油酸對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量和乳脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)的影響

邢媛媛，李紅磊，李大彪，胡紅蓮，張興夫，高 民,*

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特 010018；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究所，內(nèi)蒙古呼和浩特 010031）

油酸對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量和乳脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)的影響

邢媛媛1，李紅磊1，李大彪1，胡紅蓮2，張興夫2，高 民1,2*

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特 010018；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究所，內(nèi)蒙古呼和浩特 010031）

本試驗(yàn)旨在探討油酸對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量和乳脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)的影響。選取中國(guó)荷斯坦奶牛乳腺上皮細(xì)胞（BMECs）為試驗(yàn)材料，經(jīng)純化培養(yǎng)后，培養(yǎng)基中添加0（對(duì)照）、50、100、200、400 μmol/L油酸，繼續(xù)培養(yǎng)24 h。通過(guò)四甲基偶氮唑鹽（MTT）比色法檢測(cè)細(xì)胞活力；利用試劑盒檢測(cè)胞內(nèi)甘油三酯的含量；采用實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)乳脂肪合成相關(guān)基因的表達(dá)。結(jié)果表明：油酸濃度為200、400 μmol/L時(shí)，BMECs相對(duì)增殖率顯著低于對(duì)照組與其他試驗(yàn)組（P＜0.05）；添加100、200 μmol/L的油酸促進(jìn)了胞內(nèi)甘油三酯的合成（P＜0.05）；添加油酸上調(diào)了二酰甘油酰基轉(zhuǎn)移酶（DGAT）基因表達(dá)量，50 μmol/L的油酸顯著上調(diào)了乙酰輔酶A羧化酶（ACC）和過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARGγ）基因表達(dá)量（P＜0.05），100～400 μmol/L的油酸顯著抑制了硬脂酰輔酶A去飽和酶（SCD）、脂肪酸結(jié)合蛋白3（FABP3）、固醇調(diào)節(jié)原件結(jié)合蛋白1（SREBP-1）基因表達(dá)量。綜上所述，50～100 μmol/L的油酸對(duì)BMECs乳脂肪合成具有較好的促進(jìn)效果。

奶牛乳腺上皮細(xì)胞；油酸；細(xì)胞活力；甘油三酯；乳脂肪合成相關(guān)基因

油酸作為重要的乳成分合成前體物，能為動(dòng)物機(jī)體提供能量，還能減少血液中膽固醇和甘油三脂的含量、降低血脂、防止高血壓、提高機(jī)體免疫力等[1]。關(guān)于泌乳機(jī)理的體外研究主要以奶牛乳腺上皮細(xì)胞（BMECs）為模型，從基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)揭示油酸對(duì)乳脂肪和乳蛋白合成的調(diào)控機(jī)理。崔瑞蓮[2]研究發(fā)現(xiàn)，添加200 μmol/L和400 μmol/L油酸會(huì)抑制細(xì)胞增殖，0～100 μmol/L油酸會(huì)促進(jìn)胞內(nèi)甘油三酯合成。Kadegowda等[3]研究指出，油酸能直接影響B(tài)MECs中脂肪生成基因的表達(dá)。乳脂肪合成的調(diào)控是由一個(gè)復(fù)雜的基因網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行的。在這一基因網(wǎng)絡(luò)中過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARGγ)和固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1（SREBP1）是調(diào)節(jié)乳脂合成相關(guān)基因重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子和核受體，在細(xì)胞調(diào)控因子通路中處于樞紐位置，而且PPARG可能調(diào)控SREBP1的表達(dá)。而脂肪酸從頭合成基因乙酰輔酶A羧化酶（ACC）、脂肪酸合成酶（FASN），脂肪酸攝取轉(zhuǎn)運(yùn)基因脂蛋白脂酶（LPL）、脂肪酸結(jié)合蛋白3（FABP3），脂肪酸合成過(guò)程中的硬脂酰輔酶A去飽和酶（SCD）等諸多基因圍繞這兩個(gè)重要調(diào)控因子，形成一個(gè)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，在基因轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控乳脂肪的合成[4]。

