超高效液相色譜法測(cè)定煙草西柏三烯二醇

付秋娟，杜詠梅，劉新民，張懷寶，王愛(ài)華，劉翠翠，牛煥杰，馮 迪

（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所，青島 266101）

超高效液相色譜法測(cè)定煙草西柏三烯二醇

付秋娟，杜詠梅*，劉新民，張懷寶，王愛(ài)華，劉翠翠，牛煥杰，馮 迪

（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所，青島 266101）

建立了超高效液相色譜-紫外檢測(cè)（UPLC-UV）外標(biāo)法定量測(cè)定煙草α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇的方法。煙草樣品以乙酸乙酯為萃取劑，液料比為50：1，在超聲頻率45 kHz，提取溫度為25～30 ℃，提取時(shí)間10 min條件下進(jìn)行目標(biāo)化合物提取，提取液經(jīng)氮?dú)獯蹈?，用流?dòng)相溶解，以ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）為分離色譜柱，以70%乙腈為流動(dòng)相，流速為0.3 mL/min，柱溫為35 ℃，在波長(zhǎng)為200 nm條件下進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇線性范圍分別為12.14～194.2、6.229～99.67 μg/mL，儀器檢出限分別為0.1166、0.1495 μg/mL，方法定量限分別為33.8、49.8 μg/g，在3個(gè)加標(biāo)濃度下，平均回收率分別在96.7%～98.8%、96.2%～98.4 %，方法重現(xiàn)性相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.46%、3.11%。本方法與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)相比，對(duì)煙草西柏三烯二醇的測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著差異。該方法操作簡(jiǎn)單、溶劑用量少，檢測(cè)周期短，精密度和準(zhǔn)確度均較高，適用于煙草α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇批量檢測(cè)。

超高效液相色譜；煙草；α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇

西柏三烯二醇屬西柏烷型二萜化合物，西柏烷型二萜最早于1951年發(fā)現(xiàn)至松屬植物和煙草，隨后從海洋生物中發(fā)現(xiàn)了大量該類化合物，目前分離得到的該類化合物均具有較好的細(xì)胞毒和抗腫瘤活性[1-3]。煙草西柏三烯二醇是煙草腺毛分泌物的主要化學(xué)成分，占其腺毛分泌物的60%以上[4-6]，該化合物不僅是卷煙香氣成分的重要前體物質(zhì)，還具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、抑制前列腺素合成、抑制尼古丁感受以及神經(jīng)保護(hù)劑等多種生物活性[4-10]。在煙草生產(chǎn)過(guò)程中，生態(tài)條件和栽培、調(diào)制措施對(duì)西柏三烯二醇含量的影響，以及煙草西柏三烯二醇遺傳基礎(chǔ)、生物調(diào)控技術(shù)，一直是煙草科研工作者關(guān)注的熱點(diǎn)[4,10-12]。

煙草西柏三烯二醇有兩個(gè)異構(gòu)體，分別為α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇[4-9]。煙草α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇檢測(cè)一般采用GC-MS法[5,10,13]，GC-MS法也是目前煙草西柏三烯二醇檢測(cè)的行業(yè)推薦標(biāo)準(zhǔn)方法[13]，該方法需經(jīng)過(guò)復(fù)雜的衍生化反應(yīng)，衍生化試劑成本較高，且容易造成色譜柱污染。劉清梁[14]研究了以20R人參皂苷Rh2為內(nèi)標(biāo)，應(yīng)用高效液相色譜-紫外法半定量煙草α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇的方法，但該方法并未對(duì)樣品前處理方法（提取溶劑、料液比、提取時(shí)間、提取溫度）進(jìn)行系統(tǒng)考察。何峰[15]優(yōu)化了液相色譜法測(cè)定α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇的條件，但樣品前處理較為繁瑣，需經(jīng)過(guò)復(fù)雜的浸提、液液分配、柱層析等程序。本研究為克服氣質(zhì)聯(lián)用法檢測(cè)煙草西柏三烯二醇過(guò)程中衍生化反應(yīng)存在的弊端，研究建立超高效液相色譜分離并檢測(cè)α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇的儀器條件及樣品前處理?xiàng)l件，為煙草西柏三烯二醇的高效檢測(cè)提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1材料、儀器和試劑

