不同含水量培養(yǎng)基對北蟲草生長的影響

婁彥峰(葫蘆島市林業(yè)局，遼寧 葫蘆島 125000)

不同含水量培養(yǎng)基對北蟲草生長的影響

婁彥峰
(葫蘆島市林業(yè)局，遼寧 葫蘆島 125000)

研究了不同含水量培養(yǎng)基配方對北蟲草生長的影響，結(jié)果表明：小麥與水的質(zhì)量比為1∶1.3(A2)時北蟲草菌絲和子實(shí)體的生長良好；小麥與水的比例為1∶1.1(A1)時北蟲草菌絲和子實(shí)體生長過慢，質(zhì)量也略差；小麥與水的比例為1∶1.5(A3)和1∶1.7(A4)時北蟲草菌絲和子實(shí)體因缺氧而生長不良；小麥與水的比例為1∶1.9(A5)時北蟲草菌絲生長嚴(yán)重滯后，甚至不出草。根據(jù)對北蟲草子實(shí)體鮮質(zhì)量的比較證明：A2是培養(yǎng)北蟲草的培養(yǎng)基的最佳料水比；A1含水量不足，與A2之間差異明顯；A3含水量過高，同樣與A2差異明顯；A4與A5之間沒有顯著差別，均為生長不良。

北蟲草；料水比；人工培養(yǎng) ；子實(shí)體；產(chǎn)量

北冬蟲夏草(Cordycepsmilitaris)又名蛹蟲草，蛹草，是有名的蟲寄生嗜低溫真菌，也是一種天然滋補(bǔ)品和名貴中藥材。過去以采挖野生蟲草入藥，但由于野生蟲草的產(chǎn)地具有特殊生態(tài)環(huán)境和昆蟲條件，極大限制了其生長區(qū)域和生產(chǎn)量[1]。目前人工栽培北蟲草多采用小麥作為培養(yǎng)基[2]。本文通過不同料水比的對比試驗(yàn)，篩選適合北蟲草生長的最佳培養(yǎng)基料水比配方，以期為生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)，使之獲得高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、高效的栽培效果。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)儀器有分析天平、電熱恒溫干燥箱、高壓滅菌鍋、溫度計(jì)、無菌工作臺。

供試菌種為沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)食用菌研究所提供的固體菌種。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 培養(yǎng)基配方 培養(yǎng)基配方見表1。

1.2.2 研究的技術(shù)路線 北蟲草人工栽培的研究路線如下：

培養(yǎng)料→裝瓶→聚丙烯封口→高壓滅菌→冷卻→接種(無菌條件下)→菌絲生長、轉(zhuǎn)色→原基形成→子實(shí)體生長→出草→采收→稱重→統(tǒng)計(jì)分析。

表1 不同含水量培養(yǎng)基試驗(yàn)

(1)裝瓶與滅菌。取洗凈的罐頭瓶25個，按照表1制作栽培瓶：每5瓶為一組，每瓶均裝入小麥30 g，再分別加入水33 mL、39 mL、45 mL、51 mL、57 mL。培養(yǎng)瓶裝好后用聚丙烯塑料封口，橡皮圈扎口，整理好后送入高壓滅菌鍋。高壓下保持溫度121 ℃ 1 h，溫度降下來后出鍋。

(2)接種。待培養(yǎng)瓶冷卻(溫度降至25 ℃以下)后，在無菌條件下進(jìn)行接種，接種前應(yīng)對接種室和工作臺進(jìn)行徹底消毒，以免產(chǎn)生雜菌。接種時，在無菌接種室，點(diǎn)燃酒精燈，將接種匙在酒精燈上炙烤一下，然后用接種匙在試管里挖出一塊帶有菌種的培養(yǎng)基，再迅速地放入栽培瓶內(nèi)，然后迅速將栽培瓶上的聚丙烯塑料封口封上，以防感染雜菌。