1 材料與方法

1.1 材料 DMEM/F12、無(wú)脂肪酸的牛血清白蛋白、氫化可的松、胰島素轉(zhuǎn)鐵蛋白溶液均購(gòu)自Gibco公司；無(wú)水乙醇、表皮生長(zhǎng)因子、催乳素、膠原酶Ⅱ、雙抗、胰蛋白酶/EDTA、 MTT和油酸均購(gòu)自Sigma公司；磷酸緩沖液 （PBS）溶液和胎牛血清購(gòu)自HyClone公司；基質(zhì)膠（Matrigel）和細(xì)胞回收液均購(gòu)自Corning公司；總RNA提取試劑盒（RNA isoplus）、RTPCR試劑盒（prime scriptTMRT reagent kit）、Real-Time PCR試劑盒均購(gòu)自 TaKaRa 公司；TAG試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用單因子完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)。選取健康的中國(guó)荷斯坦奶牛的乳腺上皮細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，經(jīng)純化后，收集第2代的乳腺上皮細(xì)胞，置于37℃、5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至細(xì)胞長(zhǎng)滿60%～70%時(shí)，添加含有0（對(duì)照）、50、100、200、400 μmol/L油酸的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為添加2 mmol/L谷氨酰胺、1 ng/mL氫化可得松及5 μg/mL胰島素轉(zhuǎn)鐵蛋白溶液的DMEM/F12培養(yǎng)基。培養(yǎng)24 h后收集細(xì)胞，提取總RNA，測(cè)定濃度，制備RT-qPCR反應(yīng)液，應(yīng)用RT-qPCR方法，檢測(cè)乳脂合成相關(guān)基因[乙酰輔酶A羧化酶（ACC）、脂肪酸合成酶（FASN）、二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶（DGAT）、SCD]、乳脂合成相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)控因子[FABP3、PPARGγ、固醇調(diào)節(jié)原件結(jié)合蛋白1（SREBP-1）]，各基因表達(dá)量用2-△△Ct值表示。

1.3 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.3.1 乳腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)的獲取與純化 選取處于泌乳高峰期體況良好的荷斯坦奶牛進(jìn)行試驗(yàn)，從奶牛乳腺組織取樣，剪取腺泡豐富的乳腺組織約50 g，利用膠原酶Ⅱ消化法獲得原代乳腺上皮細(xì)胞。待原代細(xì)胞長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶底的80%左右時(shí)，利用乳腺上皮細(xì)胞和成纖維上皮細(xì)胞對(duì)胰蛋白酶的敏感度不同來(lái)純化乳腺上皮細(xì)胞并傳代。傳至第1代凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 油酸的配制 將1 g的油酸溶到無(wú)水乙醇中，配制成1 mol/L的儲(chǔ)液，-80℃冰箱保存。再按照一定比例將油酸添加到誘導(dǎo)培養(yǎng)液中。為了防止油酸在液體中析出，將油酸單獨(dú)添加到牛血清白蛋白中，誘導(dǎo)培養(yǎng)液中牛血清白蛋白的濃度為1 g/L。

1.3.3 BMECs細(xì)胞活力的檢測(cè) 用MTT法檢測(cè)BMECs的增殖能力。將BMECs懸浮液接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔接種密度是1×104個(gè)/200 μL，將培養(yǎng)板放于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24 h后添加含不同濃度油酸的誘導(dǎo)培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)48 h，每個(gè)試驗(yàn)組均設(shè)7個(gè)重復(fù)。培養(yǎng)結(jié)束前4 h吸出培養(yǎng)液，每孔加入MTT（5 mg/mL）20 μL，4 h后棄去MTT，每孔再加入100 μL的二甲基亞砜（DMSO），振蕩10 min，490 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)各孔的吸光光度值（OD490）。細(xì)胞相對(duì)增殖率RGR（Relative Growth Rate）=試驗(yàn)組OD490/對(duì)照組OD490。

1.3.4 BMECs內(nèi)TAG含量的測(cè)定 將BMECs接種于25 cm2培養(yǎng)瓶中，每瓶接種量3×105個(gè)/5mL。培養(yǎng)24 h后，分別添加含不同油酸濃度的誘導(dǎo)培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)48 h。用0.25%胰蛋白酶/EDTA混合液消化并收集細(xì)胞沉淀，用PBS清洗沉淀2遍，再將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管中，每管加入200 μL的PBS后將BMECs超聲破碎，按照甘油三酯試劑盒給出的方法檢測(cè)BMECs胞內(nèi)TAG的含量。

