農(nóng)藥多殘留測(cè)定中易出現(xiàn)的問(wèn)題及其對(duì)策

摘 要：作者通過(guò)多年的試驗(yàn)積累總結(jié)，闡述農(nóng)藥多殘留檢測(cè)中容易出現(xiàn)的問(wèn)題及典型事例，通過(guò)對(duì)樣品前處理方法的改變，以及基質(zhì)質(zhì)控標(biāo)樣的配制和加強(qiáng)儀器的維護(hù)使其達(dá)到最佳檢測(cè)狀態(tài)，并針對(duì)不同參數(shù)歸類(lèi)采取不同方法的檢測(cè)，消除了干擾因素，保證了檢測(cè)農(nóng)藥的種類(lèi)和含量的準(zhǔn)確性，為政府決策提供了可靠的依據(jù)。

關(guān)鍵詞：農(nóng)藥；多殘留；干擾；污染

中圖分類(lèi)號(hào)：S-3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20170631020

江蘇省鹽城市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心每年要完成省市例行抽檢、監(jiān)督抽檢、農(nóng)業(yè)部無(wú)公害農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)地?fù)Q證抽檢等樣品3000多個(gè)，檢測(cè)參數(shù)項(xiàng)次每年累計(jì)達(dá)12萬(wàn)項(xiàng)次，尤其在農(nóng)藥多殘留檢測(cè)中常出現(xiàn)以下問(wèn)題：定性問(wèn)題，要檢測(cè)樣品中含有哪些種類(lèi)農(nóng)藥，這就需要定性，定性出現(xiàn)問(wèn)題就會(huì)誤判，例如假陽(yáng)性、假陰性；定量問(wèn)題，要檢測(cè)樣品中所含物質(zhì)的多少，檢測(cè)不準(zhǔn)確判定就會(huì)不準(zhǔn)確，定量主要是回收率偏高或偏低的問(wèn)題，以及靈敏度的問(wèn)題包括檢測(cè)限和定量限的應(yīng)用等。

農(nóng)藥殘留檢測(cè)需要解決的問(wèn)題就是定性和定量，以及檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確判定。

1 農(nóng)藥多殘留定性中易出現(xiàn)的問(wèn)題及措施

要檢測(cè)樣品中含哪些種類(lèi)農(nóng)藥，這就需要定性，定性中出現(xiàn)問(wèn)題就會(huì)產(chǎn)生誤判，定性容易出現(xiàn)的問(wèn)題就是假陽(yáng)性和假陰性。

1.1 假陽(yáng)性

1.1.1 基質(zhì)干擾

主要是采用氣相色譜、液相色譜檢測(cè)時(shí)影響較大，部分樣品在GC/MS檢測(cè)時(shí)也會(huì)干擾。

1.1.1.1 蔥、蒜、韭菜類(lèi)樣品

蔥、蒜、韭菜類(lèi)樣品含蒜氨酸物質(zhì)（烷基硫代半胱氨酸及亞砜類(lèi)化合物）及其活性酶（蒜氨酸酶）。在完整的細(xì)胞內(nèi)酶和底物是分開(kāi)存在的，在細(xì)胞受損后，酶會(huì)作用于底物，產(chǎn)生丙酮酸、氨及磺酸酯類(lèi)在內(nèi)的含硫化合物，這些物質(zhì)與有機(jī)磷和有機(jī)氯農(nóng)藥的性質(zhì)十分相似，傳統(tǒng)凈化方法不能除去，用GC檢測(cè)時(shí)會(huì)干擾測(cè)定結(jié)果。

消除干擾的方法：采用微波爐加熱消除干擾。稱(chēng)取未破碎樣品（蔥、韭菜切成段）25g，置微波爐中加熱25～30s，然后按NY/T 761方法處理。

1.1.1.2 十字花科蔬菜（甘藍(lán)、大白菜等）

含有硫氰酸酯和異硫氰酸酯類(lèi)化合物，GC檢測(cè)時(shí)會(huì)造成干擾。

三唑酮、甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧樂(lè)果等用GC-MS/MS，LC-MS/MS檢測(cè)避免干擾。

1.1.1.3 其他類(lèi)產(chǎn)品（香菜、茶葉、香菇、香料等）

含有小分子風(fēng)味物質(zhì)造成干擾，采用GC-MS/MS，LC-MS/MS檢測(cè)避免干擾。

1.1.2 污染

1.1.2.1 前處理過(guò)程操作不當(dāng)

在前處理過(guò)程中使用的器皿洗刷不干凈造成交叉污染，解決辦法：按規(guī)定操作規(guī)程前處理。

1.1.2.2 進(jìn)樣過(guò)程中污染

進(jìn)樣針污染，柱頭和進(jìn)樣墊污染、洗針溶劑污染；前一針樣品待測(cè)組分含量高，洗針不充分；兩針進(jìn)樣時(shí)間短、前針的殘留物對(duì)下一針造成污染。