(3)菌絲培養(yǎng)期管理。保證培養(yǎng)室的環(huán)境良好是保證出草的前提，所以在接種完畢后，放在通風(fēng)散射光的環(huán)境下。由于北蟲草生長初期最容易被污染，所以通風(fēng)不要過大，控溫在16 ℃ 左右[3],光照為自然散射光為好，濕度以地面潮濕即可，培養(yǎng)20 d左右菌絲長滿瓶。菌絲長滿后，進(jìn)入轉(zhuǎn)色階段。此階段要注意溫度均衡，培養(yǎng)瓶不能移動。

當(dāng)培養(yǎng)5 d后，用肉眼可觀察到培養(yǎng)瓶內(nèi)料面上有白色菌絲出現(xiàn)，但覆蓋面積不大，小于20%，室溫在11～13 ℃。在培養(yǎng)至第9天時觀察，開始有培養(yǎng)瓶中蟲草菌絲長滿，直到培養(yǎng)至20 d時，部分培養(yǎng)瓶中菌絲覆蓋面積接近100%，室溫在11～18.5 ℃。

(4)子實(shí)體原基形成期管理。待菌絲長滿瓶后，菌絲呈白色，此時不要急于見光，繼續(xù)培養(yǎng)3 d后，做好如下工作:①每天光照12 h，散射光要充足，但不能有直射光.晚上用40 W燈泡兩盞補(bǔ)照。②注意通風(fēng)，但是風(fēng)不要太大。③白天保持室溫20～24 ℃，晚上室溫10～14 ℃并維持8～10 h，之后繼續(xù)升溫至20～24 ℃。④空氣濕度65%為好，只要地面常濕即可達(dá)到。每天按上法管理，12 d左右菌絲扭結(jié)。在培養(yǎng)基表面上長出一些小小的瘤狀隆起即為原基。此期間把受雜菌污染嚴(yán)重的培養(yǎng)瓶挑出，以免影響調(diào)查分析。

在培養(yǎng)至25～30 d時，可觀察到料面上長出一些小小的瘤狀隆起物，即為蟲草子實(shí)體原基開始分化。室溫在16～20 ℃。并且大部分開始進(jìn)入轉(zhuǎn)色階段。(該生長階段進(jìn)行了受雜菌污染培養(yǎng)瓶的挑出工作，結(jié)果表明部分A4和A5的培養(yǎng)基受雜菌污染較嚴(yán)重，挑出后仍保持試驗(yàn)數(shù)量指標(biāo))。

(5)子實(shí)體生長、出草管理。當(dāng)菌絲由白色逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)殚冱S色時，就由菌絲生長進(jìn)入了子實(shí)體生長階段。此期間，溫度保持20～24 ℃之間，每天光照時間不少于10 h，要有充分散射光。每天通風(fēng)兩次，瓶口因用橡皮圈扎口，能保證瓶內(nèi)外有微氧呼吸；濕度增加到80%～90%。通過對溫度、濕度、光照、通風(fēng)各外部條件的調(diào)節(jié)，加快北蟲草子實(shí)體的生長。從子實(shí)體原基形成到子實(shí)體形成需20～30 d。

(6)采收。 經(jīng)過60～67 d的培養(yǎng)， 待子實(shí)體長成上粗下細(xì)的棒狀，且表面出現(xiàn)橘紅色粒狀子囊殼，手觸不光滑，子實(shí)體長達(dá)5～8 cm時 ，表明子實(shí)體生長成熟，即可采收，采收時用帶彎頭的小鏟小心將子實(shí)體從基部鏟下，不要傷及子實(shí)體。將五組從不同培養(yǎng)基采收的北蟲草，分別對5個樣品進(jìn)行稱重(鮮質(zhì)量)以及試驗(yàn)分析。

1.3 觀察和測算方法

1.3.1 跟蹤觀察 從培養(yǎng)瓶上架后，每天仔細(xì)觀察、記錄北蟲草每個時期的形態(tài)變化和不同培養(yǎng)基配方蟲草的生長形態(tài)，以及溫度等培養(yǎng)條件的變化。

