阿德福韋酯納米脂質(zhì)載體的制備及處方優(yōu)化Δ

孫珊珊，王慧云，王飛飛，丁 林（濟寧醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東日照 276826）

阿德福韋酯納米脂質(zhì)載體的制備及處方優(yōu)化Δ

孫珊珊＊，王慧云#，王飛飛，丁 林（濟寧醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東日照 276826）

目的：制備阿德福韋酯納米脂質(zhì)載體（ADV-NLC），并優(yōu)化其處方。方法：以硬脂酸和單硬脂酸甘油酯為固體脂質(zhì)，油酸為液體脂質(zhì)，雙子（Gem ini）表面活性劑、聚山梨酯80為乳化劑，十二烷基硫酸鈉（SDS）為穩(wěn)定劑，采用溶劑分散-超聲法制備ADVNLC。以粒徑、多分散指數(shù)、Zeta電位和包封率為指標，單因素試驗篩選Gem ini表面活性劑-聚山梨酯80比例、乳化劑用量（乳化劑與水相之比）、藥脂比、固-液脂質(zhì)比。結(jié)果：處方為乳化劑（雙子表面活性劑-聚山梨酯80比例1∶2）用量3%、藥脂比4.5%，固-液脂質(zhì)比6∶5。所制ADV-NLC的平均粒徑為（48.83±2.65）nm，多分散指數(shù)＜0.3，Zeta電位為（－28.7±1.8）mV，包封率為（77.65±0.03）%（n＝3）。結(jié)論：成功制得ADV-NLC，且處方合理、可行。

阿德福韋酯；納米脂質(zhì)載體；雙子表面活性劑；處方優(yōu)化

阿德福韋酯（Adefovir dipivoxil，ADV）是目前臨床上用于治療乙肝的常見藥物，但由其引發(fā)的胃腸系統(tǒng)損害、低磷血癥、骨軟化癥等不良反應(yīng)屢見報道[1-4]。納米脂質(zhì)載體（Nanostructured lipid carrier，NLC）是在固體脂質(zhì)納米粒的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新一代藥物載體，通過在固態(tài)脂質(zhì)中加入液態(tài)脂質(zhì)，破壞其完整晶格結(jié)構(gòu)，從而顯著提高載藥能力，且可控制藥物釋放[5-10]。本試驗擬采用溶劑分散-超聲法制備ADV-NLC，并優(yōu)化其處方工藝，旨在開發(fā)一種高效、低毒、緩釋的ADV新劑型及新型藥物載體材料。

1 材料

1.1 儀器與透析袋

UV-2450紫外-可見分光光度計和LC-10AT高效液相色譜儀（日本島津公司）；ZEN3690粒度分析儀（英國Malvern公司）；JY92-Ⅱ超聲波細胞粉碎機（寧波新芝生物科技股份有限公司）；冷凍干燥機（北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司）；透析袋（美國Union Carbide公司，截留分子量：8 000）。

1.2 藥品與試劑

ADV標準品（大連美侖生物技術(shù)有限公司，批號：20130710，純度：＞98%）；ADV原料藥（鄭州華文化工有限公司，批號：20140923，純度：≥97%）；單硬脂酸甘油酯（化學(xué)純）、聚山梨酯80（化學(xué)純）、硬脂酸（分析純）、油酸（分析純）均購自天津市博迪化工有限公司；雙子（Gem ini）表面活性劑（2，4，7，9-四甲基-5-癸炔-4，7-二醇異氧化物，美國MSDS公司）；丙酮、無水乙醇、甘露醇均為分析純，正丙醇、十二烷基磺酸鈉（SDS）、聚乙二醇（PEG）1000均為化學(xué)純，乙腈、甲醇為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 ADV-NLC的制備

采用溶劑分散-超聲法制備ADV-NLC。精密稱取處方量的單硬脂酸甘油酯、硬脂酸和油酸以及ADV，分散于丙酮-乙醇的混合溶劑（1∶1，V/V）中，于60水浴中熔融作為油相；另精密稱取處方量的Gemini表面活性劑-聚山梨酯80和穩(wěn)定劑正丙醇、PEG1000、SDS分散于20m L水中加熱至相同溫度作為水相；然后在攪拌的條件下將油相緩慢注入水相中，將得到的混懸液于恒溫磁力攪拌器上60繼續(xù)攪拌30m in，除去有機溶劑，形成初乳。將得到的初乳超聲處理（功率：600W，間隔時間：3 s，工作時間：5 s，次數(shù)：50次）后，得到淡藍色澄清透明的ADV-NLC水分散體系。