煙草材料：煙花、鮮煙葉樣品冷凍干燥，烤后煙葉50 ℃烘干，干燥后的樣品粉碎，過(guò)60目篩，4 ℃冷藏，備用。

儀器：超高效液相色譜儀，配置紫外可見(jiàn)檢測(cè)器（H-Class，Waters公司）；WD-12水浴氮吹儀（杭州奧盛）；KQ-500DA型數(shù)控超聲波清洗器（昆山舒美）；TDZ 5-WS臺(tái)式低速離心機(jī)（湖南湘儀）。

試劑：α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇（本實(shí)驗(yàn)室從煙花中分離獲得，根據(jù)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)推薦方法（GC-FID）測(cè)定其純度為95%）。甲醇、乙腈（色譜純，MERCK公司），甲醇、乙醇、乙腈、正己烷、乙酸乙酯、二氯甲烷、石油醚（分析純，國(guó)藥），水為超純水。

1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別準(zhǔn)確稱取α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇0.1245 g、0.06229 g，用無(wú)水乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中并定容，配制成α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。分別精確吸取以上標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液0.5、1、2、4、6、7、8 mL放入50 mL容量瓶中，用70%的乙腈定容，獲得α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，4 ℃下冷藏待用。

1.3色譜條件

色譜柱：BEH C18 (2.1mm×50 mm，1.7 μm) ；流動(dòng)相：70%的乙腈，等度洗脫；流速：0.3 mL/min；柱溫：35 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：200 nm。

1.4樣品制備

稱取一定質(zhì)量（0.025、0.05、0.1、0.15、0.2、0.3、0.4 g，精確至0.001 g）的煙草粉末樣品，放入20 mL帶有聚四氟乙烯密封蓋的離心玻璃管中，準(zhǔn)確加入5 mL提取溶劑（甲醇、乙醇、乙腈及其水溶液，乙酸乙酯、二氯甲烷、石油醚、正己烷），旋緊密封蓋，放入恒溫超聲提取儀中，在超聲頻率為45 kHz，一定溫度（20、30、40、50 ℃）、時(shí)間（10、20、30、40 min）條件下進(jìn)行目標(biāo)化合物提取。提取完成后，待提取液冷卻至室溫，在3000 r/min條件下離心10 min。

對(duì)于以甲醇、乙醇、乙腈及其水溶液作為提取溶劑獲得的提取液，精確移取上清液用流動(dòng)相稀釋后，過(guò)0.22 μm濾膜，待測(cè)。

對(duì)于以乙酸乙酯、二氯甲烷、石油醚、正己烷作為提取劑獲得的提取液，精確移取上清液1 mL，在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下吹干，再用2 mL流動(dòng)相溶解后，過(guò)0.22 μm濾膜，待測(cè)。

2 結(jié) 果

2.1吸收波長(zhǎng)、色譜柱、流動(dòng)相、流速及柱溫條件

吸收波長(zhǎng)選擇：根據(jù)α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇標(biāo)準(zhǔn)溶液在190～300 nm波長(zhǎng)范圍的光譜掃描結(jié)果（圖1），在波長(zhǎng)200 nm處，西柏三烯二醇有最大吸收，因此，選擇200 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

色譜柱選擇：本研究參考前人的研究結(jié)果，選擇C18色譜柱分離目標(biāo)化合物，在超高效液相色譜柱BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）為分離柱條件下，目標(biāo)化合物獲得較好分離（圖2）。