1.3.2 平均鮮質(zhì)量的計(jì)算 由于培養(yǎng)北蟲草時條件有限，空氣濕度有些不足，菌絲和子實(shí)體的生長效果不是太好，但是從實(shí)驗(yàn)過程中對子實(shí)體的感官觀察可以看出本次試驗(yàn)達(dá)到預(yù)期目標(biāo)。而因?yàn)樽訉?shí)體數(shù)量較少，因此子實(shí)體的產(chǎn)量用各組平均鮮質(zhì)量來比較。每組的平均鮮質(zhì)量的計(jì)算公式為：

每組平均鮮質(zhì)量=每組子實(shí)體鮮質(zhì)量(g)之和/瓶數(shù)

2 結(jié)果與分析

2.1 測定結(jié)果

2.1.1 不同培養(yǎng)基配方對北蟲草子實(shí)體生長速度的影響 不同培養(yǎng)基配方北蟲草子實(shí)體生長情況如表2。

表2 不同含水量培養(yǎng)基子實(shí)體生長速度的比較

由表2和圖1可以看出，A1(1∶1.1)和A2(1∶1.3)配方培養(yǎng)基子實(shí)體生長速度最快，但A2與A1之間的差距甚大；A3、A4和A5之間，A3生長較快，A4和A5最慢，但A3、A4和A5生長速度與A1和A2比較，仍顯著較慢。

圖1 不同含水量培養(yǎng)基菌絲體生長速度的比較柱狀圖

2.1.2 不同培養(yǎng)基配方對北蟲草子實(shí)體產(chǎn)量的影響 試驗(yàn)表明：不同含水量的培養(yǎng)基配方對北蟲草生長影響很大。

由表3和圖2可以看出配方A2生長最好，平均鮮質(zhì)量為2.10 g瓶-1；其次是配方A1生長較好，平均鮮質(zhì)量為2.1 g瓶-1；配方A3和A4和A5生長最差，平均鮮質(zhì)量為0.48 g瓶-1、0.48 g瓶-1和0.62 g瓶-1。由圖2可以明顯看出，最大值與最小值之間相差很大。

表3 不同配方北蟲草子實(shí)體鮮質(zhì)量的比較

圖2 不同配方北蟲草子實(shí)體鮮質(zhì)量的比較柱狀圖

2.1.3 不同含水量培養(yǎng)基對北蟲草產(chǎn)量的影響 由子實(shí)體的長勢可以看出：五種不同含水量培養(yǎng)基配方培養(yǎng)出的北蟲草子實(shí)體外觀也各有不同。A1配方培養(yǎng)出的蟲草子實(shí)體顏色較深，但是子實(shí)體較為纖細(xì)而且長度較短；A2配方培養(yǎng)出的蟲草子實(shí)體顏色中等，子實(shí)體較為粗壯，長度也最長，為4～9 cm； A3、A4和A5配方培養(yǎng)出的蟲草子實(shí)體極為稀少，即使有子實(shí)體，也形成苔狀。

不同培養(yǎng)基配方中以A2培養(yǎng)基最好。可以看出A2培養(yǎng)基培養(yǎng)的北蟲草子實(shí)體生長粗細(xì)均勻且較粗，子實(shí)體平均鮮質(zhì)量較大、出草產(chǎn)量最好；A1培養(yǎng)基培養(yǎng)的北蟲草子實(shí)體較為纖細(xì)而且較短，產(chǎn)量較低； A3、A4和A5培養(yǎng)基配方培養(yǎng)的北蟲草子實(shí)體最少，產(chǎn)量極低。