解決辦法：通過(guò)勤換進(jìn)樣墊、襯管、清洗溶劑以及用試劑空白避免污染造成假陽(yáng)性。

1.1.3 其他問(wèn)題

二硫代氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥。測(cè)CS2、蔥蒜類(lèi)、十字花科等含硫化物蔬菜易造成干擾，用GC-MS/MS，LC-MS/MS檢測(cè)。

有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)有機(jī)氯、菊酯類(lèi)農(nóng)藥干擾，有機(jī)磷農(nóng)藥中含S，在ECD檢測(cè)器上會(huì)產(chǎn)生信號(hào)，用GC-MS/MS，LC-MS/MS檢測(cè)。

敵敵畏與敵百蟲(chóng)。敵百蟲(chóng)高溫易分解成敵敵畏，檢測(cè)敵百蟲(chóng)時(shí)GC檢測(cè)溫度不宜過(guò)高，或用LC-MS/MS檢測(cè)。

1.2 假陰性

1.2.1 提取過(guò)程不當(dāng)

提取方法不合適：土壤樣品。

酸堿度問(wèn)題，部分農(nóng)藥在堿性條件下溶解度發(fā)生變化，需要加緩沖溶液保持弱酸性或中性。

1.2.2 凈化過(guò)程

淋洗溶劑不合適

離子交換柱凈化時(shí)，pH值控制不好，調(diào)節(jié)適宜的pH。

1.2.3 濃縮過(guò)程

氮吹、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)時(shí)過(guò)干，解決辦法在氮吹、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)時(shí)至近干就停止氮吹或蒸發(fā)。

1.2.4 進(jìn)樣過(guò)程

高溫分解：辛硫磷、敵百蟲(chóng)，解決辦法用LC或LC-MS/MS檢測(cè)。

1.2.5 基質(zhì)干擾

百菌清：甘藍(lán)，白菜等十字花科蔬菜，采用質(zhì)控空白樣品校正。

2 定量過(guò)程中出現(xiàn)的問(wèn)題及解決措施

2.1 影響回收率的因素

2.1.1 基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)效應(yīng)指樣品中除目標(biāo)分析物以外的其他成份對(duì)目標(biāo)化合物定量結(jié)果的影響，根據(jù)基質(zhì)對(duì)檢測(cè)信號(hào)影響值的不同，基質(zhì)效應(yīng)可分為增強(qiáng)效應(yīng)和減弱效應(yīng)。

液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用所產(chǎn)生的基質(zhì)效應(yīng)一般認(rèn)為基質(zhì)成份與待測(cè)物從色譜柱上一起被洗脫出來(lái)，經(jīng)離子源氣化，進(jìn)入質(zhì)譜，在液滴氣化發(fā)生庫(kù)倫爆炸變成小液滴直至產(chǎn)生氣體離子的過(guò)程中，這些內(nèi)源性基質(zhì)成份由于極性較大，會(huì)同待測(cè)物離子競(jìng)爭(zhēng)液滴表面，從而導(dǎo)致待測(cè)物離子化率降低或增強(qiáng)，引起響應(yīng)值的降低或增強(qiáng)，產(chǎn)生基質(zhì)抑制或基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。

基質(zhì)效應(yīng)問(wèn)題在GC-MS/MS最為突出，LC-MS/MS、

GC-MS次之，GC、LC較弱。

基質(zhì)效應(yīng)主要表現(xiàn)為增強(qiáng)效應(yīng)，強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)有的能達(dá)到300%～500%，弱基質(zhì)效應(yīng)較少，樣品不同基質(zhì)效應(yīng)不同，樣品的種類(lèi)、品種不同基質(zhì)效應(yīng)也有差別。

為了提高定量的準(zhǔn)確性，需要采用基質(zhì)匹配標(biāo)樣來(lái)做定量標(biāo)樣。但由于基質(zhì)種類(lèi)繁多，配制基質(zhì)標(biāo)樣的處理過(guò)程復(fù)雜，且基質(zhì)標(biāo)樣中因基質(zhì)的存在使得標(biāo)樣有效貯存時(shí)間變短，為殘留分析造成很大影響。

在日常檢測(cè)中，為避免基質(zhì)效應(yīng)工作量繁重，可以采用以下方法減少工作量：

對(duì)樣品進(jìn)行分類(lèi)，按照產(chǎn)品種類(lèi)不同，根據(jù)基質(zhì)效應(yīng)的大小分為幾組配制標(biāo)樣，減少工作量。

多步凈化措施：對(duì)提取物進(jìn)行逐步凈化可以有效地凈化樣品，去除雜質(zhì)的干擾。

添加內(nèi)標(biāo)：在檢測(cè)樣品中添加目標(biāo)組分進(jìn)行參照檢測(cè)。

分析保護(hù)劑的應(yīng)用：在GC、GC-MS分析中，用山梨醇和乙氧基苯二醇做保護(hù)劑可減少基質(zhì)效應(yīng)，大大降低工作量。

如果檢測(cè)組分結(jié)果在MRL值1/3～3倍之間，需用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液重新進(jìn)行定量。