流動(dòng)相選擇：考察了不同濃度甲醇、乙腈水溶液（60%、65%、70%、75%、80%）作流動(dòng)相對(duì)目標(biāo)化合物保留時(shí)間、分離效果的影響，發(fā)現(xiàn)以甲醇-水、乙腈-水作流動(dòng)相均能使α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇及其與雜質(zhì)峰獲得較好分離。綜合考慮流動(dòng)相的本底吸收以及對(duì)目標(biāo)化合物保留時(shí)間、色譜柱壓力的影響，選擇70%的乙腈作為流動(dòng)相，等度條件下即可使目標(biāo)化合物獲得較好分離。

流動(dòng)相流速選擇：考察了流動(dòng)相流速在0.3、0.4、0.5 mL/min條件下α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇保留時(shí)間以及與雜質(zhì)峰的分離情況，綜合考慮流動(dòng)相流速對(duì)目標(biāo)化合物保留時(shí)間、分離效果、色譜柱壓力及流動(dòng)相消耗量的影響，選擇流動(dòng)相的最佳流速為：0.3 mL/min。

柱溫選擇：考察了色譜柱溫度在30、35、40 ℃條件下，α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇保留時(shí)間及分離效果的差異，發(fā)現(xiàn)色譜柱溫度對(duì)目標(biāo)化合物保留時(shí)間及分離效果影響較小。選擇色譜柱溫條件為35 ℃。

基于以上色譜條件，α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液及煙草樣品色譜圖見(jiàn)圖2，由圖2可以看出，α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇出峰時(shí)間較短，且獲得較好分離。

2.2樣品前處理?xiàng)l件選擇

2.2.1 提取溶劑選擇 考察了極性溶劑（甲醇、乙醇、乙腈及其水溶液）、弱極性及非極性溶劑（乙酸乙酯、二氯甲烷、石油醚、正己烷）提取對(duì)目標(biāo)化合物測(cè)定的影響。研究發(fā)現(xiàn)，用65%～100 %范圍的乙醇、甲醇、乙腈溶液及弱極性溶劑均能將西柏三烯二醇提取出來(lái)，但是，用極性較大的溶劑提取后進(jìn)樣測(cè)定，獲得的液相色譜圖雜峰較多，且雜峰響應(yīng)遠(yuǎn)高于目標(biāo)化合物（圖3）用乙酸乙酯、石油醚、二氯甲烷、正己烷等弱極性溶劑作為提取溶劑，提取液在氮?dú)獗Ｗo(hù)下吹干，再用流動(dòng)相溶解后進(jìn)樣分析，獲得的液相色譜圖雜峰較少且雜峰響應(yīng)較低（圖2）。

圖1 α、β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇標(biāo)準(zhǔn)溶液在190～300 nm吸收光譜圖Fig. 1 The absorption spectrum of α and β-2,7,11-Cembratriene-4,6-diol standard solution in 190～300 nm

圖2 α、β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇標(biāo)準(zhǔn)溶液（a）和煙草樣品（b）色譜分離圖（峰1：α-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇，峰2：β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇）Fig. 2 Chromatograms of α and β-2,7,11-Cembratriene-4,6-diol of compounds standards（a）and tobacco sample（b）、（Peak 1：α-2,7,11-Cembratriene-4,6-diol, Peak 2：β-2,7,11-Cembratriene-4,6-diol）

圖3以甲醇為提取溶劑獲得的西柏三烯二醇色譜分離圖Fig. 3 Chromatograms of α and β-2,7,11-Cembratriene-4,6-diol obtained with methanol as the extraction solution

本研究進(jìn)一步對(duì)乙酸乙酯、石油醚、二氯甲烷、正己烷的提取效果進(jìn)行了比較研究（表1），由表1看出，乙酸乙酯對(duì)西柏三烯二醇的提取效果最好，其次是二氯甲烷，正己烷、石油醚對(duì)西柏三烯二醇的提取效果較差。這可能與煙草西柏三烯二醇的極性有關(guān)，西柏三烯二醇為弱極性化合物，在弱極性溶劑中溶解性更好。因此，本研究選擇乙酸乙酯作為煙草西柏三烯二醇的提取溶劑。

