yàn)槲⑸锱c酶工程。