2.2 ADV-NLC的性質(zhì)表征

將ADV-NLC水分散體系稀釋一定倍數(shù)后，取適量于ZEN3690粒度分析儀樣品池中，于25條件下以光散射法檢測粒徑和多分散指數(shù)；另取適量于U型樣品池中檢測Zeta電位，測試角度為90°。

2.3 ADV的含量測定

2.3.1 ADV標準液的制備 精密稱取ADV標準品0.010 73 g，置于50m L量瓶中，用流動相[乙腈-磷酸鹽緩沖液（PBS）（40∶60）]溶解定容至50m L，得到0.214 6 mg/m L的ADV標準貯備液。分別精密量取0.2、0.4、0.8、1.2、1.6 m L的ADV標準貯備液，置于10 m L量瓶中，并用流動相定容至刻度，得到4.292、8.584、17.168、25.752、34.336μg/m L的ADV標準液。

2.3.2 ADV檢測波長的選擇 采用UV-2450紫外-可見分光光度計在200～800 nm波長范圍內(nèi)對8.584μg/m L的ADV標準液進行掃描。結(jié)果顯示，ADV在258 nm波長處有最大吸收，故選擇258 nm為ADV的檢測波長。

2.3.3 色譜條件 色譜柱：VP-ODS（250mm×4.6mm，5 μm）；流動相：乙腈-PBS（40∶60）；流速：1m L/min；檢測波長：258 nm；進樣量：20μL；柱溫：25。

2.3.4 方法學(xué)考察 按相關(guān)方法進行考察。結(jié)果顯示，ADV峰面積（y）與質(zhì)量濃度（x）的回歸方程為y＝ 17 468.002x+14 616.947（r＝0.999 71），ADV線性范圍為4.292～34.336μg/m L；平均回收率為96.13%（RSD＝1.2%，n＝6）；精密度試驗中峰面積的RSD為1.8%（n＝6）；穩(wěn)定性試驗中含量的RSD為2.1%（n＝6）。

2.4 包封率的測定

取ADV-NLC水分散體系1m L于透析袋內(nèi)，加超純水補液至3m L，將其浸入47m L同種超純水中，燒杯中加入攪拌子快速攪拌，平行9次。分別于0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5 h取出透析液，用紫外-可見分光光度計檢測各透析液中ADV的吸光度，繪制吸光度-時間曲線，計算含量和包封率[包封率（%）＝（W總－W游離）/ W總×100%]。ADV-NLC的吸光度-時間曲線見圖1。

由圖1可知，ADV-NLC釋放2 h后曲線趨于平緩，表明此時游離ADV的擴散基本達到平衡，由此確定2 h為透析平衡時間。

2.5 處方篩選

2.5.1 Gem ini表面活性劑-聚山梨酯80比例對ADVNLC理化性質(zhì)的影響 固定乳化劑的用量為3%（乳化劑與水相之比，m/V）、藥脂比為4.5%（m/m）、固-液脂質(zhì)比為6∶5（m/m），考察Gemini表面活性劑-聚山梨酯80比例（0∶1、1∶3、1∶2、1∶1、2∶1）對ADV-NLC理化性質(zhì)的影響，結(jié)果見表1。

圖1 ADV-NLC的吸光度-時間曲線Fig 1 Absorbance-time curvesof ADV-NLC

表1 Gem ini表面活性劑-聚山梨酯80比例對ADVNLC理化性質(zhì)的影響（±s，n＝3）Tab 1 Effectsof Gem inisurfactant-polysorbate 80 ratio on ADV-NLC physico-chem ical property（±s，n＝3）

表1 Gem ini表面活性劑-聚山梨酯80比例對ADVNLC理化性質(zhì)的影響（±s，n＝3）Tab 1 Effectsof Gem inisurfactant-polysorbate 80 ratio on ADV-NLC physico-chem ical property（±s，n＝3）

Gemini表面活性劑-聚山梨酯80比例（m/m）0∶1 1∶3 1∶2 1∶1 2∶1粒徑，nm 77.60±4.09 60.55±5.81 49.77±4.12 73.14±3.57 81.83±4.35多分散指數(shù)0.644±0.067 0.220±0.049 0.178±0.056 0.616±0.061 0.583±0.048 Zeta電位，mV -24.4±2.9 -20.4±2.1 -24.1±3.2 -22.5±1.8 -23.9±2.3包封率，% 72.43±3.06 72.01±2.54 73.12±2.35 73.04±1.76 72.88±2.83