2.2 不同含水量培養(yǎng)基配方分析

本試驗(yàn)中采用了小麥作為培養(yǎng)基主要組成成分，以不同水的含量來進(jìn)行對比，并以此作為根據(jù)來檢驗(yàn)各種水含量的培養(yǎng)基對北蟲草菌絲生長及子實(shí)體產(chǎn)量的影響。試驗(yàn)中的觀察可得出以下結(jié)論：A1培養(yǎng)基含水量過低，導(dǎo)致北蟲草菌絲和子實(shí)體生長滯后；A3—A5培養(yǎng)基含水量過高，導(dǎo)致北蟲草菌絲生長中容易感染雜菌，并且影響子實(shí)體產(chǎn)量。

由此可以初步推斷：適合北蟲草菌絲和子實(shí)體生長的配方最佳料水比為1∶1.3。而A1培養(yǎng)基中子實(shí)體生長過慢的原因是含水量過低并且空氣濕度過低，菌絲生長受影響；A3—A5菌絲和子實(shí)體生長慢的原因是培養(yǎng)基含水量過高，導(dǎo)致菌絲呼吸作用受影響，而且導(dǎo)致雜菌易于產(chǎn)生。

所以，適合用于生產(chǎn)的培養(yǎng)集中的最佳料水比為1∶1.3。

3 結(jié)論與討論

3.1 結(jié)論

不同含水量培養(yǎng)基配方中以料水比為1∶1.3的培養(yǎng)基最好。A2培養(yǎng)基培養(yǎng)的北蟲草子實(shí)體生長粗細(xì)均勻且較粗，子實(shí)體平均鮮質(zhì)量較大、出草質(zhì)量最好；A1培養(yǎng)基培養(yǎng)的北蟲草子實(shí)體纖細(xì)且產(chǎn)量不如A2；A3—A5培養(yǎng)基培養(yǎng)出的北蟲草因含水量過高質(zhì)量差，出草量低。 因此，建議采用料水比為1∶1.3的培養(yǎng)基大規(guī)模人工培養(yǎng)北蟲草。

[1] 葛蓓蕾，江曉璐.北蟲草的研究現(xiàn)狀[J].中國食用菌，1999，18(1)：26-27

[2] 張會敏,宋健.不同培養(yǎng)基對北蟲草氨基酸含量影響分析[J].齊魯藥事,2007，26(12)：725-726

[3] 侯瑋，吳亞江.北蟲草栽培技術(shù)要點(diǎn)[J].中國食用菌，1995(3)：27

Effects of Different Culture Media of Moisture Content on Growth ofCordycepsmilitaris

Lou Yanfeng
(Bureau of Forestry in Huludao City,Huludao 125000,China)

The effects of different culture media of moisture content on growth ofCordycepsmilitariswere studied. Results showed that the growth ofCordycepsmilitarisand the fruiting body are optimal when the mass ratio of wheat to water is 1∶1.3 (A2);the growth of hyphae & fruit body forCordycepsmilitarisis very slow and the quality is much poor while the ratio of wheat to water is 1∶1.1 (A1);the growth of hyphae & fruit body forCordycepsmilitarisis poor due to hypoxia while the ratio of wheat to water are 1∶1.5 (A3) & 1∶1.7 (A4);when the ratio of wheat to water is 1∶1.9 (A5),the growth ofCordycepsmilitarisis seriously lag, even without grass.According to comparison of fresh quality ofCordycepssinensis, the ratio of wheat to water (A2) is the optimal ratio to cultureCordycepsmilitaris; the moisture content is insufficient ;the difference between A1 &A2 are significant; the moisture content of A3 is very high,the difference between A3 &A2 are significant too; the difference between A4 and A5 is not significant,their growth are all poor.

Cordycepsmilitaris; ratio of material to water ; artificial culture; fruiting body;yield

1005-5215(2017)06-0052-03

2017-03-28

婁彥峰(1988-)，男，遼寧葫蘆島人，大學(xué)，助理工程師，現(xiàn)從事林業(yè)經(jīng)濟(jì)管理工作.

Q939.5;R282

A

10.13601/j.issn.1005-5215.2017.06.020