分離培養(yǎng)在Hp感染診斷中的重要地位

林駿　劉堯　張永頂

【關鍵詞】 分離培養(yǎng)；幽門螺桿菌；感染

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.18.113

目前幽門螺桿菌（helicobacter pylori， Hp）感染的確診途徑有所不同， 總體來說包括細菌學、病理學、分子生物學、免疫學、同位素示蹤這幾種主要的手段。針對感染性疾病較為準確的確診途徑為分離培養(yǎng)， 通過對一段時間臨床分析研究可以看到， 目前在確診此類病癥時， 采用分離培養(yǎng)這一方法的檢測越來越少， 而出現了采用其他確診性相對偏低的手段來進行病癥的研判 [1]， 需要特別指出的是有些醫(yī)療機構將脲酶試驗這種假陽性與假陰性非常顯著的方法用作主要的確診方法， 使得Hp感染診斷帶來一定的不便和不確定性 [2]。相關資料顯示[3]， 對315例Hp患者分別采用使用率最高的4種方法進行了檢測分析， 總結出以下規(guī)律， 即分離培養(yǎng)>14CO2呼氣試驗>病理切片>快速脲酶試驗， 下面就對于不同檢測方法的比較優(yōu)勢進行闡述。

1 直接檢測法

直接檢測法即一種能分離培養(yǎng)具有活性Hp， 也可以借助現代醫(yī)療設備檢測到具有Hp死細菌的檢測手段。

1. 1 分離培養(yǎng)方法 它是指從胃黏膜中取得活檢標本， 通過分離培養(yǎng)而產生活性細菌， 然后通過其他方法或手段進行界定， 這是目前最為直接和有效地證明感染性病癥的途徑。在臨床檢測中的準確率極高。Hp不僅需氧量很低， 并且這類細菌對營養(yǎng)供給的需求比較大， 所以在采集過活體標本后， 若在室外存放超過一定時間會造成活體標本失效的后果， 從而最終影響到檢測的準確率[3， 4]。作者通過小型有機玻璃罐[每次能安置十余只選擇性培養(yǎng)基：Hp選取性血平板（HpSBP）]和一個鋼瓶的混合氣體[氧氣（O2）5%、二氧化碳（CO2）10%、氮氣（N2）85%]代替進口的三氣培養(yǎng)箱。通過較為普遍的細菌培養(yǎng)室采用一般設備， 不足2000元的花費就可以進行Hp分離培養(yǎng)， 病情最終檢測結果不受影響。

1. 2 病理切片染色檢查 其被認為是較分離培養(yǎng)更為簡便的檢測方式， 僅需用胃黏膜活體標本經過石蠟包埋切片后固定在玻片上經任何一種病理切片染色法染色， 即可在高倍鏡下觀察。但是切片觀察一般采用高倍顯微鏡， 只有在存在大量Hp菌群的情況下才可以通過高倍顯微鏡觀察到。如果Hp細菌的存量較少， 則非常不容易通過高倍顯微鏡被肉眼發(fā)現， 可以說可能性幾乎為零。通過比較分離培養(yǎng)和病理切片檢測結果看來， 在同樣檢測為陽性的98例患者中， 用分離培養(yǎng)方法衡量生理切片檢測結果， 假陽性為8.1%， 假陰性為5.8%， 說明病理切片這一檢測方法較之分離培養(yǎng)的精確程度存在一定的差異性[2]。

2 間接檢測法

間接檢測法即通過檢測Hp的代謝物以及抗體和抗原等。通過具有具體特征的因素間接證明Hp是否存在。鑒于這種檢測方式的特殊性， 其影響的條件和因素較為復雜[5]。本文只對另外2種檢測方法進行了相關論證， 采用這2種檢測方法進行論證的原因是Hp可產生脲酶， 脲酶可使尿素分解成二氧化碳和氨。

2. 1 14CO2呼氣試驗 Hp產生的脲酶能對尿素進行分解， 所以可以采用閃爍掃描儀測定患者服用14C標記尿素后呼出的14CO2來間接判斷是否有Hp感染存在[6， 7]。這種方法的優(yōu)點是較為便捷， 能夠快速檢測出胃部感染情況， 彌補因發(fā)病部位不同造成檢測結果不一致的缺陷。可是14C作為一種放射性物質， 進入人體后會對人體造成一定的損傷。與進行X光照射一個道理， 對于孕婦及年齡較小的患者具體使用的局限性， 并且就是正常人也要嚴格限制使用的次數， 以免造成傷害。14C進行檢測的成本比較高， 因為人體胃部存在大量菌種， 會對14C檢測的準確性造成一定影響。如果Hp達不到一定量則會產生檢測結果為陰性的誤診。

