miR-126在宮頸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

龍 丹，劉伏香，周 艷，梁云香

(中國人民解放軍一六九醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖南 衡陽 421002)

miR-126在宮頸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

龍 丹，劉伏香，周 艷，梁云香

(中國人民解放軍一六九醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖南 衡陽 421002)

目的 研究miR-126在宮頸癌組織中的表達(dá)并探討其臨床意義。方法收集宮頸癌組織標(biāo)本78例。采用qRT-PCR技術(shù)檢測宮頸癌組織及癌旁正常宮頸組織中miR-126的表達(dá)情況，并分析miR-126在宮頸癌組織中的表達(dá)水平與宮頸癌患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。結(jié)果miR-126在宮頸癌組織中的表達(dá)相對(duì)于癌旁正常宮頸組織中的表達(dá)明顯下調(diào)(P＜0.001)。miR-126在宮頸癌組織中的高表達(dá)率與宮頸癌患者的組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期明顯相關(guān)，即miR-126在低分化組的高表達(dá)率明顯低于高中分化組(P=0.013)，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的高表達(dá)率明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P=0.005)，在Ⅲ～Ⅳ期組中的高表達(dá)率明顯低于Ⅰ～Ⅱ期(P=0.007)。而miR-126在宮頸癌組織中的高表達(dá)率在不同年齡、腫瘤大小、HPV感染患者組之間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論miR-126可能參與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展，檢測miR-126的在宮頸癌中的表達(dá)對(duì)預(yù)測宮頸癌的浸潤轉(zhuǎn)移具有重要意義。

MiR-126；宮頸癌；侵襲；轉(zhuǎn)移

microRNAs(miRNAs)是一類內(nèi)源性、長度為18～25 nt的單鏈，非編碼小RNA分子，通過與靶基因3'非編碼區(qū)結(jié)合，從而特異性調(diào)控靶基因的表達(dá)，發(fā)揮類似癌基因或抑癌基因的功能[1]。miRNAs是重要的調(diào)控因子，能調(diào)控細(xì)胞的增殖、分裂、分化、凋亡等過程。研究顯示miR-126在多種腫瘤中表達(dá)下調(diào)，并且類似于抑癌基因樣作用[2-4]。此外，miR-126在乳腺癌、成人T細(xì)胞白血病、結(jié)腸癌以及惡性間皮瘤中低表達(dá)，并且與患者的不良預(yù)后相關(guān)[5-7]。研究顯示miR-126在宮頸癌組織中的表達(dá)明顯低于正常宮頸組織，然而，目前尚無有關(guān)miR-126在宮頸癌中的臨床意義以及預(yù)后價(jià)值的研究報(bào)道。本次研究通過qRT-PCR技術(shù)檢測miR-126在宮頸癌組織與癌旁正常宮頸組織中的表達(dá)，探討miR-126與宮頸癌轉(zhuǎn)移、預(yù)后等之間的關(guān)系，為進(jìn)一步揭示宮頸癌的發(fā)病機(jī)制以及尋找宮頸癌預(yù)后分子標(biāo)志物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 病例資料 收集2010年5月至2013年12月期間我院收治并確診為宮頸癌的患者78例，年齡26～72歲，平均(54±15)歲。所有宮頸癌患者術(shù)前均未行放化療等抗腫瘤治療。病理學(xué)分類按照宮頸癌FIGO分期標(biāo)準(zhǔn)。病理診斷結(jié)果經(jīng)兩名以上病理學(xué)專家確診。所取正常宮頸組織距癌緣＞5 cm，HE染色證實(shí)為非癌組織。

1.2 主要材料 TRIZOLTM Reagent購自invitrogen公司；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自Promega公司；qRT-PCR miRNA Detection Kit購自上海吉瑪公司。其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.3 qRT-PCR 稱取每個(gè)宮頸癌標(biāo)本和癌旁正常宮頸組織各適量，用液氮研磨法將上述各種組織磨成粉末，用Trizol法抽提組織中總RNA，并逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA于-80°C保存?zhèn)溆?。PCR擴(kuò)增采用Real time qRT PCR實(shí)時(shí)定量試劑盒，擴(kuò)增反應(yīng)體系為20 μl，其中包括TaqDNA polymerase(5 U/μl)0.2 μl，MiR-126 primers(5 μmol/L)0.4 μl，2×SYBR Mix 10 μl，miRNA-126 product 2.0 μl，滅菌蒸餾水7.4 μl。循環(huán)體系為：95°C 3 min，95°C 12 s，62°C 35 s，72°C 30 s，一共40個(gè)循環(huán)。以U6為內(nèi)參，所測定的miR-126的相對(duì)表達(dá)量采用2-ΔΔCT法分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)或確切概率法，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌組織中miR-126表達(dá)水平的檢測 提取宮頸癌組織和癌旁正常宮頸組織中的總RNA，以U6 snRNA為內(nèi)參。采用qRT-PCR法檢測宮頸癌組織和癌旁正常宮頸組織中miR-126的表達(dá)水平。選取1例癌旁正常宮頸組織的miR-126的表達(dá)值為1，以2-△△Ct表示miR-126的表達(dá)水平，然后分析得到78例宮頸癌組織中miR-126的平均表達(dá)值為(0.703±0.036)，癌旁正常卵巢組織中miR-126的平均表達(dá)值為(1.526±0.065)，二者比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)，見圖1。

