不同產(chǎn)地黃精經(jīng)不同方法炮制后多糖、5-羥甲基糠醛的含量變化Δ

宋藝君，郭 濤，周曉程（.陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，陜西咸陽 7046；.解放軍第45醫(yī)院中醫(yī)藥研究所，西安 70054）

不同產(chǎn)地黃精經(jīng)不同方法炮制后多糖、5-羥甲基糠醛的含量變化Δ

宋藝君1＊，郭 濤2，周曉程1（1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，陜西咸陽 712046；2.解放軍第451醫(yī)院中醫(yī)藥研究所，西安 710054）

目的：研究不同產(chǎn)地黃精經(jīng)不同方法炮制后多糖和5-羥甲基糖醛（5-HMF）的含量變化，為不同產(chǎn)地黃精炮制工藝和不同炮制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂提供理論依據(jù)。方法：采用紫外分光光度法和高效液相色譜法分別測(cè)定黃精樣品中多糖、5-HMF的含量，并比較不同產(chǎn)地[陜西略陽縣、陜西黃陵縣、云南富民縣（道地產(chǎn)區(qū)）、陜西太白縣]黃精鮮切、干切、清蒸、酒蒸樣品中多糖及5-HMF的含量差異。結(jié)果：鮮切黃精以道地產(chǎn)區(qū)云南富民縣樣品多糖含量最高（13.4%），且未檢測(cè)到5-HMF（0）；黃精鮮切、干切、清蒸、酒蒸后多糖含量分別為10.8%～13.4%、8.9%～10.8%、5.5%～6.9%，5.6%～6.5%，5-HMF含量分別為0、0、0.21%～0.50%、0.25%～0.72%。與未炮制樣品（鮮切）比較，黃精經(jīng)干切、清蒸、酒蒸后多糖含量依次減少，清蒸、酒蒸后5-HMF含量依次增加。結(jié)論：建議在制訂道地和非道地產(chǎn)區(qū)黃精炮制工藝時(shí)應(yīng)考慮產(chǎn)地因素；在黃精清蒸和酒蒸后的炮制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)增加5-HMF含量測(cè)定指標(biāo)。

黃精；產(chǎn)地；炮制工藝；5-羥甲基糠醛；多糖

黃精是百合科黃精屬植物黃精（Polygonatum sibiricum Red.）、多花黃精（Polygonatum cyrtonema Hua.）、滇黃精（Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.）的干燥根莖[1]。其中黃精主產(chǎn)于陜西、河北、內(nèi)蒙古等省區(qū)，多花黃精主產(chǎn)于云南、貴州、湖南等省區(qū)，滇黃精主產(chǎn)于云南、貴州、廣西等省區(qū)，道地產(chǎn)區(qū)為云南[2-3]。黃精為臨床常用滋陰補(bǔ)益藥，其味甘、性平，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾潤(rùn)肺及益腎的功效[4]，其所含化學(xué)成分豐富，有多糖、皂苷、蒽醌類化合物、生物堿、強(qiáng)心苷、木脂素等[5]。其中，多糖是黃精的主要功能性成分，具有抗腫瘤、降血糖、免疫調(diào)節(jié)、抑菌消炎等活性，藥用價(jià)值較高[6]。但在多糖的貯存和生產(chǎn)加工過程中，不可避免地會(huì)發(fā)生糖苷鍵的水解和糖的脫水反應(yīng)而生成5-羥甲基糖醛（5-HMF）。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，5-HMF雖具有防治神經(jīng)退行性疾病、減輕認(rèn)知損害和抗心肌缺血的作用[7]，但對(duì)黏膜、眼睛、皮膚有刺激性，可與人體蛋白質(zhì)結(jié)合而引起毒性，造成橫紋肌麻痹和內(nèi)臟損害，并且具有神經(jīng)毒性和潛在的遺傳及生殖毒性[8]，故5-HMF含量的多少會(huì)直接影響黃精及其相關(guān)制劑的療效。因而，本文對(duì)不同產(chǎn)地不同炮制方法黃精炮制前后多糖、5-HMF的含量進(jìn)行測(cè)定，為黃精炮制工藝的優(yōu)化和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