1.3.5 BMECs中乳脂和乳蛋白合成相關(guān)基因的表達(dá)量的測(cè)定 將第2代細(xì)胞懸浮液接種于75 cm2培養(yǎng)瓶中，每瓶10 mL含有8×105個(gè)細(xì)胞，置于37℃、5% CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%匯合后，分別添加含不同濃度油酸的DMEM/F12誘導(dǎo)培養(yǎng)基，置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h，使用胰蛋白酶/EDTA消化細(xì)胞，將細(xì)胞懸液128×g離心10 min，棄去上清液，用PBS清洗，細(xì)胞總RNA的提取采用試劑盒按說(shuō)明書進(jìn)行，用分光光度計(jì)測(cè)定提取的總RNA的濃度及OD260/ OD280，反轉(zhuǎn)錄PCR按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。本試驗(yàn)以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）為內(nèi)參基因，引物序列及參數(shù)見(jiàn)表1。試驗(yàn)每組設(shè)3個(gè)重復(fù)。

表1 引物序列及參數(shù)

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2007進(jìn)行計(jì)算和整理，RT-qPCR試驗(yàn)結(jié)果采用2－△△Ct法進(jìn)行相對(duì)定量分析。利用SAS 9.0軟件的One-Way ANOVA程序?qū)?shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，多重比較采用Duncan's法，以P＜0.05作為差異顯著的判別標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

2.1 油酸對(duì)BMECs增殖的影響 由表2可知，其中50 μmol/L油酸組BMECs的相對(duì)增殖率（RGR）高于對(duì)照組趨勢(shì)（P＞0.05）。200、400 μmol/L油酸組BMECs的相對(duì)增殖率顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。

2.2 油酸對(duì)BMECs內(nèi)乳脂合成的影響 由表3可以看出，添加不同濃度油酸均會(huì)促進(jìn)BMECs胞內(nèi)TAG的合成，其中100、200 μmol/L油酸處理組BMECs胞內(nèi)TAG合成量顯著高于對(duì)照組及其他處理組（P＜0.05）。

2.3 油酸對(duì)BMECs乳脂合成相關(guān)基因表達(dá)的影響 由表4可知，添加50 μmol/L油酸ACC基因的表達(dá)量顯著高于對(duì)照組，而添加100 μmol/L和400 μmol/L的油酸ACC的表達(dá)量顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。油酸濃度為200 μmol/L時(shí)，F(xiàn)ASN的相對(duì)表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。與對(duì)照組相比，油酸處理組上調(diào)了DGAT2的基因表達(dá)水平，其中200 μmol/L的油酸處理組DGAT2的基因表達(dá)量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。油酸處理組SCD和FABP3基因表達(dá)量顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。與對(duì)照組相比，100～400 μmol/L油酸顯著抑制SREBF1基因的表達(dá)，并呈現(xiàn)劑量效應(yīng)（P＜0.05）。50 μmol/L的油酸處理組，PPARG的基因表達(dá)量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），而100、200、400 μmol/L油酸處理組，PPARG的基因表達(dá)量則顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。

表 2 添加不同濃度油酸對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞增殖能力的影響

表 3 添加不同濃度油酸對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)TAG合成的影響

表 4 添加油酸對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞乳脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)量的影響

3 討 論

3.1 油酸對(duì)BMECs增殖的影響 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的原理是活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能把MTT還原為不溶性的藍(lán)紫色的結(jié)晶甲瓚，并沉積在細(xì)胞中，細(xì)胞內(nèi)的結(jié)晶數(shù)量與細(xì)胞增殖能力呈正比。BMECs的活力是乳脂乳蛋白合成的前提。本研究發(fā)現(xiàn)，隨著油酸濃度的增加，BMECs的增殖被顯著抑制。孫曉菊等[5]研究發(fā)現(xiàn)，高濃度的油酸會(huì)抑制BMECs的增殖。崔瑞蓮等[2]研究指出，200、400 μmol/L的油酸會(huì)顯著抑制BMECs的增殖。馮小寶[6]研究表明，0～100 nmol/L的油酸能夠促進(jìn)BMECs的增殖，BMECs對(duì)油酸的吸收利用需要蛋白介導(dǎo)的膜轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程。本試驗(yàn)與前人研究結(jié)果一致，BMECs的增殖能力與油酸的添加濃度存在劑量依賴關(guān)系。

