柿種質(zhì)資源對(duì)柿炭疽菌的抗性評(píng)價(jià)

王潔++高瑞++余賢美++艾呈祥

摘要：柿炭疽病是柿樹上的毀滅性災(zāi)害，本試驗(yàn)通過連續(xù)3年的自然發(fā)病調(diào)查和田間人工接種鑒定研究了14份柿種質(zhì)資源和1份砧木對(duì)柿炭疽菌Colletotrichum horii的抗性。結(jié)果顯示，不同種質(zhì)資源的病情指數(shù)存在差異，田間自然發(fā)病病情指數(shù)在9.0～65.0之間，田間人工接種后病情指數(shù)在8.3～72.3之間。其中，野柿和浦城方柿病情指數(shù)低于10.0，發(fā)病較輕，屬于抗病品種；澀柿八月黃、魯柿5號(hào)和砧木君遷子感病指數(shù)10.0～30.0，為中等抗病水平；次郎、早秋和小萼子在田間自然發(fā)病時(shí)為中等抗病水平，但在田間人工接種時(shí)屬感病品種；其余品種均為感病或高感品種。本研究可為柿抗炭疽病育種提供理論依據(jù)和育種材料。

關(guān)鍵詞：柿；種質(zhì)資源；柿炭疽菌；抗性評(píng)價(jià)

中圖分類號(hào)：S665.203.4文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2017）06-0112-04

AbstractPersimmon （Diospyros kaki Thunb.） anthracnose disease is one of the most devastating diseases. The resistance of 14 persimmon germplasms and 1 rootstock were evaluated by natural infection ivestigation for 3 years and artificial inoculation identification in 2016 in the field. The results showed that there was difference in the disease indexes of different germplasms. The disease index in natural infection investigation and artificial inoculation identification was 9.0～65.0 and 8.3～72.3， respectively. The disease indexes of Silvestris and Puchengfangshi were below 10.0， so they exhibited resistant to C. horii. Bayuehuang， Lushi 5 and Dateplum were medium resistant to C. horii with disease indexes between 10.0 and 30.0. Jiro， Soshu and Xiaoezi were medium resistant to C. horii in natural infection investigation， but exhibited susceptible in natural infection investigation. The other 7 samples of persimmon germplasms exhibited susceptible or high susceptible to C. horii. The results could provide theoretical foundation and new resources for persimmon breeding resistant to C. horii.

KeywordsPersimmon； Germplasm； Colletotrichum horii； Resistance evaluation

柿炭疽病是目前柿樹生產(chǎn)上最嚴(yán)重的病害，主要危害柿果實(shí)和嫩枝，造成果實(shí)腐爛，枝條枯死，甚至導(dǎo)致樹體整株死亡[1-4]。目前，國內(nèi)的主栽品種均不抗柿炭疽病，該病的防治主要采取加強(qiáng)田間管理和化學(xué)防治的方法[5]。田間管理需耗費(fèi)大量的人力和物力，而化學(xué)防治極易產(chǎn)生病原菌抗藥性、農(nóng)藥殘留等潛在威脅。因此，種植抗病品種是控制柿樹炭疽病最為經(jīng)濟(jì)、有效的防治措施。

我國是世界上擁有柿樹（Diospyros kaki Thunb.）品種資源最豐富的國家[6]。迄今，柿抗逆性評(píng)價(jià)工作僅在抗寒性和抗角斑病方面獲得了一些研究進(jìn)展[7-9]，均表明不同柿種質(zhì)材料間抗性存在明顯差異。因此，本課題在柿炭疽病菌種群鑒定、致病力評(píng)價(jià)研究和柿種質(zhì)資源收集的基礎(chǔ)上[2，3，10]，采用自然發(fā)病調(diào)查和人工接種鑒定兩種方法研究了部分柿種質(zhì)資源對(duì)柿炭疽菌Colletotrichum horii的抗性，旨在明確不同柿（品）種間的抗性差異，為抗性利用、培育抗病柿新品種等提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)

田間自然發(fā)病調(diào)查于2014—2016年7—9月在臨沂、濟(jì)南、濰坊、濟(jì)寧、泰安等山東省柿主栽區(qū)進(jìn)行。田間接種鑒定試驗(yàn)在山東省果樹研究所萬吉山基地進(jìn)行，接種時(shí)間為2016年6月1日，接種后15 d進(jìn)行調(diào)查。

1.2試驗(yàn)材料

1.2.1供試材料本研究供試種質(zhì)資源及其類型詳見表2，包括12份澀柿資源，分別為魯柿5號(hào)、扁柿、八月黃、車頭柿、牛心柿、婆婆柿、小萼子、黑柿、野柿、浦城方柿、富平尖柿和廣豐方柿；1份砧木資源，為君遷子；2份完全甜柿資源，為次郎和早秋。