UV-2550紫外分光光度儀（日本島津公司）；U3000高效液相色譜（HPLC）儀（賽默飛世爾科技公司）；ST-803切片機(jī)（瑞安市賽特機(jī)電有限公司）。

1.2 藥材、藥品與試劑

黃精藥材采自陜西略陽縣、陜西黃陵縣、云南富民縣（道地產(chǎn)區(qū)）、陜西太白縣，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院王繼濤教授鑒定為百合科植物黃精（PolygonatumsibiricumRed.）的新鮮根莖；無水葡萄糖、5-HMF對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為：110833-201304、111626-201101，純度：均不低于99%）；黃酒（浙江紹興縣第三酒廠）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃精炮制品的制備

2.1.1 鮮切黃精取黃精新鮮藥材，除去須根、霉變品及泥沙雜質(zhì)，洗凈，瀝干水分，切片，60干燥至水分小于18.0%，即得[9]。

2.1.2 干切黃精取黃精新鮮藥材，除去須根、霉變品及泥沙雜質(zhì)，洗凈，晾干，軟化，切片，60干燥至水分小于15.0%，即得[1]。

2.1.3 清蒸黃精取黃精新鮮藥材，除去須根、霉變品及泥沙雜質(zhì)，洗凈，瀝干水分，切片，置于不銹鋼容器內(nèi)蒸18h，至色澤黑潤(rùn)后取出，放冷，60干燥至水分小于15.0%，即得[10]。

2.1.4 酒蒸黃精取黃精新鮮藥材，除去須根、霉變品及泥沙雜質(zhì)，洗凈，瀝干水分，切片，加20%黃酒，浸潤(rùn)6 h，置于不銹鋼容器內(nèi)蒸18h，至色澤黑潤(rùn)后取出，放冷，60干燥至水分小于15.0%，即得[11]。

2.2 多糖的含量測(cè)定

[1]方法測(cè)定。

2.2.1 對(duì)照品溶液制備取經(jīng)105干燥至恒質(zhì)量的無水葡萄糖對(duì)照品3.76mg，精密稱定，置于10mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液制備取60干燥至恒質(zhì)量的炮制品細(xì)粉約0.25g，精密稱定，置于圓底燒瓶中，加80%乙醇150mL，置于水浴中加熱回流1h，趁熱濾過，殘?jiān)?0%熱乙醇洗滌3次，每次10mL；將殘?jiān)盀V紙置于燒瓶中，加水150mL，置于沸水浴中加熱回流1h，趁熱濾過，殘?jiān)盁坑脽崴礈?次，每次10mL；合并濾液與洗液，放冷，轉(zhuǎn)移至250mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 線性關(guān)系考察精密量取對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL，分別置于10mL干燥試管中，各加水至2.0mL，搖勻，在冰水浴中緩緩滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，混勻，放冷后置于水?。?8～100）中保溫10min，取出，立即置于冰水浴中冷卻10min，取出。以上述加入的各試劑為空白，照紫外分光光度法，在582 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x）、吸光度為縱坐標(biāo)（y）作圖，得回歸方程y＝3.245x+0.0695（r＝0.9992）。結(jié)果表明，多糖在質(zhì)量濃度0.00376～0.02256mg/mL范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。

2.2.4 精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、加樣回收率試驗(yàn)按相關(guān)方法進(jìn)行考察。結(jié)果，精密度試驗(yàn)中吸光度的RSD為1.27%（n＝6），表明精密度較好；穩(wěn)定性試驗(yàn)中吸光度的RSD為1.97%（n＝5），表明供試品溶液在30min內(nèi)穩(wěn)定；重復(fù)性試驗(yàn)中多糖含量的RSD為2.08%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好；加樣回收率試驗(yàn)中多糖平均回收率為99.4%（RSD＝2.5%，n＝6），表明方法準(zhǔn)確度好。

2.2.5 樣品中多糖含量測(cè)定精密量取供試品溶液1 mL，置于10mL具塞干燥試管中，照“2.2.3”項(xiàng)下方法，自“加水至2.0mL”起進(jìn)行操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算供試品溶液中含無水葡萄糖的質(zhì)量（mg），即得。