表1不同提取溶劑對(duì)西柏三烯二醇提取率的影響(n=3)Table 1 Effects of different extraction solvents on extraction efficiencies of α and β-2,7,11-Cembratriene-4,6-diol %

2.2.2 料液比選擇 以乙酸乙酯為提取溶劑，室溫（25 ℃）下提取20 min條件下，研究了料液比對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響（表2），由表2看出，料液比對(duì)西柏三烯二醇提取效率影響顯著，在料液比200～100∶2范圍內(nèi)，西柏三烯二醇測(cè)定結(jié)果顯著較高。綜合考慮稱樣誤差及溶劑用量，選擇稱樣0.1 g，加入5 mL提取溶劑，料液比為100∶2，作為提取條件。2.2.3 提取溫度選擇 以乙酸乙酯為提取溶劑，在提取時(shí)間20 min條件下，考察了提取溫度對(duì)西柏三烯二醇測(cè)定結(jié)果的影響（表3），由表3看出，在25～50 ℃范圍內(nèi)，提取溫度對(duì)西柏三烯二醇影響不大。這可能與西柏三烯二醇存在于煙草表面，較易萃取有關(guān)。本研究選擇25～30 ℃室溫條件作為目標(biāo)化合物提取的溫度條件。

2.2.4 提取時(shí)間選擇 以乙酸乙酯為提取溶劑，室溫條件（25 ℃）下，考察了提取時(shí)間對(duì)西柏三烯二醇測(cè)定結(jié)果的影響（表4），由表4看出，在10～30 min范圍內(nèi)，提取時(shí)間對(duì)西柏三烯二醇影響不大。這可能與西柏三烯二醇存在于煙草表面，且易提取有關(guān)。因此，選擇目標(biāo)化合物的提取時(shí)間為10 min。

表2不同料液比對(duì)西柏三烯二醇提取率的影響(n=3)Table 2 Effects of different ratio of material to solution on extraction efficiencies of α and β-2,7,11-Cembratriene-4,6-diol %

表3不同提取溫度對(duì)西柏三烯二醇測(cè)定結(jié)果的影響(n=3)Table 3 Effects of different extraction temperature on extraction efficiencies of α and β-2,7,11-Cembratriene-4,6-diol %

表4不同提取時(shí)間對(duì)西柏三烯二醇測(cè)定結(jié)果的影響(n=3)Table 4 Effects of different extraction time on extraction efficiencies of α and β-2,7,11-Cembratriene-4,6-diol %

2.3方法學(xué)考察

2.3.1 工作曲線、檢出限及方法定量下限 將西柏三烯二醇標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別進(jìn)樣3 μL，分別獲得α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇濃度（Y）與峰面積(X)的線性回歸方程：Y=13900X-96.2、Y=9940X+90.5，方程決定系數(shù)R2均為0.9999，在質(zhì)量濃度12.14～194.2、6.229～99.67 μg/mL范圍內(nèi)，α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇質(zhì)量濃度與峰面積線性關(guān)系良好（圖4、圖5）。

以信噪比(S/N)為3計(jì)算的α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇的儀器檢出限分別為0.12、0.15 μg/mL，以信噪比(S/N)為10計(jì)算的方法定量下限分別為33.8和49.8 μg/g。

圖4 α-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇含量標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig. 4 α-2,7,11-Cembratriene-4,6-diolstandard curve

圖5 β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇含量標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig. 5 β-2,7,11-Cembratriene-4,6-diolstandard curve