圖1 miR-126在宮頸癌組織和癌旁正常宮頸組織中的表達(dá)

2.2 宮頸癌組織中miR-126表達(dá)水平和臨床病理參數(shù)的關(guān)系 本次研究以宮頸癌組織中miR-126表達(dá)值的中位數(shù)為臨界值，miR-126的表達(dá)值大于或等于中位數(shù)為高表達(dá)，少于中位數(shù)為低表達(dá)。結(jié)果顯示，miR-126在78例宮頸癌患者中有51例低表達(dá)(65.38%)，27例高表達(dá)(34.62%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。經(jīng)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，miR-126在宮頸癌組織中的高表達(dá)率與患者的性別、年齡、HPV感染、組織學(xué)類型以及腫瘤大小無顯著相關(guān)性(P＞0.05)；而miR-126在宮頸癌組織中的高表達(dá)率與宮頸癌患者的組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期明顯相關(guān)，即miR-126在低分化組的高表達(dá)率明顯低于高中分化組(P=0.013)，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的高表達(dá)率明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P=0.005)，在Ⅲ～Ⅳ期組中的高表達(dá)率明顯低于Ⅰ～Ⅱ期(P=0.007)，見表1。

3 討論

宮頸癌的發(fā)生是一個(gè)多步驟的過程，包括從正常宮頸上皮出現(xiàn)內(nèi)瘤變，再逐步轉(zhuǎn)化為侵襲性宮頸癌。近年來，由于婦科普查以及宮頸癌早期篩查的實(shí)施，宮頸癌的發(fā)病率呈上升趨勢，發(fā)病年齡也趨于年輕化。目前治療宮頸癌的標(biāo)準(zhǔn)方案為手術(shù)加放化療，但是不同患者的臨床結(jié)局存在顯著差異，并且也難以預(yù)測。因此，了解宮頸癌發(fā)生的病因、分子生物學(xué)以及遺傳學(xué)機(jī)制對(duì)患者的治療策略以及預(yù)后標(biāo)記物的鑒別具有重要意義。

最近大量研究顯示，miRNAs在多種腫瘤中異常表達(dá)，并且類似于癌基因或抑癌基因樣作用[8]。由于miRNAs在不同組織和疾病中的特異性表達(dá)模式以及廣泛的調(diào)控潛能，因此可作為診斷與預(yù)后生物標(biāo)志物以及潛在的治療靶點(diǎn)[9]。研究顯示，miR-126在乳腺癌中表達(dá)下調(diào)，并且通過調(diào)控VEGF/ PI3K/AKT信號(hào)通路參與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展[10]。此外，miR-126在胃癌細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，其低表達(dá)與胃癌的臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，并且通過靶向調(diào)控Crk在體內(nèi)外抑制胃癌細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移[11]。Hamada等[12]研究顯示miR-126在胰腺癌細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，并且通過靶向ADAM9b抑制胰腺癌細(xì)胞的遷移與侵襲，并且還可誘導(dǎo)EMT轉(zhuǎn)化。上述研究均表明miR-126在多種腫瘤中發(fā)揮抑癌基因樣作用。Yu等[13]研究顯示miR-126在宮頸癌細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，能抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖，并且還能增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物博來霉素的敏感性。本次研究通過qRT-PCR法檢測了miR-126在78例宮頸癌組織及癌旁正常宮頸組織的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)miR-126在宮頸癌組織的表達(dá)相對(duì)比癌旁正常宮頸組織明顯下調(diào)，經(jīng)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)miR-126在宮頸癌中的表達(dá)水平與宮頸癌患者的組織分化程度、臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)。

綜上所述，miR-126在宮頸癌組織中的表達(dá)下調(diào)，且miR-126的表達(dá)狀態(tài)與宮頸癌患者的腫瘤分化程度、臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。這些結(jié)果均提示了miR-126可能參與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展與轉(zhuǎn)移過程，為miR-126成為宮頸癌臨床預(yù)測生物標(biāo)記物以及治療靶點(diǎn)提供了實(shí)驗(yàn)證據(jù)。

[1]Tang H,Deng M,Tang Y,et al.miR-200b and miR-200c as prognostic factors and mediators of gastric cancer cell progression[J]. Clin Cancer Res,2013,19(20):5602-5612.