3.2 油酸對(duì)BMECs甘油三酯合成及乳脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)的影響 乳脂肪是牛奶的風(fēng)味物質(zhì)，其含量影響著牛奶的品質(zhì)。BMECs胞內(nèi)甘油三酯的合成量是評(píng)定油酸能否促進(jìn)乳脂肪合成的重要指標(biāo)。有研究發(fā)現(xiàn)，在細(xì)胞增殖不受抑制的情況下，油酸能促進(jìn)BMECs胞內(nèi)TAG的合成[2]。Yonezawa等[7]研究表明，向BMECs培養(yǎng)液中添加不飽和脂肪酸，均能促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)TAG的沉積。在本試驗(yàn)條件下，不同濃度的油酸處理組均會(huì)促進(jìn)BMECs內(nèi)TAG的合成，其中100、200 μmol/L的油酸處理組TAG合成量顯著高于對(duì)照組，這與前人的研究結(jié)果一致。

乳脂肪作為牛奶中重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，主要包括飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸，其中不飽和脂肪酸在維護(hù)人體健康方面扮演著重要的角色。前人針對(duì)油酸對(duì)乳脂肪合成的影響及其調(diào)控機(jī)理也開(kāi)展了一些研究工作。ACC和FASN是脂肪酸從頭合成的關(guān)鍵酶，Kadegowda等[3]研究發(fā)現(xiàn)，添加長(zhǎng)鏈脂肪酸會(huì)抑制ACC和FASN的基因表達(dá)量。DGAT2是TAG合成的重要基因，在TAG合成過(guò)程中必不可少，DGAT2基因沉默或缺失會(huì)導(dǎo)致TAG合成效率的降低[8-9]。研究表明，在BMECs培養(yǎng)液中添加一定量的油酸會(huì)抑制ACC基因的表達(dá)，促進(jìn)DGAT2基因的表達(dá)[2,5]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，高濃度的油酸會(huì)抑制ACC基因的表達(dá)，上調(diào)DGAT2基因的表達(dá)，DGAT2基因的高表達(dá)可能是促進(jìn)胞內(nèi)TAG沉積的主要原因。

在乳腺組織中SCD 是單不飽和脂肪酸合成的關(guān)鍵酶，SCD可以在碳鏈的Δ9 位置引入雙鍵，使飽和脂肪酸變成不飽和脂肪酸[10]。FABP3是一種結(jié)合長(zhǎng)鏈脂肪酸的胞質(zhì)蛋白質(zhì)，在奶牛乳腺組織中參與脂肪酸的攝取轉(zhuǎn)運(yùn)。Bionaz等[9]研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ABP3主要是為SCD 提供脂肪酸進(jìn)行乳脂肪的從頭合成。關(guān)于不飽和脂肪酸對(duì)SCD和FABP3表達(dá)的影響與前人研究結(jié)果不一致。有研究表明，體外培養(yǎng)BMECs添加不飽和脂肪酸會(huì)降低BMECs中SCD和FABP3的mRNA轉(zhuǎn)錄水平[2,5,11]。而Sheng等[12]研究發(fā)現(xiàn)，在BMECs培養(yǎng)液中添加不同配比不飽和脂肪酸會(huì)上調(diào)SCD和FABP3的表達(dá)。本研究表明，添加油酸處理組會(huì)降低SCD和FABP3的表達(dá)量。

SREBF-1在反芻動(dòng)物乳脂合成過(guò)程中起到關(guān)鍵調(diào)控作用，調(diào)控乳脂合成相關(guān)基因mRNA轉(zhuǎn)錄[13-14]。不飽和脂肪酸會(huì)抑制SREBF-1的表達(dá)[15-16]。過(guò)氧化物酶激活受體（PPAR）是配體激活核受體亞家族，其中PPARG是調(diào)控乳脂肪合成的關(guān)鍵核受體，脂肪酸代謝方面具有重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用[9]。孫曉菊[5]研究發(fā)現(xiàn)，50 μmol/LL的油酸上調(diào)了PPARG的表達(dá)量，高濃度的油酸降低了PPARG的表達(dá)量。還有研究指出不飽和脂肪酸對(duì) PPARG 基因表達(dá)量有下調(diào)的趨勢(shì)[3]。Kadegowda等[3]研究指出，SREBF1的表達(dá)可能受到PPARG的調(diào)控，PPARG促效劑不但促進(jìn)其靶基因ACC和FASN的表達(dá)，也上調(diào)了SREBF1的基因表達(dá)量。本研究得出，添加100 ～