2.35 -HMF的含量測(cè)定

參考文獻(xiàn)[12-13]方法測(cè)定。2.3.1對(duì)照品溶液制備取5-HMF對(duì)照品適量，精密稱定，用甲醇溶解制備成10μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3.2 供試品溶液制備取樣品0.2g，精密稱定，加甲醇15mL，超聲提取20min，濾過。濾渣加甲醇10mL，超聲提取10min，濾過，濾液定容至25mL量瓶中，即得。2.3.3色譜條件與系統(tǒng)適用性考察色譜柱為HypurityC1（8250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇-水（8∶92），流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，柱溫為30，進(jìn)樣量為10μL。取“2.3.1”“2.3.2”項(xiàng)下溶液進(jìn)樣分析，色譜圖見圖1。

2.3.4 線性關(guān)系考察分別吸取對(duì)照品溶液2、6、10、14、18μL，進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜峰峰面積。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（x）、峰面積為縱坐標(biāo)（y）進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程為y＝37.975x+0.0145（r＝0.9999），結(jié)果表明，5-HMF進(jìn)樣量在0.02～0.18μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.3.5 精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、加樣回收率試驗(yàn)按相關(guān)方法進(jìn)行考察，所采用樣品為陜西略陽縣酒蒸黃精。結(jié)果，精密度試驗(yàn)中峰面積的RSD為1.66%（n＝6），表明方法精密度較好；穩(wěn)定性試驗(yàn)中峰面積的RSD為1.87%（n＝5），表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定；重復(fù)性試驗(yàn)中5-HMF含量的RSD為2.04%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好；加樣回收率試驗(yàn)中5-HMF平均回收率為98.7%（RSD＝1.9%，n＝6），表明方法準(zhǔn)確度好。

2.3.6 樣品5-HMF含量測(cè)定 精密取供試品溶液10 μL，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算各樣品中5-HMF含量。

2.4 不同產(chǎn)地不同方法炮制樣品含量測(cè)定結(jié)果

根據(jù)“2.2”“2.3”項(xiàng)下方法測(cè)定各樣品中多糖和5-HMF含量，結(jié)果，不同產(chǎn)地黃精經(jīng)過不同方法炮制后，多糖含量減少，5-HMF含量不變或增加，結(jié)果詳見表1。

表1 不同產(chǎn)地、不同方法炮制黃精中多糖和5-HMF含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）Tab 1 Results of contents determ ination of polysaccharide and 5-HM F in Polygonati rhizom a from different producing areas by different processingmethods（n＝3）

由表1可見，鮮切黃精中以道地產(chǎn)區(qū)云南富民縣樣品多糖含量最高（13.4%），且未檢測(cè)到5-HMF；黃精鮮切、干切、清蒸、酒蒸后多糖含量分別為10.8%～13.4%、8.9%～10.8%、5.5%～6.9%，5.6%～6.5%，5-HMF含量分別為0、0、0.21%～0.50%、0.25%～0.72%。與未炮制樣品（鮮切）比較，黃精經(jīng)干切、清蒸、酒蒸后多糖含量依次減少，清蒸、酒蒸后5-HMF含量依次增加。不同產(chǎn)地黃精，鮮切和干切炮制后均未檢測(cè)到5-HMF，而清蒸和酒蒸炮制后檢測(cè)到5-HMF，其含量由高到低依次為云南富民縣、陜西太白縣、陜西黃陵縣、陜西略陽縣樣品。

3 討論

本課題選取的黃精樣本經(jīng)專家鑒定是百合科黃精屬植物黃精的根莖，分別來源于道地產(chǎn)區(qū)和非道地產(chǎn)區(qū)。道地產(chǎn)區(qū)為云南富民縣，非道地產(chǎn)區(qū)為陜西（黃精的主要栽培區(qū)），分別選取陜西北部（陜西黃陵縣）、南部（陜西略陽縣）和中部（陜西太白縣）的樣品，所選樣品具有代表性。