由表1可知，不同比例Gem ini表面活性劑-聚山梨酯80對ADV-NLC的包封率影響不明顯，但對粒徑和多分散指數(shù)影響較大。當Gemini表面活性劑-聚山梨酯80比例為1∶2時，所制備的ADV-NLC粒徑和多分散指數(shù)最小，且粒度分布均勻，故選擇Gemini表面活性劑-聚山梨酯80（1∶2）為乳化劑。

2.5.2 乳化劑用量對ADV-NLC理化性質(zhì)的影響 固定Gemini表面活性劑-聚山梨酯80比例為1∶2、藥脂比為4.5%、固-液脂質(zhì)比為6∶5，考察乳化劑用量[2%、3%、4%、5%、6%、7%（乳化劑與水相之比，m/V）]對ADVNLC理化性質(zhì)的影響，結(jié)果見表2。

表2 乳化劑用量對ADV-NLC理化性質(zhì)的影響（±s，n＝3）Tab 2 Effects of em ulsifier dosage on ADV-NLC physico-chem icalproperty（±s，n＝3）

表2 乳化劑用量對ADV-NLC理化性質(zhì)的影響（±s，n＝3）Tab 2 Effects of em ulsifier dosage on ADV-NLC physico-chem icalproperty（±s，n＝3）

乳化劑用量，% 234567粒徑，nm 71.08±6.75 51.51±6.83 83.16±7.97 112.4±9.04 129.0±8.93 355.8±9.51多分散指數(shù)0.303±0.054 0.161±0.040 0.147±0.043 0.124±0.037 0.186±0.065 0.488±0.063 Zeta電位，mV -25.1±2.2 -23.8±3.5 -25.3±2.8 -22.2±3.1 -22.2±2.9 -20.7±1.7包封率，% 75.71±2.23 77.84±3.11 77.44±3.29 72.17±2.18 73.47±2.45 69.73±2.76

由表2可知，隨著乳化劑用量增加，ADV-NLC粒徑增大、包封率減小。當乳化劑用量為3%時，所制備的ADV-NLC粒徑最小、包封率最高，故選擇乳化劑用量為3%。

2.5.3 藥脂比對ADV-NLC理化性質(zhì)的影響 固定Gem ini表面活性劑-聚山梨酯80比例為1∶2、乳化劑用量為3%、固-液脂質(zhì)比為6∶5，考察藥脂比（1.8%、3.2%、4.5%、6.8%、9.1%，m/m）對ADV-NLC理化性質(zhì)的影響，結(jié)果見表3。

表3 藥脂比對ADV-NLC理化性質(zhì)的影響（±s，n＝3）Tab 3 Effects of drug-lipid ratio on ADV-NLC physico-chem icalproperty（±s，n＝3）

表3 藥脂比對ADV-NLC理化性質(zhì)的影響（±s，n＝3）Tab 3 Effects of drug-lipid ratio on ADV-NLC physico-chem icalproperty（±s，n＝3）

藥脂比，% 1.8 3.2 4.5 6.8 9.1粒徑，nm 48.42±5.71 43.19±5.42 45.22±6.13 47.19±5.74 49.99±6.09多分散指數(shù)0.333±0.069 0.189±0.046 0.189±0.031 0.220±0.047 0.194±0.038 Zeta電位，mV -22.1±2.8 -23.2±2.5 -20.9±3.3 -22.4±3.1 -20.2±1.6包封率，% 75.40±2.03 77.43±3.21 77.88±2.15 69.97±1.01 64.72±2.76

由表3可知，藥脂比對ADV-NLC的粒徑影響不顯著，但對包封率影響較明顯。當藥脂比為4.5%時，ADVNLC的包封率最高；藥脂比繼續(xù)增加，包封率反而減小，故選擇藥脂比為4.5%。

2.5.4 固-液脂質(zhì)比對ADV-NLC理化性質(zhì)的影響 液態(tài)脂質(zhì)的類型或含量不同，均會使NLC的粒徑、多分散指數(shù)和釋放行為發(fā)生改變[9]。固定Gemini表面活性劑-聚山梨酯80比例為1∶2、乳化劑用量為3%、藥脂比為4.5%，考察固-液脂質(zhì)比（3∶1、2∶1、6∶5、6∶7、2∶3、3∶5、1∶2、3∶7，m/m）對ADV-NLC理化性質(zhì)的影響，結(jié)果見表4。

表4 固-液脂質(zhì)比對ADV-NLC理化性質(zhì)的影響（±s，n＝3）Tab 4 Effects of solid-liquid lipid ratio on ADV-NLC physico-chem icalproperty（±s，n＝3）