400 μmol/L的油酸顯著抑制了SREBF-1 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，進(jìn)而抑制其靶基因ACC、FASN和SCD的表達(dá)；添加50 μmol/L的油酸上調(diào)了PPARG基因的表達(dá)，添加100～400 μmol/L的油酸抑制了PPARG的表達(dá)，其原因可能是添加較高濃度的油酸對(duì)細(xì)胞造成損傷，使細(xì)胞膜表面受體及轉(zhuǎn)運(yùn)基因FABP3表達(dá)受阻，阻礙了胞外信號(hào)向細(xì)胞核的轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而抑制了PPARG的表達(dá)。添加100～400 μmol/L油酸，SREBF1和PPARG的表達(dá)同時(shí)被抑制，可能是ACC、FABP3和SCD的表達(dá)量降低的主要原因。

乳脂肪和乳蛋白質(zhì)作為牛奶中重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，是衡量牛奶品質(zhì)的重要指標(biāo)。目前我國(guó)生鮮乳的乳蛋白和乳脂肪的含量普遍低于發(fā)達(dá)國(guó)家[5]。深入研究乳成分前體物對(duì)泌乳過(guò)程的影響并揭示其調(diào)控機(jī)理對(duì)提高牛奶品質(zhì)有重要意義。根據(jù)前人研究結(jié)果，本試驗(yàn)以BMECs為試驗(yàn)?zāi)Ｐ?，設(shè)計(jì)了不同的添加劑量，進(jìn)一步研究驗(yàn)證不同濃度的油酸對(duì)細(xì)胞活力、甘油三酯合成量和乳脂肪合成及相關(guān)基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響，從而篩選油酸的最佳濃度，這在國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)系統(tǒng)報(bào)道，為研究油酸對(duì)乳脂肪及乳蛋白合成的調(diào)控機(jī)理提供了新的理論依據(jù)。

4 小 結(jié)

本研究表明，由200 μmol/L和400 μmol/L的油酸顯著降低了BMECs的增殖能力。添加50～100 μmol/L的油酸促進(jìn)了胞內(nèi)TAG的合成，上調(diào)了DGAT2基因的表達(dá)。50 μmol/L的油酸顯著上調(diào)了ACC和PPARG的表達(dá)。綜上所述，50～100 μmol/L的油酸對(duì)BMECs乳脂肪合成具有較好的促進(jìn)效果。

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Ef f ects of Oleic Acid on Triglyceride Content and Gene Expressions Involved in Milk Fat Synthesis in Bovine Mammary Epithelial Cells

XING Yuan-yuan1, LI Hong-lei1, LI Da-biao1, HU Hong-lian2, ZHAG Xing-fu2, GAO Min1,2*

The aim othis study was to determine the eects ooleic acid on triglyceride content and gene expressions involved in milkat synthesis in bovine mammary epithelial cells (BMECs). Mammary epithelial cellsrom Chinese Holstein cows were culture and purication. Dierent concentrations [0(control), 50, 100, 200, 400 μmol/L] ooleic acid were added in culture mediumor a 24 h cultivation. Cell viability was detected by thiazoly blue tetrazolium bramide (MTT); triglyceride (TAG) content was measured by using TAG determination kit; gene expressions involved in milkatsynthesis were measured by real-time quantitative (RT-qPCR). The results showed that 200 μmol/L and 400 μmol/L oleic acid signicantly inhibited the prolieration oBMECs compared with control and other experimental groups (P＜0.05); 100 μmol/L and 200 μmol/L oleic acid signicantly promoted TAG synthesis in BMECs (P＜0.05). SCD, FABP3 and SREBF1 gene expression were signicantly suppressed by addition ooleic acid (P＜0.05), however, DGAT2 gene expression was increased.50 μmol/L oleic acid signicantly increased ACC and PPARGγ gene expression(P＜0.05). In conclusion, 50 to 100 μmol/L oleic acid is an optimal level considering its improvement eects on milkat synthesis.

Bovine mammary epithelial cells; Oleic acid; Cell viability; Triglyceride; Genes related in milkat synthesis

S823.5

：A

：10.19556/j.0258-7033.2017-07-056

2016-12-05；

2017-03-27

現(xiàn)代農(nóng)業(yè)（奶牛）產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)資金（CAR S-37）

邢媛媛（1991-），女，內(nèi)蒙古人，碩士研究生，從事反芻動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)生理及瘤胃微生態(tài)研究，E-mail:xingyuany uan2014@163.com

* 通訊作者：高民，E-mail: gmyh1588@126.com