1.2.2供試菌株用于接種鑒定的供試菌株為致病力強(qiáng)且分布廣泛的C. horii代表菌株SD010。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1田間調(diào)查方法田間調(diào)查時(shí)選取有代表性的植株2株，每株樹按東西南北中5個(gè)方位均勻選取10枝當(dāng)年抽生嫩梢進(jìn)行觀測(cè)。目測(cè)法觀察每個(gè)新枝的發(fā)病情況，確定病情級(jí)別。

1.3.2田間接種方法利用分生孢子懸浮液-傷口接種的方法接種柿新發(fā)枝條及葉柄。分生孢子懸浮液的配備：將供試菌株接種于PA平板上（不含葡萄糖），9 d后用無菌水刮洗下分生孢子，配置成孢子懸浮液，濃度約為1×106個(gè)孢子/mL。每個(gè)柿樹品種選2棵樹，每棵樹接種10個(gè)當(dāng)年生新梢枝條，另取每棵樹的3個(gè)枝條接種蒸餾水作為對(duì)照，供試枝條接種前均用大頭針按壓形成微傷口。設(shè)3個(gè)重復(fù)。接種枝條用塑料袋罩好封口保濕，15 d后觀察每個(gè)新枝的發(fā)病情況，確定病情級(jí)別。

1.3.3抗性評(píng)價(jià)抗炭疽病病情分為5級(jí)[11]：0級(jí)，無病斑；1級(jí)，病斑總直徑占枝條總長(zhǎng)度的比率≤20%；2級(jí)，20%<病斑總直徑占枝條總長(zhǎng)度的比率≤40%；3級(jí)，40%<病斑總直徑占枝條總長(zhǎng)度的比率≤60%；4級(jí)，60%<病斑總直徑占枝條總長(zhǎng)度的比率≤80%；5級(jí)，80%<病斑總直徑占枝條總長(zhǎng)度的比率。

將上述調(diào)查結(jié)果按以下公式換算成病情指數(shù)（DI）：

病情指數(shù)（DI）=Σ（發(fā)病級(jí)別×該病級(jí)發(fā)病枝數(shù)）/（5×調(diào)查總枝數(shù)） ×100。

參考楊勇等[11]制定的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《農(nóng)作物優(yōu)異種質(zhì)資源評(píng)價(jià)規(guī)范柿》， 利用病情指數(shù)確定柿種質(zhì)資源對(duì)炭疽病的抗性級(jí)別（表1）。根據(jù)重復(fù)抗性鑒定結(jié)果對(duì)材料進(jìn)行抗病性評(píng)價(jià)，抗性以記載的最高病情級(jí)別為準(zhǔn)。

2結(jié)果與分析

2.1田間自然發(fā)病抗性鑒定

由表2可知，供試的12份澀柿資源中，抗性資源只有野柿和浦城方柿，病情指數(shù)為9.0和 9.3，抗性級(jí)別為3級(jí)；中等抗性資源有3份，分別為小萼子、八月黃和魯柿5號(hào)，病情指數(shù)依次為28.3、26.7和22.0，抗性級(jí)別為5級(jí)；感病資源5份，分別為廣豐方柿、扁柿、黑柿、車頭柿和牛心柿，病情指數(shù)為33.0～48.7；高感資源2份，為婆婆柿和富平尖柿，病情指數(shù)為61.3和65.0。2份完全甜柿資源次郎和早秋均為中等抗病，病情指數(shù)分別為29.0和21.0。砧木君遷子為中等抗性資源。

2.2田間接種抗性鑒定

田間接種調(diào)查發(fā)現(xiàn)，15份柿種質(zhì)資源均于接種后5～7 d開始發(fā)病，接種后15 d病斑占枝條總面積的比率最大可達(dá)到90%，最小僅為5%，病斑占枝條面積超過80%后病菌開始蔓延到葉片，嚴(yán)重的引起葉片脫落，部分柿種質(zhì)資源的癥狀見圖1。

田間接種后15 d調(diào)查結(jié)果（表2）顯示，抗性資源有2份，分別為野柿和浦城方柿，病情指數(shù)為10.0和8.3，抗性級(jí)別為3級(jí)；中等抗性資源有3份，包括2份澀柿資源八月黃和魯柿5號(hào)及砧木品種君遷子，病情指數(shù)分別為26.3、23.3和20.0。其余10份柿種質(zhì)均感病，其中高感資源5份，分別為富平尖柿、扁柿、牛心柿、婆婆柿和黑柿，病情指數(shù)均﹥50；感病資源5份，包括2份完全甜柿和3份澀柿。

3討論與結(jié)論

本課題組2014年調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同地區(qū)因氣候條件及栽植柿品種不同，炭疽病病株率存在明顯差異，山東青州和臨朐病枝率高達(dá)60%，病果率達(dá)到30%，廣西病枝率高達(dá)80%，病果率高達(dá)60%（待發(fā)表），造成的直接經(jīng)濟(jì)損失達(dá)數(shù)千萬元，嚴(yán)重制約了我國柿樹產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，所以栽植抗病品種是果樹病害防治的重要途徑。

