電針不同神經(jīng)節(jié)段腧穴對2型糖尿病大鼠的影響*

胡曉剛,李 瑞△,賈 寧,田環(huán)環(huán),馬艷佳,王躍穎,曹昺焱

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029;2.中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院，北京 100091)

電針不同神經(jīng)節(jié)段腧穴對2型糖尿病大鼠的影響*

胡曉剛1,李 瑞1△,賈 寧1,田環(huán)環(huán)1,馬艷佳1,王躍穎1,曹昺焱2

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029;2.中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院，北京 100091)

目的：通過觀察電針不同腧穴對2型糖尿病大鼠影響，為臨床針灸治療T2DM選穴提供依據(jù)。方法：以高糖高脂飲食結(jié)合鏈脲佐菌素注射制備T2DM模型大鼠，隨機(jī)分為模型組、心俞組、胰俞組和腎俞組，分別以電針刺激心俞穴、胰俞穴、腎俞穴，連續(xù)干預(yù)4周，觀察各組動物空腹血糖、OGTT曲線下面積、空腹胰島素、胰島素抵抗水平和胰島形態(tài)的變化。結(jié)果：①胰俞組空腹血糖和OGTT曲線下面積下降顯著(P<0.05)，心俞組和腎俞組變化不明顯(P>0.05);②電針對大鼠空腹胰島素水平無影響，胰俞組HOMA-IR較模型組極顯著降低(P<0.01)，心俞組和腎俞組變化不明顯(P>0.05);③HE染色：模型組胰島嚴(yán)重萎縮，胰島內(nèi)細(xì)胞減少，細(xì)胞形態(tài)異常;胰俞組胰島形態(tài)、胰島內(nèi)細(xì)胞的形態(tài)和數(shù)目基本接近空白組。結(jié)論：電針胰俞穴可以降低T2DM大鼠血糖，改善糖耐量和胰島素抵抗，保護(hù)胰島形態(tài)，且胰俞穴的這些作用符合神經(jīng)節(jié)段支配理論。

電針;胰俞;T2DM；大鼠;神經(jīng)節(jié)段

糖尿病(Diabetes)已經(jīng)成為影響人類健康的主要慢性病之一，其影響除引起全身代謝紊亂外，還造成心血管系統(tǒng)、神經(jīng)、腎臟、眼等重要器官的多種并發(fā)癥。近年來，糖尿病的發(fā)病率總體呈上升態(tài)勢，以我國為例，20～79歲之間的成年人患糖尿病總?cè)藬?shù)接近1.1億人，居世界最高，用于糖尿病防治的衛(wèi)生支出達(dá)到511億美元[1]。占糖尿病總發(fā)病人數(shù)90%的2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus，T2DM)是預(yù)防和治療糖尿病的重中之重。目前的糖尿病治療主要以口服藥物和胰島素注射為主，需要長期甚至終身用藥。

針灸是治療T2DM的有效方法之一，在我國針灸治療糖尿病有著悠久的歷史，有研究者[2]用《黃帝內(nèi)經(jīng)》中“水俞五十七處”之針灸處方治療T2DM并取得良好的效果。周平南等[3]進(jìn)行了大量的臨床研究，證明針灸療法治療新發(fā)T2DM有較高的有效率。WHO在2003年將針灸療法認(rèn)定為治療糖尿病的方法之一。本研究通過動物實(shí)驗(yàn)優(yōu)化臨床中針灸治療T2DM穴位選擇，并探討針灸作用的機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

清潔級雄性SD大鼠[斯貝福(北京)實(shí)驗(yàn)動物科技有限公司，許可證號：SCXK(京)2011-004]，體質(zhì)量150～160 g。飼養(yǎng)條件：溫度18 ℃～25 ℃，相對濕度50%～60%，空氣流通，每籠5只，自由飲水進(jìn)食，12 h明/暗循環(huán)光照。飼料由北京華阜康生物科技股份有限公司提供[許可證號：SCXK(京)2014-0008]。

1.2 模型制備

適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)抽取10只作為空白組，以普通飼料喂養(yǎng)。其余動物以高糖高脂飼料(含70%普通飼料、10%豬油、10%蔗糖、10%蛋黃粉)喂養(yǎng)4周后，按35 mg/kg質(zhì)量比腹腔注射2%鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)溶液(溶劑為濃度0.1 mol/L的檸檬酸、檸檬酸鈉混合液,pH值4.2-4.5)，注射72 h后測隨機(jī)血糖，注射2周后行口服葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)(oralglucose tolerance，OGTT)。以隨機(jī)血糖>16.7 mmol/L且OGTT實(shí)驗(yàn)2 h血糖>11.1 mol/L為成模標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 干預(yù)方法