2.3.2 回收率及精密度試驗(yàn) 在本試驗(yàn)條件下，進(jìn)行了煙草樣品（α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇含量本底值分別為0.89、0.64 mg）加標(biāo)回收率試驗(yàn)（表5），在設(shè)定的3個(gè)加標(biāo)濃度下，每一加標(biāo)量進(jìn)行6次回收率重復(fù)試驗(yàn)，由表5看出，α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇加標(biāo)回收率分別在94.9%～101.3%、 94.4%～99.8 %范圍內(nèi)，平均值分別為96.7%～98.8%、96.2%～98.4%，RSD在1.82%～2.27%、1.88%～2.16%范圍內(nèi)。本方法回收率較高，且較穩(wěn)定，符合定量分析要求。

2.3.3 方法重現(xiàn)性 選擇同一份煙草樣品，運(yùn)用本方法連續(xù)6天測(cè)定的樣品中α-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇含量分別為0.676%、0.618%、0.655%、0.679%、0.667%、0.673%、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.46%，β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇含量分別為0.366%、0.341%、0.359%、0.374%、0.365%、0.366%、0.348%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.11%，方法的重現(xiàn)性較好，符合定量分析要求。

2.4本方法與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法比較

2.4.1 系統(tǒng)誤差比較 取9份不同煙草樣品（檢測(cè)樣品為隨機(jī)選取，煙花、青煙葉、烤后煙葉沒(méi)有對(duì)應(yīng)性，非同株煙葉或同一品種），分別用行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[13]和本方法檢測(cè)樣品中目標(biāo)化合物含量，并將兩種方法的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行t配對(duì)檢驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表6。由表6看出，本方法與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)目標(biāo)化合物的測(cè)定結(jié)果差異不顯著，兩種方法沒(méi)有系統(tǒng)誤差。

2.4.2 樣品前處理及分析時(shí)間比較 表7分別列出了本方法與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇前處理過(guò)程及分析時(shí)間差異。由表7看出，相對(duì)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法，本方法所用萃取劑的體積是行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法的1/10，并在樣品處理過(guò)程中節(jié)約了60 min的衍生化反應(yīng)時(shí)間，同時(shí)，還節(jié)約了衍生化反應(yīng)加熱過(guò)程所需的能源；超高效液相色譜分析一個(gè)樣品時(shí)間僅用8 min，是行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法分析時(shí)間的1/5。

表5 α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇回收率和精密度Table 5 Recoveries and RSDs of α and β-2,7,11-Cembratriene-4,6-diol(n=6)

表6本方法與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇結(jié)果差異(n=3)Table 6 Difference in measurement results of α and β-2,7,11-Cembratriene-4,6-diol between this method and the standard method %

表7本方法與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法樣品前處理及分析時(shí)間比較Table7 Comparison of sample treatment and analysis time on this method and the standard method

3 討 論

以甲醇、乙醇、乙腈及以上三種溶劑65%以上水溶液提取煙草樣品中的西柏三烯二醇，雖然能實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)化合物的高效提取，但根據(jù)相似相容原理，以上提取溶劑極性較大，獲得提取液中極性化合物雜質(zhì)較多，從而使獲得樣品色譜圖雜峰較多。煙草西柏三烯二醇為弱極性化合物，以弱極性的乙酸乙酯作為提取溶劑，不僅可以實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)化合物的高效提取，獲得的樣品提取液在氮?dú)獗Ｗo(hù)下吹干，再用流動(dòng)相溶解后進(jìn)樣分析，提取液中非極性化合物如茄尼醇等在70%的乙腈流動(dòng)相中的溶解度較低，從而使獲得的色譜分離圖雜峰較少，譜圖較為干凈。

煙草西柏三烯二醇為熱穩(wěn)定性相對(duì)較差的化合物[4,15]，本研究應(yīng)用液相色譜法測(cè)定煙草西柏三烯二醇，相對(duì)于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)采用的氣質(zhì)聯(lián)用方法，更適合于熱穩(wěn)定性較差的化學(xué)成分分析。