2. 2 快速脲酶試驗 通過Hp脲酶降解尿素成氨與CO2， 前者可使試劑周圍介質pH值升高， 進而使指示劑顯色。因為這一檢測方法所采用的試劑價格較低且結果直觀， 故臨床上采用較多。但是因為采用的活體檢測標本可能來自不同的部位， 從而對檢測結果造成一定的影響。另外， 不同的廠家生產的試劑在標準、質量以及劑量等多方面都不一樣， 容易造成檢測結果的不準確性， 從而造成誤差， 影響病情的確診。實驗結果顯示[3]， 在315例患者中快速脲酶實驗與培養(yǎng)法的總符合率只能達到78.8%， 其中陽性與陰性不符合率分別為12.0%和9.2%。

綜合考量脲酶試驗的制劑、技術原因及不同人胃腸道中菌群的不同狀況， 出現假陽性的情況仍然存在， 出現假陰性值得進行分析。作者采用分純的Hp， 經HpSBP增殖后取無菌生理鹽水清洗， 以MacFarland 比濁法將菌液稀釋至109/ml 濃度， 再將這一濃度菌液以無菌生理鹽水， 嚴格按照無菌稀釋法逐管10倍稀釋至第10管。然后再倒過來（從第10管開始）分別取10 μl同時作分離培養(yǎng)和快速脲酶試驗。結果發(fā)現造成兩者陽性結果的濃度差別達100～1000倍以上。

3 胃腔雜菌對各診斷方法結果的影響

胃部在無異常的情況下能夠產生大量的胃酸抑制有害菌的繁殖， 如果胃部出現病變， 胃液分泌減少， 加上腸胃蠕動過緩， 造成胃中失誤滯留， 則可能會滋生大量有害菌群；一旦感染Hp， Hp就會在胃部的菌群中處于優(yōu)勢地位， 應該考慮到如果胃部有炎癥或其他病癥影響胃部的正常功能， 其他菌群的繁殖也會隨之加快， 因為飲食帶來的細菌從口腔進入胃部可能性也非常之大。

3. 1 胃腔中能檢出的微生物與常見產脲酶雜菌的種類具體見表1。

3. 2 胃腔中雜菌對分離培養(yǎng)結果的影響 Hp一般存在在胃黏膜表面或者胃粘液層下面或中間， 它能分解脲產生氨， 中和本身周圍的胃酸， 以保護自身在胃黏膜上皮細胞表面長期寄生。飲食帶來的細菌首當其沖進入胃部。相當一部分的菌群會被胃酸的強腐蝕性給殺滅， 但也不是完全殺死， 剩下的一小部分菌群對胃酸有一定的抵抗性， 它們能與胃內容物一起滯留在胃黏膜的表皮。分離培養(yǎng)Hp時采用HpSBP， 相當部分的菌群不具備在這一培養(yǎng)基上繁殖的條件， 所以較為輕松的就可以檢測到Hp。

3. 3 胃腔中其他產脲酶細菌對14CO2呼氣試驗與快速脲酶試驗結果的影響 胃腔中產脲酶的細菌種類如表1所示， 其中G-球菌、G+球菌、G-桿菌、G+桿菌等常見細菌在胃腔中都有可能檢出。作者選擇200例患者胃黏膜進行活體檢測， Hp之外的菌群檢出率為61%， 其中G-球菌占63%， G+球菌占15%， G-桿菌占18%， 真菌占4%， 其中脲酶陽性的雜菌占23%。更需要指出的是Hp陽性病例中其他菌群檢出率為79%， 有力證明因為Hp的存在產脲酶使胃黏膜局部產堿， 為細菌的繁殖提供了基礎。產脲酶的雜菌的存在肯定會影響快速脲酶試驗與14CO2呼氣試驗結果的可靠性。

4 藥物對檢出率的影響

近年來， 廣譜抗生素類藥物以及胃酸中和藥物的推廣， 在具體的病癥中Hp的實際檢出率有所減少。有研究者[6]通過150例服用廣譜抗生素類藥物以及胃酸中和藥物患者開展Hp檢測， 得出的結論是沒有服用廣譜抗生素類藥物以及胃酸中和藥物的患者Hp檢出率相對較高， 可達59.3%， 服用藥物的患者的檢出率<29%， 說明服用藥物對最終的檢出率產生了一定的影響。

綜上所述， Hp的分離培養(yǎng)與其他幾種方法相比較， 至少有如下幾種好處：有力提升Hp感染的檢測結果；有力提高患者治療質量；最大程度抑制細菌的耐藥性。

參考文獻

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[收稿日期：2017-03-29]