成模動物依空腹血糖隨機(jī)分為模型組、胰俞組、心俞組和腎俞組，每組10只，自分組之日起食普通飼料?？瞻捉M不予任何干預(yù),其余各組于每天下午17:00～20:00干預(yù)，各組在干預(yù)時(shí)間上保持同步，每日1次，每周連續(xù)6日，共4周。針刺穴位參考《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》，心俞：第5胸椎棘突下，后正中線旁開7 mm；胰俞：第8胸椎棘突下，后正中線旁開7 mm；腎俞：第2腰椎棘突下，后正中線旁開7 mm[4]。

模型組：將大鼠固定在鼠套中20 min，不予其他干預(yù)。胰俞組：將大鼠固定在鼠套中，以0.16 mm×7 mm中研太和牌無菌毫針斜刺雙側(cè)胰俞穴，進(jìn)針深度4 mm。接通英迪KWD-808電針(電針正極接位于腧穴的毫針，在同側(cè)后足縛以用生理鹽水浸濕的棉條并連接電針負(fù)極)，頻率2 Hz，電流2 mA，連續(xù)波，留針20 min。心俞組：以同法固定大鼠，斜刺雙側(cè)心俞穴，進(jìn)針4 mm，電針連接方法及參數(shù)同上。腎俞組：以同法固定大鼠，直刺雙側(cè)腎俞穴，進(jìn)針4 mm，電針連接方法及參數(shù)同上。

1.4 取材

干預(yù)4周后，用0.3%戊巴比妥鈉按1 ml/100 g比例行腹腔注射麻醉[5]，腹主動脈取血5 ml，靜置30 min后離心(3000 rmp,4 ℃,15 min)(離心機(jī):Legend micr017r,Thermo公司生產(chǎn))，將上清液轉(zhuǎn)移至1.5 ml離心管并保存于-20 ℃冰箱。取近脾臟胰腺組織保存于波恩氏液中以固定組織。

1.5 指標(biāo)檢測

①空腹血糖檢測：于初次前和末次干預(yù)后，采尾尖取血以羅氏血糖儀測空腹血糖(Fasting blood glucose，F(xiàn)BG)。②糖耐量檢測：于初次干預(yù)前及末次干預(yù)后進(jìn)行OGTT：動物禁食過夜，次日上午8:00按1 ml/100 g灌胃20%葡萄糖溶液，檢測灌胃前空腹血糖及灌胃后30、60、120 min后血糖。③血清胰島素水平檢測由北京華英生物技術(shù)研究所完成。用公式計(jì)算大鼠的胰島素抵抗指數(shù)，計(jì)算公式[6]：HOMA-IR=血清胰島素(μU/ml)×空腹血糖(mmol/L)/22.5。④胰腺E染色：胰腺組織固定72 h后，修成5 mm3塊狀，梯度酒精脫水，再以二甲苯脫酒精2次，石蠟浸潤脫二甲苯3次，石蠟包埋，切成5 μm切片，常規(guī)HE染色。用奧林巴斯BX53顯微鏡觀察切片并拍照。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 大鼠空腹血糖(FBG)變化

干預(yù)前空白組FBG極顯著低于各干預(yù)組(P<0.01)，模型組和各治療組之間無差異。干預(yù)后，各電針干預(yù)組與模型組相比，胰俞組FBG顯著降低(P<0.05)，心俞組和腎俞組與模型組相比有降低的趨勢，但是無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各組治療前后對比：模型組FBG較干預(yù)前極顯著升高(P<0.01),胰俞組出現(xiàn)顯著下降(P<0.05)，空白組、心俞組和腎俞組變化不明顯。說明電針胰俞穴可以降低T2DM大鼠FBG，其作用優(yōu)于電針心俞穴和腎俞穴。見表1。

表1 干預(yù)前后大鼠空腹血糖(FBG)變化

注：與空白組比較，**P<0.01；與模型組比較，△P<0.05;與干預(yù)前比較，##P<0.01,#P<0.05

2.2 大鼠糖耐量變化

干預(yù)前空白組OGTT曲線下面積極顯著低于各干預(yù)組(P<0.01)，模型組和各治療組之間無差異。干預(yù)后各電針組和模型組比較，胰俞組OGTT曲線下面積極顯著降低(P<0.01)，心俞組和腎俞組有降低趨勢，但差異不明顯。各組干預(yù)前后對比，模型組OGTT曲線下面積呈現(xiàn)顯著上升趨勢(P<0.05)，胰俞組較干預(yù)前顯著降低(P<0.05)，其余各組治療前后無明顯變化。說明電針干預(yù)可以提高T2DM大鼠糖耐量，其中以電針胰俞穴效果最佳。見表2。