在煙葉烘烤過(guò)程中，西柏三烯二醇降解產(chǎn)生茄酮等致香成分[4,11]，因此，同一品種烤后煙葉西柏三烯二醇含量相對(duì)鮮煙葉較低。本研究所測(cè)烤后煙葉樣品含量高于鮮煙葉，主要是由于選擇樣品的品種差異造成的。

4 結(jié) 論

本研究建立了超高效液相色譜測(cè)定煙草α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇的樣品前處理方法及儀器條件。本方法克服了傳統(tǒng)氣質(zhì)聯(lián)用法樣品前處理過(guò)程中所需的衍生化反應(yīng)程序復(fù)雜、操作周期長(zhǎng)、檢測(cè)成本高且易造成色譜柱污染等弊端。在實(shí)際樣品測(cè)定中，本方法與目前行業(yè)推薦標(biāo)準(zhǔn)方法相比，測(cè)定結(jié)果不存在系統(tǒng)誤差。因此，該方法操作步驟簡(jiǎn)單、檢測(cè)周期短，精密度和準(zhǔn)確度均較高，適用于煙草α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇的方法批量檢測(cè)。

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Determination of Cembratriene-diol in Tobacco by Ultra Performance Liquid Chromatography

FU Qiujuan, DU Yongmei*, LIU Xinmin, ZHANG Huaibao, WANG Aihua, LIU Cuicui, NIU Huanjie, FENG Di
(Tobacco Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Qingdao 266101, China)

A quantitative method using ultra performance liquid chromatography (UPLC) with UV detector was developed for the determination of α and β-2,7,11-Cembratriene-4,6-diol of tobacco. Ethyl acetate was used as solvent for extraction with a liquid-material ratio of 50：1. The ultrasonic frequency used was 45 kHz andthe temperature of extraction was room temperature above 25 ℃.The time of extraction was 10 min. The extracts obtained with above experiment conditions were dried by nitrogen and dissolved with mobile phases and the target compounds were separated on an ACQUITY UPLC BEH C18 column using acetonitrile-water (70：30) as mobile phase by gradient elution. The flow rate was set at 0.3 mL/min, the column temperature was 35 ℃and quantitative wavelength of UV detector was set at 200 nm.The results indicated that the calibration curves of α and β-2,7,11-Cembratriene-4,6-dio were linear in the range of 12.14-194.2 μg/mLand 6.229-99.67 μg/mL respectively. The limits of detection (LOD,S/N=3) were 0.1166 and 0.1495 μg/mL respectively, and the limits of quantification (LOQ,S/N=10) were 33.8 μg/g and 49.8 μg/g respectively. The average recoveries of standard addition of samples were 96.7%-98.8% and 96.2%-98.4% respectively at three spiked concentration levels, and the relative standard deviations (RSDs) of reproducibility of the method were 3.46% and 3.11% respectively. There was no significant difference in the measurement results of tobacco samples between this method and the tobacco industry-standard method. The method was simple, sensitive and accurate, and was suitable for large scale determination of α and β-2,7,11-Cembratriene-4,6-dio in tobacco .

ultra-performance liquid chromatography; tobacco; α and β-2,7,11-Cembratriene- 4,6-diol

TS41+1

1007-5119（2017）03-0067-07 DOI：10.13496/j.issn.1007-5119.2017.03.012

中國(guó)煙草總公司項(xiàng)目“烤煙生產(chǎn)結(jié)構(gòu)優(yōu)化效應(yīng)及關(guān)鍵技術(shù)研究與應(yīng)用”（110201402007）；中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程（ASTIP-TRIC05）

付秋娟（1974-），女，高級(jí)農(nóng)藝師，主要從事煙草功能成分與綜合利用研究。E-mail：fuqiujuan@caas.cn。*通信作者，E-mail：duyongmei@caas.cn

2016-09-27

2017-05-22