傳統(tǒng)的果樹種質(zhì)資源抗性評(píng)價(jià)多采用田間調(diào)查的方法[12]，但是影響果樹病害發(fā)生、發(fā)展的因素很多，田間調(diào)查時(shí)易受侵染時(shí)期、氣候條件、管理水平等的影響，需要多年、多地區(qū)的數(shù)據(jù)支持，費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、成本較高。越來越多的研究者采用室內(nèi)離體枝條接種的方法來評(píng)價(jià)品種間抗性[13]，這種方法雖然不受外界環(huán)境的影響，可以保證接種條件一致，但是不能反映自然條件下各品種的抗性反應(yīng)。而田間接種更接近果樹自然發(fā)病條件，因此，田間自然發(fā)病抗性調(diào)查結(jié)合田間接種進(jìn)行抗性評(píng)價(jià)是比較合理的抗性評(píng)價(jià)方法。

本試驗(yàn)采用這兩種方法評(píng)價(jià)柿種質(zhì)資源對(duì)炭疽菌的抗性，結(jié)果表明， 15份不同柿種質(zhì)資源在田間自然狀態(tài)下和人工接種后均能感染柿炭疽菌C. horii，無免疫品種；不同品種間在感病指數(shù)上存在差異，田間自然發(fā)病病情指數(shù)在9.0～65.0之間，田間接種后病情指數(shù)在8.3～72.3之間。從病情指數(shù)來分析，田間自然發(fā)病和田間人工接種時(shí)，野柿和浦城方柿病情指數(shù)均低于10.0，發(fā)病較輕，屬于抗病品種；澀柿八月黃、魯柿5號(hào)和砧木君遷子病情指數(shù)低于30.0，為中抗水平；次郎、早秋和小萼子在田間自然發(fā)病調(diào)查時(shí)為中抗水平，在田間人工接種時(shí)屬感病品種；其余品種均為感病或高感品種。本研究結(jié)果為柿抗性品種的合理推廣種植、炭疽病的防控提供科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]張敬澤， 胡東維. 影響柿樹炭疽菌孢子萌發(fā)、附著胞形成及致病性的環(huán)境因子[J]. 植物病理學(xué)報(bào)， 2004， 34（2）： 154-161.

[2]余賢美， 侯長(zhǎng)明， 王潔， 等. 次郞甜柿炭疽病菌的分離鑒定及其rDNA-ITS 序列分析[J]. 經(jīng)濟(jì)林研究， 2014， 32（1）： 45-50.

[3]余賢美， 侯長(zhǎng)明， 王潔， 等.山東牛心柿炭疽病菌的分離鑒定及致病力分析[J]. 林業(yè)科學(xué)， 2015， 51（4）： 126-133.

[4]張敬澤， 徐同. 柿樹炭疽菌侵染不同柿樹種、品種和部位的細(xì)胞學(xué)特征[J].菌物學(xué)報(bào)， 2005， 24（1）： 116 -122.

[5]曲健祿， 武海斌， 范昆， 等. 柿樹炭疽病菌的生物學(xué)特性及幾種殺菌劑對(duì)其的抑制作用[J]. 農(nóng)藥學(xué)報(bào)， 2012， 14（5）： 503-509.

[6]楊勇，阮小鳳，王仁梓，等. 柿種質(zhì)資源及育種研究進(jìn)展[J]. 西北林學(xué)院學(xué)報(bào)， 2005， 20（2）：133-137.

[7]楊勇， 趙紅星， 李高潮， 等. 柿種質(zhì)資源田間耐寒性調(diào)查分析[J]. 北方園藝， 2010（1）：63-65.

[8]劉偉， 王潔， 韓偉， 等. 柿樹的凍害調(diào)查[J]. 落葉果樹， 2013， 45（5）： 13-15.

[9]鄧立寶.廣西柿種質(zhì)資源遺傳多樣性及其對(duì)柿角斑病抗病性研究[D].南寧： 廣西大學(xué)，2013.

[10]艾呈祥， 孫山， 秦志華， 等. 中國柿品種資源的分布現(xiàn)狀與新技術(shù)在育種上的應(yīng)用[J]. 落葉果樹， 2011（3）： 9-11.

[11]楊勇， 江用文， 李高潮， 等. NY/T 2024—2011農(nóng)作物優(yōu)異種質(zhì)資源評(píng)價(jià)規(guī)范柿[S]. 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部，2011.

[12]劉璟，孫洪圳，李保華，等. 蘋果對(duì)枝干輪紋病的抗性鑒定及抗性機(jī)制研究[J]. 山東農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2015， 47（6）： 87-92， 96.

[13]呂松，王憶，張新忠，等. 蘋果斑點(diǎn)落葉病抗病性種質(zhì)評(píng)價(jià)及遺傳分析[J]. 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2012， 17（4）： 68-74.