[2]Walter BA,Valera VA,Pinto PA,et al.Comprehensive microRNA profiling of prostate cancer[J].J Cancer Educ,2013,4(5):350-357.

[3]Wang X,Tang S,Le SY,et al.Aberrant expression of oncogenic and tumor-suppressive microRNAs in cervical cancer is required for cancercell growth[J].PLoS One,2008,3(7):e2557.

[4]Tavazoie SF,Alarcon C,Oskarsson T,et al.Endogenous human microRNAs that suppress breast cancer metastasis[J].Nature,2008, 451(7175):147-152.

[5]Liu Y,Zhou Y,Feng X,et al.Low expression of microRNA-126 is associated with poor prognosis in colorectal cancer[J].Genes Chromosom Cancer,2014,53(4):358-365.

[6]Ishihara K,Sasaki D,Tsuruda K,et al.Impact of miR-155 and miR-126 as novel biomarkers on the assessment of disease progression and prognosis in adult T-cell leukemia[J].Cancer Epidemiol, 2012,36(6):560-565

[7]Tomasetti M,Staffolani S,Nocchi L,et al.Clinical significance of circulating miR-126 quantification in malignant mesothelioma patients[J].Clin Biochem,2012,45(7-8):575-581.

[8]Tang H,Kong Y,Guo J,et al.Diallyl disulfide suppresses proliferation and induces apoptosis in human gastric cancer through Wnt-1 signaling pathway by up-regulation of miR-200b and miR-22[J]. Cancer Lett,2013,340(1):72-81.

[9]唐云云,唐海林,蘇 琦.miRNA在胃癌中的生物學(xué)作用[J].中國腫瘤臨床,2014,41(2):131-133.

[10]Zhu N,Zhang D,Xie H,et al.Endothelial-specific intron-derived miR-126 is down-regulated in human breast cancer and targets both VEGFA and PIK3R2[J].Mol Cell Biochem,2011,351(1-2): 157-164.

[11]Feng R,Chen X,Yu Y,et al.miR-126 functions as a tumour suppressor in human gastric cancer[J].Cancer Lett,2010,298(1):50-63.

[12]Hamada S,Satoh K,Fujibuchi W,et al.MiR-126 acts as a tumor suppressor in pancreatic cancer cells via the regulation of ADAM9 [J].Molecular Cancer Research,2012,10(1):3-10.

[13]Yu Q,Liu SL,Wang H,et al.miR-126 Suppresses the proliferation of cervical cancer cells and alters cell sensitivity to the chemotherapeutic drug bleomycin[J].Asian Pacific Journal of Cancer Prevention,2013,14(11):6569-6572.

Expression of miR-126 in cervical cancer and its clinical significance.

LONG Dan,LIU Fu-xiang,ZHOU Yan, LIANG Yun-xiang.Department of Gynaecology and Obstetrics,the 169thHospital of Chinese PLA,Hengyang 421001, Hunan,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression of miR-126 in cervical cancer and its clinical significance.MethodsExpression of miR-126 was detected in 78 cases of cervical cancer by qRT-PCR.The correlations of miR-126 expression with clinicopathologic characteristics of cervical cancer patients were analyzed.ResultsThe expression of miR-126 were significantly down-regulated in cervical cancer tissues than in the adjacent normal tissues.The difference was statistically significant(P＜0.001).Decreased miR-126 expression in cervical cancer was found to be significantly associated with histological grade(P=0.013),lymph node metastasis(P=0.005),and the FIGO stage(P=0.007).However,there was no statistically significant difference between the expression and age,tumor size,as well as HPV infection(P＞0.05).ConclusionThe expression of miR-126 may be involved in the occurrence and development of cervical cancer.Detection of miR-126 expression in cervical cancer is of great importance in the prediction of invasion and metastasis.

MiR-126;Cervical cancer;Invasion;Metastasis

R737.33

A

1003—6350（2015）17—2513—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.17.0911

2015-02-16)

湖南省中醫(yī)藥科研計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)：201139）

龍 丹。E-mail：806349771@qq.com