本文中傳統(tǒng)黃精樣品是按照炮制的固定操作程序來處理，即2015年版《中國藥典》中黃精飲片項(xiàng)下“黃精”的處理方法[1]，是標(biāo)準(zhǔn)的常用方法；本課題研究黃精產(chǎn)地加工炮制一體化技術(shù)，故采用新鮮黃精直接切片后分別曬干、清蒸、酒蒸，相應(yīng)得到新鮮黃精、清蒸黃精、酒蒸黃精，各炮制方法及條件均由本課題前期試驗(yàn)優(yōu)化而得。

根據(jù)不同方法炮制后樣品中多糖和5-HMF含量的變化，提示在制訂道地和非道地產(chǎn)區(qū)黃精炮制工藝時(shí)應(yīng)考慮產(chǎn)地因素，產(chǎn)地氣候等條件差別較大時(shí)，應(yīng)制訂不同的炮制工藝參數(shù)。

2015年版《中國藥典》干切和酒蒸黃精含量測(cè)定項(xiàng)下均只列有多糖的含量測(cè)定，考慮到炮制條件的不同，其化學(xué)組成的變化方式也不相同[14]，故此標(biāo)準(zhǔn)不能很好地反映黃精炮制品的化學(xué)物質(zhì)組成變化。因而筆者認(rèn)為在黃精清蒸和酒蒸后的炮制品中增加5-HMF含量測(cè)定指標(biāo)很有必要。

黃精炮制以清蒸和酒蒸為主，炮制前后顏色差異較大，炮制后藥物表面呈棕褐色至黑色，有光澤，中心棕色至淺褐色，可見筋脈小點(diǎn)，質(zhì)地柔軟，味甜。黃精炮制后多糖含量減少，主要是因?yàn)辄S精中的糖類成分和氨基酸多肽蛋白類成分在高溫下發(fā)生了十分復(fù)雜的美拉德反應(yīng)所致[15]。

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Contents Changes of Polysaccharide and 5-HMF in Polygonati Rhizoma from Different Producing Areas after Different Processing

SONG Yijun1，GUO Tao2，ZHOU Xiaocheng1（1.School of Pharmacy，Shaanxi University of Chinese Medicine，Shaanxi Xianyang 712046，China；2.Institute of Traditional Chinese Medicine，No.451 Hospital of PLA，Xi’an 710054，China）

OBJECTIVE：To study the contents changes of polysaccharide and 5-HMF in Polygonati rhizoma from different producing areas after different processing，and provide reference for the development of processing technology of Polygonati rhizoma from different producing areas and the quality standard of different processing products.METHODS：UV spectrophotometry and HPLC were conducted to respectively determ ine the contents of polysaccharide and 5-HMF，and compare the content differences of polysaccharide and 5-HMF in Polygonati rhizoma from different producing areas[Shaanxi Lueyang County，Shaanxi Huangling County，Yunnan Fum in County（genuine producing areas），Shaanxi Taibai County]by fresh-cutting，dry-cutting，steam ing and steaming w ith w ine.RESULTS：Polysaccharide of sample from Yunnan Fumin County showed the highest content in fresh-cut samples（13.4%），no 5-HMF（0）was detected；polysaccharide contentswere respectively 10.8%-13.4%，8.9%-10.8%，5.5%-6.9%，5.6%-6.5%after fresh-cut，dry-cut，steamed and steamed w ith w ine，5-HMF contents were 0，0，0.21%-0.50%，0.25%-0.72%. Compared w ith no processing samples（fresh-cut），polysaccharide contents in Polygonati rhizoma were decreased in turn after drycut，steamed and steamed w ith w ine，5-HMF contents were increased in turn after steamed and steamed w ith w ine.CONCLUSIONS：It is suggested to consider origin factor in developing processing technology of Polygonati rhizoma from genuine and nongenuine producing areas.5-HMF content determination index should be added into quality standard of processing products after steamed and steamed w ith w ine.

Polygonati rhizoma；Produced area；Processing technology；5-hydroxymethyl furfural；Polysaccharide

R283

A

1001-0408（2017）16-2256-03

2016-09-26

2016-11-02）

（編輯：劉 萍）

陜西省教育廳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室科學(xué)研究計(jì)劃項(xiàng)目（No.14JS023）

＊講師，博士。研究方向：中藥飲片規(guī)范化。電話：029-38185172。E-mail：songyijun200506@126.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.16.26