表4 固-液脂質(zhì)比對ADV-NLC理化性質(zhì)的影響（±s，n＝3）Tab 4 Effects of solid-liquid lipid ratio on ADV-NLC physico-chem icalproperty（±s，n＝3）

固-液脂質(zhì)比3∶1 2∶1 6∶5 6∶7 2∶3 3∶5 1∶2 3∶7粒徑，nm 43.60±4.75 43.57±5.86 44.10±5.47 45.38±4.89 60.52±6.73 67.84±5.91 71.52±7.35 87.20±6.89多分散指數(shù)0.292±0.051 0.266±0.063 0.254±0.057 0.342±0.061 0.538±0.082 0.509±0.076 0.234±0.049 0.276±0.055 Zeta電位，mV -21.9±2.5 -22.5±2.3 -22.7±2.1 -26.6±3.8 -35.6±3.5 -35.3±4.2 -30.8±2.7 -28.2±3.7包封率，% 70.07±4.12 73.20±3.51 77.36±3.47 77.60±4.09 81.20±3.97 89.36±2.82 88.92±3.39 89.52±4.11

由表4可知，隨著油酸量的增加，ADV-NLC的粒徑增大，包封率增加；當固-液脂質(zhì)比達到3∶5時，繼續(xù)增加油酸量，ADV-NLC的包封率無明顯增加?？紤]到油酸的用量太大可能會導(dǎo)致藥物的突釋效應(yīng)，綜合考慮，選擇固-液脂質(zhì)比為6∶5為最佳，此時ADV-NLC的粒徑較小、包封率較高。

2.6 驗證試驗

篩選得到ADV-NLC的處方為乳化劑（Gem ini表面活性劑-聚山梨酯80比例1∶2）用量3%，藥脂比4.5%，固-液脂質(zhì)比6∶5。按此處方制得3批次的ADV-NLC，測得其平均粒徑為（48.83±2.65）nm，多分散指數(shù)＜0.3， Zeta電位為（－28.7±1.8）mV，包封率為（77.65± 0.03）%（n＝3）。

3 討論

在乳化劑的篩選中發(fā)現(xiàn)，與單獨使用聚山梨酯80作為乳化劑比較，Gem ini表面活性劑-聚山梨酯80比例為1∶2時可產(chǎn)生良好的協(xié)同作用，可顯著改善ADV-NLC的粒徑及粒度分布。

綜上所述，本試驗成功制得了ADV-NLC，且處方合理、可行。

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Preparation and Formulation Optim ization of Nanostructured Lipid Carriers of Adefovir Dipivoxil

SUN Shanshan，WANG Huiyun，WANG Feifei，DING Lin（School of Pharmacy，Jining Medical University，Shandong Rizhao 276826，China）

OBJECTIVE：To prepare nanostructured lipid carrier of adefovir dipivoxil（ADV-NLC），and optimize the formulation.METHODS：Using stearic acid and glycerin monostearate as solid lipid，oleic acid as liquid lipid，Gem ini surfactant and polysorbate 80 as emulsifier，sodium dodecyl sulfate（SDS）as stabilizer，solvent dispersion ultrasonic method was used to prepare ADV-NLC.And using particle size，polydispersity index，Zeta potential，encapsulation efficiency as indexes，single factor testwas conducted to screen Gem ini surfactant-polysorbate 80 ratio，emulsifier dosage（ratio of emulsifier to water phase），drug-lipid ratio，solid-liquid lipid ratio.RESULTS：The formula was as follow as 3%emulsifier（Gem ini surfactant-polysorbate 80 ratio of 1∶2），4.5%drug-lipid ratio，solid-liquid lipid ratio of 6∶5.The average particle size of the prepared ADV-NLC was（48.83±2.65）nm，polydispersity index＜0.3，Zeta potentialwas（－28.7±1.8）m V，encapsulation efficiency was（77.65±0.03）%（n＝3）.CONCLUSIONS：ADV-NLC is successfully prepared，and the formulation is reasonable and feasible.

Adefovir dipivoxil；Nanostructured lipid carrier；Gemini surfactant；Formulation optimization

R943

A

1001-0408（2017）16-2259-03

2016-08-26

2016-10-20）

濟寧醫(yī)學(xué)院科研計劃項目（No.JY2013KJ010）

＊講師，碩士。研究方向：藥物新劑型與新技術(shù)。電話：0633-2983689。E-mail：sunshanshan815@163.com

#通信作者：教授，博士。研究方向：膠體藥物傳遞系統(tǒng)。電話：0633-2983687。E-mail：wang_huiyun@126.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.16.27