表2 干預(yù)前后大鼠OGTT曲線下面積變化

注：與空白組比較，**P<0.01；與模型組比較，△P<0.01;與干預(yù)前比較，#P<0.05

2.3 大鼠空腹血清胰島素水平(FINS)和胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)變化

所有組間FINS無顯著差異。模型組和各治療組HOMA-IR均極顯著高于空白組(P<0.01)；胰俞組與模型組相比極顯著降低(P<0.01)，腎俞組和心俞組與模型組相比雖有下降的趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明電針干預(yù)可以改善T2DM大鼠胰島素抵抗，而以胰俞穴效果最佳。見表3。

表3 干預(yù)對大鼠FINS(μU/ml)和HOMA-IR的影響

注：與空白組比較，**P<0.01;與模型組比較，##P<0.01

2.4 各組動物胰島形態(tài)

由封三彩圖1～5可見，空白組胰島面積較大，呈橢圓形，與周圍組織分界清楚，胰島內(nèi)細(xì)胞數(shù)量較多，胞質(zhì)豐富，細(xì)胞核呈圓形，大小均勻，居于細(xì)胞中央；周圍腺泡細(xì)胞形態(tài)正常,見封三彩圖1。模型組胰島面積縮小，形態(tài)不規(guī)則，胰島內(nèi)細(xì)胞數(shù)量減少，胞質(zhì)減少，部分細(xì)胞核淡染，個(gè)別細(xì)胞細(xì)胞核異常增大；胰島周圍腺泡細(xì)胞體積異常增大，染色淺,見封三彩圖2。胰俞組胰島面積接近空白組，外形近似橢圓，邊界不規(guī)則，胰島內(nèi)細(xì)胞數(shù)目較多，細(xì)胞質(zhì)減少，細(xì)胞核大小均勻且居中，部分細(xì)胞核染色淺；胰島周圍腺泡細(xì)胞體積增大，染色變淺,見封三彩圖3。心俞組胰島面積大于模型組，但形態(tài)欠規(guī)則，胰島細(xì)胞數(shù)減少，細(xì)胞質(zhì)減少，細(xì)胞核大小一致，但染色較淺；胰島周圍腺泡細(xì)胞體積增大，染色變淺,見封三彩圖4。腎俞組胰島面積減小，形狀近似橢圓，胰島細(xì)胞分布密集，胞質(zhì)較少，細(xì)胞核大小不均；胰島周圍腺泡細(xì)胞形態(tài)基本正常,見封三彩圖5。

3 討論

糖尿病屬于中醫(yī)學(xué)消渴病的范疇，中醫(yī)很早就對本病有了基本認(rèn)識，《素問·奇病論》曰:“肥者令人內(nèi)熱，甘者令人中滿，故其氣上溢轉(zhuǎn)為消渴”,認(rèn)為過食肥甘厚味是造成消渴病的基本病因。本研究中用高糖高脂飼料喂養(yǎng)動物4周，使其產(chǎn)生糖尿病的發(fā)病基礎(chǔ)，這與《內(nèi)經(jīng)》中消渴的發(fā)病機(jī)理相類似。

早在唐朝孫思邈《千金翼方》就有“消渴咽喉干,灸胃管下俞三穴各百壯”的記載。孫思邈所謂“胃脘下俞”穴即“胰俞”穴，亦名胃下俞、胃脘下俞、胃管下輸三穴聶俞、膵俞(脺俞、下俞、八俞)、內(nèi)胰俞等[7]。胰俞穴屬于經(jīng)外奇穴，是臨床中治療糖尿病的常用穴?！督?jīng)穴穴名標(biāo)準(zhǔn)化方案》指出該穴功能和胃化痰、理氣止痛,主治胃痛、腹痛、胸脅痛、消渴、咳嗽、咽干和胰腺炎。另據(jù)臨床報(bào)道，胰腺疾病患者通常在胰俞穴處出現(xiàn)壓痛、結(jié)節(jié)、條索等其他陽性反映[8]。胰俞穴與胰腺的生理和病理聯(lián)系為密切，故而有學(xué)者提出將胰俞穴定為胰腺之背俞穴，認(rèn)為胰俞穴是胰之真氣輸注之所[9]。

胰俞穴位于第8胸椎棘突下，后正中線旁開1.5寸，解剖層次的淺層分布有T8后支的皮支，深層有T8后支的肌支。人和脊椎動物脊神經(jīng)呈節(jié)段性分布特征，支配內(nèi)臟的神經(jīng)節(jié)段也按照相應(yīng)內(nèi)臟在人體的上下位置對應(yīng)排列。支配胰腺的傳入神經(jīng)為T8，而胰腺的傳出神經(jīng)分為交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)，交感神經(jīng)是由以T8為中心的T5～T11節(jié)段神經(jīng)發(fā)出的纖維組成，副交感神經(jīng)主要是由右迷走神經(jīng)和少部分左迷走神經(jīng)組成。胰俞穴對糖尿病的治療作用與其神經(jīng)分布特征高度吻合。