2.1.2 可能引起回收率偏離的其他因素

樣品提取不充分：主要存在于糧油、土壤樣品、動(dòng)物組織樣品中及水中極性較大的農(nóng)藥。解決辦法：充分提取或改變提取方式。

凈化過(guò)程損失：主要在于凈化時(shí)選擇的溶劑不適合，極性過(guò)大或過(guò)小。解決辦法：選擇適合的溶劑或更換凈化方法。

濃縮過(guò)程中損失：氮吹法和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)過(guò)度均可以引起農(nóng)藥損失。解決辦法：加入高沸點(diǎn)溶劑，濃縮至近干。

試劑不純：不純的試劑可能存在氧化劑或還原劑，對(duì)部分農(nóng)藥會(huì)有分解作用。措施：使用純度高的試劑或重蒸試劑。

農(nóng)藥本身不穩(wěn)定：如辛硫磷、敵百蟲(chóng)、阿維菌素等。措施：前處理迅速、避光。

GC，GC/MS進(jìn)樣過(guò)程損失：主要是在進(jìn)樣口吸附或分解，如甲胺磷、氧化樂(lè)果，若進(jìn)樣口處臟，易被吸附。解決辦法：更換進(jìn)樣口處隔墊、襯管、玻璃棉、硅烷化處理使其惰性化，清洗分流平板。

ECD污染：ECD易被污染，常見(jiàn)的污染包括氧污染和其它電負(fù)性雜質(zhì)的污染。電負(fù)性雜質(zhì)來(lái)自于色譜柱、樣品或流失的固定相。

預(yù)防措施：采用高純氮；檢測(cè)器溫度高于柱溫；樣品在進(jìn)樣前一定要凈化；溶劑不進(jìn)負(fù)電性強(qiáng)的溶劑；如丙酮、乙醇、乙醚、二氧甲烷等，采用高溫色譜專(zhuān)用硅膠墊；基質(zhì)效應(yīng)，未用基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液或基質(zhì)選擇與樣品不一樣，氧樂(lè)果，用GC-MS，LC-MS/MS檢測(cè)；定容不準(zhǔn)確，溶液揮發(fā)；標(biāo)準(zhǔn)品配制不準(zhǔn)確或者分解，高濃度儲(chǔ)備液有效期1a，低濃度儲(chǔ)備液有效期1個(gè)月，標(biāo)準(zhǔn)工作溶液現(xiàn)配現(xiàn)用。具體農(nóng)藥品種不同也有所不同。

回收率判定方法可靠性具有一定局限性。

樣品中某些干擾因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果具有恒定偏差。

樣品和加標(biāo)操作相同，損失和污染對(duì)二者也相同，使誤差抵消而難以發(fā)現(xiàn)問(wèn)題。

待測(cè)物的價(jià)態(tài)和形態(tài)，加標(biāo)量多少，本底濃度均影響結(jié)果。

對(duì)于一些內(nèi)吸性農(nóng)藥，加標(biāo)后在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)，回收率結(jié)果不能反映實(shí)際方法情況。

解決辦法：可以用不同的儀器進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)，確定結(jié)果。

2.2 靈敏度的影響

檢出限：方法能夠檢出的樣品中最低農(nóng)藥殘留量。理論上一般以3倍信噪比為最小峰面積，所對(duì)應(yīng)的濃度含量計(jì)算。

定量限：實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中，應(yīng)該以能實(shí)際檢出的最低農(nóng)藥含量來(lái)確定，可以通過(guò)添加回收率的方法能夠檢出的濃度，大約為信噪比的10倍。

靈敏度越高，儀器和方法的檢出限越低，所以在檢測(cè)時(shí)充分做好儀器的維護(hù)工作，保證儀器檢測(cè)在最佳狀態(tài)中進(jìn)行，保證儀器的檢出限和定量限符合檢測(cè)方法的要求。

一般最低檢出濃度需要滿足0.01mg/kg，同時(shí)還要滿足相應(yīng)的MRL值，低于0.001mg/kg意義不大。在試驗(yàn)過(guò)程中要充分考慮方法和儀器的檢出限和定量限。

3 結(jié)果計(jì)算

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線法

標(biāo)準(zhǔn)方法中多采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法，由于在實(shí)際檢測(cè)中，標(biāo)準(zhǔn)曲線法需用基質(zhì)配制大量標(biāo)準(zhǔn)溶液，工作量大且濃度較低時(shí)誤差較大。

3.2 單點(diǎn)校正法

可選擇與待測(cè)組分濃度含量相近（誤差小于10%）的標(biāo)準(zhǔn)溶液?jiǎn)吸c(diǎn)校正來(lái)計(jì)算結(jié)果準(zhǔn)確率高。

作者簡(jiǎn)介：丁立彤（1965-），女，推廣研究員，江蘇阜寧人，現(xiàn)任鹽城市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心副主任，從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試及其檢測(cè)方法的研究。