本研究選擇不同神經(jīng)節(jié)段的胰俞穴、心俞穴和腎俞穴做對比，結(jié)果顯示心俞組和腎俞組在降低血糖、改善糖耐量、降低胰島素抵抗和保護(hù)胰島形態(tài)方面雖有一定的作用，但效果遠(yuǎn)遜于胰俞組。其機(jī)理有可能是針刺胰俞穴能夠更加有效地刺激T8，進(jìn)而加強(qiáng)胰腺的神經(jīng)傳導(dǎo)通路的興奮性，并最終對胰腺產(chǎn)生影響。

[1] Intemational Diabetes Federation.IDF Diabetes Atlas-7th Edition[EB/OL].[2015-12-01].http://www.diabetesatlas.org/across-the-globe.html

[2] 于新捷,李雪青.從“水俞五十七處”論治胰島素抵抗[J].針灸臨床雜志,2014,30(11):71-73

[3] 周平南,彭鵬鳴,王蓉娣.針灸治療新發(fā)肥胖2型糖尿病療效觀察[J].針灸臨床雜志,2013,29(1):21-23

[4] 張露芬.實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:219-220

[5] 梅福榮.0.3%戊巴比妥鈉用于大鼠麻醉的方法[J].實(shí)驗(yàn)動物科學(xué)與管理,2003,20(3):44-45

[6] 洪潔,寧光,王笑微,等.減少樣本數(shù)的Bergman最小模型技術(shù)在胰島素抵抗綜合征中的應(yīng)用[J].中華內(nèi)分泌代謝雜志,2000,16(6):358-362

[7] 高珊,李瑞,田環(huán)環(huán).胃脘下俞穴的古今研究[J].上海針灸雜志,2014,33(12):1163-1166

[8] 諶劍飛,魏稼.針刺治療糖尿病的初步研究[J].中國針灸,1983,3(1):1-4

[9] 石錦萍,陳曉莉,鐘柏松.胃脘下俞穴與胰腺相關(guān)性的探討[J].中國針灸,1998,18(1):45-46

Electro-acupuncture on T2DM Rats with Points at Different Nerve Segment

HU Xiao-gang1, LI Rui1△, JIA Ning1, TIAN Huan-huan1, MA Yan-jia1, WANG Yue-ying1, CAO Bing-yan2

(1.BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China; 2.XiyuanHospitalAttachedtoChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100091,China)

Objective：To observe the effect of electro-acupuncture on type 2 diabetes mellitus(T2DM) rats with different acupoints, and to provide evidence for clinical acupoint selection for T2DM in acupuncture treatment. Methods:T2DM models were established in rats by high fat and high sugar diet combined with Streptozotocin(STZ) injection, then the rats were randomly divided into the model group, the Xinshu group, the Yishu group, and the Shenshu group. The points of Xinshu, Yishu and Shenshu were stimulated respectively with electro-acupuncture. The fasting blood glucose(FBG), the area under curve(AUC) of OGTT, fasting insulin(FINS), insulin resistance(IR) level, and the morphology of the islets were observed in all groups. Results：①The levels of FBG and AUC decreased significantly in the Yishu group(P<0.05), the changes in the Xinshu group and the Shenshu group were not so obvious(P>0.05).②There is no effect on the level of FINS with electro-acupuncture intervention in rats, and HOMA-IR was remarkably lower in the Yishu group than that in the model group(P<0.01), but there were no obvious changes both in the Xinshu group and in the Shenshu group(P>0.05). ③HE staining: In the model group, the atrophy of pancreatic islets was severe, the islet cells decreased with abnormal morphology; whereas in the Yishu group, the shape of the islets, the cellular morphology and the numbers of the cells were all close to those in the blank group. Conclusion：Point of Yishu with electro-acupuncture can reduce blood glucose, improve glucose tolerance and insulin resistance, and it can protect the shape of the islets in T2DM rats; these effects of Yishu point fit in with the nerve segment theory.

Electro-acupuncture; Yishu point; T2DM;Rats; Nerve segment

實(shí)驗(yàn)研究

教育部科學(xué)技術(shù)研究重大項(xiàng)目,編號：313010。

胡曉剛(1990-)，男，2014級針灸推拿學(xué)專業(yè)碩士研究生。

△通訊作者：李瑞(1953-)，男，教授，研究方向：針灸經(jīng)典理論及腧穴的臨床和實(shí)驗(yàn)研究。

R246.1

A

1005-0779(2017)06-0057-03